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【摘要】本研究探討急性紅白血病（AMLM6）的生物學(xué)特征與臨床療效的關(guān)系。對(duì)29例M6初治患者細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫表型和染色體核型進(jìn)行回顧性分析并觀察臨床化療效果，同時(shí)隨機(jī)抽取30例AMLM2（急性粒細(xì)胞白血病部分分化型）作為對(duì)照。結(jié)果表明：M6患者的外周血中均可見幼稚細(xì)胞（2％-10％）及有核紅細(xì)胞，骨髓穿刺細(xì)胞學(xué)檢查顯示19例伴有多系細(xì)胞發(fā)育異常，累及二系細(xì)胞或三系細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明，M6GlyA（血型糖蛋白A）的表達(dá)率高達(dá)（66.67±23.86）％，明顯高于其在M1，M2，M3，M4和M5中的陽(yáng)性表達(dá)率(P<0.01)。M6高表達(dá)HLADR［（60.00±24.79）%］,CD34［（40.00±24.79）%］，CD38［（33.33±23.86）%］，髓系抗原主要表達(dá)CD13［（66.67±23.86）%］，MPO［（33.33±23.86）%］，CD33［（46.67±25.25）%］,CD15［（33.33±23.86）%］,CD117［（46.67±25.25）%］。部分病例伴有淋系抗原的表達(dá),如CD3、CD4、CD19，其中CD4的表達(dá)高達(dá)26.67％。M6中CD38、CD33、CD15、MPO的陽(yáng)性表達(dá)率低于M2患者。9例M6患者染色體的檢查顯示，4例存在核型異常，異常率達(dá)44.44％，其中復(fù)雜核型異常1例。M6患者化療完全緩解率為29.41％，低于M2患者化療完全緩解率（68.18％，P<0.01)。結(jié)論：GlyA是鑒別M6與其他亞型急性髓性白血病的一個(gè)重要標(biāo)志，M6有自己獨(dú)特的生物學(xué)表型，其化療效果不佳可能與其生物學(xué)特征有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】急性紅白血病AMLM6免疫表型核型

BiologicalCharacteristicsandTherapeuticEffectofAcuteErythoLeukemia

AbstractTheobjectiveofthisstudywastoinvestigatethebiologicalcharacteristicsandthetherapeuticeffectinpatientswithacuteerythroleukemia(AMLM6).Morphology,immunophenotypeandcytogeneticswereretrospectivelyanalyzedin29patientswithAMLM6andwerecomparedwith30AMLM2patients.Theresultsshowedthattherewereimmaturecells(2%-10%)anderythroblast,andpunctureofbonemarrowrevealedmyelodysplasticfeaturesinvolvingmultiplehemopoieticlineagesinbonemarrowof19patients.FlowcytometryindicatedthattheexpressionfrequencyofGlyAinM6significantlyincreased(66.67±23.86)%andhigherthanthatinM1,M2,M3,M4andM5(P<0.01).TheexpressionfrequenciesofHLADR(60.00±24.79％),CD34(40.00±24.79％),CD38(33.33±23.86％)inM6werehigh,andthefrequenciesofmyeloidimmunophenotypesCD13(66.67±23.86％),MPO(33.33±23.86％),CD33(46.67±25.25％),CD15(33.33±23.86％),CD117(46.67±25.25％)werecommonaswellinM6.LymphocyticimmunophenotypesCD3,CD4,CD19weredetectedinpartofpatientswithM6,andtheexpressionfrequenciesofCD4was26.67%.TheexpressionfrequencesofCD38,CD33,CD15,MPOinM6werelesscommonthanthatinM2(P<0.01).In4outof9M6patientsthechromosomalabnormatility(44.44%)wasseen,inoneofwhichcomplexchromosomeabnormalitywasfound.ThecompleteremmisionrateofM6patientswas29.41%,andlowerthanthatofM2patients(68.18%,P<0.01).ItisconcludedthatGlyAisaspecificimmunophenotypeinM6,whichcanhelptodistinguishM6fromothertypesofacutemyeloidleukemia.Poorclinicaltherapeuticresponsemaycorrelatedwithitsbiologicalcharacteristics.

Keywordsacuteerythroleukemia,AMLM6,immunophenotype,karyotype

JExpHematol2007;15(3):466-469

M6是一種異質(zhì)性血液系統(tǒng)惡性腫瘤，可同時(shí)累及多個(gè)細(xì)胞系，臨床預(yù)后較差。由于該亞型急性白血病相對(duì)少見，對(duì)其生物學(xué)表型了解不多，為進(jìn)一步探討M6的生物學(xué)特征與化療效果的關(guān)系，我們對(duì)29例M6初治病例的臨床資料進(jìn)行了分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

材料和方法

病例選擇

29例M6患者均為我院1995-2005年初治住院病人，符合2001年WHO造血組織腫瘤分類診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男19例，女10例，年齡7-68歲，中位年齡43歲。隨機(jī)抽取我院1995-2005年進(jìn)行免疫學(xué)分型的初治M2住院病例30例作為對(duì)照。為進(jìn)一步比較GlyA抗原的變化，另選擇M120例，M315例，M4和M5共15例進(jìn)行免疫分型作為對(duì)照。

中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志JExpHematol2007;15(3)急性紅白血病的生物學(xué)特征與臨床療效研究形態(tài)學(xué)檢查

骨髓及外周血片經(jīng)瑞氏染色分類，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)染色，包括髓過(guò)氧化物酶，非特異性酯酶、糖原染色的細(xì)胞學(xué)檢查。

免疫學(xué)分型

治療前采取患者骨髓，肝素抗凝，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。所用的單克隆抗體包括HLADR、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD10、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD36、CD38、CD56、CD71、CD117、MPO、GlyA、cCD79a。陽(yáng)性病例判斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)EGIL標(biāo)準(zhǔn)：淋系抗原陽(yáng)性細(xì)胞≥20％，髓系抗原陽(yáng)性細(xì)胞≥20％，MPO≥10％。

染色體核型分析

治療前采取骨髓，直接法或24小時(shí)培養(yǎng)法處理標(biāo)本，用G帶或R帶法顯帶，根據(jù)國(guó)際人類染色體（ISCN1995）命名核型。

治療方法

M6病例及對(duì)照組M2病例多采用標(biāo)準(zhǔn)D(H)A方案化療，僅2例M6采用CAG方案（D：柔紅霉素，H：高三尖杉酯堿，C：阿克拉霉素，A：阿糖胞苷，G：粒細(xì)胞刺激因子）。

療效判斷標(biāo)準(zhǔn)

參照參考文獻(xiàn)［1］判斷完全緩解（CR）,未緩解（NR）。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

F檢驗(yàn)，抗原陽(yáng)性率估計(jì)95％的可信區(qū)間。

結(jié)果

外周血涂片

29例M6患者外周血片中均可見外周血幼稚細(xì)胞，幼稚細(xì)胞所占比例不一，原始粒細(xì)胞＋早幼粒細(xì)胞為2％-10％，但均可見有核紅細(xì)胞。

骨髓穿刺細(xì)胞學(xué)檢查

除1例骨髓增生減低外，其余28例增生明顯活躍或極度活躍。所有病例非紅系原始細(xì)胞記數(shù)（NEC）>20％，紅系細(xì)胞記數(shù)>50％，19例存在多系發(fā)育異常，紅系以細(xì)胞巨幼變?yōu)橹鳎藓讼狄粤馨蜆有【藓思?xì)胞為主，粒系可見PelgerHeüt畸形及Auer小體，幼紅細(xì)胞PAS呈＋—＋＋＋。

免疫學(xué)分型

本組M6病例GlyA的陽(yáng)性表達(dá)率為（66.67±23.86）%，明顯高于其在M2、M1、M3、M4及M5中的陽(yáng)性表達(dá)率（P<0.01）。GlyA在M1、M2、M3、M4和M5、M6中的陽(yáng)性表達(dá)率具體見表1。

本組M6病例除表達(dá)上述抗原外，髓系抗原主要表達(dá)CD13、CD33、CD117、CD15、MPO，其中CD13、CD117的陽(yáng)性表達(dá)率在M6和M2之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。CD33、CD15、MPO在M6中的陽(yáng)性表達(dá)率低于M2（P<0.01），以上抗原在M6與M2中的陽(yáng)性表達(dá)率具體見表2。本組M6病例不伴CD14表達(dá)。部分M6病例伴有淋系抗原的表達(dá)，如CD3、CD4、CD7、CD19，其中CD4陽(yáng)性表達(dá)率較高達(dá)26.67％,一般僅伴有單一淋系抗原表達(dá)。M6與M2免疫表型比較具體見表2。

核型

本組29例M6病例中進(jìn)行染色體核型分析9例，4例（44.44％）患者具有染色體核型異常，染色體核型異常分別為46,xy,cht(6)40%；46,xy,c(87%),mar(13%)；46～47,xx,21［3］20%；49,xy,dup(1)(q3241),4,5,8,其中1例為復(fù)雜染色體核型異常（i>3處染色體數(shù)量異常和／或結(jié)構(gòu)異常）(cht:染色單體；mar:母源；dup:重復(fù))。

療效

本組M6病例化療21例，其中17例的療效可以進(jìn)行判斷?；熗耆徑?CR)5例，CR率為29.41％；對(duì)照組M2病例中化療26例，其中22例的療效可以判斷，化療完全緩解(CR)15例，CR率為68.18％。兩者相比較，M6化療CR率低于M2化療CR率(P<0.01)。對(duì)伴有多系發(fā)育異常的的M6病例化療，結(jié)果無(wú)1例緩解。

討論

M6作為造血系統(tǒng)的腫瘤性疾?。?］，除存在原始細(xì)胞數(shù)量異常，骨髓細(xì)胞學(xué)檢查往往存在多系發(fā)育異常，累及二系或三系，形態(tài)學(xué)表現(xiàn)復(fù)雜，給M6的診斷帶來(lái)一定的困難，易與MDS混淆。此時(shí)原始細(xì)胞計(jì)數(shù)成為辨別的要點(diǎn)，有核紅細(xì)胞PAS＋—＋＋＋，特別是強(qiáng)陽(yáng)性也可以輔助診斷M6，而M6化療效果不佳可能也與這個(gè)特點(diǎn)有關(guān)。

AML由于細(xì)胞發(fā)生克隆增殖的階段不同,存在某些系列多樣性和異質(zhì)性，單一依據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及組織化學(xué)染色診斷急性白血病已顯得不足。隨著MICM分型的提出，用單克隆抗體分析白血病細(xì)胞表面的免疫標(biāo)志,從而進(jìn)一步明確白血病細(xì)胞的起源及分化程度,為臨床診斷及治療，判斷預(yù)后提供了重要的依據(jù)。本研究中M6的GlyA的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于M2（P<0.01）。Kemmitz等［4］用40種單克隆抗體分析了136例AML病例的免疫表型，5例診斷為M6的病例GlyA均為陽(yáng)性，而其他亞型表達(dá)均為陰性。SanMiguel等［5］回顧性研究了98例AML病例，其中5例M6病例4例GlyA陽(yáng)性表達(dá)，其他病例表達(dá)陰性。然而，以上研究中的M6病例數(shù)較少，而本研究中M6病例數(shù)達(dá)29例，進(jìn)一步證明M6特征性表達(dá)GlyA是鑒別M6與髓性白血病其他亞型的一個(gè)重要指標(biāo)［6］。

本研究中M6除特征性表達(dá)GlyA外，HLADR、CD34、CD38陽(yáng)性表達(dá)率也較高，部分病例伴有淋系抗原的表達(dá),如CD3、CD4、CD19，其中CD4的表達(dá)高達(dá)26.67％，且一般僅伴有單一淋系抗原表達(dá)。通過(guò)分析這些抗原的表達(dá)，可以探知M6的起源。過(guò)去很多學(xué)者認(rèn)為CD34是造血干細(xì)胞的標(biāo)志，認(rèn)為白血病起源于造血干細(xì)胞；可是最新的研究表明，并非所有CD34陽(yáng)性的細(xì)胞均是造血干細(xì)胞，相反其中98％以上是早期和晚期的造血祖細(xì)胞，所以CD34是造血干/祖細(xì)胞的標(biāo)志［7］。造血干細(xì)胞白血病具有髓淋兩系同時(shí)或先后受累，或白血病細(xì)胞表型跨越髓淋兩系的特點(diǎn)，此類白血病在臨床上極為少見，而大多數(shù)的白血病僅累及髓系或淋巴系或某一個(gè)細(xì)胞系，甚至某一系的某一個(gè)分化階段。因此，M6并非傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為的起源于造血干細(xì)胞的白血病，而是惡變擴(kuò)增的粒紅祖細(xì)胞階段［3,7］。本組M6病例中髓系抗原的陽(yáng)性率高低依次為CD13>CD33，CD117>CD15，MPO>CD11b，CD71，這與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致［8,9］。

M6患者的化療療效差，在本組病例中化療完全緩解率為29.41％，較文獻(xiàn)報(bào)道M6經(jīng)強(qiáng)烈化療CR率40％-62％要低，這可能與隨訪丟失及有些病例中斷治療有關(guān)［3,8］。本研究表明，M6化療完全緩解率明顯低于M2，分析其原因可能與M6自身的免疫表型有關(guān)。本組M6病例中CD38，CD33，CD15的陽(yáng)性表達(dá)率均低于M2,而已有文獻(xiàn)報(bào)道上述抗原提示白血病細(xì)胞分化良好及白血病預(yù)后良好［9,10］。CD34是造血干/祖細(xì)胞的抗原標(biāo)志，很多學(xué)者認(rèn)為它與AML的低緩解率和短生存期有關(guān)［6，8］，本研究也表明，伴CD34陽(yáng)性表達(dá)M6病例化療緩解率明顯低于CD34陰性表達(dá)者［6］。本研究表明，伴CD11b陽(yáng)性表達(dá)M6病例的化療完全緩解率明顯高于其陰性者，而伴HLADR、CD13、CD33、CD15、CD117陽(yáng)性表達(dá)的M6病例無(wú)1例緩解。

長(zhǎng)期的臨床觀察證明，染色體異常對(duì)AML的預(yù)后有獨(dú)立的預(yù)測(cè)價(jià)值。本組病例中4例核型異常，其中1例為復(fù)雜核型異常，結(jié)果發(fā)現(xiàn)化療對(duì)核型異常者均無(wú)效。M6核型異常易見，化療對(duì)核型正常者的效果優(yōu)于異常者。M6的復(fù)雜核型異常常見于5、7、8號(hào)染色體，多倍體增加也多見［11］，本組研究曾觀察到以上特點(diǎn)。M6患者的化療效果差，也可能還與原發(fā)耐藥有關(guān)［12,13］，有關(guān)此問(wèn)題尚需要進(jìn)一步的研究。

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