導語：如何才能寫好一篇成人謎語，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

大有人在，漢語成語，拼音是dà yǒu rénzài，指某類人數量很多。兼語式;作謂語;同“不乏其人”。這里給大家分享一些關于成語大有人在的謎語，供大家參考。

一、大有人在成語謎語矢 …… 打一成語

二、大有人在成語解析形容某一種人為數不少?！顿Y治通鑒·隋紀煬帝大業(yè)十一年》：“帝至東都，顧眄街衢，謂侍臣曰：‘猶大有人在?！庵^向日平楊玄感，殺人尚少故也?！?/p>

三、大有人在成語造句1.只要你肯學,師傅大有人在。

2.我們這個時代,風流倜儻的青年大有人在。

3.這些人攬轡澄清、志在治國安邦的,也是大有人在。

4.像他這樣的貪污犯現在大有人在。

5.在解放軍戰(zhàn)士中，能百步穿楊的大有人在。

6.像他這樣愛占便宜的人大有人在。

7.舊社會，煙館賭局到處都是，在這些伐性之斧下喪生的大有人在。

8.在中青年教師隊伍中殫見洽聞之士是大有人在的。

9.至今，不相信自己，只按教條辦事，像鄭人買履的人還大有人在。

10.不怕你笑，我們團裡濫竽充數者大有人在。

11.穿著奇裝異服招搖過市的大有人在。

12.即便是今天,小富即安、不思進取的仍大有人在,就是很好的證明。

13.一邊呵佛罵祖,一邊割肉飼鷹者大有人在。

14.但,修煉界之中,忌才的人也大有人在,如若無法拉攏,那就出手毀去,也不愿這樣的人投入到別的勢力之中。

15.但是因為分布區(qū)域狹窄,所以野生數量奇缺,捕捉出售大有人在,價格比起三棱閉殼龜,也就是俗稱的金錢龜還要高昂的多。

16.武藝高強者被拜將封侯者,也大有人在。

17.再看某些知名專家學者和教授，一切向錢看，在其位不謀其政者不乏其人，滔滔不絕卻不著邊際者大有人在，能解決實際問題者顯得彌足珍貴。

18.盡管對她那行云流水般富有表現力的動作持嘲笑態(tài)度的批評家大有人在，但伊莎多拉卻為死板的古典舞蹈界帶來了靈動性和自我表現力。

19.另外一家銀行沈河支行的信貸員告訴記者，現在等了三四個月的大有人在，年前獲得貸款的希望很渺茫。

20.早期移民到加利福尼亞的錫克教信徒與墨西哥裔美國婦女通婚甚為普遍，而第二、第三代日裔與外族通婚也大有人在。

21.可事實上世人多半受寂寞所致,著急開始,然后不了了之的人大有人在,感情猶如泛濫之河水,分文不值也。

22.麥克納斯伯爵是紫荊花帝國名將,威名赫赫,麾下能征慣戰(zhàn)者大有人在,武技高明的騎士多如牛毛,杜昂要學武技很方便,根本就不用到外面另請老師。

23.佩服佩服,要知道,當今天下,能做出‘百尺竿頭’詩句者,大有人在,但是能做出‘百尺竿頭’戰(zhàn)詩者,少之又少。

24.齊風興奮的說道,這三天里他們經常聽到有人在不遠處廝殺,一言不和便殺個你死我活的大有人在,更有甚者只是剛碰面便直接打起來的。

25.準提是善人,那和準提作對的白云就是大大的惡人了,其中中長舌男女大有人在,好事不出門,惡事傳千里,一時之間牛豪惡名傳遍洪荒。

26.我可是提醒過你的,交完錢跟進不進得來可是兩碼事,每年因為不能通過入學測驗而給學院白送錢的冤大頭可是大有人在。

27.藩鎮(zhèn)將領一心保唐的在少,保存實力懷不臣之心的在多,又深懼我軍之威,堅守不出的必大有人在,剩下不聽勸告的,可遣大將痛擊,如此一來,聯軍之?？山狻?/p>

28.袁紹只覺得自己都快被所氣爆了,這幫諸候真是成事不足,敗事有余,聞功則喜,聞過則責,出謀劃策未見有人,落井下石更是大有人在。

29.知道緣由后,更似已經有人開始在楚墨的背后指指點點,甚至有的破口大罵楚墨的惡劣行徑了,而為徐陽抱打不平的更大有人在,局面朝著楚墨不利的情形發(fā)展著。

30.那些人倒了,但是,在他們的鼓噪聲中,火中取栗者、投機取巧者、陰謀家野心家、各色殘渣余孽等等,在臺上的仍然大有人在。

31.陰天樂突然問道,現在田中財團內部為了繼承權打得一塌胡涂,身為首位繼承人的田中麗奈自然成為了多方的眼中釘、肉中刺,想必妄想要她命的大有人在。

32.還有就是到現在人們也沒有形成一個統一的意見,支持兩種意見的人都是大有人在,雙方各抒已見爭論不休。

33.民間的球迷愛屋及烏的認為蔡智的教練水平也到了國際級,希望朱廣滬讓出國家隊主教練位置的大有人在。

篇2

釋義：舊時神怪故事中形容兇神惡鬼的面貌，現形容人面貌極其兇惡。

出處：許仲琳《 封神演義》第六十三回：子牙見對營門一人， 三首六臂青面獠牙。

示例：魯迅《 吶喊·狂人日記》：那青面獠牙的一伙人，便都哄笑起來。

近義詞：呲牙咧嘴、 橫眉豎眼。

篇3

1、 針鋒：針尖。針尖對針尖。比喻雙方在策略、論點及行動方式等方面尖銳對立。

2、雙方爭執(zhí)，寸步不讓 。

出處： 宋·釋道原《景德傳燈錄》卷二：“夫一切回答，如針鋒相投，無纖毫參差?！?/p>

篇4

近幾年，隨著農業(yè)產業(yè)越來越熱，諸多行業(yè)大佬紛紛進軍農業(yè)，但幾年下來，這些大佬們精心打造的產品在市場的表現卻不盡相同，褚橙一枝獨秀，銷量節(jié)節(jié)攀升，而潘蘋果和柳桃則一直處于不溫不火的狀態(tài)。盡管此次任志強口口聲聲說自己做小米完全是為公益，與賺錢無關，但從目前來看，起碼從表面上來看，“任小米”與褚橙、潘蘋果、柳桃等并沒有太大區(qū)別。那么，任志強的“任小米”能否成為糧食領域的“褚橙”呢？

北京方圓品牌營銷機構，作為國內最早的關注農業(yè)產業(yè)、打造實效營銷的知名策劃咨詢公司，憑借多年豐富的市場實戰(zhàn)經驗認為，盡管“任小米”和“褚橙”都有著名人做背書，但“褚橙”的成功絕不僅限于此，“任小米”要想創(chuàng)造“褚橙”一樣的輝煌，成為糧食領域的“褚橙”并不是件輕松的事情。

一、從方向上來說：

此次，任志強賣小米，從一開始就在打公益牌，一直強調自己“賠錢、賠時間、賠精力、賠形象”完全是為了節(jié)省水資源改善內蒙阿拉善當地荒漠化。本來，為了更好的推銷產品，搞點“公益”的情懷無可厚非，其做法與潘石屹為家鄉(xiāng)蘋果代言打造“潘蘋果”如出一轍，本來良好的公眾形象可以為產品加分不少，但從方向上來說卻不免有些偏頗。

為什么這么說呢？因為不管怎么玩情懷，最終的目的還是要賣產品，只有把產品賣出去，再能更好的促進“公益”。因此，其方向始終要對準市場、對準消費者。而一味強調“公益”，會給人一種只考慮自己，而忽視消費者的感覺。在這種情況下，也許有的消費者就會想，要玩公益，那是你們有錢人的事情，為什么非要“綁架”我呢？我為什么非要買，讓你用我的錢去做公益呢？

正是由于方向的偏頗，忽視了消費者，因此，潘石屹的“潘蘋果”雖然一直在打公益，但卻一直不溫不火。而“褚橙”就不一樣了，從一開始褚時健就把方向對準了市場、對準了消費者，那就是打造一款與眾不同的冰糖臍橙，因為方向對了，所以在開拓市場的過程就走的比較順。因此，北京方圓認為，任小米要想將來延續(xù)“褚橙”的輝煌，從一開始方向上就要找準，千萬不能出現大的偏頗。

二、從產品上來說：

在互聯網時代，一個產品要想獲得消費的認可，要想成功，必須要賦予這個產品足夠的內涵來滿足人們的精神需求，只有這樣才能直指消費者的心智并深深的扎根心底。換句話說，不能光賣產品，而是要賣需求。

“褚橙”為什么能夠異軍突起？因為褚橙除了產品真的好，能夠帶來良好用戶體驗之外，一開始就被賦予了一種正面的、積極向上的，切合年輕人精神需求的故事與內涵，甚至被賦予了一種勵志的精神，而這正是其直指消費者心智的精髓所在，除了口感之外，這一點可以說是褚橙最大的增值部分，它讓褚橙的消費者增加了一種精神上的體驗，滿足了他們精神的需求，因此褚橙火了。而“柳桃”則完全不同，柳傳志堅持認為，我賣的就是我種的獼猴桃，而不是我的故事，我的故事我也不會拿出來賣錢。正是因為只賣產品，而缺乏滿足消費者精神需求的東西，因此柳桃在直指消費者心智方面就弱了很多，故而在市場上被褚橙遠遠的甩在后面。

對于剛剛開賣“任小米”來說，北京方圓認為，似乎現在也只是在賣產品，而沒有在賣需求。也許有人說，不是有“公益”嗎，但那不是消費者的需求。而僅僅對于賣產品來說，任小米所強調的“種植基地無污染源，土壤達到國標的‘自然保護區(qū)’級別，不噴灑一滴農藥，沿用古法工藝，手工除草”等等則很難直指消費者的心智，更別提扎根心底了，因為在網絡這個競爭殘酷的環(huán)境中，比你標準高、比你說的好的同類產品有的是。所以，任小米要想真正火起來，還要從一開始就要多賦予自己一點兒能夠滿足人們精神需求的有內涵的東西，并且學會賣需求。

三、從傳播來說：

無論任小米、褚橙，還是柳桃、潘蘋果，雖然都有名人、行業(yè)大佬做背書，但是要想真正賣的好，傳播卻不可少。

褚橙之所以賣的好，引爆傳播方面功不可沒。眾所周知，褚橙剛剛上市，就迅速被王石、潘石屹、田樸珺等名人大力的贊揚追捧，并在社交媒體中宣傳，迅速引爆了傳播，還有老羅不但說褚橙，而且售書送褚橙，再到后來韓寒、蔣方舟等人對褚橙的傳播等等，除了名人、大咖的自媒體傳播，如今褚橙還充分利用個性化的包裝箱進行傳播，都為褚橙的迅速走紅及熱銷發(fā)揮了積極推動作用。而柳桃、潘蘋果在傳播方面明顯力度不夠，因此，褚橙在消費者中的知名度和認知度要比它們高的多，這也是為什么褚橙能夠火爆全國一個重要的原因。

就“任小米”來說，雖然已經在天貓開售，但北京方圓認為，無論是開售之前還是開售后，其傳播的力度還遠遠不夠，很多人知道“任小米”還是通過新聞，而在自媒體或個性化傳播方式的利用方面還亟待提高，因為只有引爆傳播，才能更好的提高產品知名度，才可能真正拉動銷量！

四、從價格上來說

眾多周知，農產品的生意不好做，而小米作為農產品的雜糧類則更不好做。因此，在價格上就要講究策略。

此次，任志強賣小米主打公益牌，但在天貓上的售價卻是49.9元/4斤，此價格讓很多消費者驚呼“太貴了”。北京方圓認為，貴并不可怕，“褚橙”也賣的貴，但一樣能夠賣的火，關鍵是一定要為自己產品的價格找到一個有力的支撐，一定要讓品牌能夠支撐起這個價格，否則建立在“公益”招牌下的任小米很可能因此而自己羈絆了自己前進的步伐。就如同潘蘋果，潘石屹更多的也是主打公益，本來其良好的公眾形象能為其加分不少，但之后潘蘋果推出的定價卻過高，12個一盒，每盒118元，相當于每個蘋果近10元的價格，不但使得公益色彩逐漸變淡，而且又找不到對價格的有力支撐，因此使得潘蘋果在水果大戰(zhàn)中遠遠地處于劣勢，并逐漸走向了沒落。

篇5

【 關鍵詞 】 口令；對稱密鑰；雙向；身份認證

【 中圖分類號 】 TN

【 Abstract 】 This paper proposes a two-way identity authentication scheme based on the password and symmetric key system.Under the assumption that communication on both sides for electronic wallet client and electronic wallet server application environment，using symmetric key algorithm implements mutual authentication between the two sides of communication、the session key exchange and user anonymity.Finally， the solution of the security and performance were analyzed.

【 Keywords 】 password；symmetric key；two-way；the identity authentication

1 引言

由于移動網絡的快速發(fā)展，越來越多的人們開始使用手機等移動終端設備上網，各種電子服務與電子交易發(fā)展也十分迅速。而遠程用戶要獲得遠程服務器的服務或者進行電子交易，用戶與服務器之間在開放的網絡中確認雙方的身份是十分重要的。為了讓人們更加安全地在網絡上進行交易，基于網絡的安全問題已經成為信息社會急需解決的問題之一。項金萍提出的基于口令的兩方認證和密鑰交換協議的研究，實現了用戶和遠程系統的相互認證，但是因為采用了智能卡和讀卡器，并不適合應用于手機等移動設備。楊a涵提出的可證安全的口令認證密鑰交換協議研究，因為采用了公鑰算法，對移動終端的資源需求較大。萬泓伶提出的基于口令的認證系統設計與實現，運用了計算量較大的模運算。林遠輝提出的基于口令的三方認證密鑰交換協議研究，采用了開銷較大的公鑰算法。由徐會艷提出的基于口令的身份認證方案的研究，運用了開銷較大的簽名運算。李曉偉提出的可證明安全的認證與密鑰協商協議研究，也采用了開銷較大的公鑰算法。本文提出的身份認證方案，因為采用了對稱密鑰算法，對系統資源需求較低，適合應用于手機設備等移動終端環(huán)境。

2 方案設計

2.1 用戶注冊

用戶A設定使用電子錢包的賬戶名IDA和口令pwA。服務器將一個共享的對稱密鑰kA和對應IDA的匿名標識snA存入到客戶A的電子錢包客戶端中，服務器保存了snA與IDA及h（pwA）的映射關系，用戶A下載并安裝電子錢包客戶端，用戶不能訪問存儲kA和snA的區(qū)域。

2.2 認證流程

方案的具體認證流程如圖1所示。

（1）用戶輸入用戶名IDA和口令pwA登陸電子錢包客戶端。

（2）客戶端選取隨機數r1并作存儲，用對稱密鑰kA加密r1 || IDA為E（r1 || IDA），把E（r1 || IDA），snA打包為MA發(fā)送至服務器。

（3）服務器收到MA后，檢測snA是否存在于數據庫，若存在則查找對應的IDA，否則拒絕認證。通過snA查找到對應IDA的共享對稱密鑰kA，用對稱密鑰kA解密E（r1 || IDA）得到r1 || IDA，存儲r1。服務器選取隨機數r2、會話密鑰k'并作存儲，用對稱密鑰kA加密IDS || k' || r1 為E（IDS || k' || r1），把E（IDS || k' || r1），r2打包為MS發(fā)送至客戶端。

（4）客戶端收到MS后，用對稱密鑰kA解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，比較解密得到的隨機數r1'與客戶端已存儲的r1是否相同，相同則存儲會話密鑰k'和隨機數r2，否則拒絕認證?？蛻舳擞脮捗荑€k'加密r2 || h（pwA）為M0，然后發(fā)送M0至服務器。

（5）服務器收到M0后，用會話密鑰k'解密M0得到r2 || h（pwA），比較解密得到的隨機數r2'、h（pwA）'與服務器端已存儲的r2、h（pwA）是否相同，相同則認證成功，否則拒絕認證。認證成功后，服務器更新snA為sn'A。用會話密鑰k'加密IDS || sn'A為M1，然后發(fā)送M1至客戶端。

（6）客戶端收到M1后，用會話密鑰k'解密M1得到IDS || sn'A，存儲匿名標識sn'A，用作下一次用戶的登錄認證。

3 安全性和性能分析

3.1 方案的安全性

性質1：認證方案可以實現會話密鑰的安全交換。

證明：步驟（3）中服務器通過匿名標識snA查找到對應IDA的共享對稱密鑰KA，從而解密了E（r1 || IDA），確認了消息MA的真實性以及用戶的真實身份IDA。服務器選取會話密鑰k'，用對稱密鑰KA加密IDS || k' || r1為E（IDS || k' || r1）傳輸至客戶端，保證了會話密鑰k'的安全傳輸。步驟（4）中客戶端用對稱密鑰KA解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，通過比較解密得到的隨機數r'1與客戶端已存儲的r1是否相同，從而確認了消息MS以及隨機數r1的真實性，客戶端存儲會話密鑰k'，因此會話密鑰的安全交換得以實現。

性質2：認證方案可以保證用戶與服務器之間的可認證性。

證明：步驟（3）中服務器通過匿名標識snA查找到對應的IDA共享對稱密鑰kA，解密E（r1 || IDA）得到r1 || IDA，通過比較解密得到的ID'A與服務器已存儲的IDA是否相同，從而確認了用戶身份的真實性，用戶身份得以認證。步驟（4）中客戶端用對稱密鑰kA解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，通過比較解密得到的隨機數r'1與客戶端已存儲的r1是否相同，從而確認了消息MS以及隨機數r1的真實性，服務器身份得以認證。步驟（5）中服務器用會話密鑰k'解密M0得到r2 || h（pwA），通過比較解密得到的隨機數r'2 、h（pwA）'與服務器端已存儲的r2 、h（pwA）是否相同，實現了用戶口令的認證，因此用戶與服務器之間的可認證性得以保證。

性質3：認證方案可以保證用戶的匿名性。

證明：步驟（2）中客戶端通過匿名標識snA隱藏用戶的真實身份IDA，snA僅在用戶向服務器發(fā)起認證的消息MA中。步驟（3）中服務器發(fā)給用戶的應答是含有隨機數r1的消息MS，除用戶本人外，任何人都不知道該報文是發(fā)給誰的，保證了用戶身份的機密性。步驟（5）中用戶與服務器認證成功后，服務器更新snA為sn'A，因此有效地保證了用戶的匿名性。

3.2 性能分析

3.2.1 客戶端

計算開銷：用H代表一次hash計算，E代表一次對稱加密計算，D代表一次對稱解密計算，用λ代表hash函數輸出的位長。

步驟（2）中客戶端用對稱密鑰kΑ加密r1 || IDA為E（r1 || IDA），需要一次對稱加密計算，步驟（4）中客戶端用對稱密鑰kΑ解密E（IDS || k' || r1）得到IDS || k' || r1，需要一次對稱解密計算，用會話密鑰k'加密r2 || h（pwA）為M0，需要一次對稱加密計算和一次hash計算，步驟（6）中客戶端用會話密鑰k'解密M1得到IDS || sn'A，需要一次對稱解密計算，客戶端的計算開銷總計為H+2E+2D。

步驟（2）中客戶端發(fā)送消息MΑ至服務器、步驟（4）中客戶端收到消息MS、發(fā)送消息M0至服務器、步驟（6）中客戶端收到消息M1需要的通信開銷大致為2| r1 | + | IDA | + | snA | + 2| IDS | + | k' | + 2| r2 | + | λ | + | sn'A | 。

| r1 | 、 | IDA | 、 | snA |、| IDS | 、 | k' |、| r2 |、 | sn'A |分別代表 r1 、 IDA 、 snA 、IDS 、 k' 、 r2 、sn'A 的標準位長。

3.2.2 服務器

步驟（3）中服務器用對稱密鑰kΑ解密E（r1 || IDA）得到r1 || IDA，需要一次對稱解密計算，用對稱密鑰kΑ加密IDS || k' || r1為E（IDS || k' || r1），需要一次對稱加密計算，步驟（5）中服務器用會話密鑰k'解密M0得到r2 || h（pwA），需要一次對稱解密計算，用會話密鑰k'加密IDS || sn'A為M1，需要一次對稱加密計算，服務器的計算開銷總計為2E+2D。

步驟（3）中服務器收到消息MA、發(fā)送消息MS至客戶端、步驟（5）中服務器收到消息M0、發(fā)送消息M1至客戶端需要的通信開銷大致為2| r1 | + | IDA | + | snA | + 2| IDS | + | k' | + 2| r2 | + | λ | + | sn'A |。

4 結束語

本文通過運用口令和對稱密鑰算法，實現了客戶端和服務器的雙向身份認證，不僅完成了會話密鑰的安全交換，而且也保證了用戶的匿名性，用戶的隱私得到了有效保護。在安全性得到保障的同時，也獲得了較好的性能。

參考文獻

[1] 項金萍.基于口令的兩方認證和密鑰交換協議的研究[D].杭州師范大學，2011.

[2] 楊a涵.可證安全的口令認證密鑰交換協議研究[D].中國礦業(yè)大學，2013.

[3] 萬泓伶.基于口令的認證系統設計與實現[D].電子科技大學，2013.

[4] 林遠輝.基于口令的三方認證密鑰交換協議研究[D].山東大學，2014.

[5] 徐會艷.基于口令的身份認證方案的研究[D].南京理工大學，2010.

[6] 李曉偉.可證明安全的認證與密鑰協商協議研究[D].西安電子科技大學，2013.

基金項目：

國家自然科學基金資助項目（61472343）。

作者簡介：

李純（1992-），男，漢族，江蘇徐州人，揚州大學信息工程學院，碩士，研究生；主要研究方向和關注領域：信息安全。

篇6

關鍵詞：人員密集 建筑 火災隱患 致災因素 預防治理

1、人員密集場所建筑的定義

人員密集場所建筑是指人員聚集眾多、密度較大,一旦發(fā)生火災極易造成人員群死群傷或重大財產損失的建筑。《建筑設計防火規(guī)范》（2006版）中將人員密集場歸納為同一時間內聚集人數超過50人的公共活動場所,而新《中華人民共和國消防法》（2009版）明確定義為:人員密集場所,是指公眾聚集場所,醫(yī)院的門診樓、病房樓,學校的教學樓、圖書館、食堂和集體宿舍,養(yǎng)老院,福利院,托兒所,幼兒園,公共圖書館的閱覽室,公共展覽館、博物館的展示廳,勞動密集型企業(yè)的生產加工車間和員工集體宿舍,旅游、宗教活動場所等。

2、城市人員密集場所建筑火災隱患存在的種類

(1)在一些大中型城市的商業(yè)繁華地段遍布著人員密集場所建筑,更有甚是文物保護建筑,建設之初未經消防設計或原消防設計已經滿足不了現行消防技術標準規(guī)范要求。比如一些商場建筑的防火分區(qū)超面積或原本就沒有進行防火分隔,防火間距及消防車通道寬度不足,消防給水系統等消防設施不符合現行規(guī)范標準。

(2)有些人員密集場所的消防設施自安裝首次調試后就沒有進行過檢驗維修,消防控制值班人員不懂更不固定,甚至根本不設消防控制人員,致使消防設施不能正常運轉或達不到功能要求,成了“假”消防設施。

(3)建筑使用上滿足不了人員密集場所消防技術標準。一些設置在居住建筑內的人員密集場所,應設置獨立安全出口,但在投入使用之初就沒有設置第二安全出口,或與居民住宅共用安全出口和疏散通道,不能滿足人員密集場所的消防安全要求。

(4)一些城市自身消防水源不足。這些城市里的部分人員密集場所沒有設置消防水源,即便安裝了消防給水系統,由于水源有限也只成了擺設,不能真正起到滅火作用。少數缺水地區(qū)的人員密集場所將消或拴系統直接接到市政管網給水系統上,不單獨設立消防泵,無法滿足消防給水常高壓的要求。

3、城市人員密集場所建筑火災隱患形成的原因

3.1 歷史形成原因

由于建筑始建年代久遠,當初的消防科技還不發(fā)達,消防技術標準比較落后,不能滿足人員密集場所的建筑消防技術要求。消防法律法規(guī)還不健全,建筑消防審核、驗收體制還不完善,加之消防監(jiān)督檢查監(jiān)管不到位,致使這些人員密集場所建筑投入使用并沿用至今。

3.2 消防設施系統檢測、維護管理不到位

一些人員密集場所的負責人不重視消防工作,不能定期對建筑消防設施進行檢驗維修保養(yǎng),不落實建筑消防設施管理、維護制度,致使建筑消防設施設備年久失修,老化、損壞嚴重,影響防滅火功能。

3.3 在消防設施安裝維護上不投入資金

一些人員密集場所經營者只顧眼前利益,認為安全投資沒有收益,加之僥幸心理作怪,不認為火災會與發(fā)生在自己頭上,寧愿在廣告宣傳上投入大量資也不愿在消防安全設施建設上投入丁點資金。

4、城市人員密集場所建筑火災隱患的預防與治理

4.1 加強對人員密集場所建筑火災隱患的監(jiān)督檢查

人員密集場所歷來是消防監(jiān)管重點單位,按照《消防法》規(guī)定,公安機關消防機構至少應每年對人員密集場所重點單位進行一次消防監(jiān)督檢查。首先是人員密集場所所在建筑是否經過消防設計審核、消防驗收合格,并取得相應消防行政許可;其次是屬于公眾聚集場所的人員密集場所開業(yè)前或使用前是否依法申請消防安全檢查,并符合消防安全要求取得消防行政許可;最后是已經通過消防設計審核和消防驗收合格的建筑使用性質是否改變。

4.2 加大對人員密集場所建筑火災隱患整改力度

對發(fā)現存在火災隱患的人員密集場所不僅要依法下發(fā)《責令改正通知書》,更要督促其落實整改措施、制定推進整改計劃、跟蹤督促整改進程,直到消防設施設備滿足現行人員密集場所各項消防技術標準要求。

4.3 嚴把建筑消防審核、驗收及備案抽查關

消防行政許可部門要嚴格按照法律法規(guī)和各項消防技術標準規(guī)范對人員密集場所建筑進行消防審核、驗收及備案抽查,從源頭上杜絕人員密集場所的建筑火災隱患。

4.4 定期組織建筑消防設施檢測維護,確保正常運行

設置在人員密集場所的消火栓給水系統、火災自動報警系統、自動噴水滅火系統、防煙排煙系統等各類消防設施必須有經過消防培訓的專門人員管理操作,并定期組織檢驗檢測,發(fā)現問題故障,及時溝通生產廠家或具備消防資質公司進行維修維護。

5、城市人員密集場所人為致災因素的基本種類

5.1 將人員密集場所設置在耐火等級低的建筑物內

人員密集場所應設置在耐火等級較高的一、二級建筑內,但個別業(yè)主為節(jié)省資金投入而將人員密集場所設置在耐火等級較低的三級建筑內,達不到人員密集場所的建筑防火要求。

篇7

【關鍵詞】 黑色素瘤抗原；發(fā)酵；大腸桿菌

【Abstract】 AIM: To realize high celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E.coli，and to evaluate the antitumor immunity of MAGE3/HSP70 fusion protein in vivo. METHODS: High celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 enginered E. coli was carried out with constant soluble oxygen and continuous cultivation in selfcontrol fermentor. The mouse was immunized by purified MAGE3/HSP70 fusion protein in E.coli， and the antitumor immunity was detected by ELISPOT and LDH release assay. RESULTS: High celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E.coli was successful， and the expression of MAGE3/HSP70 in fermented bacterial was the same as the flask culture. The results of ELISPOT and LDH release assay showed that MAGE3/HSP70 generated tumor specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) to damage tumor cel1. CONCLUSION: High celldensity fermentation of MAGE3/HSP70 engineered E.coli was realized and MAGE3/HSP70 fusion protein can generate specific CTL to kill tumor cel1.

【Keywords】 Melanoma antigen; fermentation; E.coli

【摘要】 目的：實現重組人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度發(fā)酵，并測定MAGE3/HSP70融合蛋白在體內的抗腫瘤免疫效應. 方法：利用自控發(fā)酵罐發(fā)酵，采用溶氧反饋，分批補料的方法對MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌進行了高密度發(fā)酵，從菌體中純化MAGE3/HSP70融合蛋白，并用所純化的MAGE3/HSP70融合蛋白免疫小鼠，運用酶聯免疫斑點法(ELISPOT)和細胞毒性殺傷實驗(LDH)檢測了融合蛋白激活機體細胞免疫反應的狀況. 結果：高密度發(fā)酵取得成功，發(fā)酵菌中MAGE3/HSP70融合蛋白的表達量與搖瓶中的相當，摸索出發(fā)酵水平純化MAGE3/HSP70融合蛋白工藝，ELISPOT和LDH顯示MAGE3/HSP70可以激活機體免疫反應，并產生針對MAGE3的CTL，特異性殺傷表達MAGE3的腫瘤細胞. 結論：MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌成功實現高密度發(fā)酵，MAGE3/HSP70融合蛋白可以有效激活機體免疫反應，產生針對特異性抗原MAGE3的CTL，免疫學活性良好，為新型抗腫瘤疫苗臨床前研究奠定了良好基礎.

【關鍵詞】 黑色素瘤抗原；發(fā)酵；大腸桿菌

0引言

黑色素瘤抗原（melanoma antigenassosiated gene，MAGE）是第一類被發(fā)現的腫瘤排斥抗原［1-2］，MAGE3是MAGE家族成員之一，不僅在黑色素瘤表達，同時在其它多種腫瘤中均有不同程度的表達，能夠誘導機體特異性的CTL反應，更重要的是在除和胎盤外的正常組織中均不表達，人們認為它是腫瘤特異性免疫治療理想的靶分子之一［3-4］. 重組人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白(專利申請?zhí)枺篫L03134626.X)是我室研制和開發(fā)的一種新型腫瘤疫苗［5］，它對肝癌、胃癌、乳腺癌等常見惡性腫瘤具有良好的治療效果和預防效果，在腫瘤的治療方面具有潛在的臨床應用價值［6］. 本研究目的是實現重組人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度發(fā)酵，并用從發(fā)酵菌中純化的目的蛋白，測定其在體內的抗腫瘤免疫效應，為通過動物腫瘤模型研究MAGE3/HSP70融合蛋白在腫瘤免疫治療中的作用奠定基礎.

1材料和方法

1.1材料含MAGE3/HSP70基因的重組表達質粒pET28a／MAGE3HSP70由本室構建，宿主菌BL21（DE3）本室保存. NBS Bioflo Ⅳ20L自動發(fā)酵罐(NBS公司)；J6B型大容量冷凍離心機(Beckman公司)；微量蛋白電泳儀(BioRad公司)；KTA explorer 100層析系統(Amersham Pharmacia Biotech公司);實驗動物是由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心引進繁殖的4～6 wk齡二級C57BL/6小鼠40只，體質量18～20 g，均為雌性，在SPF級飼養(yǎng)條件下進行試驗. 轉MAGE3基因的小鼠黑色素瘤細胞B16MAGE3由本實驗室馬家海博士構建，MAGE3蛋白和HSP70蛋白由本實驗室馬家海博士提取并鑒定. 小鼠IFNγ ELISPOT系統(法國Diaclone公司); Cytotox96檢測試劑盒(Promega公司); Ficoll淋巴細胞分離液(Sigma公司); 蛋白胨、酵母抽提物(Oxoid公司); SOURCE 30Q及Sephacryl S200HR (Pharmacia公司); IPTG (Sigma公司); 抗MAGE3多克隆抗體(R&D公司);其余試劑均為國產分析純試劑.

主要溶液的配制①種子液：1000 mL種子液中含蛋白胨16 g，酵母提取物10 g，甘油20 mL，NaCl 5 g，用5 mol／L NaOH將pH值調至7.0；②發(fā)酵液：每升發(fā)酵液中含有蛋白胨20 g，酵母抽提物9 g，甘油5 mL，十二水磷酸氫二鈉6 g，磷酸二氫鉀1.5 g，硫酸銨1.5 g，氯化銨1 g，七水合硫酸鎂0.25 g，氯化鈣0.02 g，硫酸亞鐵0.04 g，甘氨酸0.5 g. 每升補料基質含有：甘油120 mL，蛋白胨80 g，酵母抽提物40 g，七水合硫酸鎂5 g.

1.2方法

1.2.1種子培養(yǎng)取-70℃，100 g/L甘油保存的pETHM/BL21(DE3)菌種1支，從中挑取1環(huán)，劃含卡那霉素(Kan)的LB平板，37℃培養(yǎng)過夜，次日挑取一個邊緣整齊、生長良好的單菌落接種到10 mL LB培養(yǎng)基中(含35 mg/L Kan)，37℃振蕩培養(yǎng)12 h，以50 g/L接種量轉接1次，37℃繼續(xù)培養(yǎng)4 h左右，使其生長至對數生長期，以1%接種量轉接至200 mL種子液中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜.

1.2.2發(fā)酵采用20 L NBS Bioflo IV自控發(fā)酵罐，發(fā)酵總體積12 L (0.6 L種子液，0.74 L發(fā)酵液，1.2 L緩沖液，9.48 L H2O)，含Kan (35 mg／L). 以AFSBioCommand Bioprocessing Software(Version 2.61)軟件對其進行數據采集(每30 s采集數據1次)，實現計算機在線控制，全過程共10 h. 控制參數為：①空氣流量設定為12 L/min，溶氧控制在40%，達到最大轉速后，通入純氧；②溫度控制為37℃；③pH值設定為7.0，自動流加濃氨水以保持恒定；④攪拌速度：設定攪拌速度下限為200 r/mim，上限為1200 r/min. 生長過程中當溶氧低于設定值時通過計算機由AFSBioCom mand Bioprocessing Software(Version 2.61)軟件控制每分鐘增長5轉. 誘導過后，攪拌速度改為由NBS Bioflo IV發(fā)酵罐自動溶氧反饋控制. ⑤補料流加：在生長階段，當溶氧率在3 min內持續(xù)高于60％時補料泵以5％的速率進行補加營養(yǎng). 誘導階段當溶氧值在3 min內持續(xù)高于50％時補料泵以100％的速率進行補加營養(yǎng)1 min. 每1 h取樣測定A600 nm值，當培養(yǎng)至A600 nm=12時IPTG誘導目的蛋白表達，誘導4 h后收集菌體，取小量進行SDSPAGE檢測蛋白表達水平，其余菌體保存于-70℃用于純化目的蛋白.

1.2.3目的蛋白的純化4℃離心收菌，3 mL/g菌體重懸于Lysis Buffer（50 mmol／L NaH2PO4，300 mmol／L NaCl，10 mmol／L imidazole，pH 8.0)；加入溶菌酶至終濃度為10 g/L，冰浴30 min；超聲裂解，功率2 kW，超聲10 s，間隔10 s，共30 min；12 000 g，4℃離心15 min，取上清，0.45 μm針頭濾器過濾；上NiNTA Superflow柱， Wash Buffer(50 mmol／L NaH2PO4， 300 mmol／L NaCl， 20 mmol／L imidazole， pH 8.0)沖洗后Elution Buffer(50 mmol／L NaH2PO4， 300 mmol／L NaCl， 250 mmol／L imidazole， pH 8.0)；洗脫，收集洗脫峰；SDSPAGE分析；以50倍體積的A液(20 mmol／L Tris?HCl， pH 8.0)透析24 h，中間換3次透析外液，透析后上清過用A液充分平衡的SOURCE 30Q柱，用B液(20 mmol／L Tris?HCl， 0.5 mol／L NaCl， pH 9.0)連續(xù)梯度洗脫4～5個柱床體積，收集洗脫峰，SDSPAGE分析；收集目的蛋白峰，以50倍體積的C液(20 mmol／L Tris?HCl， pH 7.4)透析24 h，中間換3次透析外液，透析后上清過用D液（137 mmol／L NaCl， 1.4 mmol／L KH2PO4， 1.7 mmol／L KCl， 4.3 mmol／L Na2HPO4?12H2O，pH 7.4）液充分平衡的Sephacryl S200HR柱，收集洗脫峰；SDSPAGE及Western Blot鑒定. Bradford法測定蛋白的含量，凍干，-70℃保存.

1.2.4動物免疫和小鼠脾淋巴細胞的分離與活化C57BL/6小鼠30只，隨機分為5組，每組6只，各組分別于第1，10，20日腹腔注射蛋白免疫，MAGE3組注射MAGE3蛋白3.2 μg（200 pmol）；HSP70組注射HSP70蛋白15.8 μg（200 pmol）；MAGE3/HSP70組注射融合蛋白18.6 μg（200 pmol）；HSP70＋MAGE3組注射HSP70蛋白7.9 μg（100 pmol）和MAGE3蛋白1.6 μg（100 pmol），對照組注射PBS，100 μL/(只?次). 末次免疫后10 d，小鼠球后動脈取血，斷頸處死，無菌取脾臟，毛玻璃片輕輕捻碎脾臟，10號針頭輕輕吹吸數次，用Ficoll淋巴細胞分離液分離淋巴細胞. 計數后，用AIMV培養(yǎng)液培養(yǎng)1 d后用于后續(xù)試驗.

1.2.5MAGE3特異性T細胞的檢測采用IFNγ ELISPOT方法： 依照法國DIACLONE公司ELISPOT檢測試劑盒使用說明，用稀釋好的捕獲抗體（Capture Antibody）100 μL/孔包被PVDF板， 4℃靜置16 h. 20 g/L脫脂乳PBS室溫封閉2 h，加入PBS，MAGE3，HSP70，MAGE3/HSP70和MAGE3＋HSP70免疫小鼠得到的脾細胞細胞1×104個/孔，同時加入轉MAGE3基因的小鼠黑色素瘤細胞B16MAGE3細胞5×104個/孔，每個實驗組設置3個復孔，50 mL/L CO2納胞培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)20 h. 用PBS充分沖洗后加入檢測抗體（Detection Antibody），于37℃孵育2 h，洗板，再加入堿性磷酸酶標記的鏈霉親和素，同上孵育洗板，加入底物顯色液. 避光顯色20 min，1200 dpi掃描讀取斑數，統計學分析.

1.2.6LDH釋放法測定細胞殺傷效率方法參照文獻［5］，主要步驟如下：以PBS，MAGE3，HSP70，MAGE3/HSP70和MAGE3＋HSP70免疫小鼠得到的脾細胞為效應細胞，以MAGE3基因的小鼠黑色素瘤細胞B16MAGE3細胞為靶細胞，以小鼠黑色素瘤細胞B16為對照，進行體外殺傷實驗. 靶細胞濃度為1×104個/孔，效靶比分別為5∶1，10∶1和50∶1，37℃共育4 h，離心后，每孔吸取50 μL上清液進行LDH檢測. 實驗同時設立效應細胞自發(fā)釋放孔，靶細胞自發(fā)釋放孔，靶細胞最大釋放孔和培養(yǎng)液背景孔. 每個實驗組設3個復孔，用AIMV無血清培養(yǎng)液洗滌重懸細胞，所有檢測孔所測得吸光度值減去培養(yǎng)液背景即為實際值. 按下公式計算：殺傷率=(實驗組A-效應細胞自發(fā)A-靶細胞自發(fā)A)/ (靶細胞最大A-靶細胞自發(fā)A)×100％.

統計學處理：統計資料均采用x±s表示，分析采用JMP統計軟件（V5.0.1.2SAS Institute Inc.）進行，組間比較采用方差分析處理，P

2結果

2.1工程菌的發(fā)酵為了獲取足量的菌體進行研究，我們對工程菌進行了高密度發(fā)酵. 用溶氧反饋、分批補料的方法，采用20 L NBS Bioflo IV發(fā)酵罐進行高密度發(fā)酵. 接入種子液時菌體密度為A600 nm=0.01，6 h后達A600 nm=12.8. 200 μmoL/L IPTG誘導表達目的蛋白， 于誘導后4 h終止發(fā)酵， 發(fā)酵結束時A600 nm=48.2， 每升發(fā)酵液收濕菌70 g， 發(fā)酵曲線如圖1.

圖1pETMH/BL21(DE3)工程菌的發(fā)酵曲線（略）

2.2MAGE3/HSP70融合蛋白的表達及純化結果顯示，在誘導4 h后，發(fā)酵菌體的重組蛋白表達量同搖瓶培養(yǎng)表達水平相當(圖2A). 發(fā)酵菌體裂解后取上清，經過NiNTA Superflow，SOURCE 30Q及Sephacryl S200HR純化后，純度可達90％以上(圖2A). Western Blot結果顯示，純化后的目的蛋白能夠與抗人MAGE3多克隆抗體特異性結合(圖2B).

AM: 低分子質量蛋白標準;

1: 未誘導pETMH/BL21(DE3);

2: 搖瓶IPTG誘導pETMH/BL21(DE3);

3: 發(fā)酵罐IPTG誘導pETMH/BL21(DE3);

4: 純化MAGE3/HSP70融合蛋白. B1: 低分子質量蛋白標準;

2: 未誘導pETMH/BL21(DE3);

3: 純化MAGE3/HSP70融合蛋白;

4: 發(fā)酵罐IPTG誘導pETMH/BL21(DE3).

圖2MAGE3/HSP70的原核表達與分離純化（A）及Western Blot（B）結果（略）

2.3體外腫瘤免疫學試驗

2.3.1ELISPOT檢測分泌IFNγ的MAGE3特異性T細胞數量與PBS組比較，HSP70組、MAGE3+HSP70組小鼠脾淋巴細胞中分泌IFNγ的T淋巴細胞頻數沒有明顯變化，MAGE3組和MAGE3/HSP70組頻數顯著增加（P

2.3.2細胞毒性實驗采用LDH釋放實驗，結果顯示，效靶比為5∶1，10∶1和50∶1時，HSP70組及PBS組誘導的CTL對B16MAGE3細胞無特異性殺傷作用；MAGE3組、MAGE3+HSP70 和MAGE3/HSP70組特異性殺傷作用顯著增強，而且MAGE3/HSP70組特異性殺傷作用顯著大于MAGE3組、MAGE3＋HSP70組（P

bP

圖3ELISPOT檢測蛋白疫苗免疫小鼠分泌IFNγ的T淋巴細胞頻數（n=5， x±s）（略）

bP

圖4蛋白疫苗免疫的小鼠脾淋巴細胞對B16MAGE3細胞的特異性殺傷（n=5， x±s）（略）

3討論

腫瘤免疫治療在預防腫瘤復發(fā)、轉移及治療微小殘留腫瘤病灶等方面有其獨特的優(yōu)勢，是腫瘤綜合治療的重要組成部分. 腫瘤免疫治療的分子基礎是腫瘤抗原可以激活機體特異性CTL殺傷腫瘤細胞. 黑色素瘤抗原(MAGE)是一種腫瘤特異性抗原，是腫瘤特異性免疫治療理想的靶分子［1-2］. 其中MAGE3可以激活機體的細胞免疫系統，活化CTL特異性地識別并殺傷表達MAGE3的腫瘤細胞［3-4］. 重組人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白是我室研制和開發(fā)的一種新型腫瘤疫苗［5］，實驗表明，它對肝癌、胃癌、乳腺癌等常見惡性腫瘤具有良好的治療效果和預防效果，在腫瘤的治療方面具有潛在的臨床應用價值［6］. 作為廣譜抗腫瘤藥物的研究，其用量較大，為了得到大量的重組MAGE3/HSP70蛋白，就需要大量的誘導表達MAGE3/HSP70蛋白的基因重組菌體，而高密度發(fā)酵是獲取大量基因重組菌體重要策略之一［7］.

基因工程菌的兩階段培養(yǎng)法是基因工程的一大進步，它是通過合適的誘導條件將工程菌的發(fā)酵過程分為菌體生長與產物表達兩階段，為了增加基因產品的時控產率，不僅需要提高工程菌的表達水平，同時必需增高菌體增殖密度［8-9］. 對于通過化學誘導表達目標蛋白的工程菌，誘導時機和誘導時間對菌體的生長密度和比生產率有較大影響. 在細菌的對數生長中期誘導比早期和后期誘導產率高，而且只有工程菌處于對數生長時期，目標蛋白的表達水平才最高，一旦工程菌進入穩(wěn)定生長期，目標蛋白的表達水平迅速下降，可能與菌體內的酶體系有關. 在對數生長期菌體內的各種酶體系代謝旺盛，尤其是轉錄、翻譯酶體系很活躍，而進入穩(wěn)定生長期后，該酶體系活性減弱或代謝速度減慢，只能勉強進行轉錄和翻譯，從而引起細菌生長狀態(tài)下降，表達外源基因的能力也隨之降低［10-11］， 所以應在對數中期進行誘導. MAGE3/HSP70工程菌活化6 h，A600 nm為12.3時處于對數生長期中，此時進行IPTG誘導，收菌量與目標蛋白的表達量都達到較高水平. 研究雖然對MAGE3/HSP70工程菌進行成功的發(fā)酵，但是收菌量還有待進一步提高，發(fā)酵條件還要進一步優(yōu)化，以達到中試生產的要求. 在下步純化過程工作中我們一方面要提高MAGE3/HSP70蛋白的可溶性表達，另外還要摸索包涵體的復性條件，以期提高蛋白的最后得率.

為了進一步明確發(fā)酵表達并純化的MAGE3/HSP70在體內的抗腫瘤免疫活性，我們利用檢測細胞免疫反應的通用方法，酶聯免疫斑點法(ELISPOT)和細胞毒性殺傷實驗(LDH)檢測了MAGE3/HSP70激活機體免疫反應的情況. 結果發(fā)現用MAGE3/HSP70免疫小鼠，刺激機體產生分泌IFNγ的T淋巴細胞頻數顯著高于PBS組，HSP70組，MAGE3+HSP70組以及MAGE3組. 同時LDH殺傷實驗表明MAGE3/HSP70可以激活機體免疫系統產生特異性CTL殺傷表達MAGE3的腫瘤細胞，且顯著高于其他各組，而對不表達特異性抗原的細胞沒有殺傷作用. 說明MAGE3/HSP70在制備過程中保持了藥物的性能. 本實驗為MAGE3/HSP70的進一步應用奠定了基礎.

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篇8

對于一流高校理科專業(yè)的學生來說，在本專業(yè)繼續(xù)深造是比較保險的出路，也是大多數人的選擇，除此之外的舉動，例如工作、轉系等等，都被視為冒險項目。

與李杰的清閑相比，在上海，4歲孩子的父母們忙碌起來，5月和6月是幼兒園報名的高峰期，一些名牌幼兒園的名額早早就會被一搶而空，為了能在9月開學時給孩子尋找一條“金色起跑線”，家長必須提前數月打聽情報、盡早在網上登記，“通路子”、找關系，有的家庭一家六口悉數出馬，清早起床分赴不同幼兒園拿號排隊，以便能讓孩子在多家幼兒園得到“面試”機會?！昂透呖继钪驹敢粯??！庇屑议L在幼兒論壇的擇園版抱怨，他們心力交瘁，同時也暗自擔憂，如果從4歲起就如此疲于奔命。那未來的十幾年學習生涯，甚至畢業(yè)后孩子的工作出路，都像是一副枷鎖，牢牢束縛住他們的生活和希望。

“名牌大學”VS“理想的大學”

威爾?肖茨是世界上唯一一個擁有“謎語學’學位的人，1974年，他進入印第安納大學學習，該大學有一條規(guī)定――本科生可以自行設計學位課程，專業(yè)方向不限，只需要滿足基礎課及學分要求。這在很多高校是想都不敢想的規(guī)定，可是給了威爾一個機會，這個喜歡猜謎的年輕學生試著提交了一份謎語學學位課程計劃。教授們雖然吃驚，最終還是批準了，于是他讀完自己設計的謎語學課程，提交西方謎語史論文，隨后考取弗吉尼亞大學法學院，三年后放棄考律師(美國律師的吃香程度相當于如今中國的公務員)，進了一家雜志社編寫字謎。

如今，威爾的“成功業(yè)績”包括《紐約時報》的縱橫填空字謎和NPR周日字謎節(jié)目；家藏兩萬種古今謎語文獻，包括十六世紀珍本；還創(chuàng)辦了全美字謎大賽和萬國謎語錦標賽，擔任世界各地的謎語賽事的主席、評委或特邀顧問。

作家馮象在《理想的大學》一文中寫道：“我在威爾身上看到了理想的大學，那里，學生可以自由發(fā)展個性與才智，而不必套進同樣的模子，試圖長成或裝扮同樣的人材。千人一面，一個腦袋?！?/p>

李杰談論他們班那個“唯一去找工作的同學”時說：“他是一個比較有想法的人。已經直接保博了，可是想到未來5年都待在高校研究所里，而研究的項目又不一定是自己想做的，與其浪費青春，不如干脆進入社會鍛煉。”

1986年12月出生的李杰是江蘇前黃高級中學保送至清華的學生。當年在那個省重點學校，他排名年級前五，父母對他報考化學系有意見，希望他讀一個例如計算機那樣的專業(yè)。“社會上所謂熱門專業(yè)，好找工作，都是錯誤的。10年前計算機那么火，都去讀，現在畢業(yè)的學生不過也就是當個底層IT人士罷了。”李杰費了一番口舌說服文化程度不高的父母，他的父親后來覺得“學化學可以做藥，做化肥，人沒有計算機也能活，但生病了不吃藥不行”，便想通了。李杰認為自己也算是對出路想得比較明白的人――這是他的愛好，他愿意在這條路上一直走下去，而他的很多同學是“隨大流”，既然大家都走這條路，也很保險，那么就這樣吧。

去年從北大生物系畢業(yè)的吳玫選擇了一條截然不同的道路，她不盡然同意“保研―出國―直博”這一高校理科生的單一模式，畢業(yè)后當了一年古琴老師。“我的同學都覺得我很奇怪。”她穿著亞麻布的衣服，在琴館過著彈琴、上課、喝茶這樣相對悠閑的日子，她的父母也希望她能夠繼續(xù)深造，或者回西安去找一份穩(wěn)定的工作，她現在需要給父母一個留在北京的理由，因此也考慮如何重新規(guī)劃人生。跳出現有體制總要經歷陣痛，吳玫不否認壓力很大，雖然覺得在琴館或許是一種逃避面對“模式化人生”的方式，可是她的眼神看上去頗為堅定，并不為自己的決定感到后悔。

“成人”VS“成功人士”

過了22歲這個坎，李杰和吳玫結束必要的學業(yè)，做出了自己對人生的選擇，完成了沒有儀式的成人禮，進入真正“成人’’階段，“自己對自己的決定負責”，他們都提到了同樣的一句話，然而卻離目前社會價值觀中“成人”的光環(huán)還很遠。

李杰算了一筆賬，如果去國外讀博士，那么一年獎學金就有2萬2千美元至2萬5千美元不等，通常開銷1萬至1萬5肯定夠了，剩下的1萬美元是“凈賺”，5年下來也有5萬美元的積蓄，按照現在的匯率計算，相當于30萬人民幣左右，“等拿到博士學位回來，買一套房子的首付算是有了?！?/p>

那些指望孩子將來上名牌大學，賺大錢的父母恐怕要失望了，“成人”與“成功人士”之間不劃等號，22歲出國，讀完博士已經29歲，該談婚論嫁了，“沒房沒車誰要你々”李杰說。而如今家長的投入，光是屬于非義務制教育的學前教育，費用已經不成比例的高。根據上海市的一項統計，幼兒園有“六大費用”是逃不了的：公辦幼兒園伙食費4元／天；托管費在公辦的示范幼兒園收費1200元左右／月，一般中等私立幼兒園的托班管理費是每月800多元，而收費高的則在1200元以上，有臺、港地區(qū)投資背景的幼兒園一般是每月2000元，更有以美元收費的，折合人民幣每月上萬元；代辦費用于幼兒園訂閱幼兒教育類書籍、購買文具用品和衛(wèi)生用品的支出，一般每學期收100至120元；中午睡覺要購買的被褥費80至400元左右，有些幼兒園還會要求購買校服，置裝費大多在200元以上；休閑活動費，根據活動成本計算；特長興趣班，這個收費過雜，無法計算。此外不包括贊助費。

問題在于，李杰的同學中，他很少聽說有人上過課外補習班的，吳玫也如此。李杰的一個室友，初中二年級幾乎沒上過學，因為“他上初一時把初二和初三的教材都看了，說很簡單嘛，沒什么難的，他媽媽也管不了他，差點退學了?！笔聦嵣线@名室友照樣輕松考上了清華。巧立名目的補習班，頓時成了一種悖論。

“好好學習”VS“好好做人”

2009年6月2日，教育部學生司副司長姜鋼透露，今年高考報名人數約為1020萬名，比去年約減少40萬，將有84萬應屆畢業(yè)生不參考。幼教熱與高考“遇冷”形成可笑的反差。從4歲到22歲的成長期，中國人承受著冰火兩重天的考驗，這段時間里教育成為一個家庭唯一的重頭戲，中國青少年研究中心的調查顯示，54.7％的父母要求孩子讀到博士，83.6％要求孩子考試考前15名，2005年全國婦聯的一項調查顯示，母親對孩子說得最多的一句話是，“好好學習”，排在其后的是“功課做了沒有”。中國青少年研究中心副主任孫云曉認為，這樣容易造成“情感荒漠化”，即只將注意力集中在知識和技術等狹窄的領域，為實現個人目標而很少考慮可能帶來的惡劣后果等。

篇9

摘要：實踐證明，只要學生有興趣識字，并且掌握一定的識字方法，再通過少寫多認多復現進行鞏固，他們就可以輕松完成新《課標》提出的識字要求，為閱讀奠定良好基礎。本文結合自己的教學實際，介紹了一些識字教學的方法，僅供參考。

關鍵詞：識字教學；拓寬渠道；激發(fā)興趣

《語文課程標準》指出：“語文是一門實踐性很強的課程，應著重培養(yǎng)學生的語文實踐能力，而培養(yǎng)這種能力的主要途徑也應是語文實踐。”識字寫字是第一學段語文教學的重點，而要提高識字教學的效率，關鍵的因素還是培養(yǎng)學生的自主識字能力，這種能力的培養(yǎng)不是一蹴而就的，需要老師花很大的功夫，想很多的辦法。

一、幼兒園要努力為幼兒創(chuàng)設一個認讀漢字的環(huán)境

首先，幼兒在一日活動中，同樣也會碰到、看到各種東西。比如門窗、墻壁、桌椅、鋼琴、玩具……凡是能用漢字標明的實物上都盡可能與漢字掛鉤，讓孩子們識物的同時就能見到與之對應的漢字。讓幼兒在不知不覺中，自然而然地把圖像、聲音、語義、符號整合在一起，從而認識漢字。其次，教師在與幼兒交往中，也要注意營造一個認讀漢字的環(huán)境?，F在，不少幼兒園實行了在胸前佩帶標志的制度。這不但能標明每個人的身份，而且具有教兒童識字的功能。我們只要把人名寫入標志，在幼兒與教師和小朋友的交往中，他們就能認讀其上面的漢字。最后，教師通過組織幼兒開展多種多樣的活動，充分拓展他們識字的空間。也可以在區(qū)域活動中，向幼兒提供字典、圖文并茂的圖書，各類看圖識字卡片等，供幼兒自己去查找感興趣的文字。

二、拓寬識字渠道，鼓勵學生生活識字

生活是語文學習的最好資源，識字也不例外，學生學習漢語有別于學習其他語言，它具有母語學習的優(yōu)勢，因此我們必須充分發(fā)揮這一優(yōu)勢，鼓勵學生在生活中識字。放開手，讓學生自主識字。孩子有孩子的年齡和心理特點，他們最知道自己喜歡什么樣的學習方式，最會尋找符合自己個性的學習識字的方法，而這些學習方式一旦被鼓勵和激發(fā)，就會變成孩子寶貴的學習資源，成為方法性的資源，而且這些資源不僅不會遺忘，而且會隨著時間的積累而越來越熟練和提高。

三、制作生字卡片是一種很好的學習識字的方式

學生自做的卡片雖然沒有買來的好看規(guī)范，但正是這些各具特色的卡片才體現了學生的個性，培養(yǎng)了學生的創(chuàng)造能力。它至少可以起到這樣一些作用：1、可以讓學生在預習課文時提前與生字見面，在課后做卡片則可以起到鞏固生字的作用，增加學生與生字見面的機會；2、在做卡片的過程中，可以抄寫，可以剪貼，也可以配插圖，勾花邊，學生的動手操作能力得到了很好的培養(yǎng)；3、好動是孩子的天性，多樣化的活動既符合孩子喜愛動手的特點，又避免了單純抄寫生字的枯燥和無聊，讓學生真實地感受到學習生字是一項愉悅的活動，可以想象，這樣的家庭作業(yè)是受孩子喜愛的。4、人手一套的生字卡片便于學生在小組學習中合作學習。孩子們拿著自己的小卡片，可以自己拼讀，可以讓同伴欣賞，也可以當小老師拿卡片來考考小組內的同學?？梢?，這小小的識字卡片真是為學生獨立識字能力的培養(yǎng)插上了翅膀。

四、從課中遵循規(guī)律識字

低年級學生的注意力保持時間短，每節(jié)課所學的字不多，指導學生小組合作學習生字，并在全班舊了交流識字方法，再當堂采取多種方法復現，及時鞏固要求認識的字。根據兒童“先快后慢”的遺忘規(guī)律，在識字教學課后兩三天內進行復習、鞏固尤為重要。我利用學生在合作中、游戲中、活動中鞏固識字。我在生字教學中利用摘蘋果、走迷宮、找朋友、巧配對等游戲的方式在興趣盎然中加深印象。我鼓勵兒童自編句子、兒歌、謎語，鼓勵學生從身邊，從書報上找到剛識的字，在語言環(huán)境中及時鞏固識字，并和學生一起參與。例如，我教學“叢”字，順口說了一個謎語：“兩人橋上走”，馬上就有學生說出了“江”“照”“日”“田”等字的謎語，學生們根據謎語很快就記住了生字。我還鼓勵學生“異想天開”，找一些不相關的字詞連成自認為覺得有趣的一句話或一段話，這樣既鞏固了生字，同時又訓練了學生的想象能力、思維能力和表達能力，學生們都很樂意做這樣的“發(fā)明創(chuàng)造”。每一課識字完畢，我還讓學生總結自己喜歡的識字方法，如：記部件、熟字加偏旁部首、熟字換偏旁部首、找形近字、找同音字、找相關字等等，學生們總會找到適合自己的識字方法。

五、引導學生發(fā)揮想象，激發(fā)識字興趣

開始識字時，為了提高學生的學習興趣，我告訴小朋友：我們中國的漢字很奇妙，一個漢字可以是一首詩、一幅畫、一首兒歌、一個故事。小朋友聽了便十分有興趣。開始教生字時我有意識地把一些生字編成謎語，故事講給他們聽。小朋友聽了之后很感興趣，一下子就把生字記往了，之后，我便鼓勵他們自己來給生字編編謎語，講講故事。小朋友的情緒很高漲，有的小朋友編得謎語相當出色，連老師都不曾想到，如“底”字，小朋友說：“有個小不點來到廣場下買了一瓶樂百氏奶，‘底’字下面的一點代表小不點，不能漏掉?！钡诮虒W時應適時點撥，引導，避免學生為了編個謎語，講個故事就硬性把字拆開，強行把各部件編成沒有任何聯系的故事、謎語。

六、周期復現鞏固識字

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“定位”這個詞是我們電視工作者經常掛在嘴邊的一個詞?！岸ㄎ弧钡囊饬x在于以明確的方向、目標給自己以與眾不同的個性形象，從而受到社會的承認與關注。歸納起來，節(jié)目定位的依據大體有三個：一是根據受眾對象定位；二是根據節(jié)目內容定位；三是根據節(jié)目形式定位。任何一個電視節(jié)目要想辦出特色，受觀眾歡迎，定位的準確與否是關鍵，兒童節(jié)目也不例外。

一、兒童節(jié)目定位的依據

電視節(jié)目的準確定位取決于節(jié)目的基本屬性，兒童節(jié)目顧名思義是做給兒童看的節(jié)目。兒童節(jié)目定位的依據主要就是它的受眾對象即觀眾，在電視事業(yè)日益發(fā)展的今天，兒童電視節(jié)目應該成為孩子們課余的伙伴，家庭的課堂，這一點已成為人們的共識。

二、兒童節(jié)目的定位與節(jié)目內容、形式的統一

對于兒童節(jié)目來說，定位容易，但具體操作起來卻難，容易出現節(jié)目內容、形式與定位不相符的錯位情況。兒童節(jié)目是做給孩子們看的，但做節(jié)目的卻多是成年人，制作者往往帶著成人的視角來想象兒童的喜怒哀樂和興趣點，把成年人的主觀思想強加給孩子。

為此，作為成年人的編導應該做到：

1.學會尊重。這里的尊重包括兩方面內容：一是指要尊重兒童成長發(fā)展的客觀規(guī)律。兒童的年齡特點決定了他們心理發(fā)展的特征，所以兒童電視節(jié)目制作者必須要根據兒童的心理特征和年齡特點來策劃節(jié)目；二是指要尊重兒童本身。兒童有自己獨特的情感世界，對外部世界有著獨特的感知能力，觀察問題、思考問題也有其獨特的視角和方法，我們要平等地對待他們，把他們當做完整的、獨立的一個人，深入地感受他們真實而豐富的心靈。

2.學會溝通。學會溝通，就是要以它們的視角觀察世界，以它們的思維方式去思考問題。要走進他們的世界里，了解他們喜歡什么、討厭什么、關心什么、害怕什么，這樣他們才能接納你，把你當成他們的朋友。在尊重兒童的基礎上，與他們進行很好的溝通，孩子們就會很愿意把他們的心里話，把他們的喜好告訴我們，我們做出的節(jié)目也就能更加受到兒童的歡迎。