【摘要】用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)研究中醫(yī)證候是中醫(yī)研究的重要課題。文章簡(jiǎn)要介紹了用基因芯片探討中醫(yī)證候本質(zhì)的研究近況，主要包括腎陽虛證、虛寒證、心陽虛證、肺虛證、脾虛證和寒熱證差異基因表達(dá)譜的研究，從而為從基因水平上闡釋中醫(yī)證候的本質(zhì)特征和進(jìn)一步建立中醫(yī)證候的基因組學(xué)做了有意義的探索。

【關(guān)鍵詞】中醫(yī)證候基因芯片生命科學(xué)

近年生命科學(xué)最熱門的三大領(lǐng)域是基因組研究、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。相應(yīng)地也有三大生物技術(shù)給予支持，這就是DNA測(cè)序、PCR技術(shù)和生物芯片技術(shù)。自1991年美國(guó)加州舊金山Affymetrix公司創(chuàng)造了世界上第一塊DNA芯片、1995年Stanford大學(xué)發(fā)表第一篇基因表達(dá)芯片文章以來，基因芯片技術(shù)已廣泛地被用于基因功能的研究［1］?；蛐酒巧镄酒袘?yīng)用最廣泛、技術(shù)最成熟的分支，又叫DNA芯片、DNA微陣列，其是在面積不大的基片表面上以點(diǎn)陣的方式有序排列一系列固定于一定位置的可尋址的識(shí)別分子（DNA和RN段），并以此作為探針，在一定條件下與樣品待測(cè)的靶基因片段進(jìn)行結(jié)合或反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)果用同位素法、化學(xué)發(fā)光法或酶標(biāo)法顯示，然后用精密的掃描儀掃描記錄，通過計(jì)算機(jī)軟件分析，綜合可讀信息，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的存在、含量及變異等信息的快速檢測(cè)。

1中醫(yī)證候及其證候基因組

辨證論治是中醫(yī)學(xué)理論的特點(diǎn)之一，論治取決于辨證。中醫(yī)的“證”是生命物質(zhì)在疾病過程中具有時(shí)相性的本質(zhì)反映。“候”的原意則是用以說明事物變化的情狀，即所謂的疾病的臨床表現(xiàn)。由于中醫(yī)學(xué)對(duì)于疾病的認(rèn)識(shí)側(cè)重于整體、宏觀、司外揣內(nèi)，重視疾病某階段機(jī)體的整體狀態(tài)，辨證論治也即是通過對(duì)疾病表現(xiàn)在外的征象，進(jìn)而推測(cè)演繹疾病的病因、病性和病位，由此歸納出證的概念［2］。用現(xiàn)代科技研究中醫(yī)“證候”是中醫(yī)研究的重要課題，證候病機(jī)及其與疾病和方劑的相關(guān)性是證候研究的重要科學(xué)問題［3］。中醫(yī)證候是中醫(yī)藥研究的核心，“證候”本質(zhì)的研究是中醫(yī)現(xiàn)代化研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)，如能獲得突破性進(jìn)展，必將使中醫(yī)理論研究取得質(zhì)的飛躍。應(yīng)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論和分子生物學(xué)技術(shù)闡明中醫(yī)“證候”本質(zhì)是實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化的基礎(chǔ)和關(guān)鍵，具有重大科學(xué)意義。中醫(yī)“證候”本質(zhì)研究雖經(jīng)歷幾十年至今未能實(shí)質(zhì)性突破，其根本原因在于以前沒有一種像基因芯片那樣十分有效地研究手段能同時(shí)檢測(cè)許多機(jī)體、組織和細(xì)胞的變化，并比較變化以識(shí)別其規(guī)律［4］。中醫(yī)證候的現(xiàn)代研究從以癥狀、疾病、組織、細(xì)胞等為主體，逐漸發(fā)展至分子水平、基因水平，并已由單個(gè)基因向多基因，由個(gè)別基因向基因組發(fā)展，由個(gè)別基因研究積累到研究基因表達(dá)譜，當(dāng)今在引入基因芯片技術(shù)后，建立起證候的功能基因組表達(dá)譜［5］，旨在尋找一些與證候相關(guān)的基因，然后根據(jù)這些基因與證候的關(guān)系密切程度用于證候的基因診斷和療效評(píng)價(jià)［6］。從中醫(yī)理論看，證候的形成是由先天的體質(zhì)因素和后天的環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，因而對(duì)證候的研究可能要繪制3張圖譜：基因組圖譜、單核苷多態(tài)性（SNP）圖譜和蛋白質(zhì)組學(xué)圖譜。而SNP譜體現(xiàn)了不同人種和同一人種不同個(gè)體之間的基因組差異，并決定人類個(gè)體體質(zhì)差異和疾病易感性，也可能是中醫(yī)稟賦學(xué)說的基因組背景。

2中醫(yī)證候的基因芯片研究

1中醫(yī)證候及其證候基因組

辨證論治是中醫(yī)學(xué)理論的特點(diǎn)之一，論治取決于辨證。中醫(yī)的“證”是生命物質(zhì)在疾病過程中具有時(shí)相性的本質(zhì)反映。“候”的原意則是用以說明事物變化的情狀，即所謂的疾病的臨床表現(xiàn)。由于中醫(yī)學(xué)對(duì)于疾病的認(rèn)識(shí)側(cè)重于整體、宏觀、司外揣內(nèi)，重視疾病某階段機(jī)體的整體狀態(tài)，辨證論治也即是通過對(duì)疾病表現(xiàn)在外的征象，進(jìn)而推測(cè)演繹疾病的病因、病性和病位，由此歸納出證的概念［2］。用現(xiàn)代科技研究中醫(yī)“證候”是中醫(yī)研究的重要課題，證候病機(jī)及其與疾病和方劑的相關(guān)性是證候研究的重要科學(xué)問題［3］。中醫(yī)證候是中醫(yī)藥研究的核心，“證候”本質(zhì)的研究是中醫(yī)現(xiàn)代化研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)，如能獲得突破性進(jìn)展，必將使中醫(yī)理論研究取得質(zhì)的飛躍。應(yīng)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論和分子生物學(xué)技術(shù)闡明中醫(yī)“證候”本質(zhì)是實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥現(xiàn)代化的基礎(chǔ)和關(guān)鍵，具有重大科學(xué)意義。中醫(yī)“證候”本質(zhì)研究雖經(jīng)歷幾十年至今未能實(shí)質(zhì)性突破，其根本原因在于以前沒有一種像基因芯片那樣十分有效地研究手段能同時(shí)檢測(cè)許多機(jī)體、組織和細(xì)胞的變化，并比較變化以識(shí)別其規(guī)律［4］。中醫(yī)證候的現(xiàn)代研究從以癥狀、疾病、組織、細(xì)胞等為主體，逐漸發(fā)展至分子水平、基因水平，并已由單個(gè)基因向多基因，由個(gè)別基因向基因組發(fā)展，由個(gè)別基因研究積累到研究基因表達(dá)譜，當(dāng)今在引入基因芯片技術(shù)后，建立起證候的功能基因組表達(dá)譜［5］，旨在尋找一些與證候相關(guān)的基因，然后根據(jù)這些基因與證候的關(guān)系密切程度用于證候的基因診斷和療效評(píng)價(jià)［6］。從中醫(yī)理論看，證候的形成是由先天的體質(zhì)因素和后天的環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，因而對(duì)證候的研究可能要繪制3張圖譜：基因組圖譜、單核苷多態(tài)性（SNP）圖譜和蛋白質(zhì)組學(xué)圖譜。而SNP譜體現(xiàn)了不同人種和同一人種不同個(gè)體之間的基因組差異，并決定人類個(gè)體體質(zhì)差異和疾病易感性，也可能是中醫(yī)稟賦學(xué)說的基因組背景。

2中醫(yī)證候的基因芯片研究

2.1腎陽虛證

倪紅梅等［7］對(duì)腎陽虛體質(zhì)青少年差異表達(dá)基因的基因芯片研究，選取上海16～24歲青少年154例進(jìn)行腎陽虛體質(zhì)篩查，篩查出6例腎陽虛體質(zhì)者，男性1例，女性5例，余148例為對(duì)照，分別采集兩組的外周血，分離白細(xì)胞并抽提RNA?；蛐酒捎蒙虾２┬枪镜腍80S型，可做人標(biāo)本的8465點(diǎn)雜交,結(jié)果篩選出127條差異基因，其中63條上調(diào)基因，64條下調(diào)基因，其涉及免疫相關(guān)、細(xì)胞周期蛋白、發(fā)育相關(guān)、細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白、代謝、離子通道、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子，以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)。由此說明體質(zhì)的本質(zhì)是人體防御免疫功能、自我代償修復(fù)和自我調(diào)節(jié)的反映，其物質(zhì)基礎(chǔ)是建立在人體各系統(tǒng)形態(tài)、機(jī)能及代謝活動(dòng)之上的，其內(nèi)在機(jī)理也是多系統(tǒng)多環(huán)節(jié)的。譚從娥等［8］對(duì)篩選出1例骨關(guān)節(jié)炎（OA）腎陽虛證行溫針治療（取穴：氣海、關(guān)元、足三里、內(nèi)外膝眼、陽陵泉），于治療前后采集其外周血，做白細(xì)胞RNA抽提，以基因芯片研究其治療前后的基因表達(dá)譜。結(jié)果：在70條差異表達(dá)基因中，上調(diào)基因49條，下調(diào)基因21條，并對(duì)34條基因初步分類分析：與免疫相關(guān)基因10條，主要表現(xiàn)為上調(diào)。如退火素A1基因（NM-000700），OA早期一些患者滑膜液中可有T細(xì)胞浸潤(rùn)，OA晚期某些細(xì)胞因子（IL-1,TNF-α）參與局部組織損傷，其與炎癥免疫和自身免疫發(fā)生有關(guān)，致使關(guān)節(jié)軟骨發(fā)生退行性變，故認(rèn)為溫針治療后，免疫相關(guān)基因上調(diào)，提示溫針治療后可通過調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫反應(yīng)來干預(yù)OA的發(fā)病過程,還有熱休克90KDβ鏈蛋白1基因（NM-007355）與基礎(chǔ)代謝相關(guān)的基因5條,如II型cAMP依賴性調(diào)節(jié)蛋白酶β鏈基因(NM-002736),經(jīng)針刺后上調(diào)了2.43倍,已知cAMP為調(diào)節(jié)新陳代謝的第二信使，其受cAMP依賴性蛋白激酶(PKA)調(diào)節(jié)，可誘導(dǎo)蛋白質(zhì)酶，加速新陳代謝，升高體溫，調(diào)節(jié)機(jī)體能量平衡。提示溫針可調(diào)節(jié)與基礎(chǔ)代謝相關(guān)基因表達(dá)來改善患者基礎(chǔ)代謝低的臨床癥狀。與肌肉運(yùn)動(dòng)相關(guān)的基因5條,主要為下調(diào)基因,如膽堿能受體、煙堿性、α多肽1基因（NM-000079），此基因是突觸內(nèi)神經(jīng)信息傳遞的基礎(chǔ)，與骨骼肌運(yùn)動(dòng)、肌肉收縮直接相關(guān)。與生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)基因9條，人體各組織均有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGFβ）誘導(dǎo)早期生長(zhǎng)反應(yīng)基因（NM-005655），上調(diào)了2.8倍，其可調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)分化。與信息相關(guān)的基因5條，主要表現(xiàn)為下調(diào)，如G蛋白信號(hào)調(diào)節(jié)因子1（RGS1）基因（NM-002922）下調(diào)了0.35倍，其是G蛋白結(jié)合受體復(fù)合物的重要調(diào)節(jié)和組成部分。溫針可促進(jìn)氣血流通，使機(jī)體協(xié)調(diào)，起到全身調(diào)節(jié)作用。楊麗萍等［9］也以溫針治療腎陽虛骨關(guān)節(jié)炎,篩選出與免疫相關(guān)基因,其中上調(diào)基因5條,下調(diào)基因4條,上調(diào)基因主要有NCF1基因和CCR7基因,前者編碼嗜中性細(xì)胞因子,后者編碼G蛋白受體家族成員-趨化因子受體7。溫針治療下調(diào)基因CD97,其編碼一個(gè)EGF-TM7家族成員,并存在于大部分活化的白細(xì)胞表面的糖蛋白,有G蛋白偶聯(lián)特征。陳曉玲等［10］對(duì)一個(gè)典型的腎陽虛家系15個(gè)成員,以寡核苷酸雜交技術(shù)對(duì)其外周血單核細(xì)胞的差異表達(dá)譜分析研究,同時(shí)對(duì)血樣本進(jìn)行血液生化、免疫指標(biāo)檢測(cè),還設(shè)正常人10人作為對(duì)照,比較二者結(jié)果。盡管存在普遍的血液生化與免疫學(xué)指標(biāo)異常,但該腎陽虛寒證家族患者作為一個(gè)典型的陽虛寒證抽樣,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均未見顯著性差異。此提示檢測(cè)眾多血液生化、免疫指標(biāo),對(duì)整體性失調(diào)的證侯群,其臨床意義不大,故作為西醫(yī)臨床診斷所依仗的血液生化與免疫學(xué)指標(biāo),在諸如腎陽虛寒證等中醫(yī)證的診斷方面,參考意義不明顯。用5張北京博奧生物芯片中心生產(chǎn)的人全基因組表達(dá)譜芯片(2200個(gè)雜交點(diǎn)),來研究腎陽虛患者外周血紅細(xì)胞基因表達(dá)譜,結(jié)果:①典型腎陽虛證/正常對(duì)照組:上調(diào)基因100條,下調(diào)基因33條;②腎陽虛證/正常對(duì)照組:上調(diào)基因148條,下調(diào)基因31條;③典型腎陽虛證治療顯效者治療前/治療后:上調(diào)基因12條,下調(diào)基因47條;④典型腎陽虛證/正常配偶:上調(diào)基因66條,下調(diào)基因44條。這些基因主要為：物質(zhì)代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、能量代謝和免疫調(diào)節(jié)等,初步反映出腎陽虛證患者惡寒喜暖、肢冷倦臥、面色白等宏觀證候在微觀基因表達(dá)的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。

2.2虛寒證

各位領(lǐng)導(dǎo)、同志們：

大家好！

我叫*，是聯(lián)合基因科技集團(tuán)所屬的*博星基因芯片有限公司首席芯片專家，是1999年從美國(guó)留學(xué)回國(guó)的“海歸”學(xué)者。回國(guó)后，自從有了從事研究生命科學(xué)的舞臺(tái)后，我的人生突然開始變得燦爛；我的生命也仿佛融入了新的內(nèi)涵。我高興的是，我用最短的時(shí)間，在生命科學(xué)領(lǐng)域取得了突破性的研究成果，不僅獲得國(guó)際同行的認(rèn)可，同時(shí)，這些科研成果用“中國(guó)速度”，跨入世界科學(xué)前沿的行列。

八年來，我主持和參加了具有國(guó)際一流水平的國(guó)內(nèi)第一個(gè)基因芯片技術(shù)平臺(tái)的創(chuàng)建，開發(fā)了寡核苷酸芯片等一系列基因芯片產(chǎn)品，生產(chǎn)出國(guó)內(nèi)第一塊基因芯片，4項(xiàng)技術(shù)成果通過*市科委成果鑒定委員會(huì)鑒定，4項(xiàng)成果被認(rèn)定為*市高新技術(shù)成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目，5項(xiàng)成果填補(bǔ)國(guó)內(nèi)空白，在我國(guó)基因技術(shù)研究與應(yīng)用方面起到了引領(lǐng)作用，為生命科學(xué)研究領(lǐng)域提供了有力的工具。雖然我只是做了一個(gè)科技工作者應(yīng)該做的事情，可是黨和政府卻給了我許多榮譽(yù)：從*市十大工人發(fā)明家、到全國(guó)職工創(chuàng)新能手、國(guó)務(wù)院政府特殊津貼專家、*市勞動(dòng)模范的崇高榮譽(yù)。為此，我衷心地感謝黨和政府對(duì)我的關(guān)懷，感謝*人民對(duì)我的信任。

我出生在四川的一個(gè)教師家庭，曾是一個(gè)山里的女孩，1982年來到復(fù)旦大學(xué)遺傳學(xué)專業(yè)學(xué)習(xí)，在黨的教育培養(yǎng)下完成了本科、碩士和博士學(xué)業(yè)，當(dāng)上了一名大學(xué)教師。為了提高自己的學(xué)術(shù)水平，更好地掌握現(xiàn)代生物學(xué)的一些尖端技術(shù)，我于1997年6月辭去復(fù)旦大學(xué)的教師工作，去美國(guó)紐約州立大學(xué)布法羅分校做博士后深造。在美留學(xué)期間，我專心致志學(xué)習(xí)，得到了指導(dǎo)老師的幫助和贊賞。當(dāng)時(shí)國(guó)內(nèi)正發(fā)大水，我參加了當(dāng)?shù)亓魧W(xué)生團(tuán)體組織的捐款賑災(zāi)活動(dòng)，心靈受到了強(qiáng)烈震撼，我覺得身在異國(guó)他鄉(xiāng)，就像浮萍一樣，找不到根的感覺，只有回到祖國(guó)，回到親人身邊，心里才能有一種踏實(shí)感。我的內(nèi)心總是在想，我真正的事業(yè)應(yīng)該在祖國(guó)，在*這塊熱土。

1998年10月的一天，我接到了我先生的越洋電話，他告訴我復(fù)旦大學(xué)剛剛開始搞人類基因組研究，復(fù)旦的老師也希望我能回來，從事這項(xiàng)對(duì)我來說是全新的事業(yè)。這一夜，我失眠了。斗爭(zhēng)了一夜，最后我決定回到祖國(guó)，接受這個(gè)生命科學(xué)的挑戰(zhàn)！1999年1月，我毅然放棄了在美國(guó)獲得工作簽證、2萬多美金年薪和可以申請(qǐng)到綠卡等優(yōu)厚待遇的機(jī)會(huì)，回到了祖國(guó)母親的懷抱，回到了*，為我國(guó)生命科學(xué)而探秘和攻堅(jiān)！回國(guó)以后，出于對(duì)人類健康事業(yè)的追求，我在回到復(fù)旦大學(xué)的同時(shí)加入了聯(lián)合基因科技集團(tuán)。聯(lián)合基因是一家民營(yíng)高科技企業(yè)，成立于1997年，它以人類新基因?yàn)楹诵?，通過研究具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的基因功能，并實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，造福人類。

本文作者：張娟譚嘉力梁宇斌李曉明吳煒亮工作單位：廣東產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心

可視基因芯片技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用

在食源性致病微生物檢測(cè)中的應(yīng)用食源性致病微生物檢測(cè)是食品安全檢測(cè)中一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。食源性致病微生物對(duì)食品的污染，不僅會(huì)給國(guó)家造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且還會(huì)嚴(yán)重威脅人類的生命安全。目前傳統(tǒng)的食源性致病微生物的檢測(cè)方法由于過程繁瑣，而且各操作步驟之間相對(duì)獨(dú)立，因此很難快速且高通量的對(duì)食品安全進(jìn)行檢測(cè)。因此，非常有必要建立全新的食源性致病微生物檢測(cè)體系?？梢曅酒夹g(shù)從理論上說與傳統(tǒng)生物芯片的檢測(cè)效果是一致的，可以一次性檢出所有潛在的致病微生物，同時(shí)兼具傳統(tǒng)生物芯片的所有優(yōu)點(diǎn)，因而在食源性致病微生物檢測(cè)中具有很好的發(fā)展前景。近年來，許多學(xué)者對(duì)可視芯片檢測(cè)食品中常見致病微生物進(jìn)行了一系列相關(guān)探討和研究。朱許強(qiáng)等運(yùn)用可視基因芯片技術(shù)快速、準(zhǔn)確檢測(cè)食品中腸出血性大腸埃希菌、志賀菌、沙門菌以及單核細(xì)胞增生李斯特菌4種常見產(chǎn)毒微生物；以志賀菌為對(duì)象，該方法的檢測(cè)靈敏度可達(dá)到670cfu/mL[19]。趙金毅等[20]利用該技術(shù)可以準(zhǔn)確的檢出沙門氏菌屬和金黃色葡萄球菌、小腸結(jié)核腸炎耶爾森氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌3種食品中常見致病菌，對(duì)于湯卜遜沙門氏菌，檢測(cè)靈敏度可達(dá)8.5×101cfu/mL。Jenison等[21]則開發(fā)出一套多呼吸道病毒識(shí)別的可視基因芯片，可準(zhǔn)確識(shí)別6種人類呼吸道病毒，且敏感性高、通量大、結(jié)果直觀。但以上研究方法存在明顯的不足，即未充分體現(xiàn)芯片高通量檢測(cè)這一特點(diǎn)，因而相關(guān)學(xué)者又做了進(jìn)一步研究以彌補(bǔ)該不足。Bai等和黎吳雁等[22-23]分別針對(duì)11種和12種常見食源性致病菌建立了相應(yīng)的診斷方法,后者針對(duì)純培養(yǎng)單增李斯特氏菌的靈敏度為103cfu/mL，模擬樣本的靈敏度為104cfu/mL。與以上檢測(cè)方法建立的原理不同，部分研究人員建立了另一類可視基因芯片。郭永剛等以鏈霉親和素包被的磁珠作為標(biāo)記物，通過鏈霉親和素與生物素的親和作用，使得雜交結(jié)果可以在普通的光學(xué)顯微鏡或放大鏡下檢測(cè)，甚至肉眼可見，并利用大腸桿菌作為樣品進(jìn)行方法驗(yàn)證，取得較好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果[24]。史蕾等[25]利用基于磁珠的可視化基因芯片建立了一種快速檢測(cè)諾如病毒的新方法，檢測(cè)的靈敏度達(dá)50ng，特異性和重復(fù)性均較好，與PCR方法檢測(cè)結(jié)果一致。Sun等[26]同樣基于磁珠法建立了用于檢測(cè)7種腸道病原菌的可視基因芯片技術(shù)，檢測(cè)靈敏度高于前者（可達(dá)25ng/μL），86個(gè)樣品同時(shí)用傳統(tǒng)方法、PCR法和芯片方法進(jìn)行檢測(cè)，三者檢測(cè)結(jié)果完全一致。同樣是對(duì)腸道致病菌的檢測(cè)，彭賢慧等[27]基于酪胺信號(hào)放大技術(shù)和金標(biāo)銀染技術(shù)建立的可視化基因芯片法可同時(shí)檢測(cè)10種腸道病毒，可檢出不低于102拷貝/μL的體外轉(zhuǎn)錄RNA，30例臨床樣本的芯片檢測(cè)結(jié)果與熒光PCR法一致。此外，有關(guān)研究人員基于不同基質(zhì)也做了相關(guān)研究。Wang等[28]利用尼龍膜作為基質(zhì)建立了可檢測(cè)20種腸道病原菌的可視芯片檢測(cè)方法，檢測(cè)結(jié)果通過特異性PCR進(jìn)一步得到證實(shí)。張英朗等[29]同樣利用尼龍膜做基質(zhì)結(jié)合反向斑點(diǎn)雜交技術(shù)制備了可視化的基因芯片，能夠在3~4h對(duì)我國(guó)常見的12種角膜致病真菌進(jìn)行鑒定，特異性和敏感性較高?？梢暤鞍仔酒难芯枯^少，石霖等將免疫膠體金技術(shù)和銀顯影技術(shù)有機(jī)的結(jié)合，建立并優(yōu)化了可同時(shí)鑒別診斷4種禽病血清抗體的可視化蛋白質(zhì)芯片技術(shù)[30]。從以上可以看出，可視基因芯片在食源性致病微生物的檢測(cè)應(yīng)用方面比可視蛋白質(zhì)芯片技術(shù)應(yīng)用更加廣泛，其主要原因是前者相對(duì)與后者在技術(shù)成熟度、穩(wěn)定性、操作程序方面均占據(jù)一定的優(yōu)勢(shì)?？梢曅酒夹g(shù)在食源性致病微生物檢測(cè)方面的特點(diǎn)及優(yōu)勢(shì)，可能使其在未來成為最具潛力的檢測(cè)手段之一。在轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)和真假植物油鑒別中的應(yīng)用伴隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，以基因工程為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)得到廣泛應(yīng)用，因此，越來越多的轉(zhuǎn)基因食品展現(xiàn)在人們面前。一方面由于對(duì)轉(zhuǎn)基因食品可能對(duì)人體以及生物多樣性導(dǎo)致的不可預(yù)期的結(jié)果所擔(dān)憂，另一方面為了維護(hù)消費(fèi)者對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的知情權(quán)和選擇權(quán)以便做出綜合評(píng)價(jià)，轉(zhuǎn)基因檢測(cè)技術(shù)的研究已成為當(dāng)前生物技術(shù)領(lǐng)域的熱點(diǎn)。現(xiàn)有的檢測(cè)方法（普通PCR擴(kuò)增法和實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增法）一次只能檢測(cè)一種外源基因，對(duì)具有多種特性的轉(zhuǎn)基因食品卻無能為力，而且其檢測(cè)效率低、檢測(cè)周期長(zhǎng)，因而不能實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中大量不同轉(zhuǎn)基因成分的高通量檢測(cè)。Bai等[31]利用可視基因芯片技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行了相關(guān)研究。通過對(duì)轉(zhuǎn)基因作物的特異性序列及植物基因組SNP檢測(cè)的研究，建立了一套基于可視基因芯片技術(shù)的轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)和植物基因組SNP突變鑒別的行之有效的方法。該方法快速準(zhǔn)確，并顯示出高靈敏度和強(qiáng)特異性，可廣泛運(yùn)用于需要對(duì)特異核苷酸序列進(jìn)行陽性鑒定的相關(guān)研究中。Xu等和Bai等[32-33]同樣利用該技術(shù)分別建立了同時(shí)檢測(cè)7種轉(zhuǎn)基因油菜品種和6種轉(zhuǎn)基因玉米品種的可視基因芯片檢測(cè)方法，當(dāng)探針濃度為0.01μM時(shí)仍可以檢測(cè)到100fmol的PCR產(chǎn)物。中國(guó)作為一個(gè)食用油消費(fèi)大國(guó)，其食用油主要是以植物油為主。由于各種植物油價(jià)格存在很大差異，有些生產(chǎn)企業(yè)為了牟取暴利，常在高價(jià)植物油中摻入低價(jià)油或劣質(zhì)油，嚴(yán)重侵犯了消費(fèi)者的權(quán)益?，F(xiàn)今用于鑒別植物油摻假的主要方法為物理或化學(xué)方法，但檢測(cè)手段費(fèi)時(shí)費(fèi)力且檢測(cè)結(jié)果不太理想。因此，開發(fā)準(zhǔn)確、方便、快速地鑒定植物油成分的方法對(duì)控制食品質(zhì)量和確保食品品質(zhì)具有重要意義。針對(duì)此問題，Bai等[34-35]將可視基因芯片技術(shù)用于真假植物油的鑒別，一次可同時(shí)檢測(cè)8種植物油成分，最低檢出限可達(dá)0.1fmol，與以往研究相比，敏感性高很多?？梢暬蛐酒夹g(shù)應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因檢測(cè)或真假植物油鑒別，一次實(shí)驗(yàn)可篩選出大量的轉(zhuǎn)基因成分或植物油成分，基于現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)，其必將是未來轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)和真假食品鑒別的主要研究方向。在食物過敏原檢測(cè)中的應(yīng)用近年來，食物中的過敏原已逐漸成為一個(gè)重要的公共健康問題，其影響范圍可達(dá)總?cè)丝诘?%，在嬰幼兒中可達(dá)8%[36-37]。為了保護(hù)這些過敏人群的健康安全，食品必須標(biāo)明可能引起過敏反應(yīng)的原材料。目前，部分國(guó)家已經(jīng)頒布了相應(yīng)的法令。因此，亟需一種行之有效的快速檢測(cè)食品中引起過敏反應(yīng)的材料的方法?，F(xiàn)在主要通過免疫學(xué)方法檢測(cè)食品中的蛋白質(zhì)成分[38-43]，然而，不同的食品加工方法（例如熱處理或烘焙）可能引起食物中蛋白質(zhì)的變性，從而不能得到滿意的結(jié)果。最近，基于DNA的分析方法被用于過敏原的檢測(cè)[44-49]，主要是針對(duì)于蛋白質(zhì)來說它具有更高的穩(wěn)定性。由于在食品中存在著各種不同類型的過敏原，因此有必要建立一種高通量的快速檢測(cè)方法。傳統(tǒng)生物芯片已在各類研究中展現(xiàn)出這一特性[50-51]，在這其中，可視芯片技術(shù)依據(jù)其自身的優(yōu)勢(shì)顯示出比傳統(tǒng)生物芯片方法更強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)力。Wang等[52]利用可視基因芯片技術(shù)對(duì)食品中的過敏原進(jìn)行了檢測(cè)分析。通過對(duì)杏仁、芝麻以及核桃等8種原材料進(jìn)行研究，建立了一套新的用于檢測(cè)食品中過敏原材料的可視基因芯片方法。該方法不但降低了檢測(cè)費(fèi)用，而且顯示出極高的敏感性和特異性，與其他方法相比具有很強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)力。其中，芝麻的絕對(duì)檢出限和實(shí)際檢出限分別為0.5pg和0.001%（w/w），與以往研究報(bào)道相比具有更高的敏感性[53-54]。李小燕等利用辣根過氧化物酶和3,3'''',5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)-H2O2作為信號(hào)示蹤系統(tǒng)，建立了一種用于檢測(cè)菲律賓蛤仔過敏原的可視化抗體微陣列玻片的檢測(cè)方法，最低可檢出10ng/mL的雜色蛤過敏原，該方法可發(fā)展為多種過敏原的通量化檢測(cè)方法[55]。通過以上檢測(cè)方法的建立，將為預(yù)防因食物過敏原導(dǎo)致的過敏性疾病的發(fā)生提供理論依據(jù)，從而保障消費(fèi)者的健康，并有利于促進(jìn)我國(guó)食品的進(jìn)出口貿(mào)易。

可視芯片技術(shù)存在的問題及前景展望

可視芯片技術(shù)雖然起步較晚，其憑借自身的優(yōu)勢(shì)在食品安全的檢測(cè)中卻獲得越來越廣泛的應(yīng)用，但同時(shí)也存在一些亟待完善的問題。1）可視芯片制備的穩(wěn)定性需進(jìn)一步提高。首先，可視基因芯片制備過程中質(zhì)量控制不嚴(yán)格，很容易出現(xiàn)雜交點(diǎn)模糊、形狀不規(guī)范、雜交信號(hào)不均一以及背景區(qū)出現(xiàn)信號(hào)點(diǎn)等問題，嚴(yán)重影響后續(xù)的結(jié)果分析；其次，理論上雜交后可視基因芯片的背景不應(yīng)出現(xiàn)信號(hào)，但在實(shí)際檢測(cè)中，由于受多種因素的影響，背景區(qū)和未發(fā)生雜交反應(yīng)的位點(diǎn)也可能會(huì)產(chǎn)生沉淀的堆積而造成表面顏色的改變。2）可視芯片技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用范圍需進(jìn)一步擴(kuò)大。從上文中可以看出，目前可視芯片技術(shù)的應(yīng)用主要集中在食源性致病菌的檢測(cè)方面，而在其他方面的研究力度相對(duì)薄弱，下一步有必要加強(qiáng)各方面的相關(guān)研究，使該技術(shù)在食品安全檢測(cè)的各個(gè)方面發(fā)揮其作用。3）可視芯片技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化的建立存在局限性。由于各研究單位或?qū)嶒?yàn)室的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、操作過程以及判定方法的不同，導(dǎo)致各數(shù)據(jù)之間缺乏嚴(yán)重的可比性，很難實(shí)現(xiàn)共享?？梢曅酒夹g(shù)盡管還不夠完善，但由于該技術(shù)在最終的結(jié)果分析中，與傳統(tǒng)生物芯片相比，徹底擺脫了昂貴的分析儀器，大大降低了檢測(cè)成本，提高了可操作性，因而在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的發(fā)展?jié)摿?。隨著該技術(shù)的廣泛應(yīng)用，一方面，必然帶來檢測(cè)效率的提高和檢測(cè)費(fèi)用的降低，從而大大提高了食品安全的檢測(cè)水平；另一方面，為食品安全的風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警提供了一種簡(jiǎn)易快捷的檢測(cè)手段，保障了人民的健康生活。

1國(guó)內(nèi)外科技期刊中幾種常見分子生物學(xué)名詞符號(hào)的現(xiàn)行編排格式

1.1問題調(diào)查與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法。在中國(guó)知網(wǎng)《期刊全文數(shù)據(jù)庫》中選取80種近幾年刊登分子生物學(xué)論文較多的學(xué)術(shù)性中文科技期刊，其中，生物學(xué)期刊20種，農(nóng)學(xué)期刊30種，醫(yī)學(xué)期刊30種；在美國(guó)《科學(xué)引文數(shù)據(jù)庫》中選取50種近幾年刊登分子生物學(xué)論文較多的英文科技期刊，其中，生物學(xué)期刊10種，農(nóng)學(xué)期刊20種，醫(yī)學(xué)期刊20種。于2017年6月下旬，分別用“分子標(biāo)記”“基因”“位點(diǎn)”“引物序列”“基因芯片”(或其相應(yīng)的英文)為關(guān)鍵詞逐刊檢索其2016年以來發(fā)表的論文，每刊取不同期號(hào)發(fā)表的2～4篇文章，統(tǒng)計(jì)其中基因、基因位點(diǎn)、引物、分子標(biāo)記符號(hào)以及SNP基因芯片型號(hào)的編排格式，同時(shí)統(tǒng)計(jì)了引物序列轉(zhuǎn)行時(shí)是否加有連字符的情況。1.2調(diào)查結(jié)果與分析。1.2.1基因符號(hào)的現(xiàn)行編排格式。簡(jiǎn)單地說，基因是含特定遺傳信息的核苷酸序列，是遺傳信息的最小功能單位[7]。具體一點(diǎn)說，基因是基因組序列中與調(diào)控、轉(zhuǎn)錄和/或其他功能序列相關(guān)聯(lián)的有確定位置的區(qū)段，對(duì)應(yīng)于一個(gè)遺傳單位[8]?；虻拿诓煌锓N間還沒有統(tǒng)一的規(guī)則，但各物種內(nèi)的基因命名已趨于遵循統(tǒng)一的規(guī)則，具體可參見有關(guān)文獻(xiàn)[6-12]。比如細(xì)菌的基因符號(hào)由3個(gè)小寫斜體字母組成，具有相同表型的不同基因座(locus，如今一般被翻譯為基因位點(diǎn))突變用斜體大寫字母后綴相區(qū)別，等位基因用緊隨基因座名稱后的一系列特定的數(shù)字來表示[6]，如araA2表示ara基因座A的2位突變。因?yàn)槊恳粋€(gè)物種都有一個(gè)國(guó)際性的基因命名委員會(huì)，已經(jīng)注冊(cè)的基因都已被命名，并且經(jīng)過了有關(guān)委員會(huì)的審批[6-10]，作者在撰寫論文時(shí)，一般都會(huì)自覺采用已有的名稱；在命名新發(fā)現(xiàn)的基因時(shí)，一般也都會(huì)遵循本物種的基因命名規(guī)則。因此，絕大多數(shù)學(xué)術(shù)期刊中出現(xiàn)的問題都不是基因名稱是否正確，而是基因符號(hào)的編排格式不規(guī)范。最普遍的問題是基因符號(hào)的正斜體格式不規(guī)范。在《TIG遺傳命名指南》[6]中，所有基因符號(hào)中的字母都被要求為斜體，包括表示復(fù)等位基因的上角標(biāo)字母(如豌豆crtys)在內(nèi)；數(shù)字的正斜體雖然沒有明確要求，但所有舉例中，無論是阿拉伯?dāng)?shù)字還是羅馬數(shù)字，也不管它們?cè)诨蚍?hào)的末尾、中間，還是上標(biāo)位置，一律都是斜體(例如細(xì)菌基因lacA1，lac-23；枯草芽孢桿菌突變體基因spo0A，spoⅡB；斑馬魚基因cyctf219)，未見一處例外。而從表1可知，在筆者調(diào)查的80種國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)期刊中，基因符號(hào)有多種編排格式，其中，所有字母和數(shù)字均為斜體的期刊只占36.25%，字母為斜體、數(shù)字為正體的期刊占31.25%，還有少量期刊是部分字母為斜體、部分字母(比如代表基因座的大寫字母)和數(shù)字為正體(比如將大腸桿菌aroG基因?qū)懗蒩roG)；最不應(yīng)該發(fā)生的情況是，在不同文章，尤其是不同期號(hào)的不同文章中，格式不統(tǒng)一，在這一篇文章中是字母和數(shù)字均為斜體，在另一篇文章中是字母斜體、數(shù)字正體，這樣的期刊還不少，占到了總數(shù)的13.75%。這正是沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)造成的不良后果。國(guó)外SCI收錄期刊的格式統(tǒng)一度要高得多。在所調(diào)查的50種期刊中，基因名稱和基因符號(hào)的字母和數(shù)字均為斜體的期刊占90.00%；字母為斜體、數(shù)字為正體的期刊占10.00%，多為亞非拉國(guó)家主辦的期刊；沒有字母和數(shù)字均為正體的期刊。1.2.2基因位點(diǎn)符號(hào)的現(xiàn)行編排格式。基因在染色體上占有的特定位置叫基因位點(diǎn)，又稱為遺傳基因座[13]。一個(gè)基因位點(diǎn)上往往存在兩個(gè)或兩個(gè)以上的基因，這些基因被稱為等位基因或復(fù)等位基因[14]?；蛭稽c(diǎn)符號(hào)一般也都由字母和阿拉伯?dāng)?shù)字組成，有時(shí)也會(huì)有連字符。在《TIG遺傳命名指南》[6]中，基因位點(diǎn)(locus)被翻譯為基因座，一般是在基因符號(hào)后加上適當(dāng)?shù)暮缶Y來表示；基因位點(diǎn)符號(hào)中的字母和數(shù)字也都為斜體，如1B染色體上控制小麥株高的位點(diǎn)符號(hào)為Rht-B1。國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)期刊在基因位點(diǎn)符號(hào)的編排格式上更為混亂(見表1)，在筆者調(diào)查的80種期刊中，字母和數(shù)字均為正體的期刊比例最大(32.50%)；字母和數(shù)字均為斜體的期刊次之(27.50%)；字母為斜體、數(shù)字為正體的期刊也占有不小的比例(21.25%)；在不同文章中格式不統(tǒng)一的期刊占18.75%，其中個(gè)別期刊在同一篇文章中前后的格式都不一致，有的是字母和數(shù)字均為正體，有的是字母斜體、數(shù)字正體。國(guó)外SCI收錄期刊的格式也不夠統(tǒng)一，但與基因符號(hào)的情況相似，仍然以字母和數(shù)字均為斜體者占絕大多數(shù)(82.00%)；字母為斜體、數(shù)字為正體的期刊只占10.00%；不同文章中格式不統(tǒng)一的期刊占8.00%。后兩類多為亞非拉國(guó)家主辦的期刊。1.2.3引物和分子標(biāo)記符號(hào)的現(xiàn)行編排格式。引物(primer)是人工合成的、作為DNA復(fù)制起始點(diǎn)的兩段寡核苷酸序列[15]。分子標(biāo)記(molecularmarkers)有廣義和狹義之分。廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳并可檢測(cè)的DNA序列或蛋白質(zhì)，狹義的分子標(biāo)記是指DNA標(biāo)記，也就是能反映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異的特異性DN段[16]。引物和分子標(biāo)記的符號(hào)一般也都由字母和數(shù)字組成，應(yīng)該用正體還是斜體，也沒有統(tǒng)一規(guī)定，國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)期刊在其編排格式上也不夠統(tǒng)一(見表1)。在筆者調(diào)查的80種中文期刊中，引物符號(hào)中的字母和數(shù)字均為正體的期刊占70.00%，字母和數(shù)字均為斜體的期刊占8.75%，在不同文章中正斜體格式不統(tǒng)一的期刊占21.25%；分子標(biāo)記符號(hào)中的字母和數(shù)字均為正體的期刊占48.75%，字母和數(shù)字均為斜體的期刊占16.25%，字母為斜體、數(shù)字為正體的期刊占7.50%，在不同文章中或者同一篇文章的正文與圖表中正斜體格式不統(tǒng)一的期刊占27.50%。SCI收錄的國(guó)外期刊中，引物符號(hào)的格式比較統(tǒng)一，字母和數(shù)字均為正體的期刊占86.00%，均為斜體的期刊占12.00%；不同文章中格式不統(tǒng)一的期刊只占2.00%；分子標(biāo)記符號(hào)的格式也比較統(tǒng)一，字母和數(shù)表1國(guó)內(nèi)外科技期刊所發(fā)表的分子生物學(xué)論文中幾種常見名詞符號(hào)的編排格式Tab.1Formattingofnormalnounsandsymbolsformo-lecularbiologypaperspublishedindomesticoroverseassci-techjournals字均為正體的期刊占82.00%，均為斜體的期刊占12.00%；不同文章中格式不統(tǒng)一的期刊占6.00%。需要特別說明的是，有一類SSR(Simplese-quencerepeats)標(biāo)記，比如檢測(cè)小麥抗病基因的SSR標(biāo)記Xcfd81、Xwmc154、Xgwm429等等，其符號(hào)開頭的X代表基因位點(diǎn)，所以這類標(biāo)記符號(hào)一般都被排為斜體，這是應(yīng)該的。同一種期刊的不同論文或同一篇論文中，這類標(biāo)記被排為斜體，其他標(biāo)記(如SCAR標(biāo)記SCAR203)被排為正體，筆者在調(diào)查統(tǒng)計(jì)時(shí)，未將其視為“格式不統(tǒng)一”。1.2.4引物序列的現(xiàn)行編排格式。引物序列(Primersequences)即引物的核苷酸序列，也就是DNA或RNA中堿基的排列順序，如5'-GTGATGAAGTCGGAGTGGCA-3'，其中的A、T、G、C代表4種堿基。有些引物比較長(zhǎng)，含有四五十個(gè)堿基，排版時(shí)往往需要轉(zhuǎn)行，轉(zhuǎn)行時(shí)，不宜在堿基之間加連字符，因?yàn)橐粋€(gè)連字符代表一個(gè)省略的堿基，轉(zhuǎn)行時(shí)所加的連字符容易被誤認(rèn)為省略了一個(gè)堿基。國(guó)內(nèi)中文期刊中，引物序列符號(hào)轉(zhuǎn)行時(shí)不加連字符的期刊占57.50%，轉(zhuǎn)行時(shí)加連字符的期刊占42.50%。SCI收錄的國(guó)外期刊中，引物序列符號(hào)轉(zhuǎn)行時(shí)不加連字符的占92.00%，轉(zhuǎn)行時(shí)加連字符的占8.00%，后者基本為亞洲和非洲期刊。1.2.5SNP基因芯片型號(hào)的現(xiàn)行編排格式基因芯片又稱DNA芯片(DNAchip)、DNA微陣列(DNAmicroarray)、DNA微陣列芯片(DNAmicroarraychip)，是以預(yù)先設(shè)計(jì)的方式將大量的生物訊息密碼(寡核苷酸、cDNA、基因組DNA等)固定在玻片、硅片、聚丙烯膜、尼龍膜等固相載體上組成的密集分子陣列[17]。其中的SNP(SingleNucleotidePolymorphisms，單核苷酸多態(tài)性)基因芯片有90K、60K等不同型號(hào)。SCI收錄的國(guó)外期刊中，這種K為大寫者占96.00%，為小寫者僅占4.00%，并且與數(shù)字之間均無空格。但國(guó)內(nèi)中文期刊中，這種K有大寫、小寫、與數(shù)字之間留空格和不留空格4種格式，如90K、90,K、90k、90,k，有時(shí)同一篇論文中出現(xiàn)4種或3種格式：K為大寫、與數(shù)字之間無空格的期刊占38.75%；K為小寫、與數(shù)字之間有空格或無空格的期刊占17.50%；在不同文章或同一篇文章中格式不統(tǒng)一的期刊占31.25%。

2上述符號(hào)的規(guī)范編排建議

沒有統(tǒng)一的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，可能是造成我國(guó)眾多科技期刊分子生物學(xué)名詞符號(hào)編排不規(guī)范的主要原因。因此，中國(guó)科技期刊編輯學(xué)會(huì)應(yīng)該盡快牽頭制定與上述分子生物學(xué)符號(hào)編排格式有關(guān)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，讓相關(guān)期刊有據(jù)可依。在標(biāo)準(zhǔn)制定中，應(yīng)以《TIG遺傳命名指南》為基準(zhǔn)，以方便期刊排版操作為原則，以多數(shù)國(guó)際性期刊的習(xí)慣格式為標(biāo)樣。筆者在此提出幾點(diǎn)建議，供標(biāo)準(zhǔn)制定者和有關(guān)期刊參考：①根據(jù)《TIG遺傳命名指南》及90%國(guó)外期刊的慣例，建議基因和位點(diǎn)符號(hào)中的字母和數(shù)字都用斜體。②根據(jù)80%以上國(guó)外期刊的慣例，建議引物和標(biāo)記符號(hào)中的字母和數(shù)字都用正體。③將引物序列盡量排在同一行，必須轉(zhuǎn)行時(shí)，一定不要加連字符。④根據(jù)95%以上國(guó)外期刊的慣例，建議SNP基因芯片型號(hào)中的字母大寫，字母與數(shù)字之間不留空格。

一、計(jì)算機(jī)技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的具體應(yīng)用

1.醫(yī)院信息系統(tǒng)（HospitalInformationSystem，HIS）

HIS是利用網(wǎng)絡(luò)通訊技術(shù)，計(jì)算機(jī)軟硬件技術(shù)等現(xiàn)代化手段，對(duì)醫(yī)院及所屬各個(gè)部門的進(jìn)行綜合管理，對(duì)在醫(yī)療活動(dòng)各階段產(chǎn)生的數(shù)據(jù)進(jìn)行采集，存儲(chǔ)，處理，提取，傳輸，匯總加工生成各種信息，從而為醫(yī)院的整體運(yùn)行提供各種信息及自動(dòng)化的管理服務(wù)的信息系統(tǒng)。HIS對(duì)于現(xiàn)代化醫(yī)院的建設(shè)起著不可或缺的作用。它大大簡(jiǎn)化了工作流程，減輕醫(yī)務(wù)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高了工作效率，也提高了數(shù)據(jù)錄入的準(zhǔn)確性，達(dá)到信息精確化。

2.電子病歷（ElectronicMedicalRecord，EMR）

電子病歷就是把傳統(tǒng)的病歷計(jì)算機(jī)化。它是用計(jì)算機(jī)、儲(chǔ)存卡等電子設(shè)備存儲(chǔ)、查找、提取患者的診療經(jīng)過，替代傳統(tǒng)的手寫病歷。電子病歷的內(nèi)容與傳統(tǒng)病例一樣，包括患者所有的診療信息。病歷記錄著患者病情演變的詳細(xì)過程，是醫(yī)生了解患者病情制定診療方案的重要依據(jù)，也是醫(yī)務(wù)人員之間交流的一項(xiàng)重要文件，又是探索疾病規(guī)律及處理醫(yī)療糾紛的法律依據(jù)，是國(guó)家的寶貴財(cái)富。病歷對(duì)醫(yī)療、預(yù)防、教學(xué)、科研、醫(yī)院管理等都有重要的作用。而電子病歷于傳統(tǒng)的手寫病歷相比，有著顯著的優(yōu)勢(shì)。

1）易于存儲(chǔ)。患者可以將自己的病歷保存在一張小小的儲(chǔ)存卡里，方便且易于保存；醫(yī)院可以將患者們的病歷存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)無限的存儲(chǔ)空間里，節(jié)省空間也便于管理。

【摘要】目的：了解拉米夫定(LAM)和干擾素對(duì)慢性乙肝的療效，為慢性乙肝的治療開辟一條新的途徑.方法：將HBVDNA和HBeAg均陽性的慢性乙肝患者80例，1∶1隨機(jī)分為兩組，即治療組和對(duì)照組.其中治療組(LAM+干擾素)為：INFα1b，隔日5MU,im，及LAM100mg/d；對(duì)照組(LAM組)為L(zhǎng)AM100mg/d，口服，共12mo.結(jié)果：LAM和干擾素（治療組）對(duì)YMDD變異株的治療作用初步結(jié)果明顯高于LAM單獨(dú)作用（對(duì)照組）（P＜0.01）.結(jié)論：LAM和干擾素聯(lián)合治療慢性乙肝的初步結(jié)果顯示出有較好的療效，為臨床進(jìn)一步驗(yàn)證提供了科學(xué)依據(jù).

【關(guān)鍵詞】肝炎，乙型，慢性；治療；拉米夫定；干擾素

0引言

拉米夫定(LAM)通過特異性的阻斷嗜肝病毒DNA的合成，顯著抑制HBV的復(fù)制，目前已廣泛的應(yīng)用于乙肝的治療［1］，長(zhǎng)期應(yīng)用LAM其耐藥突變的發(fā)生率為16%~43%.突變發(fā)生后一方面降低療效，另一方面使肝病活動(dòng)，甚至誘發(fā)重癥肝炎，為此我們采用了LAM與干擾素聯(lián)合對(duì)抗乙肝病毒變異進(jìn)行了臨床試驗(yàn)，取得了明顯的治療效果.

1對(duì)象和方法

1.1對(duì)象

【關(guān)鍵詞】,肝炎ObservationoftherapeuticefficacyoflamivudinecombinedwithalphainterferoninpatientswithchronichepatitisB【Abstract】AIM:TostudythetherapeuticefficacyoflamivudinecombinedwithalphainterferoninpatientswithchronichepatitisBandtofindanewapproachtocontrolthedisease.METHODS:EightychronichepatitisBpatientswithHBVDNAandHBeAgpositiveweredividedintotwogroups:LAMIFNgrouptreatedwithlamivudineandalphainterferonfor12monthsandLAMgrouptreatedwithlamivudinealonefor12months.RESULTS:ThetherapeuticeffectonYMDDmutationinthegroupwithlamivudineandIFNα1bwassignificantlybetterthanthatinthegroupwithlamivudinealone（P<0.01）.CONCLUSION:LamivudinecombinedwithalphainterferonhasbettertherapeuticefficacyinpatientswithchronichepatitisB.【Keywords】hepatitisB,chronic;treatment；lamivudine;interferon【摘要】目的：了解拉米夫定(LAM)和干擾素對(duì)慢性乙肝的療效，為慢性乙肝的治療開辟一條新的途徑.方法：將HBVDNA和HBeAg均陽性的慢性乙肝患者80例，1∶1隨機(jī)分為兩組，即治療組和對(duì)照組.其中治療組(LAM干擾素)為：INFα1b，隔日5MU,im，及LAM100mg/d；對(duì)照組(LAM組)為L(zhǎng)AM100mg/d，口服，共12mo.結(jié)果：LAM和干擾素（治療組）對(duì)YMDD變異株的治療作用初步結(jié)果明顯高于LAM單獨(dú)作用（對(duì)照組）（P＜0.01）.結(jié)論：LAM和干擾素聯(lián)合治療慢性乙肝的初步結(jié)果顯示出有較好的療效，為臨床進(jìn)一步驗(yàn)證提供了科學(xué)依據(jù).【關(guān)鍵詞】肝炎，乙型，慢性；治療；拉米夫定；干擾素0引言拉米夫定(LAM)通過特異性的阻斷嗜肝病毒DNA的合成，顯著抑制HBV的復(fù)制，目前已廣泛的應(yīng)用于乙肝的治療［1］，長(zhǎng)期應(yīng)用LAM其耐藥突變的發(fā)生率為16%~43%.突變發(fā)生后一方面降低療效，另一方面使肝病活動(dòng)，甚至誘發(fā)重癥肝炎，為此我們采用了LAM與干擾素聯(lián)合對(duì)抗乙肝病毒變異進(jìn)行了臨床試驗(yàn)，取得了明顯的治療效果.1對(duì)象和方法1.1對(duì)象200202/200407住院的HBeAg和HBVDNA陽性，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）異常，均經(jīng)過LAM正規(guī)的治療12~18mo的患者80(男48，女32)例,年齡20~52歲.按1∶1的比例隨機(jī)分為2組，其中LAM與干擾素共用為聯(lián)合治療組，LAM單獨(dú)為對(duì)照組.聯(lián)合治療組：INFα1b，隔日5MU，im,及LAM100mg/d；LAM組LAM100mg/d，口服，共12mo，慢性乙肝的診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2000年西安全國(guó)傳染病與寄生蟲病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的病毒性肝炎防治方案標(biāo)準(zhǔn)［2］.1.2方法①肝功能用美國(guó)Beckman全自動(dòng)生化儀及其配套的試劑檢測(cè)；判定標(biāo)準(zhǔn)；治療后ALT降至正常參考值為顯效，有所下降為有效，無下降者為無效.②HBVM用酶聯(lián)免疫法試劑由美國(guó)Abbott公司提供；e抗原的判定：e抗原轉(zhuǎn)陰，產(chǎn)生e抗體，若e抗原轉(zhuǎn)陰，但沒有產(chǎn)生抗體表示基因突變.③HBVDNA用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR檢測(cè)，由廣州達(dá)安基因診斷中心提供儀器和試劑盒，截止值為103copies/mL；判定標(biāo)準(zhǔn)：HBVDNA轉(zhuǎn)陰的標(biāo)準(zhǔn)是0.001PG/mL，約等于100copies/mL.④YMDD變異用基因芯片檢測(cè)［3，4］，以HBV序列（GenBank4490408）為模板設(shè)計(jì)以下引物：上游引物：5′GATGTGTCTGCGGCGT3′，下游引物：5′GTAAACTGAGCCAGGAGAAA3′，在50μL含20mmol/LTrisHCl,50mmol/LKCl,2mmol/LMgCl2,0.2mmol/LdATP,dTTP和Cy5dCTP(英國(guó)Amersham公司產(chǎn)品)，100mmol/L引物、2UTaq酶的體系中，經(jīng)95℃5min預(yù)變性，以94℃30s,50℃30s,72℃30s循環(huán)30次，擴(kuò)增并標(biāo)記長(zhǎng)度為308bp的待測(cè)片段.擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)乙醇沉淀純化，55℃雜交30min,45℃洗兩次，晾干掃描，計(jì)算判讀按每塊芯片檢測(cè)4位點(diǎn)計(jì)可測(cè)得基因突變數(shù)同時(shí)可獲得確切的突變類型.⑤肝臟組織病理的變化用肝穿刺活檢的方法對(duì)肝臟的炎癥程度進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)受試對(duì)象都接受2次肝穿.用放免法對(duì)肝纖維化程度進(jìn)行檢測(cè).統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：用SPSS10.0軟件，記數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用成組t檢驗(yàn).2結(jié)果2.1均衡性檢驗(yàn)兩組在性別、年齡、病程、ALT、乙肝病毒e抗原和乙肝病毒定量方面無明顯差異（P＞0.05）.LAM組：40（男25，女15）例，年齡（36.26±1.25）歲，病程（12.20±1.61）mo,ALT（86.07±1.26）,乙肝病毒e抗原陽性（40例）、乙肝病毒定量陽性（40例）；聯(lián)合治療組：40（男23，女17）例，年齡（36.18±1.75）歲，病程（12.01±1.23）mo,ALT（87.25±1.34）,為乙肝病毒e抗原陽性（40例）、乙肝病毒定量陽性（40例）.2.2治療后在ALT，HBeAg，HBVDNA的變化聯(lián)合治療組ALT復(fù)常率、HBeAg和HBVDNA轉(zhuǎn)陰率明顯的高于LAM組（P<0.01,Tab1).表1兩組治療后ALT、乙肝病毒e抗原、乙肝病毒定量方面的比較（略）2.3肝臟組織病理的變化治療后兩組肝臟組織病理的改善，LAM組為45.0%(18/40);聯(lián)合治療組為87.5%(35/40)，聯(lián)合治療組肝臟組織病理的改善明顯高于LAM組（P＜0.01）.2.4對(duì)治療后基因突變的檢測(cè)在常規(guī)PCR檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)LAM抗病毒作用在短期達(dá)到較好效果，但隨著抗病毒時(shí)間的延長(zhǎng)，治療效果反而有減弱的現(xiàn)象，為此用基因芯片技術(shù)對(duì)有關(guān)標(biāo)本進(jìn)行了進(jìn)一步的檢測(cè)，觀察HBVYMDD變異，LAM組基因突變數(shù)為80%(32/40)，聯(lián)合治療組基因突變數(shù)為37.5%(15/40)，LAM組突變率明顯高于聯(lián)合治療組（χ2=14.907，P＜0.01）.3討論雖然LAM是目前治療乙肝的主要藥物，它可迅速抑制HBV的復(fù)制，在短時(shí)間間內(nèi)使HBVDNA轉(zhuǎn)陰，肝功能和肝臟組織學(xué)得到改善［5］，但是在其抗病毒治療過程中可出現(xiàn)HBVYMDD變異，其突變率高達(dá)16%~43%［6，7］，給治療帶來許多困難，是繼續(xù)用藥還是終止用藥，一直是臨床工作爭(zhēng)論的焦點(diǎn)，現(xiàn)在還無定論.體外實(shí)驗(yàn)證明，YMDD突變發(fā)生后LAM的用量提高105~106倍［8］，應(yīng)該停藥或更換其他的藥物治療.由于缺乏相應(yīng)的臨床資料也有專家認(rèn)為；體外實(shí)驗(yàn)并不能說明體內(nèi)LAM的效果，因此即使出現(xiàn)耐藥，還應(yīng)繼續(xù)用藥.針對(duì)這一臨床問題，我們采用了LAM聯(lián)合干擾素對(duì)乙肝病毒變異進(jìn)行了正規(guī)的治療，通過治療臨床觀察表明：LAM和干擾素聯(lián)合治療可顯著的減少YMDD變異的產(chǎn)生，能有效的抑制野生株并能控制突變株的發(fā)生已獲得滿意的治療效果.可能因乙肝的發(fā)病機(jī)制是持續(xù)的胞內(nèi)病毒復(fù)制和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷，所以聯(lián)合治療仍然是慢性乙肝抗病毒治療的主要方向，即在抗病毒治療的同時(shí)進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)治療.治療后可使血清轉(zhuǎn)換率、肝臟的炎癥及纖維化程度得到了明顯的改善，也使HBVYMDD變異出現(xiàn)了抑制或是延緩的發(fā)生.LAM聯(lián)合干擾素對(duì)乙肝病毒變異應(yīng)該是理想的治療.【參考文獻(xiàn)】［1］YaoGB，WangBE，CuiZY，etal.ArandomizeddoubleblindplacebocontrolledstudyoflamivudineinthetreatmentofpatientswithchronichepatitisBvirusinfection［J］.ChinMed（Engl），1999;12（35）：387-391.［2］中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲病學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案［J］.中華肝臟病雜志，2000;8（6）：324-329.BranchofinfectiousdiseasesandparasitediseasesofChinesemedicinemeeting.Virusnaturehepatitispreventionandcurescheme［J］.ChinJLabMed,2000;8（6）：324-329.［3］宋家武，林菊生，孔心涓，等.檢測(cè)拉米夫定耐藥基因芯片的制作及其初步應(yīng)用初探［J］[1][2].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2003;26（15）：1-3，68.SongJW，LinJS，KongXJ，etal.DoingofdetectlamivudinedurablegeneCMOSchipanditsfirstexploringofprinaipiumapplication［J］.ChinJCheckout，2003；26（15）：1-3，68.［4］宋家武，林菊生，孔心涓，等.基因芯片檢測(cè)拉米夫定致乙型肝炎病毒耐藥突變的臨床研究［J］.中華肝臟病雜志，2003；6（9）：361-363.SongJW，LinJS，KongXJ，etal.lamivudineinwhichgeneCMOSchipdetectresultinclinicresearchofhepatitisBvirusdurabledruggenemutation［J］.ChinJHepatol，2003；6（9）：361-363.［5］姚國(guó)弼，催振宇，姚集魯，等.國(guó)產(chǎn)拉米夫定治療2200例慢性乙型肝炎的IV期臨床試驗(yàn)［J］.中華肝臟病雜志，2003；11（6）：103-108.YaoGB，CuiZY，YaoJL，etal.IVperiodclinicTestof2200caseschronichepatitisBinwhichlamivudinemadeinChinatreating［J］.ChinJHepatol，2003；11（6）：103-108.［6］ZoulimF.TherapyofchronichepatitisBvirusinfection；inhibitionoftheviralpolymeraseandotherantiviralstrategies［J］.AntiviralRes，1999；44（26）：1-30.［7］計(jì)淼淼，楊敏燕，錢又宏，等.拉米夫定治療慢性乙型肝炎臨床療效及病毒變異［J］.肝臟，2000；6（18）：75-77.JiMM，YangMY，QianYH，etal.CliniccurativeeffectandvirusmutationoflamivudinetreatingchronichepatitisB［J］.Liver，2000;6（18）：75-77.［8］AllenMI，DeslauriersB，AndrewsCW，etal.IdentificationandcharacterizationofmutationinhepatitisBvirusresistanttolamivudine［J］.Hepatology，1998；27（28）：1670-1677

摘要：近年來，隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因食品也得到了快速發(fā)展。然而，轉(zhuǎn)基因食品為企業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟(jì)利益的同時(shí)也存在不小的安全隱患。因此，轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)技術(shù)就顯得尤為重要。本文重點(diǎn)闡述了分子生物技術(shù)在轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中的應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因食品；檢測(cè)基因；分子生物學(xué)；檢測(cè)技術(shù)

轉(zhuǎn)基因食品逐步商業(yè)化滿足了人們不斷增長(zhǎng)的物質(zhì)需求。轉(zhuǎn)基因食品卻在食用安全性和對(duì)生態(tài)環(huán)境的影響方面存在問題。轉(zhuǎn)基因食品是使用基因工程技術(shù)來改變?cè)嘉锓N基因信息的新型技術(shù)。轉(zhuǎn)基因過程中的每個(gè)階段都可能存在安全隱患。因此，建立有效、快速、準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)基因食品檢驗(yàn)方法，可以有效滿足消費(fèi)者的知情權(quán)和選擇權(quán)，改善轉(zhuǎn)基因食品安全管理不足。本文重點(diǎn)闡述分子生物技術(shù)在轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中的應(yīng)用。

1基因水平定性的PCR檢測(cè)法

為了更好地使外源基因成功轉(zhuǎn)移到宿主體內(nèi)并合理表達(dá)，轉(zhuǎn)基因通常必須構(gòu)建啟動(dòng)子、終止子、選擇標(biāo)記基因和報(bào)道基因。其中啟動(dòng)子和終止子是目標(biāo)基因，具有表達(dá)順序的作用。根據(jù)科學(xué)研究，大多數(shù)轉(zhuǎn)基因作物具有啟動(dòng)子（CaMV35s），終止子（NOS）和抗性基因（NPTII3）三個(gè)基因成分。為了設(shè)計(jì)啟動(dòng)子、終止子、選擇標(biāo)記基因等的引物，基于此編碼序列的PCR擴(kuò)增，可以評(píng)估該食品是否含有轉(zhuǎn)基因成分。目前，我國(guó)利用花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子和農(nóng)桿菌腐爛NOS終止子設(shè)計(jì)方案，非特異性引物設(shè)計(jì)對(duì)35S和NOS已成功地通過PCR擴(kuò)增技術(shù)測(cè)試了轉(zhuǎn)基因大豆。該方法用于成功測(cè)試RounfupReady，這是一種抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因大豆。但是，PCR方法只適用于轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品基礎(chǔ)測(cè)試，一些綠色植物或土壤微生物也將攜帶CaMV35S和NOS基因成分，檢測(cè)結(jié)果很可能是假陽性。

2基于基因芯片的檢測(cè)法

轉(zhuǎn)基因食品的安全管理普庇泰教授

[5]首先提出轉(zhuǎn)基因食品安全性問題，1998年他研究發(fā)現(xiàn)，幼鼠食用了轉(zhuǎn)基因土豆之后，其免疫系統(tǒng)和內(nèi)臟都受到了損壞。這一發(fā)現(xiàn)轟動(dòng)了科學(xué)界。后來經(jīng)審查發(fā)現(xiàn)這項(xiàng)研究結(jié)果不夠詳實(shí)，不足以證明轉(zhuǎn)基因食品具有危險(xiǎn)性[6]。轉(zhuǎn)基因食品的風(fēng)險(xiǎn)尚未有定論，迄今為止也沒有因食用轉(zhuǎn)基因食品而導(dǎo)致重大的事故傷亡。隨著人們安全意識(shí)的逐漸加強(qiáng)，各國(guó)開始了對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的監(jiān)控和管理。轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全管理世界上主要分為兩大模式，這兩種模式在轉(zhuǎn)基因食品安全管理的方法和理念上存在巨大的差異，分別是開放鼓勵(lì)型的美國(guó)模式和嚴(yán)謹(jǐn)限制型的歐盟模式，其他國(guó)家實(shí)行的模式介于兩者之間[7]。歐盟對(duì)轉(zhuǎn)基因食品一向嚴(yán)謹(jǐn)。盡管歐盟的研究表明目前市場(chǎng)上的轉(zhuǎn)基因食品是安全的，但歐盟認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品的安全評(píng)估需要靠長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)和觀察才能得以進(jìn)行。歐盟的管理模式以轉(zhuǎn)基因食品的工藝過程為基礎(chǔ)，所有的轉(zhuǎn)基因生物，都要接受安全性評(píng)價(jià)和監(jiān)控[8]。轉(zhuǎn)基因食品管理的理論基礎(chǔ)是“預(yù)防”原則。其目標(biāo)是保證人類和動(dòng)物的生命健康、保護(hù)環(huán)境免遭破壞。其管理政策是確保歐盟市場(chǎng)健康正常的運(yùn)轉(zhuǎn)[9]。歐盟很重視轉(zhuǎn)基因食品的立法。自20世紀(jì)90年代制定了一系列的法律法規(guī)，制定了新食品定義和主要成分、安全評(píng)估機(jī)制和成分標(biāo)識(shí)。從田間到菜場(chǎng)制定了全方位的食品安全管理體制。所有轉(zhuǎn)基因食品在上市前須通過歐盟的強(qiáng)制性安全評(píng)估和批準(zhǔn)程序，同時(shí)進(jìn)行標(biāo)識(shí)，確保其安全性和可追溯性，使消費(fèi)者的權(quán)益得到保障，確保轉(zhuǎn)基因食品監(jiān)督有效，并能及時(shí)采取適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)應(yīng)對(duì)措施。歐盟的轉(zhuǎn)基因食品管理機(jī)構(gòu)是歐盟食品安全局。歐盟各個(gè)國(guó)家在管理上存在差異，沒有完全依照歐盟轉(zhuǎn)基因食品管理體系來實(shí)行。與歐盟管理模式相似的有新西蘭、澳大利亞等國(guó)家[10]。美國(guó)提出，必須有可靠的科學(xué)證據(jù)證明風(fēng)險(xiǎn)的存在，才會(huì)采取適當(dāng)?shù)墓苤?，即?duì)轉(zhuǎn)基因食品的法律管制須建立在“可靠科學(xué)”原則基礎(chǔ)上[11]。美國(guó)管理模式以產(chǎn)品為基礎(chǔ)，認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品與傳統(tǒng)食品之間沒有本質(zhì)差別，具有同樣的安全性。美國(guó)在國(guó)內(nèi)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行自律管制、在國(guó)際上推行轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品貿(mào)易自由，管理模式寬松。美國(guó)沒有制定完整的法規(guī)來管制轉(zhuǎn)基因食品，僅納入到現(xiàn)有的法律管制范圍內(nèi)。美國(guó)的轉(zhuǎn)基因生物安全管理機(jī)構(gòu)有：美國(guó)農(nóng)業(yè)部、環(huán)境保護(hù)局、食品與藥品管理局。美國(guó)對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展很是樂觀。加拿大對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的管理與美國(guó)相似，運(yùn)用自律性管理。中國(guó)擁有大量的人口，隨著環(huán)境的急劇惡化及耕地不斷的被征用，耕地面積卻在大量的減少，中國(guó)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)面臨著巨大的壓力，轉(zhuǎn)基因食品的出現(xiàn)使這一問題得到了轉(zhuǎn)機(jī)[12]。中國(guó)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的研究起步比較晚，但國(guó)家對(duì)轉(zhuǎn)基因技術(shù)非常重視，并取得了一定的成果。1986年啟動(dòng)的“國(guó)家高技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃”中，大力支持發(fā)展生物技術(shù)。中國(guó)是世界上第一個(gè)批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品商業(yè)化生產(chǎn)的國(guó)家。近年中國(guó)在轉(zhuǎn)基因技術(shù)方面的研究取得了不錯(cuò)的成績(jī)，但與歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家還存在著巨大的差距[13]。中國(guó)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品采取較為嚴(yán)格的管理模式。中國(guó)的管理機(jī)構(gòu)有：農(nóng)業(yè)部、科技部、衛(wèi)生部、食品與藥物管理局和國(guó)家環(huán)保總局，中國(guó)轉(zhuǎn)基因食品的管理中發(fā)揮著主導(dǎo)作用的是農(nóng)業(yè)部。

轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)技術(shù)

DNA在提取的時(shí)候會(huì)產(chǎn)生的應(yīng)抑制因子、產(chǎn)品深加工時(shí)破壞了核酸等因素會(huì)使PCR結(jié)果呈假陰性；作物受到病毒感染、實(shí)驗(yàn)室污染等因素會(huì)造成PCR結(jié)果呈假陽性[16-18]。所以，定性PCR只能初步檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品。為了解決PCR存在的問題，消除檢測(cè)干擾，在試驗(yàn)中引入內(nèi)部對(duì)照反應(yīng)，從而可以半定量地檢測(cè)樣品[19]。(1)競(jìng)爭(zhēng)定量PCR：其主要的過程是將一種人工構(gòu)建的相互間競(jìng)爭(zhēng)模板，使這種模板能夠具有一致的待檢測(cè)基因所具有的動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)，能夠在同一反應(yīng)體系中同引物和底物相競(jìng)爭(zhēng)，之后進(jìn)行電泳檢測(cè)。將結(jié)果制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)基因的含量。該方法容易產(chǎn)生誤差，比較難使用[20]。(2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR：該技術(shù)是普通PCR的升級(jí)，主要思想就是把一個(gè)標(biāo)記了2個(gè)熒光基團(tuán)的探針加入到反應(yīng)體系中，根據(jù)探針上的熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，然后將結(jié)果制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算未知模板的含量[21]。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)的靈敏度很高，它的最小檢測(cè)量為2pgDNA/g樣品。檢測(cè)要求低、范圍廣，可以檢測(cè)一些已經(jīng)加工，或者還未進(jìn)行加工以及混合樣品。實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)能對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行有效地實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。在實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)中加入閉管分析，不需要加入PCR后處理過程，能使核酸的交叉污染有效的降低甚至消除。此方法的挑戰(zhàn)就是定量標(biāo)準(zhǔn)物的滯后發(fā)展。(3)多重PCR：在同一反應(yīng)體系中的多個(gè)靶點(diǎn)能同時(shí)進(jìn)行PCR檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果可靠，操作簡(jiǎn)單快速，降低了檢測(cè)的成本。多重PCR法的應(yīng)用前景很廣闊。(4)Southern和Northern雜交：用限制性核酸內(nèi)切酶對(duì)與特異性探針結(jié)合的基因組片斷內(nèi)或其周圍序列進(jìn)行酶切，研究基因內(nèi)部的序列。該技術(shù)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但要求樣品的純度高，檢測(cè)費(fèi)用也較高。Southem雜交的檢測(cè)對(duì)象是DNA，而Northern雜交是RNA?；蛐酒纸蠨NA芯片或DNA微陣列[22]。是美國(guó)的Affymetrix公司開發(fā)的，世界上第一塊商品化的基因芯片在1996年問世?；蛐酒夹g(shù)是目前轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)的前沿技術(shù)，是一種高度集成化的反向雜交技術(shù)。將探針分子固定在載體上，用PCR、末端標(biāo)記等方法對(duì)待測(cè)基因進(jìn)行處理，處理后的基因與固定了的探針雜交。借助放射自顯影或者激光共聚焦顯微鏡或CCD相機(jī)檢測(cè)并讀出各個(gè)不同斑點(diǎn)信號(hào)的強(qiáng)度，將所獲得的雜交信號(hào)用相應(yīng)的軟件處理，得到被檢樣品的遺傳信息。該方法可實(shí)現(xiàn)樣品大量序列的檢測(cè)和分析，同時(shí)完成樣品的定性定量。將抗原和抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合酶對(duì)底物的高效催化這兩者有機(jī)的結(jié)合，完成ELISA的檢測(cè)。酶作用于底物后，顏色會(huì)發(fā)生變化，抗原結(jié)合抗體時(shí)，可以通過比色過程或者根據(jù)熒光反應(yīng)來測(cè)定。通過顏色的變化來判斷樣品中含有抗原的的數(shù)量。ELISA檢測(cè)可以同時(shí)完成樣品的定性和定量檢測(cè)。該方法選擇性和靈敏度較高，但復(fù)雜基質(zhì)對(duì)它的準(zhǔn)確度有干擾，外源蛋白質(zhì)含量低或被熱處理變性，該方法的檢測(cè)能力就會(huì)下降[23]。3.2.2Western雜交Western雜交又稱蛋白質(zhì)印跡法，是將抗體的特異性、蛋白質(zhì)電泳的分離能力、顯色酶反應(yīng)的靈敏性結(jié)合在一起的蛋白質(zhì)檢測(cè)方法，可用于檢測(cè)復(fù)雜混合物中特異蛋白質(zhì)的含量。用于檢測(cè)特異性目的蛋白質(zhì)，檢測(cè)靈敏度可達(dá)1～5ng，還可用于檢測(cè)不可溶性蛋白質(zhì)。其檢測(cè)的關(guān)鍵是抗體的制備[24]。

中國(guó)轉(zhuǎn)基因食品安全管理的改善措施

中國(guó)缺乏系統(tǒng)的法規(guī)來制約轉(zhuǎn)基因食品的安全，因此需及時(shí)將轉(zhuǎn)基因食品的安全性納入到法律的框架內(nèi)。需要建立轉(zhuǎn)基因生物安全管理的基本原則和制度，建立相應(yīng)的部門并明確它們?cè)摮袚?dān)的職責(zé)義務(wù)和管理權(quán)限，對(duì)一些經(jīng)過轉(zhuǎn)基因技術(shù)加工的產(chǎn)品和借助轉(zhuǎn)基因技術(shù)進(jìn)行研究的行業(yè)開展全方位的正規(guī)的管理體系[25]。許多發(fā)達(dá)國(guó)家在轉(zhuǎn)基因生物安全管理立法方面已積累了一定的經(jīng)驗(yàn)，中國(guó)立法時(shí)可以借鑒。在對(duì)待轉(zhuǎn)基因食品風(fēng)險(xiǎn)的不確定方面，學(xué)習(xí)歐盟等國(guó)采取審批制度和強(qiáng)制性標(biāo)識(shí)制度。鑒于轉(zhuǎn)基因技術(shù)發(fā)展所帶來的巨大經(jīng)濟(jì)利益和未來美好的發(fā)展前景，許多發(fā)達(dá)國(guó)家均投入大量資金和人力進(jìn)行研發(fā)，中國(guó)在確保安全的提前下，也應(yīng)使轉(zhuǎn)基因技術(shù)得到更好的發(fā)展，最大限度地維護(hù)國(guó)家利益。轉(zhuǎn)基因食品從研發(fā)到消費(fèi)這一系列的過程都必須采用標(biāo)識(shí)、通報(bào)等措施保證消費(fèi)者知情同意權(quán)的實(shí)現(xiàn)。當(dāng)前市場(chǎng)上的轉(zhuǎn)基因食品的標(biāo)識(shí)很不完善。普遍存在未辦理轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識(shí)，并私自進(jìn)行轉(zhuǎn)基因種子生產(chǎn)、經(jīng)營(yíng)的行為。由于缺乏完整的農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物成分的檢測(cè)體系，監(jiān)督市場(chǎng)產(chǎn)品時(shí)，無法準(zhǔn)確判斷農(nóng)產(chǎn)品是否有轉(zhuǎn)基因成分，缺乏奏效的監(jiān)控手段。因此，通過市場(chǎng)調(diào)查了解轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)識(shí)的實(shí)際情況，掌握轉(zhuǎn)基因食品的種類、來源和加工后的形式等，制定相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因食品安全管理的條例。建立轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)識(shí)的定期監(jiān)督制度，借助已建的轉(zhuǎn)基因食品管理機(jī)構(gòu)，加強(qiáng)農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)識(shí)管理。中國(guó)境內(nèi)銷售的轉(zhuǎn)基因食品必須實(shí)行標(biāo)識(shí)，不標(biāo)識(shí)和不符合標(biāo)識(shí)規(guī)定的一律不得進(jìn)口和銷售。標(biāo)識(shí)目錄由農(nóng)業(yè)部和國(guó)務(wù)院相關(guān)部門制定并公布[26]。目前相關(guān)部門的職責(zé)配合不夠，很難對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行有效的監(jiān)管。因此應(yīng)設(shè)立專門的系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因食品安全管理部門。對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的研發(fā)、生產(chǎn)加工、運(yùn)輸、進(jìn)出口和銷售等環(huán)節(jié)進(jìn)行全面的監(jiān)督，確保轉(zhuǎn)基因食品產(chǎn)業(yè)安全規(guī)范的運(yùn)行[27]。在當(dāng)前的技術(shù)條件下，轉(zhuǎn)基因食品的安全性還不能確定，應(yīng)理性對(duì)待轉(zhuǎn)基因食品。因此，政府應(yīng)設(shè)立專業(yè)的獨(dú)立行政監(jiān)管機(jī)構(gòu)，全程跟蹤，并建立食品安全監(jiān)管過程中有效的追蹤制度，詳細(xì)記錄每一環(huán)節(jié)，一旦出現(xiàn)問題，可以速度的找出危害關(guān)鍵控制點(diǎn)，便于及時(shí)采取措施，將危害降至最低。針對(duì)轉(zhuǎn)基因食品存在的風(fēng)險(xiǎn)不確定性，制定安全評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以保證轉(zhuǎn)基因食品行業(yè)正常穩(wěn)定的發(fā)展。轉(zhuǎn)基因食品的安全評(píng)價(jià)需要合適的檢測(cè)技術(shù)。轉(zhuǎn)基因食品品種繁多且數(shù)量大，含轉(zhuǎn)基因成分的食品成分復(fù)雜、待檢測(cè)成分被降解或破壞，檢測(cè)難度大[28]。目前的檢測(cè)手段有：人工檢測(cè)、儀器檢測(cè)和生物芯片，但不能滿足當(dāng)前的檢測(cè)需要。因此，需加大轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究力度，使檢測(cè)快速、準(zhǔn)確、可靠。在發(fā)展自身技術(shù)的同時(shí)，還應(yīng)積極開展國(guó)際合作，加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因食品的安全防范[29-31]。對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的安全評(píng)價(jià)需做到公開透明。需制定一整套針對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的法規(guī)、安全評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、方法及規(guī)則。對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的生產(chǎn)源頭開始，以及對(duì)其生產(chǎn)、加工、成品、銷售等一系列過程進(jìn)行詳細(xì)的存檔化管理并進(jìn)行詳細(xì)的記錄存檔，使記錄和標(biāo)識(shí)具有可溯源性[32,33]。以轉(zhuǎn)基因食品的安全性、營(yíng)養(yǎng)上的要求和質(zhì)量上的評(píng)價(jià)以及對(duì)環(huán)境所產(chǎn)生的影響等標(biāo)準(zhǔn)作為是否決定進(jìn)口及進(jìn)口的數(shù)量、方式等的判斷因素。同時(shí)在此基礎(chǔ)上要建立有效且實(shí)時(shí)的預(yù)警機(jī)制，在轉(zhuǎn)基因作物的風(fēng)險(xiǎn)處理上，要防患于未然。監(jiān)管部門對(duì)進(jìn)口的轉(zhuǎn)基因食品實(shí)行跟蹤檢查，將存在的或可能存在的質(zhì)量問題及時(shí)公布于眾。政府應(yīng)重視和加強(qiáng)對(duì)國(guó)外轉(zhuǎn)基因食品相關(guān)政策信息的收集和研究，為企業(yè)和消費(fèi)者提供一些必要且合理的咨詢服務(wù)，以減少國(guó)際貿(mào)易中的摩擦[34]。