【摘要】研究日本新近研制的第三代3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA，HMG-CoA）還原酶抑制劑匹伐他汀（pitavastatin，NK-104）對(duì)人肝癌細(xì)胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性的影響。方法:采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，以肝癌細(xì)胞系HepG2為靶細(xì)胞，以不同濃度的藥物處理細(xì)胞48h后，利用WST-8法測定NK-104對(duì)細(xì)胞增殖的影響;利用熒光染料Hoechst33258染色，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核碎片;以流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的變化;采用半胱氨酸蛋白酶3比色法檢測caspase-3活性。結(jié)果:NK-104（10μmol/L）對(duì)HepG2細(xì)胞有明顯抑制作用，可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，并能增強(qiáng)caspase-3基因的活性。結(jié)論:NK-104能夠誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與caspase-3依賴性凋亡調(diào)節(jié)信號(hào)通路有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】肝癌

3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA，HMG-CoA）還原酶抑制劑，統(tǒng)稱為抑制素，是重要的脂類合成抑制劑，主要在人體肝臟中代謝，臨床上廣泛應(yīng)用于治療高脂血癥［1］。最近研究發(fā)現(xiàn)，HMG-CoA還原酶抑制劑具有生物學(xué)多效性，與降血脂無關(guān)。有報(bào)道其在體外具有抗癌作用［2］、體內(nèi)與5氟尿嘧啶（fluorouracil，5-Fu）共同作用能夠延長晚期肝癌患者的生存期［3］。匹伐他?。╬itavastatin，NK-104）是日本新近研制的第三代高效HMG-CoA還原酶抑制劑［4］。在血管內(nèi)皮細(xì)胞系NK-104通過磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide3-kinase/proteinkinaseB，PI3K-Akt）基因激活途徑對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用已有報(bào)道［5］，但其在肝癌細(xì)胞系的抗癌作用尚未見報(bào)道。本文在肝癌細(xì)胞系HepG2通過2-（2-甲氧基-4-硝基苯）-3-（4-硝基苯）-5-（2，4-二硫代苯）-2H-四氮唑單鈉鹽｛［2-（2-methoxy-4-nitrophe-nyl）-3-（4-nitrophenyl）-5-（2，4-disulfophenyl）-2H-tetrazolium，monosodiumsalt］，WST-8｝、熒光染料Hoechst33258染色、流式細(xì)胞儀和半胱氨酸蛋白酶3比色法等檢測方法，研究NK-104對(duì)人肝癌細(xì)胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性的影響，為NK-104在抗腫瘤中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料和方法

1.1主要材料與儀器NK-104，日本興和有限公司（日本名古屋）和日產(chǎn)化學(xué)工業(yè)公司（日本東京）產(chǎn)品;熒光染料Hoechst33258、甲羥戊酸（mevalonicacid，MEV）和碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染色液（PI100g/L，1%Triton100，9g/LNaCl），Sigma公司產(chǎn)品。流式細(xì)胞儀，2000FCA，美國BD公司產(chǎn)品。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

半朧氨酸蛋白酶抑制劑(cystatin)廣泛分布于植物、細(xì)菌、病毒、原生動(dòng)物和哺乳動(dòng)物體內(nèi)，參與各種生理和病理的過程，如蛋白質(zhì)的分解代謝、感染與免疫、腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移等。早在20世紀(jì)60年代末，F(xiàn)ossum和whitaker[’〕就已從雞蛋清中分離得到半朧氨酸蛋白酶抑制劑并發(fā)現(xiàn)其具有抑制無花果蛋白酶、木瓜蛋白酶及二膚酶的活力。80年代早期，Anastasi等[zl首次采用親和層析方法從雞蛋清中分離得到半朧氨酸蛋白酶抑制劑并命名為“cystatin”，此后，cystatin相繼在不同的物種中被分離純化。這些在結(jié)構(gòu)和功能上具有進(jìn)化上相似性的內(nèi)源性半朧氨酸蛋白酶抑制劑構(gòu)成一個(gè)Cystatin超家族。

cystatin除了具有獨(dú)特的抑制半朧氨酸蛋白酶(如組織蛋白酶eathepsinB、L、S和天冬酞胺內(nèi)膚酶AE功活性外，還具有一些免疫調(diào)節(jié)活性。本文就cystatin的分類、結(jié)構(gòu)及免疫調(diào)節(jié)活性方面的研究進(jìn)展作一綜述。

由一條約含100個(gè)氨基酸的多膚鏈構(gòu)成，不含二硫鍵和糖基，分子量約11一12KD。這類分子包括人stefinA、B，鼠。tefin。、俘等，主要分布于上皮細(xì)胞和多形核白細(xì)胞內(nèi);②cystatins家族，為分泌型蛋白。由約120個(gè)氨基酸組成，分子量約13一14KD，位于多膚鏈的c端有兩個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵，也不含糖基。目前，有些學(xué)者認(rèn)為川。ystati。超家族除上述的3個(gè)類型外，還包括一些胎球蛋白、組氨酸糖蛋白、cys-tatin相關(guān)蛋白以及恒定鏈等，這些均與cystatin同源，歸為新一類cystatin超家族成員。

cystatin分子的結(jié)構(gòu)特征cystati。分子的共同特征是[5]能以等摩爾與半朧氨酸蛋白酶分子發(fā)生緊密、可逆地結(jié)合。經(jīng)氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)它們具有3個(gè)高度保守的區(qū)域:①靠近N端的區(qū)域，其中甘氨酸一11(cystatinC序列)高度保守;②第一個(gè)發(fā)夾環(huán)，包括高度保守的QVvAG序列(谷氨酞胺一55一甘氨酸一59);③第二個(gè)發(fā)夾環(huán)，包括脯氨酸一105和色氨酸一106。這3個(gè)區(qū)域均為疏水性，其疏水性作用與cystatin和目標(biāo)酶的結(jié)合有關(guān)。

eysrain與抗原呈遞樹突狀細(xì)胞(DC)是[7]一類重要的抗原呈遞細(xì)胞(APC)。早期或未成熟的DC具有很強(qiáng)的攝取抗原的能力，而無或很弱的呈遞抗原的能力。它們在外周組織接受刺激(如抗原、1」S、細(xì)胞因子等)后逐漸向次級(jí)淋巴器官遷移。在遷移過程中，DC經(jīng)歷一個(gè)130成熟的過程:首先逐漸喪失內(nèi)化抗原的能力，接著表達(dá)MHC一n分子和協(xié)同刺激分子增加，最后胞膜表面呈遞抗原膚一MHC一n復(fù)合物。總之，DC通過調(diào)控MHC一11分子的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和胞膜表達(dá)來調(diào)節(jié)其抗原呈遞能力。

【摘要】目的：探討同型半胱氨酸水平與腦梗死的關(guān)系。方法：選取80例腦梗死患者作為實(shí)驗(yàn)組，60例基本情況與實(shí)驗(yàn)組無顯著性差異的健康者為對(duì)照組，測定各自血漿同型半胱氨酸水平進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果：腦梗死組血漿同型半胱氨酸水平(17.46±6.3)umol/L與對(duì)照組（7.82±3.64）umol/L比較有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論：血漿高同型半胱氨酸水平是腦梗死的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，值得進(jìn)一步研究。

【關(guān)鍵詞】血漿同型半胱氨酸；腦梗死

近年來，大量研究證明同型半胱氨酸水平(homocysteine,HCY)是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化一個(gè)新的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可能是尚未被完全清楚認(rèn)識(shí)、掌握的腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[1，2]。本研究通過檢測80例腦梗死患者血清同型半胱氨酸(HCY)水平，與60例健康對(duì)照者相比較，探討Hcy水平與腦梗死的關(guān)系。

一、資料和方法

1.1病例選擇：所有80例腦梗死患者皆為2007年11月-2009年3月的我院住院病人，男女比例為46∶34，年齡45-79歲，平均(61±8)歲，全部病例均為發(fā)病5天以內(nèi)的急性腦梗死患者，符合全國第4屆腦血管病會(huì)議修訂的腦梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有病例均經(jīng)頭顱CT或MRl證實(shí)。排除糖尿病、心臟病及肝腎功能不全者；健康對(duì)照組60例，男女比例為34：26，年齡43-78歲，平均年齡（59.8±7.2)歲，均為我院健康體檢者，無高血壓、腦血管病、糖尿病、心臟病及肝腎功能不全等病史。兩組受試者基本情況經(jīng)檢驗(yàn)無顯著性差異。

1.2檢測指標(biāo)：病例組和對(duì)照組的受試者在近二個(gè)月內(nèi)均未服用各種影響同型半胱氨酸代謝的藥物。病例組患者在入院后24小時(shí)內(nèi)測定空腹血漿同型半胱氨酸水平，健康受試者測定空腹血漿同型半胱氨酸水平。

【論文關(guān)鍵詞】細(xì)胞凋亡；信號(hào)傳導(dǎo)

【論文摘要】凋亡是細(xì)胞的主動(dòng)死亡過程，此過程涉及一系列基因的激活表達(dá)和調(diào)控。在細(xì)胞的正常發(fā)育過程中，約有半數(shù)細(xì)胞通過凋亡途徑被清除。由于細(xì)胞凋亡在胚胎發(fā)育、新舊細(xì)胞更替、免疫反應(yīng)終止、腫瘤發(fā)生和自發(fā)抑制，以及許多免疫性、神經(jīng)退行性疾病和衰老等方面均發(fā)揮重要作用，闡明細(xì)胞凋亡的發(fā)生及其調(diào)控機(jī)制將對(duì)相關(guān)疾病的治療展示光明的前景。本文就細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑研究及其最新進(jìn)展作一綜述。

細(xì)胞凋亡主要通過受體介導(dǎo)的信號(hào)途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡因子或刺激因素通過第二信使系統(tǒng)傳遞信號(hào)，信號(hào)傳遞途徑?jīng)Q定了細(xì)胞的命運(yùn)。本文嘗試從細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑角度來對(duì)其機(jī)制做一概述。

1死亡受體信號(hào)通路

死亡受體配體主要通過以半胱氨酸蛋白酶下幾個(gè)方面啟動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo)：受體齊聚、特殊銜接蛋白募集和caspase級(jí)聯(lián)活化。

以Fas/FasL為例：Fas是一種跨膜蛋白，屬腫瘤壞死因子受體超家族成員，它與FasL結(jié)合可以啟動(dòng)凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)引起細(xì)胞凋亡。其活化包括以下步驟：首先配體誘導(dǎo)受體三聚體化，然后在細(xì)胞膜上形成凋亡誘導(dǎo)復(fù)合物，這個(gè)復(fù)合物中包括帶有死亡結(jié)構(gòu)域的Fas相關(guān)蛋白FADD[2]。Fas又稱CD95，是由325個(gè)氨基酸組成的受體分子，F(xiàn)as一旦和配體FasL結(jié)合，可通過Fas分子啟動(dòng)致死性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終引起細(xì)胞一系列特征性變化，使細(xì)胞死亡。Fas作為一種普遍表達(dá)的受體分子，可出現(xiàn)于多種細(xì)胞表面，但FasL的表達(dá)卻有其特點(diǎn)，通常只出現(xiàn)于活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞，因而已被活化的殺傷性免疫細(xì)胞往往能夠最有效地以凋亡途徑置靶細(xì)胞于死地。Fas分子胞內(nèi)段帶有特殊的死亡結(jié)構(gòu)域。三聚化的Fas和FasL結(jié)合后，使三個(gè)Fas分子的死亡結(jié)構(gòu)域相聚成簇，吸引了胞漿中另一種帶有相同死亡結(jié)構(gòu)域的蛋白FADD[3]。FADD是死亡信號(hào)轉(zhuǎn)錄中的一個(gè)連接蛋白，它由兩部分組成：C端（DD結(jié)構(gòu)域）和N端（DED）部分。DD結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)和Fas分子胞內(nèi)段上的DD結(jié)構(gòu)域結(jié)合，該蛋白再以DED連接另一個(gè)帶有DED的后續(xù)成分，由此引起N段DED隨即與無活性的半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）酶原發(fā)生同嗜性交聯(lián)，聚合多個(gè)caspase-8的分子，caspase-8分子遂由單鏈酶原轉(zhuǎn)成有活性的雙鏈蛋白，進(jìn)而引起隨后的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，活化caspase-8通過兩個(gè)平行級(jí)聯(lián)刺激細(xì)胞凋亡：直接切割和活化caspase-3；切割Bid（Bcl-2家族蛋白），截型Bid（tBid）移位至線粒體，誘導(dǎo)細(xì)胞色素C釋放，從而活化caspase-9和caspase-3，作為酶原而被激活，引起下面的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，細(xì)胞發(fā)生凋亡[4]。TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑與此類似[5]。TNF和DR-3L能夠傳導(dǎo)促凋亡和抗凋亡信號(hào)。TNFR和DR3通過接頭蛋白TRADD和活化caspase-8加速細(xì)胞凋亡。另一方面，活化NF-κB和誘導(dǎo)存活基因（IAP）的一種接頭蛋白復(fù)合物（包括RIP）可抑制細(xì)胞凋亡。通過Apo2L誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡需要caspase活性，但是否需要接頭蛋白參與尚不清楚。

急性腎功能衰竭(ARF)是以腎小球?yàn)V過率快速下降為特點(diǎn)的綜合征。目前其精確定義仍不確定，因?yàn)楝F(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室檢查尚不能判定腎功能的突然變化。腎臟具有一系列功能，包括分泌激素，調(diào)節(jié)酸堿平衡及調(diào)節(jié)血壓。目前，臨床仍以尿量及血清肌酐來監(jiān)測腎功能并指導(dǎo)臨床治療。盡管對(duì)ARF作了許多研究并取得一定的進(jìn)展，但仍是相當(dāng)一部分病人發(fā)病及死亡的原因，其死亡率仍居高不下。

**年，急性透析質(zhì)量發(fā)起組(AcuteDialysisQualityInitiative(ADQI)Group)根據(jù)尿量及血清肌酐，提出危重病人ARF分期定義，被稱為RIFLE(risk，injure，failure，loss，andendstage)。在20000例病人回顧性研究中發(fā)現(xiàn)RIFLE可獨(dú)立預(yù)測ARF病人住院死亡率。另一項(xiàng)回顧性研究也發(fā)現(xiàn)RIFLE可預(yù)測心臟手術(shù)病人ARF的死亡率。

RIFLE分期在腎功能衰竭診斷方面向前邁進(jìn)重要一步，但早期識(shí)別腎功能損害并提供有價(jià)值治療仍較困難，盡管有報(bào)道腎功能損傷的蛋白生物指標(biāo)(類似于肌鈣蛋白是心肌損傷指標(biāo)一樣)可以更早的發(fā)現(xiàn)腎臟疾病并提供更加及時(shí)治療。而目前對(duì)手術(shù)病人尚缺乏預(yù)防腎功能衰竭的特殊治療措施。

一、ARF的原因

ARF分為腎前、腎本身及腎后原因。腎前氮質(zhì)血癥是由于絕對(duì)或相對(duì)腎血流量不足，如不及時(shí)治療可能發(fā)展為缺血性腎小管壞死(ATN)。腎臟原因分為血管、腎小球、間質(zhì)及腎小管原因。腎后原因包括膀胱及輸尿管梗阻。危重病人ARF主要是腎本身原因，ATN是大部分病人潛在原因，文獻(xiàn)報(bào)道大于70%，ATN起因是多方面的，但主要由于缺血及毒性反應(yīng)引起。在ICU中，敗血癥是急性腎衰的第一原因，幾乎占50%以上。

二、急性腎小管壞死的病理生理

摘要：抗?fàn)I養(yǎng)因子能破壞或阻礙營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用，對(duì)動(dòng)物健康和生長性能產(chǎn)生不良影響。本文對(duì)大豆中的幾種重要的抗?fàn)I養(yǎng)因子的作用機(jī)理及其鈍化處理方法進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞：抗?fàn)I養(yǎng)因子大豆鈍化

大豆作為植物飼料蛋白質(zhì)源，被廣泛應(yīng)用于飼料行業(yè)中。大豆粕粗蛋白含量為35-42%。大豆粕以其蛋白質(zhì)含量高，氨基酸比較平均而成為全世界最主要的植物蛋白質(zhì)飼料原料。但大豆中含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，嚴(yán)重影響動(dòng)物的消化、吸收。大豆中的抗?fàn)I養(yǎng)因子主要包括：蛋白酶抑制劑、植物凝集素、大豆抗原蛋白(致敏因子)、脲酶、脹氣因子、植酸及致甲狀腺腫素等多種抗?fàn)I養(yǎng)因子。

一、抗?fàn)I養(yǎng)因子

1.蛋白酶抑制因子蛋白酶抑制因子主要有KTI（胰蛋白酶抑制因子）和BBI（弓手抑制因子）兩類。KTI主要抵抑制胰蛋白酶，而BBI同時(shí)抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白質(zhì)酶。蛋白酶抑制因子，它能抑制胰蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶活性，促進(jìn)胰腺分泌、胰腺腫大，造成必需氨基酸內(nèi)源性損失的結(jié)果；生長停滯、生產(chǎn)性能下降。其中重要的是胰蛋白酶抑制因子，胰蛋白酶抑制因子主要影響胰腺的分泌功能，它與胰蛋白酶在小腸中的濃度相關(guān)。腸道的胰蛋白酶與抑制因子結(jié)合，然后經(jīng)糞便排出體外，因此降低了胰蛋白酶的濃度。大量胰蛋白酶的大量補(bǔ)償性分泌，造成內(nèi)源性含硫氨基酸的丟失引起體內(nèi)氨基酸代謝不平衡，特別是蛋氨酸的不足引起生長受阻，消化吸收功能失調(diào)和紊亂（Callaher和Scheeman，1986）。

2.植物凝聚素植物凝聚素主要以糖蛋白的形式存在，它的主要作用是對(duì)免疫系統(tǒng)和器官具有一定的毒害，對(duì)腸道產(chǎn)生的免疫球蛋白A有顯著的拮抗作用；能影響家畜的生產(chǎn)性能。植物凝集素是一種對(duì)某些糖分子具有高度親和力的蛋白質(zhì)，其中大多數(shù)是糖蛋白。植物凝集素和糖及配糖體（糖脂、糖肽、低聚糖、氨基葡聚糖）的結(jié)合，類似于酶和底物的結(jié)合或抗原和抗體的結(jié)合，具有高度的特異性。

多肽藥物在治療上的重要性，越來越引起廣大藥學(xué)工作者的重視。根據(jù)肽鏈的構(gòu)成可將多肽分為同聚肽（Homomeric）和雜聚肽（Heteromeric）兩大類，前者完全由氨基酸組成，后者是由氨基酸部分和非氨基酸部分組成的，如糖肽。根據(jù)肽鍵的結(jié)構(gòu)又分為直鏈肽和環(huán)肽。其中直鏈肽的研究最為廣泛和深入，尤其在直鏈肽的合成技術(shù)方面無論是液相法還是固相法都已成熟。雖然許多直鏈肽體外具有很好的生物活性和穩(wěn)定性，但是進(jìn)入體內(nèi)后活性很快消失。因?yàn)轶w內(nèi)環(huán)境復(fù)雜，存在各種各樣的酶。直鏈肽在酶的作用下很快降解，導(dǎo)致活性喪失[1-2]。另外，直鏈肽在液相里的構(gòu)象柔性使得不大容易符合受體的構(gòu)象要求。這些不利因素造成多肽藥物仍有許多問題有待解決。為了得到生物活性優(yōu)秀半衰期長，受體選擇性高的多肽，文獻(xiàn)報(bào)道過很多多肽改造的方法，其中包括將直鏈肽改造成環(huán)肽[3-8]。這種大環(huán)分子具有明確的固定構(gòu)象[9]，能夠與受體很好地契合，加上分子內(nèi)不存在游離的氨端和羧端使得對(duì)氨肽酶和羧肽酶的敏感性大大降低[10-12]。一般地說，環(huán)肽的代謝穩(wěn)定性和生物利用度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于直鏈肽[13]。鑒于環(huán)肽的諸多優(yōu)點(diǎn)，近年來對(duì)多肽研究的熱點(diǎn)已轉(zhuǎn)移到環(huán)肽的合成和生物評(píng)價(jià)上。

根據(jù)環(huán)肽的環(huán)合方式又分為首尾相連環(huán)肽（Head-to-tail）、側(cè)鏈和側(cè)鏈相連環(huán)肽(Sidechain-to-sidechain)[14]、側(cè)鏈和端基相連環(huán)肽（Sidechain-to-end）[15]、含二硫橋的環(huán)肽（Disufide-bridge）[16-18]、以及含有其他橋連結(jié)構(gòu)的環(huán)肽[19-23]。從合成方法上講，首尾相連的環(huán)肽的合成難度最大。因?yàn)榄h(huán)肽的前體-直鏈肽的肽鍵具有很強(qiáng)的p鍵特征，分子更偏愛形成反式構(gòu)象，呈舒展?fàn)顟B(tài)，造成屬于反應(yīng)中心的端基的羧基和氨基在空間上距離較遠(yuǎn)，不利于發(fā)生分子內(nèi)縮合反應(yīng)，有利于分子間縮合。

首尾相連的環(huán)肽通常是N端和C端游離的直鏈肽在稀溶液中（10-3~10-4M）由羧基和氨基形成酰氨鍵來合成。直鏈前體中的氨基酸種類和數(shù)目對(duì)成環(huán)的難易程度和環(huán)肽的收率起著至關(guān)重要的作用。甘氨酸、脯氨酸或D-構(gòu)型氨基酸具有誘導(dǎo)b-轉(zhuǎn)角（b-Turn）的作用，常被認(rèn)為可增加成環(huán)的可能性和收率[24-25]。

1.合成首尾相連環(huán)肽的經(jīng)典方法

合成首尾相連環(huán)肽的經(jīng)典方法是在稀溶液(10-3~10-4M)中，將保護(hù)的線性前體選擇性地活化并環(huán)合。常用活潑酯法和迭氮法。

1.1活潑酯法

1972年，Kerr等提出細(xì)胞凋亡的概念，細(xì)胞凋亡（apoptosis）又謂細(xì)胞程序化死亡（programmedcelldeath,PCD）是一種參與了生物體許多過程的細(xì)胞去除機(jī)制，是由基因編程調(diào)控的細(xì)胞主動(dòng)自殺過程。生物體通過這種機(jī)制完成對(duì)衰老細(xì)胞和畸形細(xì)胞的清除。另外細(xì)胞凋亡對(duì)胚胎發(fā)育，免疫耐受，細(xì)胞群體穩(wěn)定等有重大影響，并且對(duì)進(jìn)一步深入研究艾滋病，癌癥等對(duì)人類的生存構(gòu)成嚴(yán)重威脅的疾病有潛在的價(jià)殖。因此，許多年以來，細(xì)胞凋亡一直是生物領(lǐng)域科研研究的熱點(diǎn)。細(xì)胞凋亡的過程非常復(fù)雜，與此有關(guān)的兩大家族bcl-2,caspase對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控起著舉足輕重的作用，本文就這兩大家族對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制影響作一綜述。

1BCL-2蛋白家族

BCL-2蛋白家族分為三個(gè)亞族，原生存亞族（Pro-suvivalsubfamily）即BCL-2亞族成員有BCL-2,BCL-CL,KS-BCL-2,BCL-W,MCL-1,BHRF1,NR-B,ORF16,LMW5-HL,AL,FIB-19K,及CED-9;兩個(gè)原凋亡家族（Proapoptotrcsubfamily）是BaxandBH3亞族。Bax,bak,bid及egl-1屬bh3亞族【1】。其中15種蛋白為哺乳動(dòng)物（主要是人）所有，nr-3為雞所有，線蟲c.elegans中的蛋白有ced-9及egl-1,病毒蛋白有LMW5-HL,BHRF1,ORF-16,KS-BCL-2和EIB-19K,BCL-2家族在細(xì)胞凋亡過程中起到調(diào)節(jié)者的作用。

1.1細(xì)胞周期

細(xì)胞增殖可以啟動(dòng)PCD，在一定條件下，bax能加速細(xì)胞周期進(jìn)程。而BCL對(duì)凋亡的阻遏抑制細(xì)胞增殖受阻礙的細(xì)胞也難以再進(jìn)入細(xì)胞周期的淋巴細(xì)胞中，BCL-2造成的生長抑至與阻礙轉(zhuǎn)錄因子NFZF(NucleaarFactorAssocciateTranscription)激活相關(guān)，另外對(duì)FAS信號(hào)途徑的干擾會(huì)抑至細(xì)胞。增殖其中對(duì)FADD功能的干擾會(huì)破壞依賴生長抑至蛋白P53的細(xì)胞增殖。BCL-2家族成員對(duì)細(xì)胞增殖的作用機(jī)理目前尚不清楚【2】。

1.2BCL-2結(jié)構(gòu)蛋白

【摘要】基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一類鋅離子依賴性內(nèi)源性蛋白水解酶家族，主要功能是降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜。近年來人們對(duì)MMP的結(jié)構(gòu)功能、活性的調(diào)節(jié)及在原發(fā)性開角型青光眼發(fā)病機(jī)制和治療中的作用有了初步的了解。本文就這方面的研究結(jié)果作一綜述。

【關(guān)鍵詞】基質(zhì)金屬蛋白酶；原發(fā)性開角型青光眼；細(xì)胞外基質(zhì)

原發(fā)性開角型青光眼(POAG)是常見致盲性眼病之一，迄今為止，其病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚。小梁網(wǎng)組織的ECM與MMP的動(dòng)態(tài)平衡改變?nèi)找媸艿皆l(fā)性開角型青光眼研究領(lǐng)域?qū)W者的關(guān)注。本文就MMP與POAG關(guān)系的研究進(jìn)展綜述如下。

1MMP的結(jié)構(gòu)及分類

MMP是一類鋅離子依賴性內(nèi)源性蛋白水解酶，主要功能是降解ECM和基底膜，除此之外在許多生理和病理過程中發(fā)揮重要作用，例如基底膜的降解，ECM的重構(gòu)，結(jié)締組織的更新，血管的發(fā)生，再生，創(chuàng)傷的修復(fù)，腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。

MMP家族在人類目前已發(fā)現(xiàn)了20幾位成員，新成員還不斷被發(fā)現(xiàn)。根據(jù)其底物的特異性可將其分為五類［1］:(1)膠原酶，包括從纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞來源的膠原酶MMP-1，從中性白細(xì)胞中得到的膠原酶MMP-8、MMP-13和MMP-18。主要水解底物是膠原纖維，如Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ型膠原和基底膜成分。(2)明膠酶，包括主要由結(jié)締組織細(xì)胞來源的MMP-2和主要由中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌的MMP-9，即明膠酶A、B，其主要底物是明膠，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型膠原和基底膜成分，MMP-2還可以分解纖維粘連蛋白(FN)和層粘連蛋白(LN)；(3)基質(zhì)降解酶類，包括MMP-3，-10，-11，其底物比較廣泛，主要降解Ⅲ、Ⅳ、Ⅸ型膠原LN、FN、蛋白多糖及明膠等，并能激活某些MMP；(4)膜型酶，包括MMP-4，-15，-16，-17，-24，-25，是新發(fā)現(xiàn)的一類，能降解幾種ECM成分，有些可激活其他MMP；(5)未分類MMP，包括MMP-6，-7，-12，-19，-26，-28等，較復(fù)雜，有些底物仍不詳。

1Ang1和Ang2的結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能

1.1Ang1和Ang2的結(jié)構(gòu)Ang1基因在1996年由Davis等[3]首次克隆出來。人Ang1基因定位于第8號(hào)染色體長臂上（8q22.3～q23），其基因開放的閱讀框?yàn)?497bp，編碼498個(gè)氨基酸。Ang1是一種糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量約75000。Ang2基因由Maisonpierre等[4]在1997年從人和小鼠的cDNA文庫內(nèi)首先克隆出來。人Ang2基因定位于第8號(hào)染色體短臂上（8q23.1），其基因開放的閱讀框?yàn)?491bp，編碼496個(gè)氨基酸。Ang1，Ang2的蛋白結(jié)構(gòu)基本相同，均有信號(hào)肽、N端卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域（coiledcoildomain，CC）和C端類纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域（fibrinogenlikedomain，F(xiàn)L）。其主要的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)有：（1）Ang1、Ang2的N端信號(hào)肽分別由10和20個(gè)疏水氨基酸組成，與血管生成素分泌到細(xì)胞外有關(guān)。（2）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域分別由180和200個(gè)左右氨基酸構(gòu)成，該斷氨基酸序列折疊彎曲，形成卷曲螺旋四級(jí)結(jié)構(gòu)，這一結(jié)構(gòu)可能與血管生成素和其他蛋白形成多聚體有關(guān)。（3）類纖維蛋白原結(jié)構(gòu)域具有高度保守性，與血管生成素的生物學(xué)功能密切相關(guān)。改變該區(qū)域的氨基酸序列，血管生成素的功能也發(fā)生相應(yīng)的改變；敲除血管生成素其他區(qū)域的氨基酸序列，保留該結(jié)構(gòu)則其功能沒有明顯改變[34]。CC和FL結(jié)構(gòu)域之間的連接肽是Ang1與細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix,ECM）連接的結(jié)構(gòu)域[5]。Ang2和Ang1的主要區(qū)別在于CC與FL的交界處前者比后者少1個(gè)半胱氨酸，導(dǎo)致了其生物學(xué)功能的截然不同。

1.2Ang1和Ang2的生物學(xué)功能Ang1和Ang2是Tie2（tyrosinekinasewithimmunoglobulinandepidermalgrowthfactorhomologydomain2）的天然配體。Ang1主要由血管旁支持細(xì)胞包括周細(xì)胞（pericyte）、血管平滑肌細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等合成，通過旁分泌作用，與附近內(nèi)皮細(xì)胞膜上的Tie2受體特異性結(jié)合，引起其受體磷酸化和隨后的信號(hào)傳遞。迄今對(duì)調(diào)控其表達(dá)的因素知之甚少。Ang1的主要生物學(xué)功能有：(1)抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞生存，減少血管的萎縮和退化。與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）不同，Ang1不是細(xì)胞有絲分裂原，不能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和內(nèi)皮細(xì)胞相互聚合形成血管，而是通過激活絲氨酸蘇氨酸蛋白酶AKT，穩(wěn)定細(xì)胞活力，抑制凋亡。(2)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞出芽，遷移，趨化。(3)穩(wěn)定血管，防止?jié)B漏[3,6]。Ang2主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成，通過自分泌作用，與自身細(xì)胞膜上的Tie2受體特異性結(jié)合，但不引起受體磷酸化和隨后的信號(hào)傳遞。因此Ang2的主要功能是競爭性抑制Ang1形成不穩(wěn)定的血管。缺氧、VEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）等因素可促進(jìn)Ang2表達(dá)增高[7]。

2Ang1和Ang2與腫瘤的血管生成

Ang在腫瘤血管生成中發(fā)揮了重要作用，在很多多血管性的實(shí)體腫瘤中得到了證實(shí)，如在人胃癌、肝癌、乳腺癌和膠質(zhì)細(xì)胞瘤等均可見到有Ang1和Ang2及其受體Tie2表達(dá)增加，特別是在腫瘤邊緣的血管新生區(qū)。由此可見，Ang1、Ang2參與腫瘤的血管生成，但目前其具體的機(jī)制尚不完全清楚。Ang2與腫瘤血管生成關(guān)系密切，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞及腫瘤血管的生長；但Ang1和腫瘤血管生成的關(guān)系尚有爭議。

2.1Ang1與腫瘤血管生成