細(xì)胞器范文
時(shí)間:2023-03-31 18:56:40
導(dǎo)語:如何才能寫好一篇細(xì)胞器,這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn),歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文,供你借鑒。
篇1
“細(xì)胞器―系統(tǒng)內(nèi)的分工合作”一節(jié)是人教版生物必修一第三章第二節(jié)的內(nèi)容。本節(jié)課的知識(shí)目標(biāo)為:說出線粒體、葉綠體的結(jié)構(gòu)和功能;得出“結(jié)構(gòu)與功能相適應(yīng)”以及“細(xì)胞器之間既有分工又有合作”的觀念。細(xì)胞器的內(nèi)容對(duì)于高一學(xué)生是非常抽象和難以理解的,在之前的學(xué)習(xí)過程中學(xué)生很少使用顯微鏡,即使用了顯微鏡,學(xué)生能觀察到細(xì)胞就已十分不易,要觀察到細(xì)胞器,如葉綠體和液泡則更加困難。如何讓學(xué)生在已有的背景知識(shí)下,學(xué)習(xí)并理解分離細(xì)胞器所采用的離心技術(shù),如何引導(dǎo)學(xué)生形成細(xì)胞器之間是協(xié)同合作的關(guān)系是下面著重探討的內(nèi)容。
1 導(dǎo)入細(xì)胞器概念的類比
手機(jī)作為現(xiàn)代通訊工具給人們的生活帶來了無數(shù)的便利。手機(jī)在最基本的通訊功能的基礎(chǔ)上還衍生出了許多其他功能,如視頻聊天、導(dǎo)航、瀏覽新聞、聽音樂、看視頻、拍照、攝像等。如今手機(jī)也已經(jīng)成為學(xué)生群體中必不可少的溝通和交流的媒介。筆者就以學(xué)生非常熟悉的手機(jī)作為類比對(duì)象,導(dǎo)入細(xì)胞器一節(jié)。在課前,教師引導(dǎo)學(xué)生回顧手機(jī)的功能,并啟發(fā)學(xué)生思考手機(jī)要實(shí)現(xiàn)這些功能所需要的零部件,從而順利啟發(fā)學(xué)生思考:“細(xì)胞作為生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,細(xì)胞能夠完成呼吸作用、分裂、分化、分泌蛋白質(zhì)這些復(fù)雜的生命活動(dòng),植物細(xì)胞還能進(jìn)行光合作用,那么細(xì)胞中是否也存在零部件呢?”這樣引出細(xì)胞器的概念。手機(jī)和組成手機(jī)的零部件之間的關(guān)系與細(xì)胞和細(xì)胞器之間的關(guān)系非常類似。細(xì)胞器作為一個(gè)全新的概念,學(xué)生無法理解其與細(xì)胞之間究竟是何關(guān)系。在手機(jī)與手機(jī)零部件的類比下,學(xué)生便可以在第一時(shí)間熟悉細(xì)胞器原來就是細(xì)胞中的有一定結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。
2 探究細(xì)胞器思路的類比
如果想要研究手機(jī)中零部件的結(jié)構(gòu),只需將手機(jī)拆開,用肉眼觀察相應(yīng)的零部件便可以得知;而在細(xì)胞中,人們無法再用肉眼去一一觀察細(xì)胞器,因?yàn)榧?xì)胞太小,需要借助特殊的“眼睛”的幫助――顯微鏡,從而順利地引出首先用顯微鏡看細(xì)胞器來觀察細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的思路。隨后,便向?qū)W生介紹顯微鏡的發(fā)展過程,介紹目前生物科學(xué)研究中常用的掃描電子顯微鏡。之后,繼續(xù)啟發(fā)學(xué)生思考:如果想要研究這些零部件都有哪些種類和具體的功能,要將不同的零部件區(qū)分開,挨個(gè)地進(jìn)行研究,與研究細(xì)胞器功能的思路是通的。首先要將不同的細(xì)胞器區(qū)分開,究竟如何將這些細(xì)小的細(xì)胞器分開,筆者則用“粉筆盒”的案例做類比。假設(shè)細(xì)胞就是一個(gè)粉筆盒,粉筆盒中已知有物體,因?yàn)閾u動(dòng)粉筆盒會(huì)發(fā)出聲響,但并不知道粉筆盒中具體有哪些物品,這些物品分別是怎樣的結(jié)構(gòu),就像學(xué)生已知細(xì)胞中有細(xì)胞器(光學(xué)顯微鏡可以觀察到有葉綠體、線粒體),但具體有哪些細(xì)胞器,對(duì)這些細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、功能、名稱都不知曉。如果想要研究細(xì)胞器的具體類別、結(jié)構(gòu)和功能,就要將它們分離,想要研究粉筆盒中具體有什么物品也需要將粉筆盒中導(dǎo)致聲響產(chǎn)生的物品進(jìn)行分離,從而啟發(fā)學(xué)生思考如何分離盒中的物品(提示學(xué)生盒子可以打開,但開的方式由學(xué)生決定)。學(xué)生自然而然就想到粉筆盒中的物品可能有不同的體積,可以利用過濾的想法,在盒子表面打許多等大的孔(由小到大的順序),再將粉筆盒搖晃,就可以根據(jù)體積將粉筆盒中的物體分離開。
接著,繼續(xù)啟發(fā)學(xué)生若將打孔的方法應(yīng)用到細(xì)胞上會(huì)不會(huì)有問題,能否順利進(jìn)行,學(xué)生自然會(huì)想到細(xì)胞過小,且無法知道最小的細(xì)胞器具體有多大,在細(xì)胞上打孔難度極大,也不知道孔該打多大。順著學(xué)生的思路,教師繼續(xù)啟發(fā)學(xué)生可以從描述物體特性的另一個(gè)角度“質(zhì)量”來思考。教師可通過借助“旋轉(zhuǎn)飛椅”(人坐在由鏈條牽引的椅子上由慢到快被甩到空中旋轉(zhuǎn)的游樂設(shè)施)的案例,幫助學(xué)生得出離心的技術(shù)方法。因?yàn)樵谙嗤D(zhuǎn)速下,體重輕的人被甩得更高更遠(yuǎn),而體重相對(duì)較重的人會(huì)被甩得相對(duì)較低也離地面更近。教師利用手機(jī)、粉筆盒、旋轉(zhuǎn)飛椅三個(gè)類比,可順利地幫助學(xué)生理解科學(xué)家探究細(xì)胞器結(jié)構(gòu)和功能時(shí)所采用的思路。
3 “細(xì)胞器之間的協(xié)調(diào)配合”的類比
篇2
關(guān)鍵詞:細(xì)胞器知識(shí) 中學(xué)教學(xué) 教學(xué)延伸
高中生物人教版必修1《分子與細(xì)胞》第3章“細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)”中,細(xì)胞器相關(guān)知識(shí)的教學(xué)活動(dòng)是重點(diǎn)和難點(diǎn)。細(xì)胞器種類繁多,功能和結(jié)構(gòu)各異,識(shí)別和記憶的內(nèi)容很多。教材提到:線粒體是細(xì)胞的“動(dòng)力車間”,葉綠體是植物細(xì)胞的“養(yǎng)料制造車間”和“能量轉(zhuǎn)換站”。線粒體和葉綠體中含有少量DNA和RNA。至于其中的核酸(DNA、RNA)的功能就沒有做詳細(xì)介紹。但是習(xí)題中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)要應(yīng)用這些知識(shí)解決的一些問題。
下面我就列舉幾個(gè)在平時(shí)經(jīng)常會(huì)涉及有關(guān)細(xì)胞器知識(shí)的判斷題,給予歸納總結(jié)。
問題1:某細(xì)胞中,一條還未完成轉(zhuǎn)錄的mRNA已有核糖體與之結(jié)合,并翻譯合成蛋白質(zhì),則該細(xì)胞一定不可能是真核細(xì)胞。
問題2:在根尖細(xì)胞中進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)錄的結(jié)構(gòu)只有細(xì)胞核。
大部分學(xué)生認(rèn)為這兩個(gè)判斷的答案是正確的。
問題1中的表述可以得知,該細(xì)胞可以邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯。而真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄在細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行,翻譯在細(xì)胞質(zhì)(核糖體)中進(jìn)行的。很顯然轉(zhuǎn)錄和翻譯不是同步的。而原核細(xì)胞無細(xì)胞核只有擬核,在轉(zhuǎn)錄還未結(jié)束的同時(shí)就可以進(jìn)行翻譯了。
問題2中根尖細(xì)胞中核內(nèi)含有DNA,可以進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)錄。
拘于高中生物教材中的知識(shí)回答似乎沒有太大問題。因?yàn)楦咧薪滩碾m然介紹了在線粒體、葉綠體中含有DNA和RNA,那么其中的基因是如何表達(dá)發(fā)揮作用的呢?
研究發(fā)現(xiàn),線粒體和葉綠體中除有DNA外,還有RNA(mR―NA,tRNA,rRNAl、核糖體等,說明這兩種細(xì)胞器都具有獨(dú)立進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯的功能。就內(nèi)共生學(xué)說看,線粒體和葉綠體都是被真核生物內(nèi)吞的原核生物,所以線粒體和葉綠體與原核生物類似,其中的DNA不與蛋白質(zhì)構(gòu)成染色體,而是環(huán)狀DNA,并且具有自己的核糖體。由此來看,它們的基因表達(dá)過程應(yīng)該與原核生物的相同,在轉(zhuǎn)錄的同時(shí),正在延長的mRNA~:就可以開始翻譯了。
經(jīng)過上面知識(shí)的補(bǔ)充、延伸,發(fā)現(xiàn)問題1的錯(cuò)誤在于忽略了真核細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器(線粒體、葉綠體)的轉(zhuǎn)錄翻譯也是同步的。而問題2中根尖細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄還可以發(fā)生在細(xì)胞器(線粒體)內(nèi)。
問題3:在真核細(xì)胞中,DNA的復(fù)制在細(xì)胞核中完成,而蛋白質(zhì)的合成在細(xì)胞器中完成。
問題4:在一個(gè)正在分裂的大腸桿菌細(xì)胞中,既有DNA的復(fù)制又有轉(zhuǎn)錄與翻譯過程:在一個(gè)人體的神經(jīng)細(xì)胞中,只有轉(zhuǎn)錄與翻譯過程,沒有DNA的復(fù)制過程。
同樣大部分學(xué)生認(rèn)為這兩個(gè)判斷的答案是正確的。
真核細(xì)胞的DNA主要分布在細(xì)胞核內(nèi),只有細(xì)胞分裂時(shí)細(xì)胞核內(nèi)的才能進(jìn)行DNA復(fù)制。而只要是活的細(xì)胞,均可以進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯過程。人體的神經(jīng)細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞,失去了分裂能力,不進(jìn)行DNA復(fù)制,只有轉(zhuǎn)錄與翻譯過程,沒有DNA的復(fù)制過程。
線粒體DNA、葉綠體DNA都呈雙鏈環(huán)狀,與細(xì)菌DNA相似。而且其中的DNA都可以自我復(fù)制,復(fù)制也是以半保留方式進(jìn)行的。它們的復(fù)制都受細(xì)胞核的控制,復(fù)制所需的DNA聚合酶都是由核DNA編碼,在細(xì)胞質(zhì)核糖體上合成的。而且細(xì)胞器的復(fù)制與細(xì)胞分裂不是同步的。
經(jīng)過分析,如果只考慮細(xì)胞細(xì)胞核中DNA,則問題3、4這兩句話都是對(duì)的。但是如果考慮到人的神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞器中DNA的復(fù)制,那么這兩題的敘述顯然是不夠正確的。
問題5:細(xì)胞分裂過程中葉綠體、線粒體是如何增殖的?分裂后細(xì)胞器的數(shù)量會(huì)均等嗎?
在高中生物教材必修1《細(xì)胞的增殖》一節(jié)中提到,正常動(dòng)物細(xì)胞中的中心體由兩個(gè)相互垂直的中心粒構(gòu)成。在細(xì)胞分裂間期一個(gè)中心體復(fù)制,形成兩個(gè)中心體,并在前期逐漸移向兩極,發(fā)出星射線形成紡錘體。細(xì)胞分裂后每個(gè)子細(xì)胞中又各含一個(gè)中心體。
細(xì)胞分裂中不僅要進(jìn)行染色體的復(fù)制并且平分到兩個(gè)子細(xì)胞中,各種細(xì)胞器同樣要增殖,隨著細(xì)胞質(zhì)的分裂進(jìn)入子細(xì)胞中,不同細(xì)胞器其增殖方式亦有所不同。
線粒體的增殖是由原來的線粒體分裂或出芽而來的。線粒體的DNA進(jìn)行復(fù)制,線粒體中部縊縮或中間產(chǎn)生隔膜而一分為二。有的線粒體以“出芽”方式進(jìn)行繁殖,先在線粒體上出現(xiàn)球形小芽,然后與母體分離,不斷長大而形成新的線粒體。
葉綠體由原生質(zhì)分化而來,葉綠體靠分裂而增殖,這個(gè)分裂是靠中部縊縮而實(shí)現(xiàn)的。
細(xì)胞器經(jīng)過復(fù)制增殖后,子細(xì)胞中的各種細(xì)胞器數(shù)量并不一定是均等分配的。因?yàn)榧?xì)胞器并沒有類似紡錘體的幫助精確平分的機(jī)構(gòu)。不過細(xì)胞質(zhì)近似液體,所以細(xì)胞器原本分布就較勻,所以細(xì)胞質(zhì)一分為二后兩個(gè)新細(xì)胞中細(xì)胞器數(shù)量近似。
問題:6:內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成和加工,以及脂質(zhì)合成的“車間”。
篇3
【摘要】 目的研究西黃丸抑瘤作用對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響。方法采用體內(nèi)體外兩方面實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。體外實(shí)驗(yàn):將西黃丸浸提液加入人原發(fā)性肝癌細(xì)胞株SMMC7721培養(yǎng)基中,72 h后流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定SMMC7721細(xì)胞的細(xì)胞周期;體內(nèi)實(shí)驗(yàn):連續(xù)10 d給予移植性U14荷瘤小鼠模型西黃丸,10 d后流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定U14細(xì)胞的細(xì)胞周期。結(jié)果在體外實(shí)驗(yàn)中,西黃丸(200 μl/ml)使SMMC7721中G0-G1期細(xì)胞比例顯著低于腫瘤細(xì)胞對(duì)照組,G2-M期增多;在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,西黃丸高劑量組(0.96 g/kg)中也導(dǎo)致U14細(xì)胞G0-G1期細(xì)胞比例顯著低于模型組,G2-M期細(xì)胞增多。結(jié)論 體內(nèi)、體外研究結(jié)果顯示西黃丸可特異性地將腫瘤細(xì)胞阻滯在G2-M期,提示西黃丸可以通過影響腫瘤細(xì)胞周期來發(fā)揮抑瘤效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】 西黃丸 抗腫瘤 細(xì)胞周期
AbstractObjectiveTo study the antitumous effect of Xihuang Pill on cell cycles of cancer cells. MethodsLeachate of Xihuang pill was used to treat human malignant tumor cell strains(SMMC7721)in vitro, after 48 hours the cycle of tumor cells was determined by flow cytometry. At the same time, Xihuang pill was used to treat tumor-bearing mice (U14) for 10 days in vivo, the cycle of U14 cells was determined by flow cytometry. ResultsExperiment in vitro showed that the proportion of G2-M of SMMC7721 treated by leachate of Xihuang pill was high (P
Key wordsXihuang pillt; Antitumous effect; Cell cycle
西黃丸為中藥抗癌名方,功效活血化淤、清熱解毒、消腫止痛。臨床文獻(xiàn)報(bào)道,西黃丸用于乳腺癌、肝癌、白血病等多種惡性腫瘤的治療,取得了肯定的療效。在既往的研究中發(fā)現(xiàn),西黃丸可抑制腫瘤細(xì)胞的生長。為了進(jìn)一步研究西黃丸抑瘤的特點(diǎn),筆者采用體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的方法,考察了它對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響,具體實(shí)驗(yàn)如下。
1 材料
1.1 藥物西黃丸,九寨溝天然藥物集團(tuán)有限公司生產(chǎn),批號(hào)030501。體外實(shí)驗(yàn)采用西黃丸低溫浸提液,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用西黃丸混懸液進(jìn)行。西黃丸低溫浸提液制備方法:采用密閉容器,以預(yù)冷4℃的RPMI-1640培養(yǎng)液浸泡西黃丸24 h(比例為0.1 g/ml),超聲振蕩助溶2h,復(fù)以4℃下繼續(xù)浸泡48 h后取上清液,用0.22 μm微孔濾器過濾后,得到西黃丸低溫浸體液。實(shí)驗(yàn)時(shí)用RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋至所需濃度使用。
1.2 試劑
RPMI Medium 1640培養(yǎng)基Gibco公司,批號(hào)1165062;胰蛋白酶(Trypsin,1:250)Serva公司,批號(hào)27043C; RNA酶(RNase)Roche公司,批號(hào)90436528;新生小牛血清(Newborn Bovine Serum,NBS)三利生物制品廠,批號(hào)20040101;碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)Sigma公司,廣州展晨生物科技有限公司進(jìn)口分裝。
1.3 細(xì)胞株
人原發(fā)性肝癌細(xì)胞株SMMC7721,由成都中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室提供。細(xì)胞株用含10%新生小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng),細(xì)胞貼壁達(dá)80%時(shí)傳代。
1.4 動(dòng)物
昆明種小鼠,雌性,18~22 g,成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,批號(hào)SCXK(川)2004-11。
1.5 儀器Beckman Coulter Epic XL 流式細(xì)胞分析儀;Heraeus BiofugeStratos低溫離心機(jī)。
2 方法
2.1 體外實(shí)驗(yàn)
2.1.1 分組
體外實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組(含人腫瘤細(xì)胞)、實(shí)驗(yàn)組(含人腫瘤細(xì)胞和西黃丸浸提液,設(shè)兩個(gè)濃度100,200 μl/ml)。
2.1.2 方法
取對(duì)數(shù)生長期的SMMC7721,0.25%胰蛋白酶消化,計(jì)數(shù)細(xì)胞,用1640培養(yǎng)基稀釋成5×105/ml濃度的單細(xì)胞懸液,然后取每孔1 000 μl,接種到6孔板上,置37 ℃,5 %CO2,飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)6 h待細(xì)胞貼壁后,設(shè)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組,均設(shè)4復(fù)孔。對(duì)照組用等體積1640培養(yǎng)液代替受試藥物,實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的藥物,每孔200 μl。6孔板置37 ℃,5 %CO2,飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)72 h后。棄培養(yǎng)液,收集6孔板內(nèi)的細(xì)胞,PBS洗滌離心后,70%乙醇固定12 h,去乙醇,經(jīng)PBS洗滌2次,加PI染劑混勻,置4℃冰箱避光染色30 min后,上機(jī)檢測(cè)細(xì)胞周期,每次測(cè)定10 000個(gè)細(xì)胞。
2.2 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
2.2.1 小鼠移植性惡性腫瘤細(xì)胞株
小鼠宮頸癌U14由成都中醫(yī)藥大學(xué)病理教研室提供。
2.2.2 小鼠移植性腫瘤的接種與傳代
根據(jù)文獻(xiàn)方法[1,2]將液氮凍存昆明小鼠子宮頸癌瘤株進(jìn)行復(fù)蘇,經(jīng)體外培養(yǎng)增殖,生長穩(wěn)定后以5×106細(xì)胞量接種于昆明小鼠腹腔內(nèi),待其長出癌性腹水后傳代培養(yǎng)至5代,取小鼠無血性的癌性腹水,供接種使用。實(shí)驗(yàn)時(shí)將第5代的腫瘤小鼠癌性腹水用無菌生理鹽水調(diào)整細(xì)胞數(shù)至5×106,接種于昆明種小鼠右側(cè)腋窩皮下(每只皮下注射0.1 ml),建立移植性U14荷瘤小鼠模型。
2.2.3 動(dòng)物分組
實(shí)驗(yàn)時(shí)取昆明種小鼠30只,按體重分層隨機(jī)分為3組,每組10只動(dòng)物,分模型對(duì)照組、西黃丸高劑量組、西黃丸低劑量組。各組均使用移植性荷瘤小鼠。
2.2.4 給藥及實(shí)驗(yàn)方法
模型對(duì)照組給予等體積蒸餾水灌胃;西黃丸低劑量組給予西黃丸混懸液0.48 g/kg灌胃給藥(西黃丸每日人用量6 g,以50 kg為正常人體重計(jì)算,給藥量相當(dāng)于人用量9倍)、西黃丸高劑量組給予西黃丸混懸液0.96 g/kg灌胃給藥(給藥量相當(dāng)于人每日用量18倍)1次/d,于動(dòng)物接種后1 d開始給藥。連續(xù)給藥10 d,處死動(dòng)物,剝離皮下瘤塊,在PBS中用眼科剪將瘤塊剪碎后,經(jīng)300目篩過濾除去成團(tuán)細(xì)胞,離心800 r/min,5 min,取上層液體,經(jīng)1 500 r/min離心10 min,棄上清,離心后得的細(xì)胞,再次經(jīng)PBS洗滌1次后, 70%的乙醇固定24 h。去乙醇,經(jīng)PBS洗滌2次,加PI染劑混勻,置4℃冰箱避光染色30min后,上機(jī)檢測(cè)細(xì)胞周期,每次測(cè)定10 000個(gè)細(xì)胞。
2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
用《中國醫(yī)學(xué)百科全書·醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)》統(tǒng)計(jì)軟件包PEMS3.1進(jìn)行。
3 結(jié)果
見表1~2。表1 西黃丸對(duì)SMMC7721細(xì)胞周期(72h)的影響(體外)(略)
表1可見,與腫瘤細(xì)胞對(duì)照組相比,西黃丸浸提液100,200 μl/ml使G0-G1期細(xì)胞明顯減少(P<0.01);西黃丸浸提液200 μl/ml G2-M期細(xì)胞比例明顯增高(P<0.01)。
表2可見,與模型組相比,西黃丸高劑量組使G0-G1期細(xì)胞明顯減少(P
4 討論
西黃丸出自清代王洪緒所著的《外科全生集》,為治療“乳巖”之家傳秘方,由牛黃、麝香、乳香、沒藥4味中藥組成,方中牛黃別名犀黃,牛黃產(chǎn)于西北者,又叫西黃,故西黃丸也稱犀黃丸。其主要功效為活血化淤、清熱解毒、消腫止痛。它組方簡單,療效確切,臨床應(yīng)用廣泛,為中醫(yī)抗癌名方。目前較多的臨床研究報(bào)道:西黃丸用于肝癌、乳腺癌、白血病、肺癌等惡性腫瘤的治療,取得了肯定的療效。既往的研究發(fā)現(xiàn),西黃丸對(duì)腫瘤細(xì)胞具有明顯的抑制作用,但抑制作用發(fā)生的細(xì)胞周期環(huán)節(jié)是本次研究的焦點(diǎn),故我們采用體內(nèi)、體外兩方面的實(shí)驗(yàn),對(duì)此環(huán)節(jié)進(jìn)行了研究。
細(xì)胞從一次分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束的一個(gè)周期稱為細(xì)胞周期。增殖型細(xì)胞的細(xì)胞周期分為4期,即G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期 (DNA合成后期)、M期(有絲分裂期)。有時(shí)細(xì)胞長期處于靜止的非增殖狀態(tài),常稱為G0期[3,4]。流式細(xì)胞技術(shù)(Flow Cytometer, FCM)是細(xì)胞周期研究中常用手段,能夠?qū)?xì)胞和細(xì)胞器及生物大分子進(jìn)行高達(dá)每秒上萬個(gè)染色體的分析。具有速度快、精確度高、準(zhǔn)確性好的特點(diǎn),是目前最先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)。
在既往的文獻(xiàn)中,有報(bào)道顯示[5,6],抗癌中藥的作用是將腫瘤細(xì)胞阻止于G0-G1,使腫瘤細(xì)胞處于相對(duì)靜止?fàn)顟B(tài)而發(fā)揮抑瘤作用。
篇4
[關(guān)鍵詞]血管內(nèi)皮祖細(xì)胞;CD133(AC133):免疫磁珠
[中圖分類號(hào)]Q254 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008―6455(2007)01―0015-04
一般認(rèn)為內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor Cell,EPC)僅見于胚胎時(shí)期,但近年來,越來越多的證據(jù)表明在成年個(gè)體中也存在少量的EPC。1997年ASahara等報(bào)道在成人外周血中分離出EPC,體外培養(yǎng)呈梭形,具有形成管腔樣結(jié)構(gòu)的能力,且能夠表達(dá)成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特異性抗原,在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中可參與新生血管的形成,此后,又陸續(xù)觀察到骨髓和臍帶血中均存在EPC。EPC具有促進(jìn)血管新生,加速缺血組織血管化的作用。本實(shí)驗(yàn)采用免疫磁珠法從人臍血中分離培養(yǎng)EPC,觀察EPC在體內(nèi)缺氧條件下分化成內(nèi)皮細(xì)胞,并參與血管生成,為治療性血管發(fā)生研究及組織器官移植提供種子細(xì)胞。
1 材料和方法
1.1主要試劑及標(biāo)本來源:胃癌GC7901細(xì)胞株由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心細(xì)胞庫提供);ACD―B抗凝液(上海市血液中心):1.077淋巴細(xì)胞分離液(天津TBD公司);免疫磁珠試劑盒(挪威DYNAL公司);Fibronectin(美國Sigma公司):異硫氰酸熒光素(FITC)CDl33單抗(美國R&D公司);抗人vWF單抗(英國Serotec公司);F1RC-二抗及辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗、CD34單抗(丹麥DAKO公司);EGM-2MV培養(yǎng)基(美國Cambrex公司);細(xì)胞熒光染色試劑盒(PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit,Sigma,美國);人纖維蛋白原(Fibronogen,Sigma,美國):人凝血酶(Thrombin 500,IMMUNO AG,奧地利):PGA真皮替代物(NEOVEIL,日本)。BALB/c,nu/lnu裸小鼠15只,雌雄不限,鼠齡4~6周,體重18~23g(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心);人臍血標(biāo)本來源于本院34例婦產(chǎn)科健康產(chǎn)婦(產(chǎn)婦均知情同意)。
1.2 EPC分離及誘導(dǎo)分化培養(yǎng):ACD-B抗凝臍血,1:2加入磷酸鹽緩沖液(PBS)稀釋,取7ml緩慢加入3ml淋巴細(xì)胞分離液,621×g離心30min,取單個(gè)核細(xì)胞層,PBS洗滌3次去血小板。免疫磁珠與FITC-CDl33單抗室溫孵育30min,PBS洗去多余單抗。將包被FITC-CD133的免疫磁珠加入單個(gè)核細(xì)胞中,室溫孵育30min,置于磁場中1min,棄細(xì)胞懸液,參照免疫磁珠試劑盒說明書分離出CD133+細(xì)胞。加入EGM-2MV培養(yǎng)基(hEGF,Hydrocortisone,VEGF,F(xiàn)GF-B,R3-IGF-1),接種于包被Fibronectin的25cm2培養(yǎng)瓶中,37℃,飽和濕度培養(yǎng)。24h換液除去未貼壁細(xì)胞,3天后半量換液,培養(yǎng)3~4周。檢測(cè)指標(biāo):①原代EPC的生長曲線:細(xì)胞以5×103個(gè)/孔的密度接種于96孔板。1~19天,隔日隨機(jī)抽取4個(gè)培養(yǎng)孔,噻唑藍(lán)(MTT)法測(cè)定各孔吸光度值,繪制細(xì)胞生長曲線。設(shè)不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液為空白對(duì)照。②CDl33+細(xì)胞分化:培養(yǎng)5天、10天的細(xì)胞分別加入FITC-CDl33單抗、CD34單抗、vWF單抗,室溫孵育30min,PBS洗去多余單抗。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗,二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色;取培養(yǎng)10天的細(xì)胞。③行透射電鏡觀察找Weibel-Palade小體。
1.3裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn):常規(guī)方法復(fù)蘇、培養(yǎng)將胃癌GC7901細(xì)胞。取1×106個(gè)/1001×1原代培養(yǎng)EPC與1×106個(gè)/100μl胃癌GC7901細(xì)胞混合接種于裸鼠背部皮下。30天過量麻藥腹腔注射處死裸鼠,取出腫瘤。40g/L多聚甲醛固定12h,常規(guī)石蠟切片vWF免疫組化染色。觀察瘤體內(nèi)EPC參與構(gòu)成血管情況。
1.4裸鼠皮實(shí)驗(yàn):取5×106EPC,90g(800rpm),離心5min棄上清,加入稀釋液(Diluent C)0.5ml,重懸取1μl PKH26熒光染液,迅速加入細(xì)胞懸液中室溫孵育2~5min。加入1ml RPM11640/10%FBS培養(yǎng)基中止染色,調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/ml,熒光顯微鏡下觀察。采用0.3%戊巴比妥鈉腹腔麻醉。裸鼠腹腔注射0.5~0.7ml,3~5min麻醉生效后,根據(jù)設(shè)計(jì)于腹部肉膜層與深筋膜的淺面之間,將皮瓣仔細(xì)掀起,熒光標(biāo)記EPC單細(xì)胞懸液100μl(1×105),分成3點(diǎn)(遠(yuǎn)點(diǎn)、中點(diǎn)、蒂部)經(jīng)皮軟組織面均勻皮下注射于皮瓣。術(shù)后7天,過量麻藥腹腔注射處死裸鼠,于皮中段切取組織,大小1.0cm×0.5cm。①細(xì)胞示蹤:行冰凍切片,采用570nm波長,熒光顯微鏡觀察。②常規(guī)石蠟切片vWF免疫組化染色,觀察EPC參與構(gòu)成血管情況。
1.5取對(duì)數(shù)生長期EPC及成纖維細(xì)胞與纖維蛋白原溶液(5g/L)按1:2:3混合,加入PGA材料(預(yù)先加入20u/40μl凝血酶),37℃放置10min,混懸液便形成凝膠狀固定于網(wǎng)孔中,加入EGM-2MV培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)48h后,移植于裸鼠背部皮下。于裸鼠移植后21天取材,4%多聚甲醛固定。常規(guī)石蠟切片,vWF免疫酶組織化學(xué)染色,鏡檢。
2 結(jié)果
2.1 EPC傳代培養(yǎng)后,細(xì)胞形態(tài)及密度均勻,前3天為相對(duì)抑制期,此后呈指數(shù)形式快速增殖,10天后達(dá)到80%~90%融合。EPC生長曲線(圖1)顯示:人臍血EPC接種后5天內(nèi)細(xì)胞數(shù)量無明顯增加,從第7天開始細(xì)胞數(shù)量明顯增加,在第16天達(dá)到最高峰,以后增殖趨于平緩。
2.2原代EPC貼壁緩慢,24h后懸浮細(xì)胞重新接種
培養(yǎng)仍有細(xì)胞貼壁生長。EPC在Fibronectin包被的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)24h后,可見到部分圓形大單核細(xì)胞粘附于培養(yǎng)瓶底,3天后細(xì)胞貼壁完全,少量細(xì)胞開始伸展,隨著誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間的延長,圓形細(xì)胞逐漸減少,梭形細(xì)胞數(shù)量逐漸增多。7天左右出現(xiàn)由十?dāng)?shù)個(gè)細(xì)胞形成的細(xì)胞集落,可見20~30或更多數(shù)目細(xì)胞排列成內(nèi)皮細(xì)胞特異性條索狀結(jié)構(gòu)或網(wǎng)格狀結(jié)構(gòu)。10天后形成明顯克隆,并有梭形貼壁細(xì)胞從其邊緣不斷生成,2~3周,細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶底,單層細(xì)胞呈多角形融合成片狀(圖2)。
2.3原代培養(yǎng)第10天細(xì)胞透射電鏡顯示:人臍血EPC平均直徑15μm,核/漿比例大。細(xì)胞膜伸出許多偽足絲,基底膜呈多層。胞漿內(nèi)可見一種短棒狀小體,含平行管狀的內(nèi)部結(jié)構(gòu),即Weibel-Palade小體(圖3),是內(nèi)皮細(xì)胞最具特征性的細(xì)胞器。
2.4 5只裸鼠接種細(xì)胞7天后均見腫瘤快速生長,抗人vWF免疫熒光組織化學(xué)染色顯示大量EPC參與腫瘤血管構(gòu)建(圖4)。
2.5 EPC參與皮血管重建的觀察:通過實(shí)驗(yàn)室體外培養(yǎng),證實(shí)染色后細(xì)胞增殖活性無明顯變化,在熒光顯微鏡下可以清楚地辨別細(xì)胞的輪廓,染料在細(xì)胞膜上分布均勻一致。通過移植后7天皮瓣中段真皮下層熒光顯微鏡觀察,發(fā)現(xiàn)皮真皮下層存在能激發(fā)出紅色熒光的細(xì)胞,多呈散在分布,或呈條索狀分布(圖5),偶可見管狀結(jié)構(gòu)。并通過抗人vWF免疫酶組織化學(xué)染色,進(jìn)一步證實(shí)EPC確實(shí)參與皮血管重建(圖6)。
2.6 EPC、成纖維細(xì)胞與纖維蛋白原混懸液與凝血酶混合后,數(shù)秒鐘后即形成膠凍狀,數(shù)小時(shí)后可見細(xì)胞均勻分布于真皮支架的各個(gè)層面,并逐漸伸展為梭形或多極狀,貼附于PGA支架纖維材料上(圖7),隨培養(yǎng)時(shí)間的延長,細(xì)胞呈簇狀聚集生長。移植21天,真皮替代物支架中的孔隙已完全被細(xì)胞和細(xì)胞外間質(zhì)填充,支架部分降解,被大量平行排列的新生膠原纖維所替代,可見大量新生小血管形成,vWF免疫酶組織化學(xué)染色陽性(圖8),表明種植的EPC具有生物學(xué)活性,參與血管化過程。
3 討論
內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cell,EPC)是一類能循環(huán)、增殖并能直接分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells,EC),但尚未表達(dá)成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞表型的前體細(xì)胞。以前認(rèn)為EPC僅僅出現(xiàn)于胚胎血管發(fā)育階段,在人出生后,并不存在EPC。但最近研究發(fā)現(xiàn)在臍帶血、成人外周血、骨髓中的CD34+細(xì)胞或flk 1+細(xì)胞或CD133+3細(xì)胞離體培養(yǎng)兩周后均能分化為內(nèi)皮細(xì)胞,從而證實(shí)成年個(gè)體中存在EPCI3-41。并且經(jīng)異體骨髓移植模型證實(shí),成年個(gè)體外周血中的EPC來源于骨髓,在受到血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子(G/M-CSF)等細(xì)胞因子以及缺氧刺激后可加速動(dòng)員入外周血。在動(dòng)物后肢缺血模型及大鼠急性心肌梗死模型中,人外周血、臍帶血和骨髓來源的EPC移植均取得了很好的療效。為臨床缺血性疾病的血運(yùn)重建提供了一種新的治療策略。
目前對(duì)EPC發(fā)育分化的機(jī)制尚不十分清楚。EPC從原血干細(xì)胞而來,定向分化為內(nèi)皮細(xì)胞,在此分化發(fā)育過程中,flk1是最先表達(dá)的內(nèi)皮標(biāo)志,其次是PECAM和Tie2的表達(dá)。成人外周血中的CD34+/ACl33+/flkl+EPC體外培養(yǎng)分化為成熟內(nèi)皮細(xì)胞過程中,干細(xì)胞標(biāo)志ACl33+逐漸下降,2周后完全消失,表明EPC是從原血干細(xì)胞到內(nèi)皮細(xì)胞過程中的一個(gè)過渡的轉(zhuǎn)瞬即逝的細(xì)胞表型階段,隨著系列定向和分化成熟,在某些基因的調(diào)控下,細(xì)胞表型逐漸改變。目前尚未發(fā)現(xiàn)EPC的特異性表面標(biāo)記物,CD133是新近發(fā)現(xiàn)的干細(xì)胞標(biāo)記,其表達(dá)在造血干/祖細(xì)胞分化過程中迅速下調(diào),而不表達(dá)于CD34-群體。更重要的是CD34+/VEGFR-2+的細(xì)胞均表達(dá)CD133,這就使CD133成為富集EPC的理想細(xì)胞標(biāo)記。
篇5
第一天去見了主管的經(jīng)理,據(jù)說口才是很棒的,初次見面,感覺她很干練。保險(xiǎn)公司的氛圍與其他地方相比是很不同的,這里有一種很活躍的氣氛,在這里真的感受到了一些以前沒有感受過的東西。由于我沒有什么經(jīng)驗(yàn),不能跑業(yè)務(wù),所以就呆在辦公室和經(jīng)理、組訓(xùn)一起。
在保險(xiǎn)公司,每天早上都會(huì)有晨會(huì),晨會(huì)早上8點(diǎn)準(zhǔn)時(shí)開始,遲到會(huì)扣錢的,但只是形式上的,一般會(huì)扣一塊錢的樣子,主要還是調(diào)動(dòng)大家的積極性。晨會(huì)由主持人主持,一般就是組訓(xùn)或負(fù)責(zé)的經(jīng)理,但為了鍛煉各個(gè)業(yè)務(wù)員,也經(jīng)常的會(huì)讓業(yè)務(wù)員上去主持。晨會(huì)首先會(huì)讓全體同仁起立做晨操,很有激情,在音樂的節(jié)拍下做各種滂湃的動(dòng)作,會(huì)舒緩緊張的心情,還會(huì)讓沉睡中的身體舒展開。記得第一天去公司,要讓我上臺(tái)作自我介紹,本來剛剛到的時(shí)候還有些緊張,但跟著做完晨操后緊張感就沒了,很從容的上臺(tái)作了自我介紹。在晨會(huì)中,還會(huì)公布昨天各個(gè)業(yè)務(wù)室的業(yè)績,給予鼓勵(lì)。從早會(huì)中,讓我看到了朝氣,想必開完早會(huì)后一天的工作將會(huì)充滿激情。
這次實(shí)習(xí)中,公司召開了兩次產(chǎn)說會(huì),一次是歲歲登高,一次是鴻福年年。通過這兩次產(chǎn)說會(huì),讓我對(duì)險(xiǎn)種有了新的認(rèn)識(shí),而且懂得了什么叫有壓力才會(huì)有動(dòng)力。產(chǎn)說會(huì)是有關(guān)產(chǎn)品的說明會(huì),各個(gè)業(yè)務(wù)員會(huì)帶著自己邀請(qǐng)到的客戶來參加產(chǎn)說會(huì),由主講師講解關(guān)于這個(gè)產(chǎn)品的情況,讓客戶了解到該險(xiǎn)種的價(jià)值,有何優(yōu)惠,自己能得到什么利潤,以便客戶選擇適合自己的險(xiǎn)種投保。通過講師生動(dòng)的講解,加上現(xiàn)場回饋獎(jiǎng)品,很多客戶都會(huì)現(xiàn)場簽單,所以說,產(chǎn)說會(huì)被保險(xiǎn)公司看作一個(gè)和客戶溝通得很好的橋梁。還記得那次歲歲登高的產(chǎn)說會(huì),當(dāng)時(shí)現(xiàn)場簽單的客戶并不多,有5,6份吧。當(dāng)時(shí)一位省公司的講師說,還是因?yàn)槠眱r(jià)的問題,因?yàn)槲覀兊钠眱r(jià)太便宜,有時(shí)甚至不需要用票,所以業(yè)務(wù)員就沒有一種壓力,只是隨便邀請(qǐng)一個(gè)客戶來聽便完事了,隨便邀請(qǐng)到的客戶又有幾個(gè)想真心來簽單的呢。在接下來的一場票價(jià)為110元省公司的產(chǎn)說會(huì)中,現(xiàn)場簽的都是2萬元以上的單子,開始時(shí),只有幾個(gè)業(yè)務(wù)主管買了票。但是,在那個(gè)口才很好的經(jīng)理的說明下,有越來越多的業(yè)務(wù)員購買了票,就像那個(gè)經(jīng)理所說的,只要買了票就一定能帶來客戶。果然那天所有買票的業(yè)務(wù)員都帶來了客戶,而且有了不錯(cuò)的成績。
還有就是創(chuàng)說會(huì),公司有像是雷霆行動(dòng)等擴(kuò)員活動(dòng),增員的任務(wù)是很重的。業(yè)務(wù)員會(huì)帶領(lǐng)自己邀請(qǐng)的新進(jìn)人員來聽創(chuàng)業(yè)說明會(huì),之后有意者將會(huì)留下面試。從事保險(xiǎn)行業(yè),首先必須通過從業(yè)資格考試,拿到資格證書,于是,新進(jìn)人員會(huì)進(jìn)行考試培訓(xùn)??荚噧?nèi)容是關(guān)于保險(xiǎn)的一些基本知識(shí)和其他的與保險(xiǎn)相關(guān)的法律法規(guī),像是《民法通則》《保險(xiǎn)法》《消費(fèi)者權(quán)益保護(hù)法》等等。為了了解更多的知識(shí),我和這些新進(jìn)人員一起進(jìn)行了學(xué)習(xí),在此期間,尤其學(xué)到了很多關(guān)于保險(xiǎn)法的知識(shí),收獲頗豐。
“讓客戶滿意”不是一句空洞的口號(hào)。在實(shí)際工作中,公司里有許許多多的客戶服務(wù)團(tuán)隊(duì)和員工在為此努力。他們?cè)诟髯云椒驳膷徫簧?,勤勤懇懇,認(rèn)真負(fù)責(zé),用微笑耐心的態(tài)度和專業(yè)的服務(wù)水平,讓客戶滿意,用真誠的服務(wù)體現(xiàn)自身價(jià)值,也在為客戶創(chuàng)造價(jià)值。他們也是公司在第一線和客戶打交道的“形象代言人”。
還記得有一次晨會(huì)中,經(jīng)理請(qǐng)來了兩名其他地區(qū)的先進(jìn)工作者和大家交流,至今令我印象深刻。第一位上臺(tái)交流的,聲音很響亮,很有自我表現(xiàn)能力,一上臺(tái)就唱起了歌以吸引大家注意。這是一位56歲的女士,但是她的語氣,氣色,情緒,都無法讓人猜出她的實(shí)際年齡,感覺充滿活力。從她的身上,我看到了激情與真誠的魅力,無論任何人與她想出一段時(shí)間后,都會(huì)感到她身上所散發(fā)的激情,并被此所感染,變得擁有生機(jī)活力。在激情的背后,她又不缺真誠,所以很多客戶只對(duì)她所推薦的險(xiǎn)種感興趣,于是她的業(yè)務(wù)越來越好。只要對(duì)自己工作充滿激情,我想任何工作都會(huì)變得有意義?!熬\所至,金石為開”,只有自己真誠地對(duì)待別人,別人才有可能接納你,才會(huì)信任你,那樣工作也會(huì)變得順利。另一位上臺(tái)的女士,與前一位是十分不同的,她很文靜,感覺很踏實(shí),也很真誠。這是兩種不同的風(fēng)格,但她同樣的優(yōu)秀,據(jù)說很快會(huì)升為副經(jīng)理。她不會(huì)充滿激情的與你交流,但是,她卻發(fā)展了很多的下線,因?yàn)樗苏嬲\,有耐心,很多人都信任她,都愿意跟著她干,于是她的業(yè)務(wù)室人員越來越多,而且,她關(guān)心每個(gè)同事。從她身上,我同樣看到了真誠,我想在以后的生活中,無論從事什么工作,都要有對(duì)工作的熱情和待人的真誠。
每個(gè)營銷員要做得更多,要努力提升自己,要誠信熱情,要學(xué)會(huì)自我管理,要真正為客戶考慮問題……每一個(gè)非保險(xiǎn)人也應(yīng)該對(duì)營銷員多一些寬容、多一些理解,對(duì)保險(xiǎn)多點(diǎn)認(rèn)識(shí),不要厭惡,不要恐懼——它只不過是一份契約而已。
篇6
受訪嘉賓二:北京市臍帶血造血干細(xì)胞庫業(yè)務(wù)負(fù)責(zé)人 鄧鉞
(注:本刊記者分別采訪兩位嘉賓)
保存臍帶血早已經(jīng)不是什么新鮮事了。準(zhǔn)媽媽一般會(huì)在產(chǎn)前的孕婦學(xué)校了解到保存臍帶血的信息,但是,因?yàn)槿狈?duì)臍帶血全面和科學(xué)的認(rèn)識(shí),是否保存臍帶血仍然是讓很多準(zhǔn)媽媽左右為難的事情。為難的原因大致分兩類,一是相對(duì)于近2萬元的自存費(fèi)用和低概率的重大疾病發(fā)生率,保存臍血到底值不值得;二是保存后,看不見摸不著,長期不管不問,臍血庫是否能保證其保存和管理的質(zhì)量。
臍血的利用,不只白血病
大眾健康:對(duì)于公眾來說,了解臍帶血的機(jī)會(huì)不是很多,有人認(rèn)為臍血只能治療白血病。
劉開彥:保存臍帶血是為了保存臍血中的造血干細(xì)胞。而造血干細(xì)胞所治療的疾病不僅僅是白血病。目前,國際上利用臍帶血治療過的疾病已經(jīng)有80多種,我國目前利用臍血參與治療的疾病也已經(jīng)有30種以上。1996年,北京大學(xué)人民醫(yī)院、北京大學(xué)血液病研究所建立了中國首家臍帶血造血干細(xì)胞庫。2000年,北京臍血庫向北京大學(xué)人民醫(yī)院提供了第一份臍帶血用于臨床移植,成功救治了一名非霍奇金淋巴瘤患者。時(shí)至今日,僅北京臍血公共庫就已經(jīng)利用臍血治療了500例之多。全國北京市、天津市、上海市、山東省、廣東省、浙江省、四川省共7個(gè)臍血公共庫,目前已累計(jì)提供了2000份臍血用于疾病的治療。截至2013年底,全球臍血移植超過38000例,絕大多數(shù)為非血緣造血干細(xì)胞移植。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展,應(yīng)用臍帶血造血干細(xì)胞治療的疾病種類會(huì)越來越多,技術(shù)也會(huì)越來越成熟。
所以,保存臍血實(shí)際上是保存了一種希望,這種希望會(huì)隨著醫(yī)學(xué)科技的發(fā)展而越來越豐富。保存臍帶血造血干細(xì)胞不僅對(duì)個(gè)體是儲(chǔ)備或保險(xiǎn),對(duì)于血緣相關(guān)的親屬或用于公共庫捐贈(zèng)都有很好的應(yīng)用前景和價(jià)值。
鄧鉞:保存臍血與買保險(xiǎn)有相似的地方。有車一族年年都會(huì)為愛車購置保險(xiǎn),但不見得年年都會(huì)用到車險(xiǎn)。臍血也是一樣。不是為了將來一定會(huì)用到而保存,而是為了以后需要的時(shí)候有可用。要知道,雖然白血病的發(fā)病率為每10萬人約3人,但是對(duì)于那些不幸罹患疾病的家庭來說,幾率就是100%。所以是否保存臍血還是取決于公眾的認(rèn)識(shí)。
大眾健康:對(duì)于臍血的認(rèn)識(shí),很多準(zhǔn)媽媽沒有得到準(zhǔn)確信息的途徑,而網(wǎng)上的信息很多都是片面的,以致于很多準(zhǔn)媽媽存有各種疑慮。比如,我在一個(gè)人氣頗高的母嬰論壇上,就曾看到有人很肯定的發(fā)帖稱,自體移植臍帶血尚無成功先例。利用異體臍帶血移植是已經(jīng)得到臨床驗(yàn)證的醫(yī)療手段,但自體移植獲得成功的,全世界尚無一例報(bào)道。
劉開彥:1998年國際上就有自體臍血移植的報(bào)道,目前,全世界已有上千自體臍血治療的病例。2009年,我國成功進(jìn)行了第一例自體臍帶血移植,治療的疾病為神經(jīng)母細(xì)胞瘤,也是亞洲的首例。這也是北京臍帶血造血干細(xì)胞庫首例儲(chǔ)存的臍帶血成功用于臨床。我記得是2009年4月,一名2歲的兒童在北京兒童醫(yī)院接受了移植手術(shù)。
鄧鉞:我們北京市臍血庫已經(jīng)成功進(jìn)行了9例自體臍帶血的移植。去年,我們成功進(jìn)行了第9例、同時(shí)也是我國年齡最小的自體臍帶血移植。一名出生僅3個(gè)月的小嬰兒被確診患上了急性未分化型粒細(xì)胞白血病。因?yàn)楹⒆幽挲g太小,所以一度被懷疑為先天性白血病。但幸運(yùn)的是,通過提取臍帶血樣本,最終確定孩子所患的并非先天性白血病。2013年7月,孩子在首都兒科研究所接受了移植。我還記得,孩子的媽媽在看到我們的工作人員送去救命血時(shí),寫下了“多虧當(dāng)時(shí)留了臍帶血”的字條,她透過厚厚的玻璃窗,含著眼淚一直在點(diǎn)頭。
大眾健康:這個(gè)案例真感人!看來,各位準(zhǔn)媽媽真的不能隨意輕信網(wǎng)絡(luò)信息。剛才碰巧二位所提到的臍帶血移植都是嬰幼兒,我也聽過一些信息,說臍帶血移植只適用于10歲以下兒童,因?yàn)槟殠а臄?shù)量有限,每一個(gè)產(chǎn)婦的臍帶血大概也就是50~80ml,根本不足以用于成人的治療。 這個(gè)信息是否也不甚準(zhǔn)確?
劉開彥:是的。10年之前,北京大學(xué)人民醫(yī)院首份臍帶血成功用于臨床的同年,也就是2000年,北京市臍血庫向北京大學(xué)人民醫(yī)院提供了雙份臍帶血,我們成功救治了一名體重95公斤的白血病患者。這也是我國首例成功移植雙份臍帶血造血干細(xì)胞的病例。目前成人的臍血移植,無論國內(nèi)還是國外,均以單份臍血為主。
大眾健康:95公斤!那不但是成人,而且將近200斤體重的成人,是個(gè)質(zhì)量偏大的成人呀!那是不是成人的治療都需要雙份臍血呢?
鄧鉞:也不盡然。有的成人只要一份也可以成功,也有孩子需要雙份的。這要具體看所患的疾病和治療手段。
大眾健康:剛才劉主任也提到,儲(chǔ)存臍血不僅僅是對(duì)將來個(gè)體應(yīng)用,對(duì)于血緣相關(guān)的親戚也很有應(yīng)用的可能。這個(gè)怎樣理解呢?
劉開彥:就是指臍帶血配型時(shí)HLA A 、B、DRB1 6個(gè)點(diǎn)位的相合度。對(duì)于孩子來說,臍帶血與其100%相合,與孩子的父母為半相合,與孩子的兄弟姐妹25%半相合,25%幾率全相合。對(duì)于異體臍帶血移植來說,只有相合度達(dá)到一定程度后,才能夠進(jìn)行手術(shù)移植。
大眾健康:我們有沒有為親屬提供臍帶血的成功案例?
鄧鉞:2008年,一位四川的李女士在懷孕37周時(shí)被檢查出患有白血病。家人對(duì)她隱瞞了病情,曾勸她放棄懷孕接受治療。醫(yī)生得知此情況后,建議患者家屬將孩子的臍帶血儲(chǔ)存到北京市臍血庫,以便為日后進(jìn)行移植治療時(shí)使用。當(dāng)年12月,李女士順利進(jìn)行了剖宮產(chǎn)手術(shù),并采集了70毫升的臍帶血。生產(chǎn)后,醫(yī)生開始為她尋找合適的骨髓,但最終也沒找到配型完全相合的骨髓。于是醫(yī)生建議用患者父親配型半相合的骨髓進(jìn)行移植。為了降低父親半相合骨髓移植的風(fēng)險(xiǎn),需要使用孩子留下的臍帶血進(jìn)行輔助治療,來降低排異反應(yīng)。2009年1月。李女士成功接收了手術(shù)。移植1個(gè)月后,李女士病情逐漸好轉(zhuǎn)。原本AB型血的她竟然變成了跟父親一樣的B型血,說明她的造血系統(tǒng)已經(jīng)重建。
除了自存,您還可以捐獻(xiàn)
大眾健康:很多準(zhǔn)媽媽也是考慮到自存費(fèi)用所以有所猶豫。目前我們的費(fèi)用是多少?
鄧鉞:目前,在我們北京臍血庫的自存費(fèi)用為19800元。
大眾健康:這也不算個(gè)小數(shù)字了,那這19800都包括哪些費(fèi)用呢?
鄧鉞:我們采集、制備和檢驗(yàn)的費(fèi)用是6800元,其余都是年度保管費(fèi),每年980元,一共18年。當(dāng)然,也可以采取按年的方式來繳納保管費(fèi)用,跟分期付款似的。
大眾健康:除了自存,也可以進(jìn)行捐獻(xiàn)。那捐獻(xiàn)和自存在采集程序和儲(chǔ)存上有什么不同嗎?
鄧鉞:沒有什么不同,都是一樣的。在孕婦學(xué)校的宣傳也是一樣的,都是想讓大家能夠充分認(rèn)識(shí)臍帶血的價(jià)值。產(chǎn)婦簽署了知情同意書之后,會(huì)拿到一套采集的器皿,然后進(jìn)產(chǎn)房之后直接交給大夫就可以了。我們的儲(chǔ)存條件也都是一樣的,沒有自存和捐獻(xiàn)之分,都保存在同樣的條件和環(huán)境下,完全一模一樣。雖然捐獻(xiàn)的臍帶血存在公共庫,自存的臍血存在自存庫,但這都只是名稱上的不同,在檔案記錄中有所區(qū)分,而實(shí)際的存儲(chǔ)都是同樣的。
大眾健康:捐獻(xiàn)臍帶血的捐者可以獲得怎樣的利益?
鄧鉞:捐者會(huì)得到一份自愿捐獻(xiàn)臍帶血的證書,今后在其本人和親屬需要時(shí),都可以得到臍帶血的優(yōu)先配型權(quán)。
大眾健康:那在捐者需要時(shí),是否也可以使用自己捐出的那一份臍帶血呢?如果可以,這樣跟花錢自存有什么區(qū)別?
鄧鉞:捐獻(xiàn)就不是自己的了。就是說,如果是捐獻(xiàn),臍帶血的所有權(quán)在血庫,捐獻(xiàn)者僅僅是有臍帶血的優(yōu)先配型權(quán),不一定能夠使用到自捐的臍帶血,而且還需要支付相應(yīng)的配型、使用費(fèi)用。但如果是自存的,那么臍帶血的所有權(quán)屬于自己,無論何時(shí)、如何使用、給誰使用都可以由自己支配,而且無需額外支付配型和使用費(fèi)。
劉開彥:的確有很多家庭是懷著這種僥幸的心理來進(jìn)行捐獻(xiàn)的。捐獻(xiàn)出來的臍帶血有可能由以下幾種途徑消耗掉。一是臨床。我們2007年加入了中華骨髓庫,將公共庫所有數(shù)據(jù)納入中華骨髓庫數(shù)據(jù)配型業(yè)務(wù),共用檢索查詢平臺(tái),共同為患者和醫(yī)院提供檢索查詢服務(wù)。數(shù)據(jù)都是公開的,所捐獻(xiàn)的臍帶血有可能被需要的患者配走。二是我們每年都要向科研單位提供臍帶血來進(jìn)行科學(xué)研究之用。這部分臍血也出自公共庫。三是每年我們會(huì)隨機(jī)抽取臍血進(jìn)行質(zhì)檢,以確認(rèn)我們的儲(chǔ)存質(zhì)量。所捐出的臍血也有可能被抽到。
當(dāng)然,如果很幸運(yùn),捐獻(xiàn)者需要幫助時(shí),所捐出的臍血?jiǎng)偤脹]有消耗掉,還在我們臍血庫,那捐獻(xiàn)者當(dāng)然可以首選這份臍血。
但目前的情況來看,捐獻(xiàn)臍血的過程并不順暢,存在很多問題。
大眾健康:主要都有哪些問題呢?
鄧鉞:最主要的問題就是捐獻(xiàn)者的盲目性。不花錢,對(duì)自己也沒什么影響,那捐就捐吧。存在這樣想法的人不在少數(shù),其實(shí)他們并不明確捐獻(xiàn)的意義在哪里。所以導(dǎo)致了很多在隨訪中找不到聯(lián)絡(luò)人或者采集后忽然拒捐,不愿意配合隨訪的情況。比如搬家了,手機(jī)換號(hào)了,不愿意把寶寶的健康情況告知我們的隨訪人員等等。
大眾健康:這會(huì)導(dǎo)致什么后果?
鄧鉞:我們隨訪的內(nèi)容會(huì)關(guān)系到這份臍血的有效保存和利用。如果我們不能聯(lián)絡(luò)到捐獻(xiàn)者,那么這份采集到的臍血就只能作廢了。我們?cè)?jīng)發(fā)生過患者配型終于配上了,卻找不到捐獻(xiàn)者的情況。我們的工作人員打了無數(shù)的電話,甚至找到當(dāng)時(shí)生產(chǎn)的醫(yī)院都未果。最后只能放棄這份臍血。這樣的案例不只一例。
大眾健康:真是太可惜了!您認(rèn)為捐獻(xiàn)的意義在哪里?
鄧鉞:儲(chǔ)存臍帶血,真的是一生只有一次的機(jī)會(huì)。這不像獻(xiàn)血,血液會(huì)再生,可以重復(fù)捐獻(xiàn)。臍帶血只有在懷孕生產(chǎn)時(shí)才能采集得到,也不見得所有采集到的臍血都能通過我們的檢測(cè)、制備,最終成為一份合格的臍帶血造血干細(xì)胞而被保存下來。這份合格的臍帶血,有可能挽救一個(gè)人的生命,有可能給予一個(gè)家庭莫大的希望,有可能推動(dòng)我們治愈重大疾病前進(jìn)的步伐。這是多么美好的事情!在我看來,成功進(jìn)行捐獻(xiàn)的媽媽本身就已經(jīng)是崇高和偉大的了。捐獻(xiàn)對(duì)母嬰沒有任何影響,如果不捐獻(xiàn)不自存,那這份隨著生命而來的希望之血也就只能消逝在這個(gè)世界上了。所以,如果大家沒有條件和意愿進(jìn)行自存,希望可以捐獻(xiàn)出來。
大眾健康:我記得央視曾公布過一些數(shù)據(jù),說自存臍帶血庫的配型利用率很低,我印象中不到2%。而公用庫的配型利用率是自存庫的4~5倍,好像是8%以上。也就是說,公用庫的配型利用率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于自存庫。
劉開彥:這種情況很正常。因?yàn)楣矌焓敲嫦蚬婇_放的,誰都有權(quán)力合理的使用它。而自存庫只能是自己或家人使用自己的。再加上公共庫的存儲(chǔ)量少于自存庫,從每年的采集來看,70%是自存的,30%是捐獻(xiàn)的,本身分母的基數(shù)不同,那肯定公共庫的利用率要高于自存庫。這是很正常的。
大眾健康:劉主任您建議自存還是捐獻(xiàn)呢?
劉開彥:鼓勵(lì)捐獻(xiàn),自存一定要充分,知情、自愿。公眾應(yīng)根據(jù)自己實(shí)際情況和需要選擇是否儲(chǔ)存,是自存還是捐獻(xiàn)。
臍血采集后的“生命”歷程
大眾健康: 我們的自存臍帶血會(huì)存18年,18年能保證存放的質(zhì)量嗎?18年后,這份臍血中的造血干細(xì)胞還能保有多少活力?
劉開彥:國外已有報(bào)道,凍存23年的臍帶血細(xì)胞依然保持良好的活性和植入能力。2013年,北京市臍血庫將一份凍存長達(dá)14年的臍帶血成功應(yīng)用于臨床,細(xì)胞復(fù)蘇后的活性達(dá)到了96.14%。我們的技術(shù)是沒有問題的,甚至說已經(jīng)達(dá)到國際領(lǐng)先水平。2005年,我們通過了ISO9001國際質(zhì)量管理體系認(rèn)證。2013年,北京市臍血庫獲得了美國血庫協(xié)會(huì)(American Association of Blood Banks ,簡稱AABB)認(rèn)證,成為中國首家通過該認(rèn)證的臍帶血庫。AABB頒布的臍帶血庫相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)是世界上公認(rèn)的主要標(biāo)準(zhǔn),受到全球同行的廣泛認(rèn)可。全世界除美國臍血庫遵循此標(biāo)準(zhǔn)外,歐洲、美洲、非洲、亞洲等眾多國家和地區(qū)的臍血庫均嚴(yán)格遵守該標(biāo)準(zhǔn)。北京市臍血庫獲得AABB認(rèn)證,標(biāo)志著中國臍血庫已經(jīng)與國際接軌,并獲得了國際行業(yè)標(biāo)桿的認(rèn)同。這不但保障了臍帶血臨床應(yīng)用的安全性,也對(duì)進(jìn)一步規(guī)范與提高我國的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)起到積極作用。
鄧鉞:合格的臍帶血造血干細(xì)胞會(huì)被存放在零下196攝氏度的液氮中。這個(gè)溫度在醫(yī)學(xué)上認(rèn)為是生命靜止的溫度,可以長久地保持造血干細(xì)胞的活性。我們的每個(gè)液氮罐都有一根真空管路通往室外的大型液氮儲(chǔ)備裝置,可以隨時(shí)補(bǔ)充罐中的液氮量,保持液氮液面高度。每個(gè)液氮罐都由電腦控制,數(shù)據(jù)會(huì)在監(jiān)控部門的集中監(jiān)控下,一旦條件改變,隨時(shí)都會(huì)報(bào)警。我們的這套裝備是從美國進(jìn)口的,是目前國際上最先進(jìn)的。通過了AABB的認(rèn)證,意味著我們存儲(chǔ)的每一份臍帶血都擁有了“國際身份證”,無論在世界上哪一個(gè)國家都可以被認(rèn)可。
大眾健康:我想很多準(zhǔn)媽媽都很好奇,自己的臍帶血在采集完成后會(huì)被帶到哪里?都要進(jìn)行哪些步驟?最終會(huì)“住”在哪里?您能為我們的準(zhǔn)媽媽們描述一下,以便有一個(gè)感性的認(rèn)識(shí)嗎?
鄧鉞:采集后的臍帶血會(huì)在24小時(shí)內(nèi)由專人取送至臍血庫,工作人員會(huì)首先對(duì)臍血外觀和相關(guān)資料的完整性進(jìn)行檢查,并對(duì)臍血體積進(jìn)行評(píng)估。符合初篩條件的臍血會(huì)生成伴隨其一生的條碼編號(hào),然后進(jìn)入制備流程。制備的目的是去除臍帶血中的紅細(xì)胞和血漿,保留富含造血干細(xì)胞的有核細(xì)胞成分。整個(gè)制備過程在符合GMP要求的潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成,采用的是國際上最先進(jìn)的全密閉的自動(dòng)化處理系統(tǒng),保證制備效果安全可靠。制備完畢的臍帶血會(huì)進(jìn)行程控降溫,使之嚴(yán)格按照每分鐘1℃的降溫速率緩慢冷凍至零下90℃,然后再放入液氮儲(chǔ)存。在臍帶血凍存的同時(shí),針對(duì)每一份臍血的一系列檢測(cè)也隨之展開。一方面是安全性的檢測(cè):為了最大限度的減少經(jīng)血傳播疾病的發(fā)生,我們除了對(duì)乙肝、丙肝、艾滋、巨細(xì)胞病毒、梅毒的抗原或抗體進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)采用靈敏度更高的全自動(dòng)儀器對(duì)乙肝、丙肝和艾滋病毒的核酸進(jìn)行檢測(cè);還有臍帶血的細(xì)菌/霉菌檢測(cè),使用的也是血站專用的進(jìn)口培養(yǎng)系統(tǒng)。另一方面是有效性檢測(cè):采用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)臍帶血有核細(xì)胞數(shù)量和分類,使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)臍帶血中的造血干細(xì)胞數(shù)量和活性,通過14天的集落培養(yǎng)評(píng)估造血干細(xì)胞的增殖和分化能力;這些檢測(cè)可保證每份臍帶血中含有足量有效的細(xì)胞。還有HLA分型檢測(cè),可用于臨床使用時(shí)的配型查詢和臍帶血的身份確認(rèn)。
篇7
大學(xué)的最后一個(gè)暑假,我有幸到廣東電信羅定分公司實(shí)習(xí),在將近一個(gè)月的實(shí)習(xí)期里,我初步接觸大電信公司的一些運(yùn)作,積累了一定的社會(huì)經(jīng)驗(yàn). 我被安排在ADSL社區(qū)實(shí)習(xí),負(fù)責(zé)指導(dǎo)我的是一名姓董的班長,而實(shí)習(xí)內(nèi)容主要是ADSL的安裝與維護(hù).經(jīng)過班長的悉心教導(dǎo),很快我就熟悉了ADSL的各項(xiàng)原理,實(shí)際操作能力也有所提高,以下就是我的一些實(shí)習(xí)體會(huì). 第一:真誠待人.我剛來報(bào)到時(shí),遇到很多新的面孔,由于和他們未熟悉,所以不敢和他們說太多的話,而且對(duì)工作未曾了解,開始覺得不太適應(yīng).后來我慢慢發(fā)現(xiàn),只要真誠待人,虛心請(qǐng)教同事,他們也很樂意和我交往.還教會(huì)我一些技術(shù),由此我深感真誠的重要性,在公司里不但要學(xué)會(huì)如何做事,而且要學(xué)會(huì)如何做人.正確處理同事之間的關(guān)系是非常重要的,它會(huì)關(guān)系到你能否開展工作.孤芳自賞并不能說明你有個(gè)性,過于清高是很難融入大集體的. 第二:不要偷懶.我曾問班長:"什么樣的員工在企業(yè)里會(huì)受?"他的回答是不偷懶的員工.我覺得很有道理,試問有哪個(gè)老板會(huì)喜歡懶惰的下屬的?于是我時(shí)刻提醒自己要多干活,盡力把本份工作做好.還記得我曾在超市做兼職時(shí),主管很討厭在工作時(shí)幾個(gè)人圍在一起聊天的事,所以在工作的時(shí)候,就算是生意很淡的時(shí)候也不要聊天.由于我時(shí)刻牢記這一點(diǎn),最終努力沒有白廢,我以良好的表現(xiàn)完成了實(shí)習(xí). 第三:勤學(xué)好問.剛來到單位時(shí),我對(duì)很多方面都未熟悉,這就需要我勤學(xué)好問.因?yàn)榻?jīng)驗(yàn)是很重要的,我發(fā)現(xiàn)引起線路故障的原因有很多,如果沒經(jīng)驗(yàn)就很難處理問題.例如有一次,班長接到某音像店的報(bào)障后,趕赴現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)戶主的網(wǎng)絡(luò)下行速率不正常,他先后把電話線,調(diào)制解制器,甚至電纜也換過仍未解決問題,最后他把端口也換了才排除了故障.遇上如此復(fù)雜的問題是比較少見的,可能連經(jīng)驗(yàn)豐富的員工也感頭疼.經(jīng)驗(yàn)不足的我更需多請(qǐng)教他們.但必須注意的是:在問人之前要分清哪些問題可以問,哪些問題不該問.還要注意在什么時(shí)候問會(huì)好一點(diǎn).比如新來的員工就盡量避開報(bào)酬這個(gè)話題,不要對(duì)薪水太在乎,對(duì)于新人來說,能學(xué)到東西才是最重要的. 第四:講究條理.年輕人剛到工作單位時(shí)往往會(huì)表現(xiàn)急躁,這是正常的,但最好不要急功近利,急于表現(xiàn)自己可能會(huì)使自己處于不利地位.我們要抱著踏實(shí)的態(tài)度來做事,虛心點(diǎn)往往能得到別人的認(rèn)同.其實(shí)我發(fā)覺前輩做事有一點(diǎn)很值得學(xué)習(xí)的,就是他們做事很講究條理,他們遇到問題會(huì)一步步去解決,而不是驚慌失策.例如他們?cè)诮拥焦收蠒r(shí),首先會(huì)根據(jù)用戶的反映來分析情況,然后問清楚對(duì)方的地址和聯(lián)系方式,當(dāng)懷疑是用戶的電腦故障時(shí)還要帶上手提電腦去監(jiān)測(cè),最后才派出人手去收復(fù),這種做事方式就很有條理,不會(huì)做一些無用功,工作效率也得到提高.受他們的影響我也慢慢變得做事不那么急躁了,這真是很難得的工作經(jīng)驗(yàn)啊! 今次的暑期實(shí)習(xí)帶給我不僅僅是一種社會(huì)經(jīng)驗(yàn),更是我人生的一筆財(cái)富.更可喜的是我在實(shí)習(xí)期間還結(jié)識(shí)了一些好朋友,他們給予我不少的幫助.俗語說:紙上得來終覺淺.沒有把理論用于實(shí)踐是學(xué)得不深刻的.當(dāng)今大學(xué)教育是以理論為主,能有機(jī)會(huì)走進(jìn)電信公司去實(shí)習(xí),對(duì)我來說是受益不淺的.我就快畢業(yè)走向社會(huì)了,相信這次實(shí)習(xí)對(duì)我日后參加工作有幫助.感謝在這期間所有幫助過我的人!
寫于廣東郵電
為(通信)企業(yè)管理032學(xué)生
篇8
蘇寧增資日本Laox
日前,蘇寧電器(002024.sz)公告稱,將以35日元/股的價(jià)格認(rèn)購旗下日本Laox株式會(huì)社定向發(fā)行的1.79億股股份,總投資約5.03億元人民幣。發(fā)行完成,蘇寧將通過境外全資子公司持有Laox 51%股權(quán),成為控股股東。日本Laox株式會(huì)社創(chuàng)立于1930年,是日本歷史最悠久的家電連鎖企業(yè),與蘇寧,國美不同,Laox業(yè)務(wù)除了傳統(tǒng)3C家電外,還涉及動(dòng)漫產(chǎn)品,樂器,手表等日用品零售。蘇寧副董事長孫為民表示,公司將把Laox引入中國,實(shí)施雙品牌戰(zhàn)略,同時(shí)還將擴(kuò)大Laox在日本的布局,為國際化進(jìn)一步奠定基礎(chǔ)。蘇寧電器打算在中國設(shè)立Laox中國總部,并公布了未來五年發(fā)展規(guī)劃:到2016年,Laox中國將在北京,上海,廣州等25個(gè)城市開設(shè)150家門店,建立集休閑,購物于一體的樂購仕生活廣場(LAOX LIFE),單店面積在1萬至2萬平方米之間。目前Laox在北京,上海,深圳等核心城市已經(jīng)開始進(jìn)行選址規(guī)劃,今年年底將開出2到3家門店。孫為民說,Laox可獨(dú)立采購,共享蘇寧電器后臺(tái)設(shè)施,并互相補(bǔ)充各自經(jīng)營管理模式。
網(wǎng)上商品性能描述將有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)
受全球數(shù)字貿(mào)易產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟的委托,重科院將與中國電子商務(wù)協(xié)會(huì),廣東商學(xué)院聯(lián)合共建“數(shù)字貿(mào)易標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室”。這個(gè)實(shí)驗(yàn)室的其中一項(xiàng)功能就是:建立一套統(tǒng)一的商品性能,質(zhì)量描述標(biāo)準(zhǔn),并從生產(chǎn),供應(yīng)環(huán)節(jié),就將這個(gè)統(tǒng)一的商品描述轉(zhuǎn)化為數(shù)字資料,放入到網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫。有了這樣一個(gè)數(shù)據(jù)庫,可以避免現(xiàn)在網(wǎng)店銷售時(shí),對(duì)同一件商品存在多種不同的性能,質(zhì)量描述。消費(fèi)者在網(wǎng)購時(shí),也可以從這個(gè)數(shù)據(jù)庫中調(diào)取標(biāo)準(zhǔn)描述,減少因夸大或不實(shí)描述而掉進(jìn)消費(fèi)陷阱。
“數(shù)字貿(mào)易”是由全球數(shù)字貿(mào)易產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟發(fā)起并提出的一種B2C、B2B的電子商務(wù)創(chuàng)新模式,其目標(biāo)是向消費(fèi)者提供一個(gè)從網(wǎng)上到網(wǎng)下的互動(dòng)生活輔助平臺(tái),并最終改變網(wǎng)絡(luò)生活方式,現(xiàn)實(shí)消費(fèi)習(xí)慣。
沃爾瑪電子商務(wù)中國區(qū)總部落戶上海
日前,上海市商委與沃爾瑪簽署了《在滬發(fā)展電子商務(wù)合作框架備忘錄》,據(jù)雙方簽署的備忘錄,沃爾瑪將在上海設(shè)立沃爾瑪電子商務(wù)中國區(qū)總部,全面負(fù)責(zé)沃爾瑪全球電子商務(wù)在中國市場的運(yùn)營。沃爾瑪表示,將把傳統(tǒng)零售業(yè)和電子商務(wù)領(lǐng)域積累的先進(jìn)經(jīng)營管理經(jīng)驗(yàn)引入上海,并引進(jìn)擁有國際化背景和豐富行業(yè)經(jīng)驗(yàn)的電子商務(wù)高端人才。
海爾電器全面收編日日順
海爾電器公告稱,于6月24日以2.4億元的價(jià)格向控股股東海爾集團(tuán)收購青島日日順電器服務(wù)公司全部股權(quán),青島日日順電器服務(wù)公司主要業(yè)務(wù)是為在國內(nèi)分銷的家電產(chǎn)品提供售后服務(wù)及增值客戶服務(wù)。而海爾集團(tuán)還為青島日日順電器服務(wù)公司提供了盈利保證,從2011年1月30日起至2012年12月21日期間,凈利潤將不少于6000萬元。
海爾電器董事會(huì)主席楊綿綿表示,三四級(jí)市場渠道綜合服務(wù)業(yè)務(wù)已成為公司業(yè)務(wù)新的增長動(dòng)力,收購青島日日順電器服務(wù)公司可以讓公司現(xiàn)有的渠道網(wǎng)絡(luò)向“非海爾”品牌產(chǎn)品提供售后服務(wù)。“未來公司將成為在中國家電分銷領(lǐng)域舉足輕重的渠道綜合服務(wù)提供商?!睏罹d綿說。事實(shí)上,基于這一目標(biāo)和海爾集團(tuán)內(nèi)部整合的需要,海爾電器全面收編日日順渠道平臺(tái)的步伐正在加快。
2010年8月底,海爾電器斥資7.63億元收購了青島海爾物流有限公司。12月底,以1880萬元收購煙臺(tái)日日順51%控股權(quán),同時(shí)與山東合資伙伴出資2000萬設(shè)立山東日日順電器有限公司。2011年4月底起,分別收購了合肥日日順,蘇州日日順和湖南日日順各51%的控股權(quán)。一系列收購讓海爾電器基本完成銷售網(wǎng),物流網(wǎng)和服務(wù)網(wǎng)在資本層面的整合。
海爾電器2010年財(cái)報(bào)顯示,綜合渠道業(yè)務(wù)收入占其總收入比重已從2009年的13.33%,迅速上升至79%;在縣級(jí)市場的零售終端店面數(shù)量已近7000家,在鄉(xiāng)鎮(zhèn)級(jí)市場也有2.8萬個(gè)銷售點(diǎn)。海爾電器有關(guān)人士表示,除新疆,青海等一些偏遠(yuǎn)的縣鎮(zhèn)沒有布點(diǎn)外,全國其他省份的三,四級(jí)市場都已布局完畢。其中,山東,河南,四川,安徽等省份布點(diǎn)相對(duì)密集。
海爾電器在三四級(jí)市場渠道綜合服務(wù)的商業(yè)模式是,通過網(wǎng)頁,電話,電郵等虛擬網(wǎng)絡(luò),借助公司的物流和配送體系,向三四級(jí)市場廣大分銷伙伴提供訂單規(guī)劃,存貨管理,物流,售后等增值服務(wù),推行“零庫存下的即需即供”運(yùn)營模式,并利用此渠道綜合服務(wù)模式吸引“非海爾”品牌。
卓越亞馬遜推出“我要開店”和“卓越亞馬遜物流”服務(wù)
7月6日,卓越亞馬遜對(duì)外宣布開放第三方賣家平臺(tái),推出“我要開店”和“卓越亞馬遜物流”服務(wù)。旨在為消費(fèi)者帶來更多的選品和更有競爭力的價(jià)格,并以全方位的服務(wù)幫助廣大賣家進(jìn)一步開拓自身業(yè)務(wù)。“我要開店”平臺(tái)面向所有賣家實(shí)行先期“零投入”的政策,即無加入費(fèi),無年費(fèi),無平臺(tái)使用費(fèi)。目前,真正制約中小型電子商務(wù)企業(yè)發(fā)展的是倉儲(chǔ)和物流?!白吭絹嗰R遜物流”正好為賣家提供倉儲(chǔ)物流服務(wù),覆蓋范圍廣闊的貨到付款服務(wù)及多種付款方式,并由24小時(shí)不間斷服務(wù)的客服中心幫助賣家完成退,換貨等售后服務(wù)。
至此,卓越亞馬遜給賣家提供了一個(gè)360。全方位平臺(tái)。通過運(yùn)用與亞馬遜全球同步的強(qiáng)大技術(shù)功能,賣家可以簡單便捷地在卓越亞馬遜上陳列商品。此外,第三方賣家除可以在該平臺(tái)上開店銷售產(chǎn)品,還可享受到“卓越亞馬遜物流”服務(wù),即由卓越亞馬遜按照自身物流服務(wù)的高標(biāo)準(zhǔn)提供的倉儲(chǔ),發(fā)貨,配送和售后服務(wù)。
作為全球性電子商務(wù)網(wǎng)站,亞馬遜在中國,美國,法國,日席等都有運(yùn)營的網(wǎng)站,加入卓越亞馬遜的第三方賣家未來也可以有機(jī)會(huì)在亞馬遜其他國家的網(wǎng)站上銷售產(chǎn)品,這可以幫助中國賣家建立面向全球的業(yè)務(wù)。未來,借助卓越亞馬遜全球平臺(tái),中國的賣家可以有機(jī)會(huì)走向國際,這是“我要開店”平臺(tái)與其他中國電子商務(wù)第三方平臺(tái)的最大的不同之處?!拔乙_店”和“亞馬遜物流”已在亞馬遜全球成功運(yùn)營多年,一直是推進(jìn)亞馬遜業(yè)務(wù)增長的強(qiáng)大動(dòng)力。目前,來自全球第三方賣家的商品在亞馬遜公司所銷售商品總量中的占比已超過30%。
家電下鄉(xiāng)政策或?qū)⑼顺?/p>
按照國務(wù)院原定的實(shí)施方案,山東,河南,四川,青島三省一市首批試點(diǎn)地區(qū)的家電下鄉(xiāng)政策將在今年11月到期,其他地區(qū)也將于2012年11月到期,隨著截止日期越來越近,國家相關(guān)主管部委并無政策將延續(xù)的明確表態(tài)。而此前家電節(jié)能惠民政策也是如此這般徹底退出。家電下鄉(xiāng)政策自2008年初出臺(tái)以來,對(duì)國民經(jīng)濟(jì)拉動(dòng)的作用十分明顯,隨著政策的不斷推進(jìn),銷售金額連連攀高,但今年4、5月卻連續(xù)兩月出現(xiàn)大幅下滑。
統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,今年一季度家電下鄉(xiāng)銷售數(shù)據(jù)沖高;尤其是3月份數(shù)據(jù)創(chuàng)歷史新
高,商務(wù)部4月11日數(shù)據(jù),3月份全國家電下鄉(xiāng)產(chǎn)品共銷售1471.5萬臺(tái),同比增長135.36%;實(shí)現(xiàn)銷售額344.8億元,同比增長178.06%。但4月,四部委發(fā)文加強(qiáng)對(duì)家電下鄉(xiāng)進(jìn)行政策監(jiān)管后,下鄉(xiāng)銷售數(shù)據(jù)急轉(zhuǎn)直下。商務(wù)部公布4月份全國共銷售家電下鄉(xiāng)產(chǎn)品328.8萬臺(tái),同比下降31%;實(shí)現(xiàn)銷售額87.2億元,同比下降12%,銷售量和銷售額均出現(xiàn)大幅度下滑,數(shù)據(jù)再次跳躍性波動(dòng)。5月數(shù)據(jù)顯示,2011年5月全國家電下鄉(xiāng)產(chǎn)品共銷售578萬臺(tái),同比僅增長0.90%,家電下鄉(xiāng)政策的對(duì)市場的刺激作用呈現(xiàn)出遞減拐點(diǎn)跡象。
下鄉(xiāng)政策實(shí)施以來,三四級(jí)農(nóng)村市場獲得高速增長,但隨著政策的減弱乃至退出,三四級(jí)市場增速將隨之放緩,如何去保證這些投入大,數(shù)量多的新網(wǎng)店的單店效率并提升其收益和價(jià)值,也將考驗(yàn)企業(yè)的經(jīng)營智慧。
洗碗機(jī)6A檢測(cè) 掀起廚房新革命
日前由中國家用電器研究院主辦,中國家用電器研究院產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟(jì)與技術(shù)經(jīng)濟(jì)研究所,國家家用電器質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心承辦的“廚房新勢(shì)力 悅享凈生活”,2011年洗碗機(jī)6A檢測(cè)結(jié)果會(huì),在北京貴都大酒店召開。
繼洗衣機(jī)6A、洗干一體機(jī)6A檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)相繼公布后,中國家用電器研究院于今年3月底,再次了清潔器具又一“6A檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)”,即JDYB007-2011《家用和類似用途洗碗機(jī)性能分等分級(jí)》技術(shù)規(guī)范(以下簡稱“洗碗機(jī)6A”標(biāo)準(zhǔn))。
標(biāo)準(zhǔn)后,國家家用電器質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心便積極地展開了洗碗機(jī)6A檢測(cè)工作,格蘭仕、松下、西門子,美的等國內(nèi)主流洗碗機(jī)生產(chǎn)企業(yè)相繼送來樣機(jī)檢測(cè)。此次活動(dòng)現(xiàn)場,多位行業(yè)專家都站在各自領(lǐng)域的角度,全面剖析了洗碗機(jī)行業(yè)的發(fā)展前景。作為此次洗碗機(jī)6A檢測(cè)工作的總負(fù)責(zé)人,國家家用電器質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心綜合檢驗(yàn)部主任魯建國表示,長期以來,阻礙著國內(nèi)洗碗機(jī)市場發(fā)展的主要因素之―便是國內(nèi)消費(fèi)者的觀念以及對(duì)洗碗機(jī)的誤解,而此次6A標(biāo)識(shí)貼上產(chǎn)品后,更為消費(fèi)者合理選購洗碗機(jī)提供了科學(xué)依據(jù)。隨著70后,80后逐漸成為社會(huì)主流消費(fèi)群體,新興的消費(fèi)理念和消費(fèi)模式正在逐步成為主流模式。另外,國內(nèi)外主流企業(yè)的市場策略也直接影響著洗碗機(jī)在國內(nèi)的推廣步伐。國家信息中心市場信息處處長蔡瑩指出,洗碗機(jī)發(fā)展目前正呈現(xiàn)出越來越快的增長趨勢(shì)。去年全年,國內(nèi)重點(diǎn)城市洗碗機(jī)銷售量約為12萬臺(tái),同期增長了21.1%。去年,國內(nèi)重點(diǎn)城市洗碗機(jī)銷售額約為6.05億元,與09年相比,銷售額同比增長30.2%,高于銷售量增幅,中高端產(chǎn)品作用相對(duì)突出。從歷史數(shù)據(jù)看,國內(nèi)重點(diǎn)城市洗碗機(jī)銷售量年度比增長保持了逐年上升的趨勢(shì)。在洗碗機(jī)的區(qū)域分布方面,地區(qū)之間消費(fèi)能力差異巨大,華東,華北占整體銷售量比例達(dá)到81.38%,呈現(xiàn)初級(jí)消費(fèi)特征。目前,連鎖專賣渠道成為重點(diǎn)品牌倚賴的重要銷售渠道,三四級(jí)城市市場拓展工作尚未有效開展。北京國美總經(jīng)理宋林林也從市場的角度,表達(dá)了對(duì)洗碗機(jī)未來在國內(nèi)發(fā)展前景的信心目前,在北京國美銷售的洗碗機(jī)產(chǎn)品包括海爾,西門子,美的等多個(gè)品牌的十幾個(gè)型號(hào)的產(chǎn)品。這些產(chǎn)品的價(jià)格從3000多元至8000多元不等,可以滿足不同消費(fèi)者多種層次的需求。
(記者 馮國忠)
編讀往來
河北蘇立:我們是一個(gè)小家電品牌的區(qū)域商。前段時(shí)間,因?yàn)榻o某個(gè)淘寶店供貨,我們公司受到了廠家10萬元的罰款,停止供貨3個(gè)月的處罰。受各方面影響,今年的市場非常低迷,不但平常的節(jié)假日商場沒人,就連五一這樣的重大節(jié)日,賣場的銷售也都非常慘淡。我們認(rèn)為,這與小家電產(chǎn)品在網(wǎng)絡(luò)上銷售的火爆有一定的關(guān)系。所以,傳統(tǒng)渠道商面臨的是多重壓力,一方面賣場銷售業(yè)績下滑,各種費(fèi)用卻在大幅度地上漲;另一方面,廠家對(duì)我們的業(yè)績卻每年都在持續(xù)增長,還要面對(duì)網(wǎng)店的沖擊。令我們不解的是,現(xiàn)在即使我們這樣的傳統(tǒng)渠道商想去做電子商務(wù),廠家都不允許。所以我們很困惑,傳統(tǒng)渠道商如何獲得長足的發(fā)展。
編者:接到蘇立電話的當(dāng)時(shí),我還真的非常同情他,畢竟罰款10萬元,是真金白銀的要腰包。而且停止供貨3個(gè)月的損失,肯定對(duì)其年度的業(yè)績有較大的影響。但是靜下來想,其實(shí),客觀地說,廠家這樣做是正確的。傳統(tǒng)渠道商一直都在糾結(jié)網(wǎng)店對(duì)于他們的沖擊,但是背地里卻又給沒有授權(quán)的網(wǎng)店違規(guī)供貨。盡管這是為了業(yè)績“不得已而為之”,但從廠家管理的角度,規(guī)范市場也需要“揮淚斬馬謖”。如果不重罰違規(guī)竄貨的商家,網(wǎng)絡(luò)銷售更是會(huì)亂的一塌糊涂。
蘇立說的另一個(gè)問題,即廠家不讓傳統(tǒng)渠道商經(jīng)營網(wǎng)店的問題,我認(rèn)為,這正是規(guī)范網(wǎng)絡(luò)銷售的重要手段之一。畢竟傳統(tǒng)渠道商與專業(yè)的網(wǎng)商在做網(wǎng)絡(luò)經(jīng)營的水平上還是有很大差距的。從廠家的角度看,為了獲得快速的增長,廠家也會(huì)授權(quán)專業(yè)的網(wǎng)商運(yùn)作線上的銷售工作。因?yàn)椋€上的競爭同樣激烈,容不得半點(diǎn)喘息。
無論是傳統(tǒng)渠道商還是網(wǎng)絡(luò)經(jīng)銷商,都是廠家渠道的組成部分,短時(shí)間內(nèi)誰也不能取代誰。所以,我希望,為了品牌的長遠(yuǎn)發(fā)展,商有責(zé)任和義務(wù)協(xié)助廠家規(guī)范線上線下的渠道管理工作。
上海質(zhì)檢抽查電飯鍋產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定
2011年,上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局對(duì)上海市生產(chǎn)和銷售的電飯鍋產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行了專項(xiàng)監(jiān)督抽查。電飯鍋是列入國家強(qiáng)制性認(rèn)證產(chǎn)品(CCC)目錄的產(chǎn)品。截止3月底,上海市有效獲證生產(chǎn)企業(yè)共6家,本次抽查上海市生產(chǎn)企業(yè)6家,實(shí)際抽到產(chǎn)品的有5家,另有1家企業(yè)由于停產(chǎn)等原因未抽到樣品。
本次抽查了33批次產(chǎn)品,經(jīng)檢驗(yàn),不合格的為0批次。在這33批次產(chǎn)品中,上海市生產(chǎn)的產(chǎn)品7批次,其他省市生產(chǎn)的產(chǎn)品26批次。
篇9
首日里來到我實(shí)習(xí)所在的渝北區(qū)人民法院,畢竟xx年完工的建筑,這樣也頗覺新鮮的。它的地理方位離空港不遠(yuǎn),每日不經(jīng)意便可見飛機(jī)起降。既為新區(qū),雖少了幾分城區(qū)生活之便利,然多了份綠意清新,兼有早午自費(fèi)院餐之營養(yǎng)供應(yīng),于是每日工作狀態(tài)也自然顯得精神飽滿。這樣除卻早晚擠車上班之煩擾,余者也還算愜意了,故而每日工作心情也相應(yīng)愉悅許多。我被安排在了五樓的行政庭,歐式風(fēng)格的建筑里面的辦公室也是一式的現(xiàn)代氣息,惟新樓未及聯(lián)寬帶網(wǎng)稍顯美中不足。
許多事在第一次的感覺往往是最深刻而令你最難忘的。第一天及第一周上班的感受于我也大抵如此。對(duì)于自己的評(píng)價(jià)是一個(gè)字“拙”,而對(duì)于所從事的工作印象是兩個(gè)字“新鮮”。盡管實(shí)務(wù)與原來對(duì)法院工作的印象出入不大,但每當(dāng)具體操作一些書記員所做的日?,嵭脊ぷ鲿r(shí),還是頗覺有幾分新奇的,同時(shí)暴露了我在實(shí)際動(dòng)手能力方面的嚴(yán)重欠缺。這些事務(wù)如打印、復(fù)印、蓋章、登記新案、整理案卷及填寫送達(dá)回證等,乍看來如和尚撞鐘般的輕松且不入眼,而初來新手的生疏體驗(yàn)于我印象還是深刻的,如第一次接觸自動(dòng)釘書機(jī),那份新鮮快意還是如孩童般的。而生活不能只有坦途,經(jīng)歷亦非皆屬快意的,其中令人尷尬的不堪回顧的亦不屬少數(shù),如第一次打印判決書那次。先此之前打印文稿多采單面,所以以為這份判決書的打印亦屬之。于是就同樣采用了單面印刷,彼時(shí)的情形是打印1份復(fù)印15份而每份是7張紙,所幸那里的打印員中途發(fā)現(xiàn)及時(shí),才不致更大的損失,但這樣浪費(fèi)的紙張,業(yè)已使崇尚環(huán)保的我當(dāng)慮及其紙張所耗之林木時(shí),頗感罪孽深重的。汲取教訓(xùn),總結(jié)經(jīng)驗(yàn)后的我在后來的工作愈加地覺得輕車熟路起來,或許不破不立的道理就在此間吧。
不知覺卻入了這實(shí)習(xí)過半的日子,渝地的秋有幾分“余夏”的味道,天氣依舊悶悶的,讓人透不過氣來,不經(jīng)意間,知了此時(shí)也卻不知趣地伴著聒耳起來,甚或有些心慌。所幸的是,原來的對(duì)于前陣子的熱可能要撐到10月的種種顧慮,連同這熱的本身,卻不期被新近的雨時(shí)斷時(shí)續(xù)地沖散開去了。無疑,彼時(shí)的天是灰灰的,間或地時(shí)時(shí)淋些雨下來。于尋常人所感則似應(yīng)痛楚傷感呵。而于熱悶中掙扎的我而言,卻是如海水湛藍(lán)般的清新感受。既然天遂人意,實(shí)習(xí)工作若不加倍用心,精心著意于它,似乎就有仵這好韶光了。持著這樣的念頭,做起工作來自然也利落了許多。論及工作,新近的亦無甚新奇,除了先前業(yè)已述及的例行諸項(xiàng)文案工作,余下新增的項(xiàng)目便是填了些附上送達(dá)回證的掛號(hào)信及做了移送上訴函登記。
臨到終了時(shí)候,憶著實(shí)習(xí)兩個(gè)月間的日子,倍覺充實(shí)許多,收獲頗豐。
二、實(shí)習(xí)所得
實(shí)習(xí)中所得有可分為兩方面:一為法內(nèi)的,一為法外的。
法內(nèi)的所得,即法的實(shí)踐中所習(xí)得的生活中的法律適用。總體上本人在實(shí)習(xí)中所做的工作性質(zhì)是書記員的輔助工作。具體而言,有登記立案、填庭前準(zhǔn)備的送達(dá)回證(內(nèi)含給原告的合議庭通知書、傳票(2份)、舉證通知書,給被告的應(yīng)訴通知書(2份)、舉證通知書、權(quán)利義務(wù)告知書、傳票(2份)、法定代表身份證明、起訴狀副本,給第三人的參加訴訟通知書(2份)、舉證通知書權(quán)利義務(wù)告知書、傳票(2份)、法定代表人證明、起訴狀副本)、到二樓接待中心或到一樓送達(dá)處給當(dāng)事人送達(dá)回證(含開庭前準(zhǔn)備和宣判后兩類)、粘判決書并給之加蓋騎縫章和與原件核對(duì)無異章、給判決書或裁定書到七樓蓋院章、裝訂案卷存檔及編卷宗目錄、登記所結(jié)案件在冊(cè)、到研究室送交上訴或移送管轄案件、復(fù)印打印各類文書等事項(xiàng)。以上事務(wù)中內(nèi)括需2份的,皆意為其中一份需要備案。
篇10
關(guān)于保證期間,目前一種定義為:保證人與債權(quán)人約定的或法律規(guī)定的,當(dāng)債務(wù)人不履行債務(wù)時(shí),保證人對(duì)債務(wù)人之債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任的期間。本人認(rèn)為此種定義不妥1) 依該定義保證人都是在保證期間承擔(dān)保證責(zé)任的,但其無法對(duì)實(shí)踐中保證人基于法院的判決而最終承擔(dān)保證責(zé)任的時(shí)間都是在保證期間之后的這樣一個(gè)事實(shí)作出解釋,也無法將這樣一種事實(shí)包含于其定義之中。2) 此定義沒有說明保證人在保證期間內(nèi)是怎樣承擔(dān)其保證責(zé)任的,是在債務(wù)人不履行債務(wù)的情況下保證人主動(dòng)去向債權(quán)人履行保證責(zé)任呢還是在債權(quán)人要求下才承擔(dān)保證責(zé)任呢,依此定義不管是主動(dòng)履行也好還是被債權(quán)人要求履行保證責(zé)任也好,似乎保證人都必須在此期間將其保證責(zé)任履行完畢,但實(shí)踐中保證人會(huì)以種種事由拒絕承擔(dān)保證責(zé)任,直至債權(quán)人起訴至法院判決其最終承擔(dān)保證責(zé)任為止。這樣的話,有沒有該定義下的保證期間,都不能杜絕保證人對(duì)保證責(zé)任的拒絕承擔(dān),那么此定義下的保證期間又有何作用呢?這都是對(duì)保證期間概念及性質(zhì)的誤解所帶來的困擾。因此這樣一種定義僅僅是保證期間的字面含義,不能準(zhǔn)確說明保證期間的特定含義特征及作用。
(一) 保證期間的概念
人們?cè)诮o一個(gè)概念下定義的時(shí)候總是先入為主,按照自己的理解想當(dāng)然地給其下定義,然后根據(jù)定義推出其特點(diǎn),進(jìn)而又給其定性,殊不知在其給概念下定義的時(shí)候已經(jīng)將概念限定在其主觀范圍之內(nèi),當(dāng)然不能全面而準(zhǔn)確地給概念下定義。本人的做法是先從不同角度分析所要定義的概念的特點(diǎn),然后綜合這些特點(diǎn)進(jìn)行抽象提煉最后得出該概念的定義,分析過程如下:
1)要理解保證期間的特點(diǎn),離不開對(duì)保證的準(zhǔn)確理解,《擔(dān)保法》第6條規(guī)定:“本法所稱保證,是指保證人和債權(quán)人約定,當(dāng)債務(wù)人不履行債務(wù)時(shí),保證人按照約定履行債務(wù)或者承擔(dān)責(zé)任的行為。”該條中的“按照約定”,當(dāng)然也包括按約定的保證期間。
由《擔(dān)保法》第6條可以推出保證期間的兩個(gè)特點(diǎn):一個(gè)特點(diǎn)是保證期間是保證人與債權(quán)人約定的,而不是保證人與債務(wù)人約定的,明確此點(diǎn)的意義在于債權(quán)人對(duì)其能向保證人提出承擔(dān)保證責(zé)任請(qǐng)求的時(shí)間范圍是明知的,既然是明知,那么過了該期間而不提出請(qǐng)求的,唯一合理的推定就是棄權(quán)。當(dāng)然,在對(duì)擔(dān)保期間未約定或約定不明的情況下,也有《擔(dān)保法》規(guī)定的法定保證期間。另一個(gè)特點(diǎn)是只有在債務(wù)人不履行債務(wù)的前提下,保證人才有在保證期間履行債務(wù)或者承擔(dān)責(zé)任的可能。明確這點(diǎn)的意義在于:保證期間內(nèi),保證人承擔(dān)保證責(zé)任并不具有必然性,保證期間內(nèi)其承擔(dān)保證責(zé)任的前提條件之一是債務(wù)人不履行債務(wù),只有在這時(shí)保證人才有承擔(dān)保證責(zé)任的可能。
按《擔(dān)保法》第18條規(guī)定:連帶責(zé)任保證的主債務(wù)人在主合同規(guī)定的債務(wù)履行期屆滿沒有履行債務(wù)的,債權(quán)人可以要求債務(wù)人履行債務(wù),也可以要求保證人在其保證范圍內(nèi)承擔(dān)保證責(zé)任。由此規(guī)定可以看出,即使在債務(wù)人不履行債務(wù)的情況下,保證人在保證期間內(nèi)也并不是必然承擔(dān)保證責(zé)任,是否要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任債權(quán)人有選擇權(quán),這里的選擇權(quán)并不是說擇一的選擇權(quán),即并非選擇了要求債務(wù)人履行債務(wù)就不能再要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任了,這里的選擇權(quán)是說當(dāng)債務(wù)人不履行債務(wù)時(shí),債權(quán)人可能基于某種理由先要求債務(wù)人履行債務(wù),而不是必然或立即向保證人主張權(quán)利,只有在明確知道債務(wù)人不能履行或拒不履行時(shí)再要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任,也就是說保證人在保證期間承擔(dān)保證責(zé)任的可能性不僅取決于債務(wù)人是否履行了債務(wù),而且還取決于保證期間內(nèi)債權(quán)人是否向其提出了承擔(dān)保證責(zé)任的請(qǐng)求。而在一般保證的情況下,基于保證人的先訴抗辯權(quán)的存在,保證人在保證期間承擔(dān)保證責(zé)任的可能性取決于債務(wù)人不履行債務(wù)以及債權(quán)人是否在保證期間內(nèi)向債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁。
2)從《擔(dān)保法》第25、第26條來看保證期間的特點(diǎn)?!稉?dān)保法》第25條規(guī)定,在一般保證的情況下,在合同約定的保證期間和法律規(guī)定的保證期間,債權(quán)人未對(duì)債務(wù)人提起訴訟或者申請(qǐng)仲裁的,保證人免除保證責(zé)任。第26條規(guī)定,在合同約定的保證期間和法律規(guī)定的保證期間,債權(quán)人未要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的,保證人免除保證責(zé)任。從這兩條我們可以看出,保證期間內(nèi),債權(quán)人不作出一定的行為,即在一般保證情況下債權(quán)人不對(duì)債務(wù)人起訴或申請(qǐng)仲裁,在連帶保證中債權(quán)人未要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的,期間屆滿后將直接導(dǎo)致其喪失向保證人主張保證責(zé)任的權(quán)利。因此保證期間是這樣一種期間,對(duì)債權(quán)人來說,是其必須在該期間內(nèi)做出一定行為的期間,不作為的話,期間屆滿將導(dǎo)致其喪失請(qǐng)求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的權(quán)利;而對(duì)保證人來說,是其需等待債權(quán)人作出一定行為的期間,一旦債權(quán)人做出該行為,保證人不得借保證期間來主張免除責(zé)任。
3)從保證人約定保證期間的目的來看保證期間。保證屬于人的擔(dān)保,與抵押等物的擔(dān)保不同,物的擔(dān)保產(chǎn)生的擔(dān)保權(quán)往往都具有物權(quán)的性質(zhì),當(dāng)債務(wù)人不履行債務(wù)時(shí),債權(quán)人都會(huì)直接對(duì)擔(dān)保物行使擔(dān)保物權(quán),以擔(dān)保物折價(jià)或拍賣變賣所得價(jià)款優(yōu)先受償,清償完畢后,擔(dān)保人一般都能很快從擔(dān)保責(zé)任中解脫出來,可以說對(duì)物的擔(dān)保約定擔(dān)保期間意義及作用不大。而保證則不同,其是以保證人的信用為保證的,債務(wù)人不履行債務(wù),債權(quán)人對(duì)保證人不能直接就其財(cái)產(chǎn)拍賣變賣所得價(jià)款受償,仍得請(qǐng)求保證人去履行債務(wù)或承擔(dān)責(zé)任,債權(quán)人對(duì)保證人的權(quán)利仍為債權(quán)屬性?;趥鶛?quán)不如物權(quán)實(shí)現(xiàn)的便利,一般情況下,債務(wù)人不履行債務(wù)時(shí),如果債務(wù)人資金實(shí)力雄厚或是債務(wù)人另外還提供了物的擔(dān)保,債權(quán)人一般都會(huì)首先向債務(wù)人主張權(quán)利或?qū)?dān)保物行使其擔(dān)保物權(quán)。這樣一來,保證人對(duì)其是否會(huì)被要求承擔(dān)保證責(zé)任以及何時(shí)(尤其是介入了債權(quán)人對(duì)債務(wù)人訴訟的因素)會(huì)被要求承擔(dān)保證責(zé)任都是十分不明確的,這也必將導(dǎo)致保證人不能斷定其何時(shí)能從其保證責(zé)任中解脫出來,保證人時(shí)刻都有被債權(quán)人要求承擔(dān)保證責(zé)任的可能,這樣對(duì)保證人是不公平的,因?yàn)楸WC人不能確定何時(shí)能從保證責(zé)任中脫離出來就不能對(duì)其自身的經(jīng)濟(jì)活動(dòng)作出合理的安排,畢竟有項(xiàng)保證債務(wù)尚未確定。例如,債權(quán)人基于債務(wù)人實(shí)力雄厚以及長期合作關(guān)系而在債務(wù)人不履行債務(wù)時(shí)將主要精力放在與債務(wù)人的交涉上,經(jīng)過長期交涉達(dá)不成債務(wù)履行協(xié)議的又開始進(jìn)行訴訟,而訴訟又隨著各種法定事由中止或中斷,時(shí)間被無限期地延長,訴訟結(jié)束前,債權(quán)人發(fā)現(xiàn)有債務(wù)人財(cái)產(chǎn)狀況惡化等情況,且可能威脅其債權(quán)的實(shí)現(xiàn),這時(shí)便反過頭來對(duì)保證人主張權(quán)利,而向保證人主張權(quán)利的時(shí)間可能離債務(wù)人不履行債務(wù)的時(shí)間已經(jīng)相去甚遠(yuǎn),保證人處于相當(dāng)被動(dòng)的狀態(tài),因?yàn)檫@段時(shí)間內(nèi)保證人可能會(huì)有別的經(jīng)濟(jì)活動(dòng)安排或是有財(cái)產(chǎn)上的增減變化等情況,對(duì)長期未確定而又突然而至的債權(quán)人主張,保證人實(shí)在是有苦難言,對(duì)保證人來說是十分不公平的。
為避免自己隨時(shí)被要求承擔(dān)保證責(zé)任,也為督促債權(quán)人盡快向自己主張權(quán)利以便盡快從保證責(zé)任中解脫出來從而方便對(duì)今后經(jīng)濟(jì)活動(dòng)的安排,保證人通常會(huì)與債權(quán)人約定一個(gè)保證期間,在此期間內(nèi),債權(quán)人必須就是否要求保證人承擔(dān)保證人作出明確提示,逾期不提示的,保證人不再承擔(dān)保證責(zé)任。而對(duì)此保證期間,債權(quán)人也是明知的,既然是明知,為何不在此期間向保證人主張權(quán)利,唯一合理的推定就是其放棄了向保證人請(qǐng)求承擔(dān)保證責(zé)任的權(quán)利。這也解釋了為什么在對(duì)保證期間沒有約定或約定不明時(shí)法律所規(guī)定的保證期間僅僅為6個(gè)月,期間太長對(duì)保證人不利。
綜上所述,保證期間有如下幾個(gè)特點(diǎn):1)保證期間是由保證人與債權(quán)人約定的或是在沒有約定或約定不明情況下由法律規(guī)定的;2)保證期間內(nèi)保證人承擔(dān)保證責(zé)任不具有必然性;3)保證人可能在保證期間承擔(dān)保證責(zé)任基于兩個(gè)條件的成就:一是債務(wù)人不履行保證債務(wù);二是債權(quán)人在保證期間內(nèi)向保證人請(qǐng)求其承擔(dān)保證責(zé)任或是債權(quán)人對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁;4)保證期間的作用在于對(duì)債權(quán)人是否要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任或是債權(quán)人是否對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁之事實(shí)狀態(tài)的確定,而并不必然導(dǎo)致保證人對(duì)其保證責(zé)任的最終承擔(dān),即債權(quán)人是否有要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的行為或是否向債務(wù)人提起了訴訟或申請(qǐng)了仲裁是保證期間內(nèi)所要確定的事實(shí),而一旦確定,保證人以后就不能再以保證期間為由主張免除保證責(zé)任,而至于保證人是否會(huì)最終承擔(dān)保證責(zé)任以及承擔(dān)多大范圍內(nèi)的保證責(zé)任則是保證合同訴訟時(shí)效范圍內(nèi)所要解決的問題,與保證期間再也沒有關(guān)系了。
現(xiàn)在便可以對(duì)保證期間的概念做個(gè)比較準(zhǔn)確的定義:保證期間就是保證人與債權(quán)人約定的或法律規(guī)定的一段期間,當(dāng)債務(wù)人不履行債務(wù)時(shí),債權(quán)人必須于該期間屆滿前向保證人提出承擔(dān)保證責(zé)任的請(qǐng)求(連帶保證情況下)或是向債務(wù)人提起訴訟或仲裁(一般保證情況下),該期間屆滿債權(quán)人仍未請(qǐng)求保證人承擔(dān)保證責(zé)任或?qū)鶆?wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,視為債權(quán)人放棄要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的權(quán)利,保證人之保證責(zé)任自該期間屆滿后免除;如在該期間屆滿前債權(quán)人向保證人提出了承擔(dān)保證責(zé)任的請(qǐng)求或是向債務(wù)人提起了訴訟或仲裁,那么保證人不能再以保證期間未由主張免除保證責(zé)任。
(二) 保證期間的性質(zhì)
要弄清保證期間的性質(zhì),必須先澄清其與除斥期間、訴訟時(shí)效的關(guān)系
1)保證期間與除斥期間的聯(lián)系與區(qū)別。聯(lián)系:兩者都表現(xiàn)在一定的權(quán)利經(jīng)過一定期間而未行使即歸消滅,二者都是不變期間。區(qū)別:1)保證期間既有約定的又有法定的,而除斥期間只有法定的。2)即使是法定保證期間,也與除斥期間有所不同:a.除斥期間一般適用于形成權(quán),如追認(rèn)權(quán)、撤消權(quán)等,其目的在于撤消已經(jīng)成立的民事行為,或確認(rèn)效力未定的民事行為。而保證期間適用的仍是請(qǐng)求權(quán)。B除斥期間屆滿而權(quán)利人未行使權(quán)利其后果是權(quán)利人實(shí)體權(quán)利的消滅,導(dǎo)致對(duì)已成立民事行為效力的認(rèn)定而使權(quán)利人承擔(dān)民事義務(wù),如享有合同撤消權(quán)的權(quán)利人在一年內(nèi)不行使撤消權(quán)則原合同仍繼續(xù)有效并對(duì)其有約束力;或否定效力未定的民事行為,如相對(duì)人可以催告被人在一個(gè)月內(nèi)對(duì)效力未定的合同予以追認(rèn),一個(gè)月內(nèi)被人未追認(rèn)的,被人不對(duì)人的行為承擔(dān)責(zé)任。而保證期間屆滿債權(quán)人未行使請(qǐng)求權(quán)或未對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,其后果是債權(quán)人喪失請(qǐng)求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的權(quán)利,對(duì)保證人來說是保證責(zé)任的免除,而非對(duì)一定民事行為效力的肯定或否定。同樣都是除權(quán),但除權(quán)的內(nèi)容與法律后果卻是不同的,不能僅從實(shí)體權(quán)利的消滅的表面形式上去認(rèn)定保證期間屬于除斥期間。
2)保證期間與訴訟時(shí)效的聯(lián)系與區(qū)別。聯(lián)系:兩者都表現(xiàn)為一定權(quán)利經(jīng)過一定期間不行使即歸消滅,都適用于請(qǐng)求權(quán)。區(qū)別:A保證期間既有法定的也有約定的,而訴訟時(shí)效只有法定的,不能約定;B保證期間的債權(quán)人享有的請(qǐng)求權(quán)是針對(duì)保證人的請(qǐng)求權(quán),而非針對(duì)法院的請(qǐng)求權(quán);而訴訟時(shí)效中的債權(quán)人享有的請(qǐng)求權(quán)是針對(duì)法院的,是請(qǐng)求法院保護(hù)其權(quán)利的請(qǐng)求權(quán)。C保證期間屆滿而債權(quán)人未要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任或未對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,債權(quán)人喪失請(qǐng)求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的權(quán)利。而訴訟時(shí)效屆滿債權(quán)人未向法院請(qǐng)求保護(hù)其債權(quán)的,債權(quán)人喪失請(qǐng)求法院保護(hù)其債權(quán)的權(quán)利。D保證期間內(nèi)債權(quán)人向保證人主張了權(quán)利時(shí),保證合同的訴訟時(shí)效從主張權(quán)利之才開始起算。如果保證期間已過債權(quán)人仍未向保證人主張權(quán)利,則意味著債權(quán)人對(duì)其享有的要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的權(quán)利的放棄,也就不存在訴訟時(shí)效的問題。因此,保證期間對(duì)保證合同之訴訟時(shí)效具有直接的影響,二者是兩個(gè)完全不同的概念。
3)有種觀點(diǎn)認(rèn)為,保證期間是這樣一種期間,即該期間屆滿的法律效果是導(dǎo)致保證責(zé)任向?qū)硐麥?,保證人不再對(duì)此后產(chǎn)生的任何債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任。也就是說保證期間屆滿解除了保證人的將來義務(wù),保證人只需對(duì)已經(jīng)確定發(fā)生的債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任。該觀點(diǎn)的核心意思有二:1)保證期間是保證人承諾只對(duì)該期間發(fā)生的債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任的期間;2)保證期間是從時(shí)間維度限定保證范圍。
本人認(rèn)為此種觀點(diǎn)不妥,理由如下:1)將保證期間理解為保證人承諾只對(duì)該期間內(nèi)發(fā)生的債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任的期間,似乎將保證期間理解為《擔(dān)保法》第14條的規(guī)定“就一定時(shí)期內(nèi)連續(xù)發(fā)生的借款合同或者某項(xiàng)商品交易保證人可以與債權(quán)人在最高債權(quán)額限度內(nèi)進(jìn)行協(xié)商訂立保證合同”中的“一定時(shí)期”,然而《擔(dān)保法》第14條雖然規(guī)定了保證人可約定就一定時(shí)期內(nèi)(即該觀點(diǎn)所認(rèn)為的保證期間)債權(quán)人與債務(wù)人發(fā)生的債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任,但要滿足兩條限制條件,一是有最高債權(quán)額的限度,二是保證的對(duì)象必須是連續(xù)發(fā)生的借款合同或連續(xù)的某項(xiàng)商品交易,如果不滿足這兩個(gè)條件,保證人還是要就單個(gè)主合同分別訂立保證合同。而上述觀點(diǎn)把保證期間理解為保證人承諾只對(duì)該期間內(nèi)發(fā)生的債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任的期間似乎是要超越《擔(dān)保法》第14條的規(guī)定,其后果可能會(huì)加重保證人責(zé)任,因?yàn)橐粵]有最高債權(quán)額的限制,保證人可能承擔(dān)天文數(shù)字的保證責(zé)任,二是沒有保證標(biāo)的種類的限制,可能會(huì)導(dǎo)致保證人在一定時(shí)期內(nèi)既承擔(dān)借款合同又承擔(dān)商品交易或是其他種類合同的保證責(zé)任。這都是混淆保證期間與保證范圍所帶來的不利后果 2)在沒有《擔(dān)保法》第14條的情況下,保證人與債權(quán)人一般只就單個(gè)合同約定保證責(zé)任并約定保證期間,按上述觀點(diǎn),即使保證期間已過,保證人仍要就此合同承擔(dān)保證責(zé)任,那么訂立保證期間的意義何在,約不約定都會(huì)導(dǎo)致保證人對(duì)保證責(zé)任的承擔(dān)。該觀點(diǎn)有意把保證期間過后的債務(wù)排除在保證人保證責(zé)任之外,實(shí)在是沒有必要,因?yàn)楸WC期間是從屬于保證范圍的,是就保證范圍內(nèi)的事項(xiàng)在一定時(shí)間內(nèi)承擔(dān)保證責(zé)任,保證期間之后的債務(wù)勢(shì)必超出原保證范圍之外,當(dāng)然不能要求保證人在保證期間內(nèi)承擔(dān)保證責(zé)任,除非得到保證人的同意或另訂保證合同。3)此種觀點(diǎn)旨在限制保證人的保證范圍,但卻造成了保證期間與保證范圍的混亂,干涉了本不該由其干涉的保證范圍的職能。照該觀點(diǎn),保證期間似乎有與保證范圍相同的功能,約定了保證期間就不必在約定保證范圍了,然而保證范圍是就保證人承擔(dān)的各種具體保證責(zé)任的明確,而保證期間是保證人就保證范圍內(nèi)的各具體保證責(zé)任將在多長時(shí)間內(nèi)承擔(dān)保證責(zé)任的明確,本質(zhì)上還是依附于保證范圍以保證范圍為基礎(chǔ)的,這就是為什么一旦有新債務(wù),非有保證人同意或另訂保證合同,保證人不對(duì)新生之債務(wù)承擔(dān)保證責(zé)任,因?yàn)樾聜黠@超出原保證范圍,既然超出原保證范圍,附屬于原保證范圍的保證期間又會(huì)起什么作用呢。從上可以看出,該觀點(diǎn)在解釋保證期間的性質(zhì)時(shí)造成了與保證范圍的混亂,因此是不可取的。
4)通過對(duì)上述關(guān)系的澄清,我們已明確保證期間的性質(zhì)既非除斥期間也非訴訟時(shí)效,更不是一種用于限制保證范圍的期間。其實(shí)在給保證期間下定義的過程中,我們就已經(jīng)能夠看出保證期間在連帶保證情況下實(shí)為一種提示期間,即債權(quán)人必須在保證期間提示保證人去承擔(dān)保證責(zé)任(在一般保證下,對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁視為向保證人提示),如果逾期不提示的,則視為對(duì)保證債權(quán)的放棄,保證人免責(zé)。提示的法律效果并不會(huì)直接導(dǎo)致保證人對(duì)保證責(zé)任的最終承擔(dān),而只是表明債權(quán)人未放棄其保證債權(quán),對(duì)保證人來說其不得再以保證期間為由主張免除保證責(zé)任。這就是保證期間的性質(zhì)。
在這里,有必要對(duì)上述“在一般保證下,對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁視為向保證人提示”進(jìn)行解釋。保證期間是保證人與債權(quán)人約定的,按理說只有債權(quán)人在保證期間內(nèi)向保證人主張保證責(zé)任才產(chǎn)生保證期間的法律效果,即明確債權(quán)人非放棄對(duì)保證人主張權(quán)利以及保證人不得再以保證期間為由主張免責(zé)。但在一般保證情況下,保證人享有先訴抗辯權(quán),債權(quán)人未對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,債權(quán)人請(qǐng)求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的,保證人可拒絕債權(quán)人的請(qǐng)求。為防對(duì)債務(wù)人的訴訟判決生效時(shí)間晚于保證期間而帶來保證人借超過保證期間主張免責(zé),《擔(dān)保法》第25條第2款規(guī)定在合同約定的保證期間或法律規(guī)定的保證期間內(nèi),債權(quán)人未對(duì)債務(wù)人提起訴訟或者申請(qǐng)仲裁的,保證人免除保證責(zé)任,其反面意思是,如果債權(quán)人在保證期間內(nèi)向債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,保證人就不能再借口對(duì)債務(wù)人的訴訟判決生效時(shí)間晚于保證期間而拒絕承擔(dān)保證責(zé)任,其效果與債權(quán)人向保證人主張權(quán)利是一樣的,因此本人將向債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁視為向保證人提示,而這僅僅是視為。關(guān)于這點(diǎn)在后面對(duì)《擔(dān)保法》第25條之評(píng)析中會(huì)有詳細(xì)論述。
(三)需要澄清的幾個(gè)問題
1)保證期間應(yīng)該是可變期間還是不變期間。依據(jù)《擔(dān)保法》第25條規(guī)定:債權(quán)人已提起訴訟或者申請(qǐng)仲裁的,保證期間適用訴訟時(shí)效中斷的規(guī)定。該法條看將保證期間當(dāng)作可變期間。而依據(jù)《擔(dān)保法解釋》第31條規(guī)定:保證期間不因任何事由發(fā)生中斷、中止、延長的法律后果。該解釋已明確表明保證期間無論是一般保證還是連帶保證,無論是法定保證期間還是約定保證期間,都不因任何事由而中斷、中止、延長,對(duì)《擔(dān)保法》第25條關(guān)于保證期間適用時(shí)效中斷進(jìn)行了徹底的否定。本人認(rèn)為《擔(dān)保法解釋》較正確地理解了保證期間的性質(zhì)。理由如下:1)保證期間是債權(quán)人必須向債務(wù)人要求承擔(dān)保證責(zé)任或向債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的期間,大多數(shù)情況下由保證人與債權(quán)人約定,只有在少數(shù)沒有約定或約定不明確的情況下才由法律規(guī)定保證期間的長短。保證期間在約定的情況下充分體現(xiàn)了當(dāng)事人的訂約自由,保證期間的長短完全是保證人與債權(quán)人雙方自愿協(xié)商的結(jié)果,一旦約定,非經(jīng)保證人與債權(quán)人協(xié)商變更,當(dāng)事人以外的任何人都無權(quán)去中斷、中止或延長約定的保證期間,法律也不應(yīng)當(dāng)去干涉當(dāng)事人的這種訂約自由,并應(yīng)充分尊重當(dāng)事人的在保證合同中對(duì)保證期間的約定,不得任意規(guī)定保證期間可因法定事由而去中止、中斷或延長。2)即使是由法律所規(guī)定的保證期間也僅僅是在當(dāng)事人對(duì)保證期間沒有約定或約定不明的情況下才予以適用,實(shí)為一種補(bǔ)充救濟(jì)方式,以避免在對(duì)保證期間無約定或約定不明的情況下保證人承擔(dān)無限期或期限不明之保證責(zé)任。我們不能因?yàn)榉伤?guī)定的保證期間沒有干涉當(dāng)事人之間的定約自由就認(rèn)為法律所規(guī)定的保證期間可以中斷中止或延長,因?yàn)榉梢?guī)定保證期間的宗旨就是為了保護(hù)保證人的利益,既然都是為了保護(hù)保證人利益,為何在規(guī)定一個(gè)較短的保證期間之后又規(guī)定該期間可因某種事由而中止、中斷和延長進(jìn)而加重保證人責(zé)任呢,這不是自相矛盾嗎,因此即使是法律規(guī)定的保證期間也不能認(rèn)為是可變期間。3)將保證期間視為不變期間也符合保證期間的性質(zhì),前已論述保證期間實(shí)為一種提示期間,而提示的法律效果如前所述只是確定債權(quán)人是否放棄對(duì)保證人主張權(quán)利這一事實(shí)以及保證人不得再以保證期間為由主張免責(zé),而并不產(chǎn)生保證人對(duì)保證責(zé)任最終承擔(dān)的法律效果,既然該期間只是為了確定一種事實(shí)狀態(tài)以及去除一項(xiàng)免責(zé)事由,而非確定保證責(zé)任的最終承擔(dān),那么何以要去中止中斷或延長該期間呢。綜上所述,保證期間應(yīng)為不變期間而非可變期間。
2)對(duì)《擔(dān)保法》第25條之澄清?!稉?dān)保法》第25條規(guī)定:“一般保證情況下債權(quán)人在合同約定的保證期間或法律規(guī)定的保證期間內(nèi)對(duì)債務(wù)人提起訴訟或者申請(qǐng)仲裁的,保證期間適用訴訟時(shí)效中斷的規(guī)定”。對(duì)該規(guī)定如何理解?a.這首先需要探求該條立法的本意。我們都知道在一般保證情況下,債權(quán)人在債務(wù)履行期屆滿后而未對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁便直接要求保證人承擔(dān)責(zé)任的,保證人可以拒絕,保證人只對(duì)債務(wù)人被起訴后并被強(qiáng)制執(zhí)行其財(cái)產(chǎn)后仍不能清償?shù)膫鶛?quán)部分承擔(dān)保證責(zé)任,即保證人享有先訴抗辯權(quán)。問題在于如果在約定或法定的保證期間內(nèi),盡管債權(quán)人已經(jīng)起訴債務(wù)人但就債務(wù)人不能清償?shù)牟糠秩匀徊荒茉诒WC期間內(nèi)確定的話,即判決生效時(shí)間發(fā)生在保證期間之后,則必然導(dǎo)致債權(quán)人在保證期間內(nèi)不能要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任,其結(jié)果是保證期間屆滿保證人免責(zé),這樣對(duì)債權(quán)人的來說是十分不公平的,因?yàn)槠洚吘挂呀?jīng)在積極主張其債權(quán)了,只是因?yàn)樵V訟的關(guān)系導(dǎo)致其不能在保證期間內(nèi)確定債務(wù)人不能清償?shù)膫鶛?quán)部分,并由此而不能要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任。可能是基于此種顧慮,《擔(dān)保法》第25條第二款才規(guī)定在一般保證情況下,債權(quán)人已提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,保證期間適用訴訟時(shí)效中斷的規(guī)定。b .但這又會(huì)帶來新的問題。例如:一份合同的履行期限為10月1日,保證人的保證期間到10月15日,由于是一般保證,當(dāng)履行期屆滿債務(wù)人不履行時(shí),基于保證人先訴抗辯權(quán)的存在,債權(quán)人必然對(duì)債務(wù)人提起訴訟,且其是在10月15日前即保證期間內(nèi)提起訴訟的,按《擔(dān)保法》第25條第二款自提起訴訟時(shí)起,保證期間中斷,重新起算,依據(jù)其規(guī)定的保證期間適用訴訟時(shí)效中斷的規(guī)定,再結(jié)合《擔(dān)保法解釋》第34條規(guī)定:一般保證的債權(quán)人在保證期間屆滿前對(duì)債務(wù)人提起訴訟或者申請(qǐng)仲裁的,從判決或者仲裁裁決生效之日起,開始計(jì)算保證合同的訴訟時(shí)效,由此可以得出保證期間從對(duì)債務(wù)人的判決或者仲裁裁決生效之日起重新起算,比如判決是在11月1日生效的,那么保證期間應(yīng)該從11月1日重新起算并延伸到11月15日,同時(shí)保證合同訴訟時(shí)效也從11月1日開始起算,這就導(dǎo)致保證期間與訴訟時(shí)效在11月1日至11月15日這段時(shí)間內(nèi)重合。那么如果債權(quán)人于11月15日后才請(qǐng)求保證人承擔(dān)保證責(zé)任的,由于保證期間已過,根據(jù)《擔(dān)保法》第25條第二款,保證人免除保證責(zé)任,但此時(shí)仍在保證合同訴訟時(shí)效期間之內(nèi),似乎債權(quán)人仍可請(qǐng)求法院強(qiáng)制保證人承擔(dān)保證責(zé)任,但基于保證期間已過,法院不會(huì)去支持債權(quán)人的此項(xiàng)請(qǐng)求,就是說即使在保證期間中斷的情況下,債權(quán)人仍需在重新起算的保證期間內(nèi)要求保證人承擔(dān)保證責(zé)任或?qū)ΡWC人直接起訴,債權(quán)人再一次受到保證期間的約束。
其實(shí),《擔(dān)保法》第25條根本不必去規(guī)定保證期間去適用訴訟時(shí)效的中斷。該條已經(jīng)規(guī)定了在合同約定的保證期間和法律規(guī)定的保證期間,債權(quán)人未對(duì)債務(wù)人提起訴訟或者申請(qǐng)仲裁的,保證人免除保證責(zé)任。反過來推,債權(quán)人在保證期間內(nèi)對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,保證人就不能以保證期間為由主張免除保證責(zé)任,保證人保證責(zé)任的承擔(dān)從此不再與保證期間掛鉤,既然保證期間內(nèi)債權(quán)人已經(jīng)以向債務(wù)人提起訴訟或仲裁的行為明確了保證人不能再借保證期間來主張免責(zé),那么何苦要去中斷保證期間,讓保證期間在訴訟判決生效時(shí)又重新起算進(jìn)而又給保證人一次借保證期間去主張免責(zé)的機(jī)會(huì)呢,這不是作繭自縛嗎?因此在一般擔(dān)保下,保證期間適用訴訟時(shí)效的中斷是不合理的。
正是因?yàn)槿绱?,《?dān)保法解釋》第31條規(guī)定:保證期間不因任何事由發(fā)生中斷、中止、延長的規(guī)定。第34條又規(guī)定:一般保證的債權(quán)人在保證期間屆滿前對(duì)債務(wù)人提起訴訟或者申請(qǐng)仲裁的,從判決或者仲裁裁決生效之日起,開始計(jì)算保證合同的訴訟時(shí)效。到這,不僅保證期間為不變期間已成定論,而且還在保證期間與保證合同的訴訟時(shí)效之間劃清了界限。依據(jù)《擔(dān)保法解釋》第34條規(guī)定,在一般保證情況下,只要債權(quán)人在保證期間屆滿之前對(duì)債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁的,那么保證期間的使命即已完成,即使對(duì)債務(wù)人的判決生效之日已超過保證期間,仍不影響債權(quán)人于判決生效之日起請(qǐng)求保證人承擔(dān)保證責(zé)任,保證人不能借保證期間已過而主張免責(zé),保證人是否最終承擔(dān)保證責(zé)任以及承擔(dān)多大范圍內(nèi)的保證責(zé)任,將在對(duì)債務(wù)人的判決或者仲裁裁決之日后通過保證人主動(dòng)履行或?qū)ΡWC人進(jìn)行訴訟的方式確定。另外,依此規(guī)定,也驗(yàn)證了本人在論及保證期間性質(zhì)時(shí)的“將債權(quán)人向債務(wù)人提起訴訟或申請(qǐng)仲裁視為向保證人提示承擔(dān)保證責(zé)任”的觀點(diǎn),因?yàn)樵摋l已規(guī)定了只要債權(quán)人在保證期間內(nèi)向債務(wù)人提起了訴訟或申請(qǐng)了仲裁,保證人就不能再借口保證期間已過來免除保證責(zé)任,這與連帶保證下債權(quán)人在保證期間只要向保證人請(qǐng)求承擔(dān)保證責(zé)任的,保證人就不得以保證期間已過而主張免除其保證責(zé)任的效果是一樣的。
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