導(dǎo)語：如何才能寫好一篇細(xì)胞核，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

可以這樣說，但不是全部的秘密都在細(xì)胞核里。細(xì)胞核有絕大部分DNA，細(xì)胞核是生命活動(dòng)的控制中心，可以說很多秘密都在那了。

細(xì)胞的秘密在細(xì)胞核里細(xì)胞核里有遺傳物質(zhì)DNA。遺傳物質(zhì)包含了指導(dǎo)，控制細(xì)胞的物質(zhì)和能量的一系列指令，所以細(xì)胞核是細(xì)胞的控制中心。

細(xì)胞核是細(xì)胞維持正常活動(dòng)的關(guān)鍵所在，所有遺傳物質(zhì)都存在細(xì)胞核內(nèi)比如控制遺傳的DNA，RNA。

細(xì)胞與細(xì)胞核相互依存，統(tǒng)一整體.細(xì)胞核是系統(tǒng)的控制中心，是遺傳信息庫，細(xì)胞代謝和遺傳的控制中心。細(xì)胞質(zhì)為細(xì)胞提供代謝場所.兩者缺一不可。

（來源：文章屋網(wǎng) ）

篇2

細(xì)胞核是真核細(xì)胞內(nèi)最大、最重要的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，是細(xì)胞遺傳與代謝的調(diào)控中心，是真核細(xì)胞區(qū)別于原核細(xì)胞最顯著的標(biāo)志之一。它主要由核膜、染色質(zhì)、核仁、核基質(zhì)等組成。

細(xì)胞核的主要構(gòu)造為核膜，是一種將細(xì)胞核完全包覆的雙層膜，可使膜內(nèi)物質(zhì)與細(xì)胞質(zhì)、以及具有細(xì)胞骨架功能的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)核纖層分隔開來。由于多數(shù)分子無法直接穿透核膜，因此需要核孔作為物質(zhì)的進(jìn)出通道。這些孔洞可讓小分子與離子自由通透；而如蛋白質(zhì)般較大的分子，則需要載體蛋白的幫助才能通過。

核運(yùn)輸是細(xì)胞中最重要的功能；基因表現(xiàn)與染色體的保存，皆有賴于核孔上所進(jìn)行的輸送作用。

篇3

[關(guān)鍵詞]體細(xì)胞；核移植；克隆；表觀遺傳重構(gòu)

[中圖分類號]Q819 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]2095-0616（2016）05-40-04

一直以來研究人員普遍認(rèn)為只有通過卵子和相互結(jié)合形成受精卵，隨著受精卵的不斷分化，最終才能發(fā)育成為一個(gè)新的生命，但在這個(gè)過程中，受精卵細(xì)胞同時(shí)也將逐漸地失去其發(fā)育成為完整后代的能力，把受精卵細(xì)胞具備發(fā)育成為完整個(gè)體的能力稱為全能性。體細(xì)胞核移植（somatic cell nuclear transfer，SCNT）技術(shù)的成功歸因于人們對細(xì)胞全能性的逐步認(rèn)識。核移植（NT）就是將動(dòng)物的體細(xì)胞或者早期胚胎卵裂球的細(xì)胞核，移植進(jìn)經(jīng)去核的發(fā)育成熟的卵母細(xì)胞的胞質(zhì)中或受精卵中，得到重構(gòu)的卵母細(xì)胞，然后通過重新激活，恢復(fù)其細(xì)胞分裂及分化，從而促使其發(fā)育成為與供體細(xì)胞的基因型完全相同的子代，這一技術(shù)也可稱為體細(xì)胞克隆技術(shù)。體細(xì)胞核移植技術(shù)最早是由德國的胚胎學(xué)家Spemann 1938年提出的，他起初提出這個(gè)理論，主要是為了研究細(xì)胞核全能性的機(jī)制以及在胚胎發(fā)育的過程中細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核的相互作用機(jī)理。直到1952年Briggs和King按照他的理論，首次成功地進(jìn)行核移植試驗(yàn)，他們首先將非洲爪蟾的卵子去除其細(xì)胞核，然后向其中移植進(jìn)其囊胚細(xì)胞核，從而得到了正常的后代。隨著胚胎工程技術(shù)的不斷進(jìn)步，人們先后以不同動(dòng)物的胚胎細(xì)胞等作為供體，不斷成功地培育出了各種克隆動(dòng)物，如克隆羊、克隆牛、克隆豬、克隆小鼠以及克隆家兔等。其中最具有標(biāo)志意義的是1997年Roslin、研究所的Wilmut等，首次在世界上報(bào)道了他們利用體細(xì)胞核移植技術(shù)，用成熟綿羊的體細(xì)胞（乳腺上皮細(xì)胞）作為核供體，成功地克隆出“多莉”羊，一下在全世界掀起了軒然大波。這一實(shí)驗(yàn)充分證明了高度分化的體細(xì)胞仍然具有全能性，人們可以利用體細(xì)胞，通過體細(xì)胞移植技術(shù)獲得基因型與供體細(xì)胞基因型基本相同的子代個(gè)體。成為了生物學(xué)以及遺傳學(xué)發(fā)展史上一個(gè)重要的里程碑事件。家兔是生物醫(yī)學(xué)研究中最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一。利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)克隆兔子是目前研究的熱點(diǎn)，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有十分誘人的應(yīng)用前景。而家兔被認(rèn)為是利用體細(xì)胞核移植技術(shù)難以成功克隆的哺乳動(dòng)物之一，直到2002年法國學(xué)者Patrick Chesne等用卵丘細(xì)胞作為核供體首次成功克隆了家兔，突破了家兔難以成功克隆的關(guān)鍵問題，為擴(kuò)大家兔在生物醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用研究提供了方法。應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)，2006年我國學(xué)者李善剛博士應(yīng)用成纖維細(xì)胞作為核供體成功地培育出克隆家兔，在此基礎(chǔ)上他又進(jìn)一步將轉(zhuǎn)基因技術(shù)與體細(xì)胞核移植技術(shù)結(jié)合起來，成功培育出了表達(dá)綠色熒光蛋白的克隆兔，將該項(xiàng)技術(shù)推向新的高度。

1體細(xì)胞核移植的主要方法

具體來講，體細(xì)胞核移植技術(shù)主要包括受體細(xì)胞的去核、核供體細(xì)胞的準(zhǔn)備與選擇、細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞融合、重組胚胎細(xì)胞的激活以及培養(yǎng)等步驟。

1.1受體細(xì)胞的選擇

在哺乳動(dòng)物體細(xì)胞核移植的實(shí)驗(yàn)中，可以作為受體的細(xì)胞主要有以下三種：（1）去核的受精卯；（2）去核的MⅡ期成熟卵母細(xì)胞；（3）去核的早期胚胎細(xì)胞，其中MⅡ期卵母細(xì)胞是目前采用較多的核移植受體細(xì)胞，因?yàn)樵谶@個(gè)時(shí)期，一方面該細(xì)胞體積較大，便于顯微操作；另一方面重組胚胎所需要的各種細(xì)胞因子在MⅡ卵母細(xì)胞質(zhì)中均存在，而且細(xì)胞營養(yǎng)成分充足。在細(xì)胞分裂過程中，結(jié)合在DNA上的各種細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)錄因子等從DNA螺旋軸上脫離下來，與此同時(shí)胞質(zhì)中的大量重組因子即可與DNA螺旋軸結(jié)合，從而促進(jìn)基因重組的發(fā)生。另外一方面，因?yàn)檫x擇合適卵齡的卵母細(xì)胞作為胞質(zhì)受體，對體細(xì)胞核移植是否能夠成功產(chǎn)生巨大的影響，故細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)間也特別重要，實(shí)驗(yàn)中一般多選擇培養(yǎng)40～44h，傳代4～6代的卵母細(xì)胞作為受體細(xì)胞。因?yàn)榇罅康膶?shí)驗(yàn)證明，傳代越多重組胚的囊胚率也越多。

1.2受體細(xì)胞去核的方法

先要對受體細(xì)胞進(jìn)行去核，才能進(jìn)行供體核的移植。受體細(xì)胞去核必須完全，如果去核不完全，一方面可能導(dǎo)致重組的胚胎細(xì)胞染色體形成非整倍體或多倍體從而使克隆直接失敗，另一方面也可能使卵母細(xì)胞產(chǎn)生異常分裂進(jìn)而發(fā)育受阻甚至可以導(dǎo)致胚胎的早期死亡從而使克隆最終失敗。所以是否完全使卵母細(xì)胞去核，是保證核移植所形成的新的胚胎細(xì)胞能否發(fā)育成為正常個(gè)體的前提條件。為了減少實(shí)驗(yàn)中的干擾因素，可以通過縮短體外操作的時(shí)間并快速而準(zhǔn)確的去除受體細(xì)胞核以避免孤雌發(fā)育。大體上受體細(xì)胞去核的方法可以分為兩種方法，即化學(xué)去核法和機(jī)械去核法。具體有以下幾種操作方法（1）盲吸法：這一方法的優(yōu)點(diǎn)是不用借助于其他的化學(xué)物質(zhì)，但此法耗費(fèi)時(shí)間較長、易影響細(xì)胞質(zhì)空間結(jié)構(gòu)故對卵母細(xì)胞損傷比較嚴(yán)重，所以技術(shù)要求較高，不同動(dòng)物去核率相差也較大，應(yīng)用較少；（2）半卵法：這個(gè)方法是應(yīng)用特制的卵母細(xì)胞切割刀，將卵母細(xì)胞切割成為兩個(gè)半卵，然后丟棄含有極體的那一半半卵細(xì)胞，用兩個(gè)不含極體的半卵細(xì)胞與供體細(xì)胞核進(jìn)行融合，構(gòu)建核移植胚胎。（3）化學(xué)試劑去核法：這種方法的原理是利用蔗糖或者脫羰秋水仙堿等化學(xué)試劑的作用，使受體細(xì)胞能夠自行排出第二極體，從而實(shí)現(xiàn)去核的目的，但目前還不清楚化學(xué)試劑是否對受體細(xì)胞造成損傷；（4）擠壓法及點(diǎn)壓法：此兩種方法均是利用固定管固定住細(xì)胞，使細(xì)胞染色于特定位置，然后擠壓透明帶，用去核針取出第一極體，再用熒光染料Hoechest33342染色后觀察其去核率。點(diǎn)壓法是擠壓法的改進(jìn)方法，優(yōu)點(diǎn)是對卵母細(xì)胞胞質(zhì)的損傷較小，在去核操作的過程中不用更換去核針，節(jié)省了時(shí)間，有效的提高了去核效率；（5）紡錘體探測技術(shù)：此法去除細(xì)胞核的方法是將卵母細(xì)胞放置于Spindle-view偏振光系統(tǒng)的倒置顯微鏡下，受體卵母細(xì)胞的紡錘體區(qū)域較其它部位明亮，從而清楚顯示其染色置，而后再用去核針通過顯微鏡下操作去核，以利于去核的操作準(zhǔn)確完全。（6）透明帶膨脹輔助去核法：此法是先用去核針吸入適量操作液后稍施正壓，使吸入的操作液平緩流出，推進(jìn)去核管，使透明帶逐漸膨脹，然后用去核針將細(xì)胞核取出，此法的優(yōu)點(diǎn)是縮短了去核操作的時(shí)間并且顯著地提高了去核操作后卵母細(xì)胞的生存率。（7）離心去核法：這個(gè)方法的原理是根據(jù)細(xì)胞質(zhì)的密度小于細(xì)胞核，通過離心的方法將沒有透明帶的細(xì)胞核甩向一側(cè)進(jìn)而脫離卵母細(xì)胞。該方法的缺點(diǎn)是必須去除透明帶，不利于之后核移植胚胎的發(fā)育。

1.3供體細(xì)胞選擇與核的移植

實(shí)驗(yàn)中可用于核供體的細(xì)胞很多，主要有胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）、卵丘細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、支柱細(xì)胞、細(xì)胞、乳腺細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞以及成纖維細(xì)胞等，其中最主要的是兩種：一是生殖細(xì)胞如卵丘細(xì)胞，二是胎兒或成年成纖維細(xì)胞。影響核移植成敗的一個(gè)重要因素是受體與供體細(xì)胞的細(xì)胞周期同步化發(fā)育，早期的研究認(rèn)為要使體細(xì)胞核移植成功必需使供體細(xì)胞處于GO期，獲得GO期細(xì)胞主要是通過兩種方法：選擇細(xì)胞類型或者人工誘導(dǎo)的方法。Inoue等研究人員在小鼠的核移植實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，移植的效率較大的受到供體細(xì)胞的細(xì)胞類型以及其基因型的影響。近年來許多科研人員通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)把沒有經(jīng)過休眠誘導(dǎo)的處于細(xì)胞周期中G1期、G2期以至于M期的細(xì)胞作為供體細(xì)胞進(jìn)行核移植也可以獲得成功。將供體細(xì)胞核移植進(jìn)入受體細(xì)胞的常用方法主要可分為融合法以及注射法兩類。其中融合法中目前最常用的是電融合的方法，這是因?yàn)殡娙诤系姆椒ň哂屑?xì)胞損害較小、可重復(fù)性好而且融合的效果較好等明顯的優(yōu)點(diǎn)，所以逐漸被廣大的研究人員所應(yīng)用。電融合方法的原理是通過細(xì)胞在強(qiáng)電場短時(shí)間的作用下，使細(xì)胞膜產(chǎn)生一過性的擊穿，當(dāng)電流使兩個(gè)相鄰的細(xì)胞膜接觸的區(qū)域發(fā)生擊穿時(shí)，兩側(cè)的細(xì)胞膜就可以在擊穿的瞬間發(fā)生接觸并融合成為一個(gè)細(xì)胞。注射法一般分為透明帶下注射和胞質(zhì)內(nèi)注射。透明帶下注射是把整個(gè)供核細(xì)胞注射至受體細(xì)胞卵周隙，這就需要在注射后還需使供體細(xì)胞與受體細(xì)胞進(jìn)行融合。胞質(zhì)內(nèi)注射一般是用壓電一陶瓷微注射系統(tǒng)，直接把供體核注入胞質(zhì)內(nèi)。

1.4卵母細(xì)胞的激活

因?yàn)槿鄙倭耸芫@一步驟，在以成熟的卵母細(xì)胞作為受體的核移植實(shí)驗(yàn)中，缺少了自然受精過程中受精卵的激活過程，所以必須進(jìn)行人工激活核移植后重構(gòu)的卵母細(xì)胞從而促使其進(jìn)一步分化發(fā)育。根據(jù)激活時(shí)期的不同，可分為移核前激活、移核時(shí)激活、移核后激活三種不同的時(shí)期。使卵母細(xì)胞激活的方法可以分為化學(xué)或者物理刺激的方法兩類。激活方法目前應(yīng)用較多的有鈣離子載體A23187激活和離子霉素激活、乙醇激活、蛋白質(zhì)合成抑制劑激活、氯化鍶激活、提取物激活、蛋白質(zhì)磷酸化抑制劑激活以及電脈沖激活、聯(lián)合激活等。雖然卵母細(xì)胞可以被以上的各種化學(xué)物質(zhì)以及物理刺激的方法激活，但是卻不可避免地在激活的同時(shí)也造成受體細(xì)胞一定程度的損害，影響胚胎的發(fā)育。所以，是否能夠盡快地探索出對卵母細(xì)胞損傷較小并且激活效率高的激活方法對體細(xì)胞核移植技術(shù)最終能否成功尤為重要。

2體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景

體細(xì)胞核移植技術(shù)作為細(xì)胞生物學(xué)及發(fā)育生物學(xué)領(lǐng)域取得的最偉大的成就之一，應(yīng)用前景必然是特別廣闊的甚至是我們一時(shí)無法估量的！其潛在的經(jīng)濟(jì)效益是十分巨大的，隨著這項(xiàng)技術(shù)的不斷發(fā)展、逐步完善，必將帶來生物學(xué)以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一場深刻變革。這項(xiàng)技術(shù)在生物學(xué)方面如在保護(hù)瀕危動(dòng)植物物種、新物種的培育、優(yōu)良畜種培育以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物生產(chǎn)方面前景十分廣闊。另外，這項(xiàng)技術(shù)在醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域同樣具有巨大的應(yīng)用潛力和發(fā)展前景。尤其在醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域，可能為機(jī)體損傷修復(fù)、器官移植乃至遺傳性疾病、老年性疾病的治療等打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，有著不可估量的作用，所以值得科研人員持續(xù)關(guān)注并為體細(xì)胞核移植技術(shù)的不斷完善發(fā)展付出不懈的努力。

篇4

【摘要】 目的 探索神經(jīng)酰胺（C2cer）影響人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖、凋亡和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）表達(dá)。方法 12.5、25 μmol/L的C2cer處理HT29細(xì)胞，用MTT法、流式細(xì)胞儀、激光共聚焦顯微鏡、Western印跡等方法檢測HT29細(xì)胞增殖、凋亡和PCNA表達(dá)。結(jié)果 以12.5、25 μmol/L的C2cer處理HT29細(xì)胞，細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞凋亡明顯增加，PCNA表達(dá)明顯降低，并呈劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論 C2cer可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，該效應(yīng)可能與下調(diào)PCNA表達(dá)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 HT29 細(xì)胞；神經(jīng)酰胺；增殖細(xì)胞核抗原；細(xì)胞凋亡

結(jié)腸癌是中老年人常見消化道惡性腫瘤之一，常規(guī)治療療效欠佳〔1〕。神經(jīng)酰胺（C2cer）是細(xì)胞膜組成成分，也是一種細(xì)胞凋亡中的常見第二信使分子，它參與調(diào)控機(jī)體細(xì)胞的分化、凋亡、生長停止、細(xì)胞因子合成及分泌、免疫反應(yīng)等病理生理過程〔2〕，與血液、神經(jīng)、消化、生殖等系統(tǒng)多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，它作為一種潛在的腫瘤細(xì)胞凋亡治療劑引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注〔3〕。C2cer使凋亡基因（Bax、Bad和Bid基因）表達(dá)水平增高，B細(xì)胞淋巴瘤/白血病2和xl（Bcl2和Bclxl）基因表達(dá)水平減弱，脂肪酸合成酶（Fas）蛋白的表達(dá)增加，p53蛋白的表達(dá)降低，誘導(dǎo)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞發(fā)生凋亡〔4，5〕。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA) 是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，其表達(dá)的程度和含量反映細(xì)胞增殖的活性，PCNA高表達(dá)者增殖力、侵襲力、轉(zhuǎn)移力均較強(qiáng)，腫瘤預(yù)后差〔6〕。為進(jìn)一步探討C2cer影響HT29癌細(xì)胞增殖的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)觀察C2cer 對HT29結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡以及PCNA表達(dá)影響，為C2cer抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡這一控制腫瘤新的策略提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 HT29結(jié)腸癌細(xì)胞株由第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院腫瘤科彭亦良博士惠贈(zèng)。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)、傳代。取指數(shù)期細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。C2cer為Sigma公司產(chǎn)品，用二甲基亞砜（DMSO）作溶劑；兔抗PCNA單克隆抗體和Cy3羊抗兔二抗，工作濃度為1∶150，Santan公司產(chǎn)品。免疫組化ABC試劑盒，北京中杉公司品。膜聯(lián)蛋白熒光素(AnnexinVFLUOS)凋亡試劑盒，德國寶靈曼公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 低濃度組：12.5 μmol/L的C2cer處理HT29細(xì)胞，高濃度組：25 μmol/L的C2cer處理HT29細(xì)胞，對照組：不含C2cer的DMSO處理組。

1.2.2 MTT檢測 96孔板中每孔加100 μl的2×104/ml HT29細(xì)胞，預(yù)培養(yǎng)24 h；每孔加100 μl經(jīng)二倍遞減稀釋的C2cer，再培養(yǎng)24 h，每組平行3個(gè)復(fù)孔。加50 g/L MTT試劑20 μl，培養(yǎng)4 h，棄上清160 μl，加200 μl DMSO，在MODEL 450酶聯(lián)儀(BIORAD)上測492、630 nm雙波長的OD值，繪制生長曲線。

1.2.3 細(xì)胞凋亡檢測 按試劑盒說明書進(jìn)行。取約1×106細(xì)胞，PBS洗滌后離心5 min，棄盡上清，重懸于100 μl AnnexinVFLUOS標(biāo)記緩沖液(1 000 μl溶液Ⅲ中預(yù)先加入20 μl AnnexinVFLUOS單抗及20 μl 50 μg/ml PI)中，室溫避光放10 min，加0.4 ml的溶液Ⅲ，上機(jī)檢測。

1.2.4 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測PCNA表達(dá) 將多聚賴氨酸包被過的無菌蓋玻片置于培養(yǎng)瓶內(nèi)，常規(guī)培養(yǎng)12 h制作細(xì)胞爬片。取細(xì)胞爬片，4%多聚甲醛室溫固定30 min后用0.3%甲醇H2O2封閉非特異性15 min，接著用含1%血清白蛋白(BSA)、0.5%苯基醚(TritonX100)的PBS緩沖液孵育打孔20 min，然后用含5% 羊血清的PBS液孵育封閉20 min，再加1∶150的PCNA抗體，室溫2 h后4℃過夜，最后經(jīng)PBS沖洗后加1∶150的Cy3二抗且37℃孵育30 min，20％甘油封片，德國產(chǎn)Leica TCSNT型激光掃描共聚焦顯微鏡觀察，測定細(xì)胞相對熒光強(qiáng)度。陰性對照實(shí)驗(yàn)：用PBS代替PCNA抗體孵育。

1.2.5 Western印跡半定量分析PCNA表達(dá) 收獲處理12 h的細(xì)胞，以蛋白裂解液提取蛋白并測定蛋白含量。制備10%分離膠和5%積層膠，50 μg總蛋白上樣，80 V 180 min蛋白電泳轉(zhuǎn)印至聚偏氟己烯(PVD)F膜，膜用5 %脫脂奶粉37℃封閉1 h，加1∶150的PCNA抗體，1∶150 通用二抗，1∶200稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈親和素，DAB顯色。蛋白表達(dá)結(jié)果以PVDF膜上棕色染條帶的深淺來判斷。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所用數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SPSS10.0進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果

2.1 MTT法觀察C2cer影響HT29細(xì)胞增殖效應(yīng) 低于0.05 μmol/L的C2cer對HT29細(xì)胞的增殖影響不明顯(P＞0.05)，3.125～6.25 μmol/L的C2cer明顯減緩HT29細(xì)胞增殖，高于12.5 μmol/L的C2cer細(xì)胞導(dǎo)致HT29增殖幾乎完全停滯，細(xì)胞死亡。見圖1。

圖1 C2cer影響HT29細(xì)胞增殖的抑制曲線（略）

2.2 AnnexinV/PI檢測C2cer作用12 h影響HT29細(xì)胞的凋亡 AnnexinV結(jié)合PI染色，流式細(xì)胞儀把細(xì)胞分為壞死、凋亡晚期、正常和凋亡早期細(xì)胞。12.5、25.0 μmol/L的C2cer作用HT29細(xì)胞12 h后，細(xì)胞凋亡比例約為(53.64±9.11)%和(83.94±11.62)%，細(xì)胞凋亡呈劑量效應(yīng)關(guān)系，表明C2cer是HT29細(xì)胞強(qiáng)有力的凋亡誘導(dǎo)劑。見表1。

2.3 PCNA免疫組織化學(xué)結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡檢測結(jié)果 PCNA為增殖核抗原，表達(dá)于細(xì)胞核，與細(xì)胞增殖程度相關(guān)。陽性為細(xì)胞核中表達(dá)紅色熒光，對照組細(xì)胞中PCNA表達(dá)呈強(qiáng)陽性。對照組、低濃度組和高濃度組細(xì)胞中的PCNA表達(dá)相對熒光強(qiáng)度分別為(126.10±22.49)，(80.43±18.33)和(52.82±10.46)。與對照組相比，低濃度組和高濃度細(xì)胞中PCNA表達(dá)明顯降低(P＜0.01)，高濃度組細(xì)胞中PCNA表達(dá)較低濃度組明顯降低（P＜0.01），表明C2cer能下調(diào)HT29細(xì)胞中PCNA的表達(dá)，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。見圖2。

表1 C2cer處理12 h對HT29細(xì)胞凋亡的影響（略）

與對照組比較：1）P＜0.01；與低濃度組比較：2）P＜0.01

圖2 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測HT29細(xì)胞PCNA表達(dá)(SP，×400) （略）

2.4 Western印跡檢測C2cer影響HT29細(xì)胞中PCNA表達(dá) HT29細(xì)胞中PCNA呈高表達(dá)，對照組、低濃度組、高濃度組的平均IOD分別為(1.51±0.362)、(1.05±0.225)、(0.516±0.138)，C2cer明顯下調(diào)HT29細(xì)胞中PCNA的表達(dá)，呈劑量效應(yīng)關(guān)系。見圖3。

圖3 Western印跡檢測C2cer影響HT29細(xì)胞中PCNA表達(dá)（略）

3 討論

結(jié)腸癌早期多無癥狀，不易發(fā)現(xiàn)，同時(shí)又因其特殊的解剖部位，腫瘤易發(fā)生腹膜外轉(zhuǎn)移，常規(guī)的手術(shù)、放療和化療等治療效果均不太理想。因此，探尋一種新的治療方案或治療模式尤為重要。鞘磷脂作為一種有潛力的用于腫瘤方面的化學(xué)預(yù)防劑或治療劑已引起了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注〔7，8〕。鞘磷脂是各種動(dòng)、植物細(xì)胞生物膜的重要組成部分，其主要成分是神經(jīng)鞘磷脂(SM)，SM由鞘氨醇(SP)、脂肪酸及磷酸膽堿組成。C2cer是多種細(xì)胞功能如細(xì)胞分化、衰老、增殖和細(xì)胞循環(huán)停滯的第二信信使，激活酶級聯(lián)反應(yīng)和轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性，產(chǎn)生多種生物效應(yīng)。許多胞外的刺激因素，如化療藥物、輻射、腫瘤壞死因子α和內(nèi)毒素等引起的細(xì)胞凋亡均由C2cer將凋亡信號傳遞給其下游的靶分子，如激活SAPK/JNK等信號途徑，引起凋亡的信號級聯(lián)反應(yīng)〔7〕。越來越多的研究表明，C2cer等鞘脂及其代謝物能夠誘導(dǎo)多種腫瘤和惡性增殖細(xì)胞如腺癌、結(jié)腸癌、肝腫瘤、肺癌、鼻咽癌等的凋亡。C2cer通過影響B(tài)cl家族基因水平的表達(dá)和Fas、p53蛋白水平表達(dá)的改變，最終促進(jìn)HT29結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡〔2～4〕。本研究結(jié)果顯示，細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞凋亡明顯增加，并呈劑量效應(yīng)關(guān)系。

PCNA是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白，在細(xì)胞核內(nèi)合成，在G1期表達(dá)逐漸增加，S期達(dá)到高峰，G2/M期減少或消失，因此，PCNA作為細(xì)胞周期內(nèi)S期的特異性標(biāo)記，其出現(xiàn)與細(xì)胞增殖有關(guān)，其含量能反映細(xì)胞的增殖程度。PCNA是一種與DNA合成密切相關(guān)的細(xì)胞核內(nèi)的酸性蛋白質(zhì)，研究表明大腸癌中PCNA陽性表達(dá)率高于94.4%，與腫瘤預(yù)后較差相關(guān)〔6〕。本研究結(jié)果表明12.5、25 μmol/L的C2cer能夠明顯抑制HT29細(xì)胞中PCNA蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡。

總之，C2cer可抑制HT29結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并明顯降低HT29細(xì)胞中PCNA表達(dá)，該研究為探索結(jié)腸癌等消化道腫瘤的化學(xué)預(yù)防和化學(xué)治療提供了一腫新的方法和新思路〔8〕。

參考文獻(xiàn)

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2 張曉峰，李百祥，任 銳.神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡作用〔J〕.毒理學(xué)雜志，2006;20(2):6871.

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篇5

    【關(guān)鍵詞】  維A酸 ;癌前病變; 增殖細(xì)胞核抗原;端粒酶

    Abstract:Objective To observe the effect of retinoic acid(RA) on proliferating cell nuclear antigen (PCNA, represented with proliferating index, PI) and telomerase activity (represented with human telomerase reverse transcriptase,hTERT) in rats with  gastric  precancerous lesion. Methods  The model was established by MNNG together with other factors including 15% 56 ℃ brine,sodium deoxycholate, 40% alcohol stimulus, 0.03% ranitidine, undue hunger,and overeating. PCNA(converted to PI) and hTERT was detected by immunohistochemical method, in normal group, spontaneous recovery group,and RA(20 mg/kg and 40 mg/kg) group.Results  PI and hTERT of normal group and RA 40mg/kg groups were lower detected than spontaneous recovery group and was significantly different (P<0.01 or P<0.05). Conclusion  RA  makes GPL reversed in rates by inhibiting  activity of telomerase and cell proliferating.

    Key words: retinoic  acid; precancerous lesions; proliferating cell nuclear antigen;telomerase

    利用某些化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化為正常細(xì)胞或近似正常細(xì)胞,已成為抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn),維A酸是腫瘤分化誘導(dǎo)劑的代表之一。維A酸對多種化學(xué)致癌過程和誘癌作用有抑制作用,具有逆轉(zhuǎn)胃癌前病變大鼠的腸化生和不典型增生作用,對急性早幼白血病M 型的療效,已被證實(shí)和公認(rèn)[1,2]。為進(jìn)一步探討其作用機(jī)理,本文觀察維A酸對大鼠胃癌前病變增殖細(xì)胞核抗原和端粒酶活性的影響,報(bào)告如下。

    1  材料

    1.1  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級,雄性 Wistar大鼠,6周齡, 體質(zhì)量100~120 g,由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供 ,生產(chǎn)許可證號:SCXK(鄂)2003-0005。

    1.2  主要藥品及試劑維A酸( RA) ,上海第六制藥廠;甲硝基亞硝基胍(MNNG)為 Fluka 公司產(chǎn)品;脫氧膽酸鈉 ,北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠;雷尼替丁, 杭州賽諾菲圣德拉堡民生制藥有限公司;無水乙醇 ,上海振新興化工一廠;氯化鈉 ,天津化學(xué)試劑三廠;即用型PCNA 單抗、即用型端粒酶催化活性亞單位(hTERT)多抗試劑盒、SPDAB 即用型顯色試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)公司。

    1.3  主要儀器CUT 5062輪轉(zhuǎn)切片機(jī),德國SLEE公司;BX 40系統(tǒng)顯微鏡,日本OLYMPUS公司;HPIAS1000 型顯微攝像全自動(dòng)圖像分析儀,同濟(jì)千屏影像工程公司。

    2  方法

    2.1  造模及給藥方法按綜合法復(fù)制模型 [ 3]。大鼠50只,隨機(jī)抽取 11只作為正常對照組,其余 39只用于造模。正常對照組大鼠不做任何處理;造模大鼠每日自由飲用 100 μg/mL MNNG 液(新鮮配制,飲水瓶用油漆涂黑避光),上午用 56 ℃、 ρ=15%的氯化鈉液 10 mL/kg 灌胃。攝食為含ρ= 0.03%雷尼替丁的純鼠飼料,饑飽相間,進(jìn)食2 d的當(dāng)天下午,用 ρ=0.85%脫氧膽酸鈉溶液按10 mL/kg 灌胃;禁食1 d的當(dāng)天下午,用 φ=40%乙醇10 mL/kg 灌胃,持續(xù)6個(gè)月(造模過程中死亡6只大鼠)。6個(gè)月末時(shí),取正常和造模大鼠各1只殺檢,觀察組織病理學(xué)變化,確認(rèn)模型是否成功。模型成功后,將造模存活的大鼠,隨機(jī)分為:自然恢復(fù)組12只、RA 20 mg/kg和RA 40 mg/kg組各10只。 

    正常對照組和自然恢復(fù)組大鼠給蒸餾水10 mL/kg; RA 20 mg/kg和RA 40 mg/kg組大鼠分別給0.2% RA和 0.4% RA 10 mL/kg灌胃,每日1次,連續(xù)3個(gè)月(自然恢復(fù)組大鼠死亡 4只)。末次給藥后,所有動(dòng)物禁食1 d,放血處死,剖腹取胃,沿胃大彎剪開,生理鹽水沖洗,肉眼觀察,平鋪于硬紙板上,于胃竇部剪取組織1塊,Φ=4%多聚甲醛固定,石蠟包埋,切片 5 μm,免疫組織化學(xué)染色。

    2.2  檢測方法免疫組織化學(xué)用 SP法,按試劑說明書操作,DAB 顯色,PBS 代替一抗作陰性對照,已知陽性切片作陽性對照。免疫組化染色陽性信號為棕色,PCNA 陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞核, hTERT 陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞質(zhì)。采用顯微攝像計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng),每張切片檢測5個(gè)視野(×400)。計(jì)算PCNA陽性細(xì)胞數(shù)以及腺上皮細(xì)胞總數(shù)(每例≥200 個(gè)),求出細(xì)胞增殖指數(shù)(PI), PI=PCNA 陽性細(xì)胞數(shù)/腺上皮細(xì)胞總數(shù)×100%。hTERT:無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)<25%為(-),陽性細(xì)胞數(shù)25%~50%為(+),陽性細(xì)胞數(shù) 50%~75%為(++),陽性細(xì)胞數(shù)>75%為(+++)。

    2.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理PI 值的比較,采用t檢驗(yàn); hTERT 蛋白表達(dá)陽性率的比較,采用χ2檢驗(yàn)(校正χ2值計(jì)算),以P<0.05為差異有顯著性。

    3  結(jié)果

    3.1  維A酸對胃黏膜細(xì)胞增殖指數(shù)的影響  正常大鼠胃黏膜增生帶細(xì)胞可見 PCNA 陽性細(xì)胞; 自然恢復(fù)組大鼠胃黏膜細(xì)胞增殖指數(shù)明顯高于正常對照組和維A酸各組, 差異有非常顯著性(P<0.01);維A酸組高于正常對照組,提示維A酸有一定的抑制胃黏膜細(xì)胞增殖活性作用,見表 1。

    表1  維A酸對胃黏膜細(xì)胞增殖指數(shù)的影響(略)

    Tab.1  Effect of RA on PI of the gastric mucosa

    與自然恢復(fù)組比較: *P<0.01;與正常對照組比較: P<0.01  ( t檢驗(yàn) )

    3.2  維A酸對胃黏膜細(xì)胞hTERT 蛋白表達(dá)陽性率的影響   正常大鼠胃黏膜沒有hTERT 蛋白表達(dá)。自然恢復(fù)組大鼠8例均呈陽性表達(dá),陽性率達(dá)100%。維A酸20 mg/kg和40 mg/kg組 hTERT 蛋白陽性率分別為60%和40% ,較自然恢復(fù)組低,見表 2。

    表2  維A酸對胃黏膜細(xì)胞hTERT 蛋白表達(dá)陽性率的影響(略)

    Tab.2  Effect of RA  on  hTERT positive rate of the gastric mucosa

    與自然恢復(fù)組比較:*P<0.05;**P<0.01;與正常組比較:P<0.05(χ2檢驗(yàn))

    4  討論 

    增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)是目前被公認(rèn)的能較好地判斷細(xì)胞增殖狀態(tài)的一項(xiàng)指標(biāo)[ 4]。PCNA又稱周期數(shù),是存在于細(xì)胞核內(nèi)的一種周期蛋白。研究表明,在胃癌前病變階段已存在PCNA的表達(dá)異常,推論胃黏膜發(fā)生癌變的機(jī)制之一,可能是某些致癌因素引起持續(xù)的胃黏膜細(xì)胞增殖過度。 

    端粒酶活化是細(xì)胞保持持續(xù)分裂增殖的基礎(chǔ),與細(xì)胞的異常增殖密切相關(guān),是腫瘤發(fā)生學(xué)上的一個(gè)共同途徑,在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起非常重要的作用[5]。端粒酶是一種逆轉(zhuǎn)錄酶,至少由3個(gè)亞單位組成,即端粒酶RNA、端粒酶相關(guān)蛋白Ⅰ和端粒酶催化活性亞單位(hTERT),但僅 hTERT 水平與細(xì)胞端粒酶活性呈正相關(guān)[6]。 研究發(fā)現(xiàn)由胃黏膜正常細(xì)胞胃癌前病變胃癌的過程中,端粒酶逐漸被激活[7],而且其陽性率、活性水平相應(yīng)地逐漸增高;也有研究發(fā)現(xiàn)端粒酶陽性的胃癌或癌前病變細(xì)胞增殖活性(PCNA)明顯高于陰性者[8],均說明端粒酶的激活在胃黏膜癌變形成、發(fā)展中扮演重要角色。  

    本實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床發(fā)病原因,采用多因素建立胃癌前病變大鼠模型,側(cè)重維A酸對其逆轉(zhuǎn)作用機(jī)理研究。結(jié)果顯示:正常大鼠胃黏膜增殖帶可見PCNA 陽性細(xì)胞,但沒有hTERT 活性表達(dá),自然恢復(fù)組大鼠 PI明顯高于正常組,hTERT蛋白陽性表達(dá)率 100%,表明在胃癌前病變階段,由于各種因子的刺激而導(dǎo)致了端粒酶被激活和細(xì)胞增殖活性增加,使部分細(xì)胞逃脫死亡危象,并出現(xiàn)永生化或惡性增殖。模型動(dòng)物應(yīng)用維A酸治療 3個(gè)月后,大鼠胃黏膜 PI和hTERT 蛋白的表達(dá)顯著降低,表明維A酸對其端粒酶活性和細(xì)胞增殖活性有一定的抑制作用。由此推論維A酸逆轉(zhuǎn)大鼠胃癌前病變的機(jī)制之一,可能與其抑制了大鼠胃癌前病變PCNA和端粒酶活性,從而抑制胃黏膜惡性增殖,增加細(xì)胞穩(wěn)定性,恢復(fù)細(xì)胞增殖和凋亡平衡有關(guān)。

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篇6

【摘要】 目的 觀察加味小柴胡湯對順鉑誘導(dǎo)的大鼠肝BRL細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-kB(NF-kB)、熱休克蛋白70(HSP70)表達(dá)的影響。方法 將BRL細(xì)胞分為4組：空白組、順鉑組及加味小柴胡湯大、小劑量組。采用完整細(xì)胞蛋白質(zhì)斑點(diǎn)印跡、免疫組織化學(xué)等方法，檢測各組細(xì)胞NF-kB、HSP70變化。結(jié)果 順鉑組NF-kB表達(dá)明顯較空白組升高，HSP70表達(dá)降低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；加味小柴胡湯大、小劑量組 NF-kB明顯較順鉑組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；加味小柴胡湯大、小劑量組HSP70表達(dá)均升高，但僅加味小柴胡湯大劑量組差異明顯。結(jié)論 加味小柴胡湯可下調(diào)順鉑誘導(dǎo)的BRL細(xì)胞NF-kB表達(dá)，上調(diào)HSP70表達(dá)，此作用可能是該方減輕細(xì)胞氧化損傷、抑制細(xì)胞凋亡重要機(jī)理之一。

【關(guān)鍵詞】 BRL細(xì)胞；順鉑；加味小柴胡湯；細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-kB；熱休克蛋白70

Abstract：Objective To study the effect of modified Xiaochaihu Decoction on NF-kB and HSP70 of BRL cell induced by cisplatin. Methods BRL Cells were pided into control group， cisplatin group， high and low dose of modified Xiaochaihu decoction. Complete cell protein dot blot technique and immunohistochemisth analysis were appllied to detect the change of NF-kB and HSP70. Results There was a significant increase in NF-kB and decrease in HSP70 of BRL cell induced by cisplatin compared with control group. There was a significant decrease of NF-kB in modified Xiaochaihu decoction group compared with cisplatin group. There were increases of the expression of HSP70 in both high and low dose group， but only the high dose group demonstrated significant difference. Conclution The expression of NF-kB of BRL cell induced by cisplatin can be inhibited while the expression of HSP70 can be enhenced by modified Xiaochaihu decoction. It may be one of important mechanisms of relieving cell oxidize lesion and inhibiting apoptosis by modified Xiaochaihu decoction.

Key words：BRL cell；cisplatin；modified Xiaochaihu decoction；NF-kB；HSP70

核轉(zhuǎn)錄因子-kB(NF-kB)是一種能與免疫球蛋白k輕鏈基因的增強(qiáng)子kB序列特異結(jié)合的蛋白因子，具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用，當(dāng)細(xì)胞氧化損傷后NF-kB的表達(dá)增強(qiáng)[1]。熱休克蛋白(HSP)是機(jī)體在各種應(yīng)激害時(shí)所產(chǎn)生的一種高度保守蛋白質(zhì)， HSP70是HSP中最重要的一種中等分子量蛋白，其表達(dá)能夠?qū)?yīng)激狀態(tài)下細(xì)胞產(chǎn)生保護(hù)作用。HSP的細(xì)胞保護(hù)作用可能是恢復(fù)和維持抗氧化酶功能，修復(fù)其在應(yīng)激狀態(tài)時(shí)被破壞的功能蛋白，從而穩(wěn)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞維持正常的生理功能[2]。筆者利用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法，觀察了順鉑誘導(dǎo)BRL細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)損傷時(shí)NF-kB、HSP70的異常表達(dá)及加味小柴胡湯的調(diào)控作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

正常大鼠肝BRL細(xì)胞，廣州中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心細(xì)胞庫提供。胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM、單克隆抗體、TUNEL檢測試劑盒均購自Sigma公司。順鉑為齊魯制藥有限公司生產(chǎn)，批號0503007。加味小柴胡湯由中國第153中心醫(yī)院中藥制劑室制備(原藥材1 g/mL)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 細(xì)胞分組及處理

取處于對數(shù)生長的BRL細(xì)胞隨機(jī)分為4組(每組6瓶)?？瞻捉M：加入含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基；順鉑組：加入順鉑5 mg/L及10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基；加味小柴胡湯大劑量組：加入順鉑5 mg/L、10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基及加味小柴胡湯4 mg/mL；加味小柴胡湯小劑量組：加入順鉑5 mg/L、10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基及加味小柴胡湯2 mg/mL。在37 ℃、0.5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，將胰蛋白酶消化的細(xì)胞制備成細(xì)胞混懸液。將收獲的4組細(xì)胞分別制成細(xì)胞滴片(1×107/mL細(xì)胞混懸液滴加至預(yù)先處理過的硝酸纖維素膜和載玻片上)、細(xì)胞裂解液，并提取DNA和蛋白質(zhì)，進(jìn)行免疫組化檢測。

2.2 完整細(xì)胞蛋白質(zhì)斑點(diǎn)印跡

采用間接酶標(biāo)抗體免疫組化法：點(diǎn)膜標(biāo)本經(jīng)氯仿蒸氣裂解細(xì)胞膜暴露細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)，加0.5%吐溫-20/TBS(Tris- HCl pH 7.2)封閉，加各自的一抗，0.01%吐溫-20/TBS洗2次，加堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗鼠或羊抗兔IgG，加DAB/NBT-BCIP底物液進(jìn)行免疫組化顯色，以PBS代替一抗作為陰性對照。

2.3 免疫細(xì)胞化學(xué)染色

4%多聚甲醛固定后的細(xì)胞標(biāo)本入0.3%Triton X-100/PBS透化后，加10%正常羊血清，甩去多余血清，加1∶100稀釋的各種一抗，置4 ℃濕盒內(nèi)孵育過夜。PBS，pH 7.5洗后，加1∶200稀釋的二抗(鼠IgG-HRP)，置37 ℃濕盒內(nèi)孵育1.5 h，以DAB顯色。陰性對照實(shí)驗(yàn)用PBS代替一抗。

2.4 檢測指標(biāo)

對細(xì)胞蛋白質(zhì)斑點(diǎn)的印跡應(yīng)用薄層層析掃描儀(Shimadu，日本)進(jìn)行掃描并對免疫組織化學(xué)標(biāo)本染色，應(yīng)用圖像分析儀(山富，中國)掃描各標(biāo)本的免疫反應(yīng)信號的灰度值。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.5軟件對以上數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)用x±s表示，均值之間比較采用t檢驗(yàn)。

4 結(jié)果

4.1 加味小柴胡湯對順鉑誘導(dǎo)BRL細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子-kB、熱休克蛋白70表達(dá)的影響

(見表1) 表1 各組細(xì)胞NF-kB、HSP70蛋白表達(dá)掃描灰度值(略)注：與空白組比較，**P＜0.01；與順鉑組比較，P＜0.05，P＜0.01

4.2 各組細(xì)胞免疫組化顯色比較

細(xì)胞NF-kB經(jīng)DAB染色呈棕黃色，正常組染色淺淡，順鉑組呈棕褐色，加味小柴胡湯大、小劑量組均明顯較順鉑組淺淡，加味小柴胡湯大劑量組更為顯著。提示順鉑處理組細(xì)胞NF-kB表達(dá)較正常組明顯，應(yīng)用加味小柴胡湯的實(shí)驗(yàn)組可下調(diào)NF-kB表達(dá)(見圖1)。細(xì)胞HSP70染色呈棕色，正常組細(xì)胞染色較深，順鉑組較淺，加味小柴胡湯大、小劑量組染色均明顯較順鉑組深。提示正常細(xì)胞HSP70表達(dá)明顯，順鉑組HSP70表達(dá)降低，加味小柴胡湯大、小劑量組細(xì)胞HSP70表達(dá)明顯上調(diào)(見圖2)。

5 討論

NF-kB是由B淋巴細(xì)胞核提取物中檢測到的一種能與免疫球蛋白k輕鏈基因的增強(qiáng)子kB序列特異結(jié)合的蛋白因子，典型的NF-kB由p53和p65亞基組成。在靜止?fàn)顟B(tài)下，NF-kB與I-kB抑制性蛋白結(jié)合處于未活化狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受到炎性細(xì)胞因子、LPS等刺激時(shí)，I-kB激酶活化，I-kB從NF-kB復(fù)合體上解離，NF-kB發(fā)生核易位并與特定的DNA kB序列結(jié)合而促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄。NF-kB可被炎性細(xì)胞因子激活，而后又誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。因此，早期應(yīng)用抑制NF-kB活化藥物，對控制炎癥介質(zhì)的大量釋放將有所裨益[3]。由于活性氧(ROS)可激活NF-kB的表達(dá)[4]，在H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中，可見NF-kB激活轉(zhuǎn)錄因子p53的表達(dá)[5]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，順鉑誘導(dǎo)的BRL細(xì)胞NF-kB表達(dá)明顯升高，提示順鉑致肝細(xì)胞損傷的發(fā)生機(jī)制與NF-kB的高表達(dá)有關(guān)。

HSP蛋白作為分子伴侶作用，是生物體或離體培養(yǎng)細(xì)胞在不良環(huán)境因素作用下所產(chǎn)生的一組具有高度保守性的應(yīng)激蛋白，能保護(hù)細(xì)胞不受或少受損害。HSP70是目前發(fā)現(xiàn)的主要分子伴侶之一，能與蛋白分子結(jié)合，保護(hù)新合成的恰當(dāng)構(gòu)型。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)受損變性時(shí)，能促使其恢復(fù)或加速其降解和消除，以維護(hù)細(xì)胞的功能和生存。HSP70的增加可以提高細(xì)胞在各種應(yīng)激狀態(tài)下的生存能力，其細(xì)胞保護(hù)作用與應(yīng)激時(shí)受損蛋白質(zhì)的修復(fù)或移除有關(guān)，主要有抗氧化作用、協(xié)同免疫作用、抗細(xì)胞凋亡作用等幾方面[6]。HSP70可增強(qiáng)機(jī)體對多種應(yīng)激原的耐受能力，由于各種有害應(yīng)激可激活細(xì)胞內(nèi)應(yīng)激激酶而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，而HSP70基因表達(dá)水平的增加，可抑制應(yīng)激激酶的激活，防止細(xì)胞凋亡，這無疑對預(yù)防肝細(xì)胞損傷有積極意義。

本研究提示，加味小柴胡湯可下調(diào)順鉑誘導(dǎo)的BRL細(xì)胞NF-kB表達(dá)，上調(diào)HSP70表達(dá)，此作用可能是該方減輕細(xì)胞氧化損傷、抑制細(xì)胞凋亡的重要機(jī)理之一。

【參考文獻(xiàn)】

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篇7

關(guān)鍵詞: 增殖細(xì)胞核抗原;CD44;結(jié)腸直腸腫瘤;肝腫瘤/繼發(fā)性;聚合酶鏈反應(yīng)

摘 要:目的 研究伴有靜脈侵襲的結(jié)直腸癌組織中增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）和CD44mRNA的表達(dá)及其與肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系. 方法 采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）方法檢測31例伴有靜脈侵襲的結(jié)直腸癌組織中PCNA和CD44mR-NA的表達(dá)狀況. 結(jié)果 PCNA和CD44mRNA在結(jié)直腸癌組織中陽性表達(dá)率分別為100%和64.5%.在有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中，PCNA和CD44mRNA的強(qiáng)表達(dá)率分別為94.1%和70.6%，表達(dá)強(qiáng)度明顯高于無肝轉(zhuǎn)移者（P

Keywords:proliferating cell nuclear antigen;CD44;colorec-tal neoplasms;liver neoplasms/secondary;poly-merase chain reaction

Abstract:AIM To investigate the expression of prolifera-ting cell nuclear antigen（PCNA）and CD44mRNA in venous invasional colorectal cancer and its relationship with liver metastasis.METHODS Reverse transcriptase-polymerase chain reaction（RT-PCR）was used to detect the expressions　of PCNA and CD44mRNA in31cases of colorectal cancer with liver metastasis.Theexpressions of PCNA and CD44mRNA in31cases of venous invasional colorectal cancer.RESULTS Positive expression rates of PCNA and CD44mRNA in the colorectal cancer were higher than those with-out liver metastasis（P

0 引言

既往研究報(bào)道，靜脈的侵襲程度與腫瘤肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生率和范圍呈正相關(guān).增殖細(xì)胞核抗原（prolifer-ating cell nuclear antigen，PCNA）作為細(xì)胞增殖活性的主要指標(biāo)，與惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移與預(yù)后密切相關(guān)［1］ .而細(xì)胞粘附分子與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移行為有關(guān)，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著作用［2］ .本文旨在用RT-PCR方法研究PCNA和粘附分子CD44mRNA在伴有嚴(yán)重靜脈侵襲的結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)，并探討兩者與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系.

1 對象和方法

1.1 對象 本院收治的伴有嚴(yán)重靜脈侵襲的結(jié)直腸癌31（男20，女11）例，年齡44～82（平均66）歲.按病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)直腸癌靜脈侵襲程度分為v0～v3，選取嚴(yán)重靜脈侵襲的v3期病例作為研究對象，伴有肝轉(zhuǎn)移者17例.術(shù)后立即將腫瘤標(biāo)本投入液氮，-80℃保存?zhèn)溆?RNA抽提試劑盒購自Gibco公司;Taq酶購自Takara公司;PCNA、CD44及β-actin的引物均由上海博亞公司合成.PCNA的上游引物序列:5’-GCCGAGATCTCAGCCATATT-3’，下游引物:5’-ATGTACTTAGAGGTACAAAT-3’;CD44上游引物序列:5’-CTTCATCCCAGTGACC-TCAG-3’，下游引物:5’-TGCCACTGTTGATCAC-TAGC-3’;β-actin上游引物:5’-CACCATGTACC-CTGGCATTG-3’，下游引物:5’-TAACGCAAC-TAAGT CATAGT-3’.預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物的大小分別為452bp，446bp和243bp.

1.2 方法 利用TRIzol試劑盒（Gibco），按操作說明提取組織總RNA.分光光度計(jì)測量RNA純度及含量，-80℃保存?zhèn)溆?在50μL的反應(yīng)體積中加入5μg總RNA，5×反應(yīng)緩沖液10μL，10mmol?L-1 dNTPs5μL，RNasin20U，oligo（dT）12-18 0.25μg，反轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV，Gibco）200U，0.1mol?L-1 DTT0.5μL，置37℃孵育1h，65℃加熱5min終止反應(yīng).在25μL反應(yīng)體積中加入cDNA0.1μg，10×PCR緩沖液2.5μL，2mmol?L-1 dNTPs2.5μL，25mmol?L-1 MgCl2 2.5μL，各引物20pmol，Taq DNA聚合酶（Takara）5U.使用PTC-100PCR儀（MJ Research）進(jìn)行熱循環(huán).循環(huán)條件:93℃1min預(yù)變性;93℃30s，56℃30s，72℃1min，35個(gè)循環(huán);72℃延伸8min.取各擴(kuò)增產(chǎn)物10μL，經(jīng)3g?L-1 瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色后，用UVP凝膠成像系統(tǒng)及Labworks軟件進(jìn)行檢測和光量子強(qiáng)度分析，將PCNA和CD44陽性條帶的密度與β-actin條帶密度的比值作為PCNA和CD44mRNA的相對表達(dá)量.表達(dá)強(qiáng)度分為3級，+:占β-actin密度的1%～30%;:31%～65%;:66%～100%.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有結(jié)果進(jìn)行χ2 檢驗(yàn).

2 結(jié)果

2.1 PCNA和CD44mRNA在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá) RT-PCR方法在結(jié)直腸癌組織中分別檢測到了PCNA，CD44和β-actin基因的表達(dá)，擴(kuò)增片段的大小與預(yù)期的一致（Fig1）.在31例結(jié)直腸癌中均檢測到了PCNA mRNA的表達(dá)，陽性率為100%，但其表達(dá)水平在不同病例中存在差異（Fig1A）.CD44mR-NA呈陽性表達(dá)者20例，陽性率為64.5%.在不同病例中，CD44mRNA的表達(dá)水平也存在差異（Fig1B）.作為內(nèi)對照的β-actin在不同結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平基本一致（Fig1C）.

2.2 PCNA和CD44mRNA的表達(dá)與肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系 在17例有肝轉(zhuǎn)移的病例中，PCNA mRNA強(qiáng)表達(dá)（，）者有16例（94.1%），顯著高于無肝轉(zhuǎn)移者（28.6%，P

圖1 略

2.3 PCNA與CD44在結(jié)直腸癌中表達(dá)之間的關(guān)系 在16例呈CD44mRNA強(qiáng)表達(dá)的病例中，12例同時(shí)呈PCNA mRNA強(qiáng)表達(dá)（75.0%）;在15例CD44mRNA陰性或弱表達(dá)的病例中，PCNA mR-NA強(qiáng)表達(dá)者7例（46.7%），兩者間有顯著性差異（P

3 討論

癌細(xì)胞對靜脈的侵襲被認(rèn)為是腫瘤從原發(fā)灶向肝轉(zhuǎn)移的第一步，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也與此相符.但在臨床上，即使組織學(xué)檢查證實(shí)有靜脈侵襲的病例，不一定同時(shí)伴有肝臟的轉(zhuǎn)移.這提示，除靜脈侵襲外，一定還有其它的因素參與了結(jié)直腸癌的肝轉(zhuǎn)移過程.

既往研究表明，PCNA與腫瘤的惡性程度、血管侵犯、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及預(yù)后顯著相關(guān).我們觀察到，在已有靜脈侵襲的情況下，PCNA mRNA在伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌中的強(qiáng)陽性表達(dá)率顯著高于無肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌，表明PCNA的強(qiáng)表達(dá)與結(jié)直腸癌的肝轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（r=0.82，P

近年來的研究表明，CD44可表達(dá)于不同腫瘤組織中［3］ .Bhatavdekar等［4］ 發(fā)現(xiàn)CD44過度表達(dá)與結(jié)直腸癌的臨床分期有關(guān)，而且CD44陽性是與結(jié)直腸癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)和總生存期有關(guān)的重要不良預(yù)后因素.進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，CD44可使癌細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)移能力，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞與血管內(nèi)皮的粘附，加速癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移進(jìn)程.我們觀察到，在伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中，CD44mRNA的強(qiáng)表達(dá)率明顯高于無肝轉(zhuǎn)移者，進(jìn)一步提示CD44可能在結(jié)直腸癌細(xì)胞的肝轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用.但是CD44能否作為結(jié)直腸癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移的獨(dú)立指標(biāo)尚存在爭議.

我們還觀察到，在已有靜脈侵襲的情況下，伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌病例往往同時(shí)呈PCNA和CD44mRNA強(qiáng)表達(dá)，提示在結(jié)直腸癌的肝轉(zhuǎn)移、PCNA和CD44mRNA的強(qiáng)表達(dá)之間存在正相關(guān)性（r=0.82，P

參考文獻(xiàn)

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篇8

1、酵母菌屬于真核細(xì)胞。

2、酵母菌是一些單細(xì)胞真菌，并非系統(tǒng)演化分類的單元。每個(gè)細(xì)胞通常只有一個(gè)核，但也有含有兩個(gè)核或者甚至多個(gè)核。細(xì)胞核由核被膜、染色質(zhì)、核仁和核基質(zhì)組成。核由雙層膜包被，核膜上有許多核孔。

（來源：文章屋網(wǎng) ）

篇9

一、細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)與功能相統(tǒng)一

細(xì)胞膜主要由磷脂分子和蛋白質(zhì)分子構(gòu)成，磷脂雙分子層構(gòu)成了細(xì)胞膜的基本支架。構(gòu)成細(xì)胞膜的磷脂和蛋白質(zhì)分子大都可以運(yùn)動(dòng)，這就使得細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，這對于細(xì)胞膜完成它的生理功能具有重要的意義。

細(xì)胞膜最重要的生理功能是控制物質(zhì)出入細(xì)胞。水分子極小，可以通過膜脂運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生間隙。細(xì)胞需要的離子和小分子的運(yùn)輸往往需要由細(xì)胞膜上的載體蛋白協(xié)助完成，并且還需消耗能量，因此細(xì)胞膜運(yùn)輸?shù)奈镔|(zhì)的種類和數(shù)量與細(xì)胞膜上載體的種類和數(shù)量有關(guān)，這是本身遺傳所決定的。大分子物質(zhì)運(yùn)輸?shù)姆绞健毯桶伦饔脤?shí)現(xiàn)的基礎(chǔ)是細(xì)胞膜的流動(dòng)性。分泌蛋白實(shí)質(zhì)上可看做是胞吐的典型例子。

二、細(xì)胞質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能相統(tǒng)一

不同細(xì)胞功能往往不同，主要體現(xiàn)在細(xì)胞質(zhì)中的各種細(xì)胞器上的差異。各種細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和功能也是相統(tǒng)一的。

1.線粒體與有氧呼吸

線粒體是活細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的主要場所。與此功能相適應(yīng)的結(jié)構(gòu)有：線粒體具有雙層膜結(jié)構(gòu)，外膜通透性較好，物質(zhì)比較容易通過，內(nèi)膜的通透性很差，能嚴(yán)格控制分子和離子通過，有利于反應(yīng)的進(jìn)行，內(nèi)膜向內(nèi)折疊形成嵴，使內(nèi)膜的表面積大大增加，為酶提供了附著位點(diǎn)，內(nèi)膜上磷脂和蛋白質(zhì)的比例也比其他的膜要大。催化有氧呼吸第二、第三階段的酶位于線粒體中，其反應(yīng)也在線粒體中進(jìn)行，所以線粒體是細(xì)胞有氧呼吸的主要場所，耗能多的細(xì)胞中，線粒體也多。線粒體的基質(zhì)中含有少量的DNA，因此被稱為半自主性細(xì)胞器。

2.葉綠體與光合作用

葉綠體是綠色植物進(jìn)行光合作用的細(xì)胞器。與此功能相適應(yīng)的結(jié)構(gòu)有：葉綠體具有雙層膜結(jié)構(gòu)，葉綠體內(nèi)膜通透性較外膜差，是細(xì)胞質(zhì)和葉綠體基質(zhì)間的功能屏障。葉綠體的基質(zhì)中有許多由膜結(jié)構(gòu)的類囊體堆疊而成的基粒，這種結(jié)構(gòu)大大增加了膜的總面積，其上有豐富的光合色素，能更有效地捕獲光能，加速光反應(yīng)。

其他的細(xì)胞器也同樣如此，且各細(xì)胞器之間也有一定的聯(lián)系，大家不妨自己總結(jié)，仔細(xì)體會(huì)一下“結(jié)構(gòu)是功能的基礎(chǔ)，功能與結(jié)構(gòu)相統(tǒng)一”的觀點(diǎn)。

3.細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)與功能相統(tǒng)一

細(xì)胞核的最外層結(jié)構(gòu)是核膜，一方面，核膜構(gòu)成了核、質(zhì)之間的天然選擇性屏障，將細(xì)胞分成核與質(zhì)兩大結(jié)構(gòu)與功能區(qū)域；另一方面，核膜并不是完全封閉的，而是具有核孔，核、質(zhì)之間頻繁的物質(zhì)交換和信息交流主要通過核孔進(jìn)行。

（1）細(xì)胞核與遺傳

細(xì)胞核是遺傳物質(zhì)儲(chǔ)存和復(fù)制的主要場所。細(xì)胞核中最主要的結(jié)構(gòu)是染色質(zhì)，染色質(zhì)的主要成分是DNA和蛋白質(zhì)，而DNA又是主要的遺傳物質(zhì)，通過復(fù)制傳給子代，保證了遺傳信息的穩(wěn)定性。

（2）細(xì)胞核與代謝

細(xì)胞核是細(xì)胞代謝的控制中心。細(xì)胞代謝的主要承擔(dān)者蛋白質(zhì)的合成受DNA控制，DNA通過表達(dá)，把其中的遺傳信息以蛋白質(zhì)的形式體現(xiàn)性狀。所以說細(xì)胞核是細(xì)胞代謝的控制中心。

篇10

1 病例資料

患者，男，61歲。因發(fā)熱、頭痛、牙齦出血20+天，右上腹痛10+天于2011年4月12日入院。曾在院外查血白細(xì)胞增高、超聲顯示膽囊結(jié)石，按“結(jié)石性膽囊炎”治療1周無效。入院查體：體溫38℃。慢性病容。皮膚、鞏膜無黃染。兩側(cè)頜下、頸部、腹股溝觸及0.5cm×0.5cm大小淋巴結(jié)，質(zhì)韌，活動(dòng)度可，頸部、頜下淋巴結(jié)壓痛?？谇火つo潰瘍，右上第二三磨牙間、右下第三磨牙牙齦滲血，無溢膿。腹平軟，劍突下壓痛，莫非征陽性，無反跳痛，未觸及包塊;肝、脾未觸及。門診檢查：AST 112U/L、ALT 189U/L、ALB 34g/L、TBIL 19μmol/L、ALP 121U/L、rGT 614U/L、尿酸518μmol/L、肌酐141μmol/L。初步診斷：(1)病毒性肝炎急性無黃疸型肝炎(病因不詳)?(2)結(jié)石性膽囊炎?(3)牙齦炎?(4)淋巴結(jié)炎?入院后查：抗-HAV-IgM陽性，乙肝五項(xiàng)及抗-HCV均為陰性。WBC 137.2×109/L、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)9.6×109/L、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)103.3×109/L。手工分類：幼稚細(xì)胞0.62，N 0.2，L 0.18。PLT 35×109/L， RBC 3.3×1012/L，K+ 2.92mmol/L，Na+ 135mmol/L，UA 476μmol/L，CREA 82μmol/L。PT 15s。血沉40mm/h。結(jié)核抗體陽性。彩超示肝脾體積大，膽囊結(jié)石。骨髓檢查：單核細(xì)胞97.5%(原始34.5%、幼稚62%、成熟1%)，明顯異常增加，主要為原單，幼單，細(xì)胞體積較大，胞漿豐富，部分胞漿內(nèi)含有空泡，空泡內(nèi)特異顆粒細(xì)小，少部分細(xì)胞漿內(nèi)含有棒狀小體，細(xì)胞核染色質(zhì)粗大，核仁不明顯。有核細(xì)胞增生活躍，粒：紅為1：1。粒系統(tǒng)占0.5%，明顯受抑制。紅系統(tǒng)占0.5%，成熟紅細(xì)胞著色較深，細(xì)胞體積稍大。淋巴細(xì)胞核漿比例正常。未見寄生蟲。骨髓診斷：急性單核細(xì)胞白血病(M5)。明確診斷：(1)急性甲型病毒性肝炎;(2)急性單核細(xì)胞白血病;(3)結(jié)石性膽囊炎;(4)電解質(zhì)紊亂。給予保肝、抗炎等對癥治療4天，病情無緩解自動(dòng)出院。

2 討論

甲型病毒性肝炎是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的急性消化道傳染病。HAV是一種單股線狀正鏈RNA病毒，歸屬于小RNA病毒科中的肝病毒屬。甲型肝炎是一種有自限病程的急性傳染病，除了少數(shù)特別嚴(yán)重的爆發(fā)型病例外，其他所有病例預(yù)后良好。甲型肝炎引起并發(fā)癥較少見。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，部分病例可有關(guān)節(jié)酸痛、皮疹、出血傾向和心律失常等，較少見的并發(fā)癥有單純紅細(xì)胞再生障礙性貧血、血小板減少性紫癜、視神經(jīng)炎、急性感染性多發(fā)性神經(jīng)炎和溶血性貧血等[1]。該患者起病急，發(fā)熱，血清ALT、AST顯著升高，血清抗-HAV-IgM陽性，既往無肝炎病史，故急性甲型病毒性肝炎診斷明確。本例有發(fā)熱、出血、血象見白系進(jìn)行性異常升高，骨髓檢查顯示單核細(xì)胞97.5%(原始34.5%、幼稚62%、成熟1%)，明顯異常增加，主要為原單，幼單，細(xì)胞體積較大，胞漿豐富，部分胞漿內(nèi)含有空泡，空泡內(nèi)特異顆粒細(xì)小，少部分細(xì)胞漿內(nèi)含有棒狀小體，細(xì)胞核染色質(zhì)粗大，核仁不明顯。有核細(xì)胞增生活躍，粒：紅為1：1。粒系統(tǒng)占0.5%，明顯受抑制。紅系統(tǒng)占0.5%，成熟紅細(xì)胞著色較深，細(xì)胞體積稍大。淋巴細(xì)胞核漿比例正常。未見寄生蟲。所見考慮為急性單核細(xì)胞性白血病，故急性淋巴細(xì)胞性白血病診斷明確。白血病是一組異質(zhì)性惡性克隆性疾病，系造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞突變引起的造血系統(tǒng)惡性腫瘤。國際常用的法美英(FAB)分類法將急性白血病(AL)分成急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)和急性髓系白血病(AML)。而AML分M0至M7共8型，急性單核細(xì)胞性白血病為M5。病因尚未完全明了，其發(fā)生與機(jī)體的內(nèi)外因素有密切關(guān)系。外環(huán)境包括環(huán)境、年齡、物理、化學(xué)、病毒、遺傳等諸多因素有關(guān)[2]。甲型肝炎與急性單核細(xì)胞白血病的發(fā)病有無關(guān)聯(lián)尚不清楚。HAV是否是致病因素之一，值得注意，有待積累更多的資料并進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】