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[關(guān)鍵詞]免疫組織化學(xué)染色； 質(zhì)量管理； 標(biāo)準(zhǔn)化； 文獻(xiàn)綜述

[中圖分類號]R818.023[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號] 1005-0515（2010）-12-030-01

免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展給傳統(tǒng)病理學(xué)帶來了一場革命，使純形態(tài)學(xué)觀察的病理學(xué)發(fā)展成為形態(tài)與免疫信號相結(jié)合的現(xiàn)代病理學(xué)，免疫組織化學(xué)染色在病理診斷中的作用已得到廣泛的認(rèn)同，具有特異性高、敏感性高、程序相對一致等特點(diǎn)，已成為病理診斷中不可缺少的重要輔助技術(shù)。免疫組織化學(xué)染色的方法與步驟復(fù)雜繁瑣，在應(yīng)用中還存在不少問題，直接或間接地影響了最終的病理診斷，而且目前還沒有很好的標(biāo)準(zhǔn)化方案?？v觀免疫組織化學(xué)染色的全過程，重視染色應(yīng)用中的環(huán)節(jié)問題，充分發(fā)揮病理診斷醫(yī)生和技術(shù)人員不同的質(zhì)量保障作用，才能有效地利用好免疫組織化學(xué)染色這一有力工具。

1 診斷醫(yī)生涉及的環(huán)節(jié)問題

1.1 抗體配備的選擇：用于病理診斷的抗體種類很多，擁有抗體種類的多少與實(shí)驗(yàn)輔助診斷水平有一定相關(guān)性。診斷醫(yī)生在決定科室內(nèi)實(shí)驗(yàn)抗體的選擇配備時，要不斷學(xué)習(xí)相關(guān)知識并根據(jù)科室實(shí)際情況選擇確定適用的有效抗體種類和數(shù)量。

1.2 抗體應(yīng)用的選擇：每一種抗體的特性、適用范圍、可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)等都不相同。決定抗體的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，是診斷醫(yī)生在形態(tài)學(xué)診斷的基礎(chǔ)上，根據(jù)鑒別診斷的需要選擇提出的，診斷醫(yī)生應(yīng)不斷學(xué)習(xí)掌握相關(guān)知識，達(dá)到正確選擇適用的實(shí)驗(yàn)抗體，而且應(yīng)選擇聯(lián)合抗體配套使用，避免得到片面的結(jié)果，造成錯誤的解釋和診斷。

1.3 檢測片的選擇：很多病例的組織切片不止一張，不同切片中的組織成分常常不完全一樣。正確選擇檢測片是獲得正確每一組織化學(xué)染色結(jié)果的前提，應(yīng)由診斷醫(yī)生正確選擇用于免疫組織化學(xué)染色的檢測片，避免由技術(shù)人員選擇可能出現(xiàn)的差錯。

1.4 陽性對照的選擇：每一組織化學(xué)染色過程比較復(fù)雜、影響因素也多，只有把握住陽性對照和陰性對照，所有的染色結(jié)果才容易判斷。陽性對照是由診斷醫(yī)生根據(jù)組織的不同情況設(shè)定的，診斷醫(yī)生應(yīng)不斷加強(qiáng)相關(guān)知識的學(xué)習(xí)，正確運(yùn)用陽性對照的表達(dá)。

2 技術(shù)人員涉及的環(huán)節(jié)問題

2.1 檢測片質(zhì)量：因機(jī)械性損傷、電烙性損傷、固定工作人為差錯等原因?qū)е碌慕M織細(xì)胞外部或內(nèi)部結(jié)構(gòu)損傷及組織塊處理不良等都會引起組織化學(xué)染色效果不好。尤其組織固定，其目的在于良好地保持組織和細(xì)胞的生前結(jié)構(gòu)及位置，以保證化學(xué)成分和各種酶類（抗原）在組織中的定位研究，但當(dāng)前組織固定不良仍是技術(shù)中的主要問題，有關(guān)免疫組織化學(xué)技術(shù)、免疫組織化學(xué)質(zhì)量控制、免疫組織化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化的文章和書籍，都對其有所闡述。諸如組織固定不及時、組織人為的變干導(dǎo)致的抗原損失，固定液種類和濃度不恰當(dāng)使用造成的組織固定不良，固定時間、處理工藝掌握的差異影響的組織固定效果，等等，都會造成免疫組織化學(xué)染色效果不好。

2.2 抗原修復(fù)質(zhì)量：抗原修復(fù)技術(shù)的應(yīng)用提供了免疫組織化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化的基礎(chǔ)，但目前國內(nèi)技術(shù)的最突出和最頑固的問題還是抗原修復(fù)質(zhì)量問題，主要有修復(fù)溫度、時間掌握不利，修復(fù)液質(zhì)量存在問題等。專業(yè)內(nèi)普遍認(rèn)為，甲醛等固定液造成組織抗原失活是影響免疫組織化學(xué)染色應(yīng)用的重要原因，挽救因甲醛固定而失活的抗原是克服途徑之一，抗原修復(fù)是解決問題的焦點(diǎn)，目前最需要改進(jìn)的方面就是要進(jìn)行充分的抗原修復(fù)。

3 總結(jié)

縱觀免疫組織化學(xué)染色應(yīng)用的全過程，為使免疫組織化學(xué)染色能真正地有效地為病理診斷服務(wù)，診斷醫(yī)生和技術(shù)人員應(yīng)建立互相尊重、團(tuán)結(jié)互助、共同提高、密切配合的和諧關(guān)系，共同努力爭取獲得合格的準(zhǔn)確的免疫組織化學(xué)染色結(jié)果。病理診斷在臨床治療工作和醫(yī)院質(zhì)量中舉足輕重，加強(qiáng)病理診斷工作的質(zhì)量管理相當(dāng)重要，科學(xué)的管理和規(guī)范化操作，是解決質(zhì)量問題的關(guān)鍵。

為了促進(jìn)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化，檢測免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的可靠性，每次染色都應(yīng)該進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，保證室內(nèi)質(zhì)控、保證免疫組織化學(xué)染色的質(zhì)量是全科室人員的責(zé)任。病理科主任應(yīng)基于相當(dāng)過硬的免疫組織化學(xué)診斷知識和豐富的免疫組織化學(xué)技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，有責(zé)任指導(dǎo)監(jiān)督科室內(nèi)免疫組織化學(xué)質(zhì)控工作，加強(qiáng)人員繼續(xù)教育工作，開展免疫組織化學(xué)相關(guān)知識的培訓(xùn)提高工作。

參考文獻(xiàn)

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[關(guān)鍵詞] 胃原發(fā)性腫瘤；神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤；臨床病理分析

[中圖分類號] R36 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2013）07（c）-0106-02

神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（neuroendocrine tumor，NET）是一組起源于肽能神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的異質(zhì)性腫瘤，可發(fā)生于全身許多器官和組織，其中以胃腸胰NET最常見，Yao等[1]研究發(fā)現(xiàn)NET的發(fā)病率近年來有上升的趨勢。本研究對發(fā)生于胃的18例NET患者進(jìn)行分析，探討胃神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤（gastric neuroendocrine tumor，GNET）的病理特征及鑒別診斷方法，旨在提高對該病的認(rèn)識。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集云浮市新興縣人民醫(yī)院病理科2005年7月～2012年12月18例胃原發(fā)性NET病例資料，包括原始取材記錄、HE切片、免疫組織化學(xué)技術(shù)染色切片和原病理診斷資料，其中，后期腫塊切除手術(shù)病理資料6例。所有病例資料中，男8例，女10例，中位年齡55歲，隨訪時間6個月～6年。

1.2 方法

所有標(biāo)本經(jīng)4%的甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋切片，HE染色和免疫組織化學(xué)技術(shù)染色，免疫組織化學(xué)技術(shù)采用PV-7000二步法，DAB顯色，突觸素（synaptophysin，Syn）、嗜鉻粒素A（chromaffin granule A，CgA）和Ki-67等試劑均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。Syn、CgA陽性細(xì)胞胞質(zhì)呈黃色顆粒狀，Ki-67為細(xì)胞核陽性表達(dá)，設(shè)陽性和陰性對照，光學(xué)顯微鏡下觀察組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果。通過門診復(fù)診、電話及郵件等方式隨訪。

1.3 分類標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)2010年WHO新的分類方法將胃腸NET分為3類：①NET，根據(jù)核分裂象與Ki-67指數(shù)分為NET 1級和NET 2級；②神經(jīng)內(nèi)分泌癌（neuroendocrine carcinoma，NEC），根據(jù)細(xì)胞形態(tài)大小分為大細(xì)胞NEC和小細(xì)胞NEC；③混合性腺神經(jīng)內(nèi)分泌癌（mixed adenoneuroendocrine carcinoma，MANEC），要求每種腫瘤成分不少于30%[2]。

2 結(jié)果

2.1 臨床特點(diǎn)

患者臨床癥狀相似，主要為上腹部不適、隱痛，部分伴有黑便。發(fā)生部位：賁門1例，胃底6例、胃體6例，胃竇幽門部5例。腫瘤大小：手術(shù)切除病理資料6例中，腫瘤直徑為1.0～11.0 cm。腫瘤巨檢：隆起型11例、局限潰瘍型3例、浸潤型4例。

2.2 光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果

本研究中NET 14例，其中，男性5例，女性9例；鏡下腫瘤細(xì)胞較小，呈多邊形、卵圓形，胞質(zhì)中等量，核圓較深染，染色質(zhì)分面均勻，無明顯核仁，細(xì)胞排列可呈實(shí)心巢狀、結(jié)節(jié)狀、菊形團(tuán)狀等，核分裂象少見，無壞死。NEC 3例，其中，男性2例，女性1例；小細(xì)胞NEC 2例，鏡下腫瘤細(xì)胞小或中等大，像淋巴細(xì)胞，大小約為成熟淋巴細(xì)胞的2倍，胞質(zhì)少，彌漫性或成巢狀生長，核染色質(zhì)均質(zhì)細(xì)膩，核分裂象常見，灶狀壞死，胃鏡鉗取檢標(biāo)本常被擠壓變形；大細(xì)胞NEC 1例，腫瘤由大細(xì)胞組成，胞質(zhì)豐富，核空泡明顯，核仁突出，可見局部壞死。MANEC 1例，男性，鏡下見神經(jīng)內(nèi)分泌成分為小細(xì)胞NEC，腺癌成分為管狀腺癌，每種成分超過30%。

2.3 免疫組織化學(xué)技術(shù)染色結(jié)果

18例胃原發(fā)性NET中Syn和CgA均呈陽性表達(dá)，低級別NET呈彌漫性陽性表達(dá)，高級別NET陽性表達(dá)相對較弱，Ki-67在小細(xì)胞NEC中高表達(dá)（>60%+）。

3 討論

NET是一類起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的腫瘤，包含了由高分化到低分化的腫瘤譜系[3]。近年來，GNET的發(fā)病率逐年升高，占整個消化道NET的11%～41%。馮強(qiáng)等[4]報(bào)道，NET患者在女性中居多，而男性NEC發(fā)病率更高，本組NET和NEC患者中男、女比例分別為1∶1.8和2∶1，與報(bào)道相似。

GNET作為一個譜系，其發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，組織學(xué)上由高到低，生物學(xué)行為上由傾向于良性到惡性，在同一腫瘤中其內(nèi)分泌細(xì)胞會出現(xiàn)不同分化。多數(shù)低級別NET生長非常緩慢，如果發(fā)生轉(zhuǎn)移，通常局限于局部淋巴結(jié)和肝臟中，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移并不影響長期生存。NET 2級腫瘤可能是一組多相性的腫瘤，這樣可以解釋其在不同的研究中具有不同的預(yù)后[5]。而高級別NET（包括NEC和MANEC）預(yù)后普遍較差，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，脈管內(nèi)癌栓發(fā)生率高，即便進(jìn)行規(guī)范的根治及淋巴結(jié)清掃，術(shù)后總體生存期仍然較短。GNET的預(yù)后與諸多因素有關(guān)，因此，2010年WHO分類中，病理專家推薦病理報(bào)告中必須包括標(biāo)本類型、腫瘤部位、大小和數(shù)目、浸潤深度和范圍、脈管和神經(jīng)受累及情況、核分裂象數(shù)和（或）Ki-67陽性指數(shù)、神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物（Syn與CgA）、切緣情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，以供腫瘤分期與預(yù)后參考。本組14例低級別NET患者隨訪6個月～6年均存活，而4例高級別NET患者中，3例術(shù)后2年內(nèi)死亡，1例術(shù)后5個月見肺轉(zhuǎn)移灶。以往的病理報(bào)告中，未要求對核分裂象數(shù)和Ki-67陽性指數(shù)作評估，本組實(shí)驗(yàn)證實(shí)，兩者評估值越高，預(yù)后越差。

胃鏡檢查是發(fā)現(xiàn)GNET的重要手段，足夠量的活檢取材有助于提高確診率[6]。部分大細(xì)胞NEC鏡下特點(diǎn)與低分化腺癌難以區(qū)分，易被誤診為分化差的胃腺癌；胃鏡鉗取樣標(biāo)本容易擠壓變形，導(dǎo)致部分小細(xì)胞ENC易與淋巴瘤相混淆。本組有1例大細(xì)胞NEC，最初診斷為低分化腺癌，1例小細(xì)胞ENC最初診斷為非霍奇金淋巴瘤，經(jīng)免疫組織化學(xué)技術(shù)Syn和CgA染色陽性后確診為NEC。因此，免疫組織化學(xué)技術(shù)在具有腺樣結(jié)構(gòu)的大細(xì)胞NEC和小細(xì)胞為NEC的鑒別診斷中作用巨大，對指導(dǎo)治療與預(yù)后判斷有重要意義，是目前明確診斷不可缺少的輔助檢查方法。

綜上所述，胃原發(fā)型NET在臨床表現(xiàn)方面較其他常見胃腫瘤無特異性，診斷與鑒別診斷主要依靠病理形態(tài)和免疫組織化學(xué)技術(shù)，正確的病理分型對治療和預(yù)后評估均有指導(dǎo)意義。

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【關(guān)鍵詞】胃癌 DEK蛋白：免疫組織化學(xué)：組織芯片

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料 胃癌組織芯片

人胃癌組織芯片購置于上海芯超生物科技有限公司，組織芯片編號為200點(diǎn)的0D-CT-Dgstm01-002（90例胃癌，8例正常組織，12例其他器官對照組織，共110例）和62點(diǎn)的OD-CT-Dgsm03-003（31例胃癌和31例癌旁組織）。

1.2主要試劑

1.2.1 PBS緩沖液（PH：7.2-7.4）：購于美國CAMBREX公司；

1.2.2 枸櫞酸緩沖液（PH：6.0）：購于北京中山生物技術(shù)有限公司；

12.3 單克隆抗體：DEK抗體為美國US bio生物公司產(chǎn)品；

1.2.4 ABC免疫組織化驗(yàn)試劑盒：購于北京華美生物工程公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法：

1.3.1免疫組織化學(xué)染色方法檢測DEK蛋白在胃癌中的表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色方法根據(jù)ABC試劑盒說明書步驟進(jìn)行。

1.3.2免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定

DEK蛋白以細(xì)胞核呈棕黃色顆粒為陽性。蛋白表達(dá)采用雙評分半定量法進(jìn)行評分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理分析，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果分析采用卡方檢驗(yàn)，P

2結(jié)果

2.1 DEK蛋白在胃癌中的表達(dá)見表1

2.2 DEK蛋白在胃癌不同組織學(xué)類型中的表達(dá)見表2

2.3 DEK蛋白的過表達(dá)與胃癌病理學(xué)行為的相關(guān)性見表3

3 討論

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其死亡率局世界癌癥的第二位，在我國胃癌的死亡率局各種惡性腫瘤的首位。目前發(fā)現(xiàn)參與胃癌的發(fā)生發(fā)展過程的癌基因有C-met、ras、bcl-2、c-myc、survivin、Ki-67、CDK4和MMPs基因等。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要方式，在胃癌的早期即可出現(xiàn)。有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對胃癌的治療方案產(chǎn)生重要影響。因此，早期發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并及時進(jìn)行治療是改善胃癌預(yù)后、提高生存率的關(guān)鍵。

DEK蛋白廣泛存在于有機(jī)體的大多數(shù)細(xì)胞中，是一種豐富的細(xì)胞白，存在于大多數(shù)生物體中和一些單核細(xì)胞有集體中（小木軍除外）。研究發(fā)現(xiàn)DEK蛋白與自身免疫疾病的發(fā)生有密切相關(guān)，同時在許多惡性腫瘤比如膀胱癌、卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、小細(xì)胞肺癌和肝癌中，DEK蛋白均有過表達(dá)。人類DEK蛋白是在急性粒細(xì)胞白血?。ˋML）亞型中作為一種融合蛋白，這種AML亞型的特征是有特殊的染色體異位（6；9）（p23；q34）。它廣泛存在于有機(jī)體的大多數(shù)細(xì)胞中（酵母菌除外）。人類的DEK蛋白由375個氨基酸組成。DEK蛋白定位于細(xì)胞核，主要分布與細(xì)胞核的常染色質(zhì)，DEK的表達(dá)水平與細(xì)胞的生理狀態(tài)有密切相關(guān)，細(xì)胞增殖狀態(tài)時DEK表達(dá)水平升高。而靜止或終末分化狀態(tài)時細(xì)胞內(nèi)的DEK表達(dá)水平降低。

我們利用胃癌組織芯片，通過免疫組化方法研究DEK蛋白在胃癌中的表達(dá)及病理學(xué)行為相關(guān)性。結(jié)果表明，DEK蛋白在胃癌中的陽性表達(dá)率明顯高于正常胃黏膜組織，兩組間有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （p

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篇4

【關(guān)鍵詞】cd44v5  胃癌  免疫組織化學(xué)  淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

        在我國，胃癌(gastric carcinoma, gc)死亡率居消化系統(tǒng)各類癌癥死亡的首位，嚴(yán)重危害人類健康。胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要因素，臨床和病理資料顯示，有60%以上的患者在確診時已發(fā)生腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移[1]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌轉(zhuǎn)移的主要方式，是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立因素，評估淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況對決定術(shù)式、判斷預(yù)后具有重要意義[2]。目前發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞表達(dá)多種 cd44的剪接變異體(cd44v)，其表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲性、轉(zhuǎn)移性有關(guān)。在本研究采用免疫組織化學(xué)法對胃癌患者cd44v5表達(dá)進(jìn)行研究，探討cd44v5表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

        1  材料和方法

        1.1材料  濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2006年8月-2008年7月期間，經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)的48例胃癌患者的臨床資料、病理結(jié)果及標(biāo)本蠟塊。其中男性30例，女性18例，年齡≥60歲38例，<60歲10例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例。分化好(包括高、中分化腺癌)16例，分化差(包括低分化腺癌、印戒細(xì)胞癌、粘液腺癌、類癌)32例。cd44v5單克隆抗體(兔抗人)、即用型sabc免疫組化檢測試劑盒、dab顯色試劑盒均購于美國mscn life生物技術(shù)有限公司。

        1.2方法  采用免疫組織化學(xué)技術(shù)sabc法（抗體濃度1:80）對48例胃癌標(biāo)本cd44v5的表達(dá)進(jìn)行檢測。cd44v5免疫組化結(jié)果的判定，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，cd44v5在胞漿和胞膜都有表達(dá)，以膜上有cd44v5線樣表達(dá)作為陽性表達(dá)，連續(xù)計(jì)數(shù)10個高倍視野，根據(jù)有陽性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的百分比將cd44v5的表達(dá)分為以下四組：(1)陰性組：陽性細(xì)胞數(shù)百分比<5%；(2)弱陽性組：陽性細(xì)胞數(shù)百分比在6-35%之間； (3)陽性組：陽性細(xì)胞數(shù)百分比在36-70%之間；(4)強(qiáng)陽性組：陽性細(xì)胞數(shù)百分比>70%[3]。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)時將陰性和弱陽性組之和作為陰性組，陽性和強(qiáng)陽性組之和作為陽性組。將檢測結(jié)果與臨床資料對照分析，采用spss統(tǒng)計(jì)軟件處理，以α=0.05(雙側(cè))作為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

        2  結(jié)果

        48例病例中cd44v5表達(dá)陽性28例(58.3%) (圖1，2)，表達(dá)陰性20例(41.7%) (見圖3)。cd44v5蛋白的表達(dá)水平與患者的性別、年齡、腫瘤大小及發(fā)生部位均無顯著關(guān)系(p>0.05)，與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(p<0.05)，即發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，癌細(xì)胞中的cd44v5陽性表達(dá)率(24/39, 61.5%)明顯高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織(4/9, 44.4%)。

        3  討論

        侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤標(biāo)志性生物學(xué)行為。腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞與宿主間復(fù)雜、多步驟相互作用的結(jié)果，也是胃癌治療失敗和死亡的主要原因。liotta[4]首先提出浸潤轉(zhuǎn)移的三步學(xué)說：即粘附、降解和轉(zhuǎn)移。其中粘附是指腫瘤細(xì)胞通過自身細(xì)胞膜表面的粘附受體與細(xì)胞外基質(zhì)成分間的相互作用。近年來研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞都是首先破壞細(xì)胞上的粘附分子而發(fā)生轉(zhuǎn)移的。

        cd44v5是cd44的一個變異體，屬細(xì)胞表面黏附分子家族。cd44是一種在淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞表面上發(fā)現(xiàn)的、高度糖基化的跨膜糖蛋白[5]。是一類多結(jié)構(gòu)、多功能的細(xì)胞表面黏附分子，廣泛存在于細(xì)胞與細(xì)胞間和細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間。其基因組結(jié)構(gòu)包括20個外顯子。前面5個和最后5個外顯子是恒定的，中間的10個外顯子是可變的，形成可變區(qū)。它可以通過 10個可變外顯子的選擇性剪接及糖基化產(chǎn)生多種變異體。目前發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞表達(dá)多種cd44的剪接變異體，其表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲性、轉(zhuǎn)移性有關(guān)。cd44是多功能的受體，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與基質(zhì)間的交互作用、細(xì)胞移動、淋巴結(jié)歸巢、遷移細(xì)胞的生長因子的表達(dá)、傳遞生長信號等。cd44還參與降解ha，傳遞信號調(diào)節(jié)造血和凋亡。許多癌細(xì)胞及其轉(zhuǎn)移灶都有高水平表達(dá)。cd44特別是它的變異體常用來診斷或作為判斷人類惡性疾病的指標(biāo)[6]。cd44v表達(dá)與惡性腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)的機(jī)理可能是：cd44分子的氨基酸末端細(xì)胞外區(qū)域能與細(xì)胞外間質(zhì)及基底膜的透明質(zhì)酸結(jié)合，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動及形態(tài)，cd44v與透明質(zhì)酸結(jié)合而“錨”定在宿主細(xì)胞外間質(zhì)及基底膜上，同時cd44v陽性細(xì)胞更易與后小靜脈中的高柱狀內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合，使腫瘤細(xì)胞更易進(jìn)入淋巴系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)。

        cd44不同變異型在不同的組織中的表達(dá)的報(bào)道各不相同。有學(xué)者報(bào)道cd44可以存在于正常組織中[7]，另一些人則認(rèn)為cd44只在惡性組織中表達(dá)[8]。普遍認(rèn)為，cd44與胃癌的轉(zhuǎn)移、進(jìn)展、預(yù)后有關(guān)。王書奎[9]等采用流式細(xì)胞術(shù)對39例胃癌患者的癌灶、癌旁組織、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶和外周血的cd44v5表達(dá)率進(jìn)行檢測和對比，結(jié)果胃癌患者不同組織的cd44v5陽性細(xì)胞檢出率顯著高于對照組，胃癌患者的各種組織中，伴腫瘤轉(zhuǎn)移患者的cd44v5細(xì)胞檢出率均顯著高于未轉(zhuǎn)移者。muller[10]用免疫組化方法檢測胃癌中的cd44v5，cd44v5的表達(dá)與胃癌病理分級、淋巴結(jié)累及、血液和淋巴浸潤有關(guān)。cd44v5陽性病人的總體生存率明顯低于陰性病人。

        目前研究表明cd44v5與胃癌的一些生物學(xué)行為，尤其是侵襲和轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系，但是關(guān)于其在胃癌中的作用尚有不少分歧。ham等認(rèn)為cd44v5的表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。muller等研究結(jié)果提示cd44v5在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌中的表達(dá)率與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率61.5%(24/39)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組44.4% (4/9)，與ham等認(rèn)為cd44v5的表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)的論點(diǎn)一致。在胃癌組織中，cd44v5表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，因此我們認(rèn)為cd44v5可以作為判斷胃癌惡性程度和預(yù)后的參考指標(biāo)。

        圖1  病理證實(shí)為透明細(xì)胞癌，cd44v5免疫組織化學(xué)染色（×400）示成片的瘤細(xì)胞胞漿、胞膜被染成棕黃色。按shimizu方法，陽性細(xì)胞數(shù)百分比>70%，劃為強(qiáng)陽性組。

        圖1    

       圖2  病理證實(shí)為腺癌，cd44v5免疫組織化學(xué)染色（×400）示大部分瘤細(xì)胞胞漿、胞膜被染成棕黃色。按shimizu方法，陽性細(xì)胞數(shù)百分比在36-70%之間，劃為陽性組。

        圖2  

        圖3  病理證實(shí)為腺癌，cd44v5免疫組織化學(xué)染色（×400）未見陽性細(xì)胞，劃為陰性組。

        圖3  

參 考 文 獻(xiàn)

[1] castells a, anil k. principles of oncogenesis[m]. chapter 5: tumor invasion and metastasis, 2002: l-12.

[2] saito h, tsujitani s, oka s, et al. prediction of survival period for patients with postoperative recurrence after curative resection for advanced gastric carcinoma. hepatogastroenterology, 2001,48:290-293.

[3] castella em, arizaa, pellieerl, et al. differential expression of cd44v6 in metastases of intestinal and diffuse types of gastric careinoma[j].clin pathol，1998,51:134-137.

[4] litta la, steeg ps, stetler steveson wg. cancer metastasis and angiogenesis: an imbalance ofpositire and negative regulation[j]. cell,1991,64(2):327.

[5] mackay cr，terpe hj，stauder r，et a1.expression and modulation of cim4 variant isoforms in humans[j]. cell biol，1994,l24(1-2)：71.

[6] naor d, sionov rv, ish-shalom d. cd44: structure, function, and association with the malignant process[j]. adv cancer res, 1997,71:241-319.

[7] weg-remers s, anders m, von lampe b, et al.decreased expression of cd44 splicing variants in advanced colorectal carcinomas[j]. eur j cancer,1998,34: 1607-1611.

[8] harn hj, ho li, chang jy, et al.differential expression of the human metastasis adhesion molecule cd44v in normal and carcinomatous stomach mucosa of chinese subjects[j]. cancer, 1995,75:1065-1071.

篇5

關(guān)鍵詞：  輸尿管梗阻； 纖維化； 姜黃素； 免疫組織化學(xué)； 大鼠，Spragua-Dawley； 腎間質(zhì)

      

腎間質(zhì)纖維化幾乎是所有慢性腎臟疾病進(jìn)行性發(fā)展的共同最終通路，延緩腎間質(zhì)纖維化的發(fā)展，可降低終末期腎病(ESRD)的發(fā)生率［1］。姜黃素是姜黃中提取的一種植物多酚，也是姜黃發(fā)揮藥理作用最重要的活性成分。近年來的研究不僅證明了姜黃的傳統(tǒng)作用，而且還揭示出一些新的藥理作用，如抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗人類免疫缺陷病毒、保護(hù)肝臟和腎臟、抗纖維化以及防癌抗癌等作用，而且無明顯的毒副作用［2］。2007年5~8月研究了姜黃素抑制腎間質(zhì)纖維化的作用機(jī)制，其中重在研究姜黃素對在單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）模型大鼠中腎間質(zhì)中轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor，CTGF）的影響，希望在臨床上研制出有效藥物。

    1  材料與方法

    1.1  材料

    雄性、無特定病原體動物級（specific pathogen free, SPF）、Sprague-Dawley大鼠[同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動物中心提供，生產(chǎn)許可證：SCXK（鄂）2004-0028]30只，7 w齡，體重(180.2±8.35)g。動物房飼養(yǎng)環(huán)境為每籠6只，每24 h換1次墊料，喂以正常飲食，自由進(jìn)水，溫度為（24±2）℃，相對濕度為（45±3）%。姜黃素純度為＞95%（美國Sigma公司）；兔抗大鼠TGF-β1、CTGF 多克隆抗體及SP免疫試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）。

    1.2  方法

    1.2.1  造模  適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按照完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方法，以體重由輕到重的順序編號用隨機(jī)排列表法分為假手術(shù)組、模型組、姜黃素組各10只。假手術(shù)組和模型組每天給予蒸餾水2 ml灌胃，姜黃素組將姜黃素粉末（200 mg·kg-1·d-1）混懸于2 ml蒸餾水中灌胃，術(shù)前1 d開始給藥。造模方法：模型組和姜黃素組行右側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)，質(zhì)量濃度為20 g/L戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉后，行正中豎切口打開腹腔，分離右側(cè)輸尿管并行雙結(jié)扎，假手術(shù)組只分離但不結(jié)扎。于術(shù)后第14天處死所有大鼠，處死前下腔靜脈取血3 ml做血生物化學(xué)檢驗(yàn)并行腎原位灌流去除血細(xì)胞。取右側(cè)腎臟，縱切為兩部分，一部分用體積分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛溶液浸泡24 h做病理及免疫組織化學(xué)檢測，另一部分速凍于-70 ℃冰箱。

   1.2.2  BUN、Scr檢測  采用自動生化分析儀(Beckman CX3 Delta)進(jìn)行BUN、Scr的檢測。

    1.2.3  免疫組織化學(xué)檢查  SP法檢測腎組織中的TGF-β1、CTGF表達(dá)，按SP試劑盒說明書進(jìn)行。每張切片不含腎小球的腎小管間質(zhì)區(qū)域，隨機(jī)選取8個高倍鏡視野（400倍），用免疫組織化學(xué)分析軟件系統(tǒng)HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)（同濟(jì)醫(yī)學(xué)院清屏影像公司）對所選視野內(nèi)的棕黃色陽性信號進(jìn)行圖像分析，計(jì)算各組大鼠腎組織TGF-β1、CTGF的平均陽性表達(dá)率，即棕黃色陽性信號占整個視野的百分比。

    1.2.4  腎組織病理檢查  右側(cè)腎組織行Masson染色，光鏡觀察腎間質(zhì)纖維化情況。間質(zhì)纖維化定量分析也借助HMIAS-2000高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)，取Masson染色切片，每張切片觀察8個不含腎小球，互不重疊的間質(zhì)高倍鏡視野（400倍），計(jì)算每張切片腎間質(zhì)綠染面積占整個視野的百分比。

    1.3  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量數(shù)據(jù)采用(x±s)表示，組間比較用單因素方差分析和兩兩比較用q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2  結(jié)果

    2.1  血生化檢查

    模型組和假手術(shù)組比較BUN、Scr都顯著升高（P＜0.01），姜黃素組和模型組比較，BUN、Scr都顯著降低（P＜0.01）。見表1。

    2. 2  免疫組化TGFβ1、CTGF的表達(dá)

    模型組與假手術(shù)組比較，TGFβ1、CTGF的表達(dá)都顯著上調(diào)（P＜0.01），而姜黃素組與模型組比較都顯著抑制了其表達(dá)（P＜0.01）。見表1、圖1和圖2。

    2.3  腎組織病理改變

    模型組中腎間質(zhì)增寬，可見間質(zhì)細(xì)胞增多，膠原成分增加，出現(xiàn)明顯的纖維化。模型組與假手術(shù)組比較，P＜0.01；姜黃素組與模型組比較，腎間質(zhì)的膠原成分顯著減少（P＜0.05）。見表1和圖3。表1  各組BUN、Scr、TGF-β1、CTGF及Masson染色面積比的改變情況(1)與假手術(shù)組比較P＜0.01；(2)與模型組比較P＜0.01，(3)P＜0.05

篇6

【關(guān)鍵詞】  喉鱗癌;claudin3;ecadherin;免疫組織化學(xué)

【摘要】  目的 檢測claudin3及上皮型黏附素(ecad)在喉鱗癌中的表達(dá)，探討二者在喉鱗癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測98例喉鱗癌組織及30例正常喉黏膜組織中claudin3、ecad蛋白的表達(dá)情況，并將檢測結(jié)果與臨床病理特征進(jìn)行綜合分析。結(jié)果 claudin3蛋白陽性表達(dá)主要定位于喉鱗癌癌旁正常黏膜細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，ecad蛋白陽性表達(dá)主要定位于喉鱗癌癌旁正常黏膜細(xì)胞膜，claudin3、ecad蛋白在喉鱗癌中表達(dá)的陽性率明顯低于正常黏膜。喉鱗癌中claudin3和ecad蛋白的表達(dá)與腫物大小、分化程度、有無甲狀軟骨累及和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。結(jié)論 claudin3和ecad在喉鱗癌組織中表達(dá)下調(diào)，二者可能與喉鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，聯(lián)合檢測claudin3和ecad可能與喉鱗癌的預(yù)后密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】  喉鱗癌;claudin3;ecadherin;免疫組織化學(xué)

喉鱗癌的發(fā)生發(fā)展是涉及多個蛋白水平的變化，而細(xì)胞間的黏附力丟失常導(dǎo)致細(xì)胞連接的破壞〔1〕。claudin3是緊密連接的主要跨膜蛋白，此蛋白在細(xì)胞間傳輸轉(zhuǎn)運(yùn)中起重要接頭作用，是細(xì)胞黏附功能的基礎(chǔ)，研究表明claudin3在眾多腫瘤組織中異常表達(dá)〔2〕。ecad是鈣依賴的黏附素家族的一個經(jīng)典成員。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測喉鱗癌組織中claudin3和ecad蛋白的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的相互關(guān)系，以深入探討二者在喉鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2005年8月至2008年8月本院病理科喉鱗癌切除標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組，共98例，年齡為31～79(平均51.3)歲。其中男76例，女22例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的63例，術(shù)前均未進(jìn)行放化療，同時選取30例癌旁正常黏膜組織為對照組。

1.2 試劑

實(shí)驗(yàn)用的兔抗人claudin3多克隆抗體由武漢博士德生物工程有限公司提供，鼠抗人ecad單克隆抗體，sp和dab顯色試劑盒均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 免疫組織化學(xué)方法檢測二種蛋白的表達(dá)

claudin3和ecad蛋白的表達(dá)應(yīng)用免疫組織化學(xué)sp法進(jìn)行。主要步驟：①將5 μm切片脫蠟水化后，用pbs沖洗3次，每次3 min。②用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)。③每張切片加1滴過氧化物阻斷溶液(試劑a)，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，室溫下孵育10 min。④pbs沖洗3次，每次3 min。⑤甩去pbs液，每張切片加1滴非免疫性動物血清(試劑b)，室溫下孵育10 min。⑥甩去血清，每張切片加1滴第一抗體，室溫下孵育60 min或4℃過夜。⑦pbs沖洗3次，每次3 min。⑧甩去pbs液，每張切片加1滴生物素標(biāo)記的第二抗體(試劑c)，室溫下孵育10 min。⑨pbs沖洗3次，每次3 min。⑩甩去pbs液，每張切片加1滴鏈霉菌抗生物素過氧化物酶溶液(試劑d)，室溫下孵育10 min。pbs沖洗3次，每次3 min。甩去pbs液，每張切片加2滴新鮮配制的dab溶液，顯微鏡下觀察3～10 min，陽性顯色為棕色。自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，0.1%鹽酸分化，pbs沖洗返藍(lán)。切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，中性樹膠封固。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

claudin3蛋白陽性染色位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，光鏡下以細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)同時出現(xiàn)棕黃色著色為陽性細(xì)胞，細(xì)胞無著色或者單純細(xì)胞質(zhì)著色、細(xì)胞膜著色為陰性細(xì)胞。ecad蛋白陽性染色位于細(xì)胞膜，呈棕黃色為陽性細(xì)胞，細(xì)胞無著色或者淡黃色為陰性細(xì)胞。合并計(jì)算高倍鏡下(×400)隨機(jī)選擇的5個視野中陽性細(xì)胞占全部計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞的百分率，平均每個視野細(xì)胞質(zhì)(膜)呈陽性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性，無明顯陽性反應(yīng)或陽性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)<10%為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用sas6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 claudin3和ecad在喉癌與正常黏膜中的表達(dá)

claudin3和ecad在喉鱗癌中表達(dá)的陽性率明顯低于正常黏膜(p<0.000 1)。見表1，圖1。表1 claudin3和ecad在喉癌與正常黏膜中的陽性表達(dá)

2.2 claudin3和ecad的表達(dá)與喉鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

喉鱗癌claudin3和ecad蛋白的表達(dá)與腫物大小、分化程度、有無甲狀軟骨累及和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，而與患者的年齡及性別無明顯相關(guān)。見表2。圖1 ecad和claudin3在喉癌組織和正常黏膜組織中的表達(dá)(×400)表2 claudin3和ecad的陽性表達(dá)與喉鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

claudins是一類跨膜蛋白，是從雞肝中得到的一種緊密連接的片段，迄今在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)至少有24種不同蛋白，分子量大約為20～27 kd之間。近年有研究顯示，多種上皮性惡性腫瘤claudins有異常表達(dá)，并且與這些腫瘤發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系〔1〕。claudin3是其家族的重要成員，不僅具有調(diào)節(jié)細(xì)胞間物質(zhì)流動和維持上皮細(xì)胞極性的功能，而且還參與細(xì)胞增殖分化、基因轉(zhuǎn)錄、腫瘤抑制等過程。但我們發(fā)現(xiàn)claudin3在不同腫瘤中的表達(dá)并不完全相同。soini等〔3〕通過免疫組化研究表明claudin3在腎癌、膀胱癌中的表達(dá)下調(diào)。long等〔4〕利用northen印跡發(fā)現(xiàn)在人類前列腺上皮中，claudin3基因轉(zhuǎn)錄的mrna量較周圍正常組織明顯增高，同時用免疫組化發(fā)現(xiàn)claudin3蛋白在骨轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)也是增高的。resnick〔5〕等發(fā)現(xiàn)claudin3在腸型胃癌中是高表達(dá)的。但是claudin3在喉鱗癌中的表達(dá)未見報(bào)道。黏附素是一組ca2+依賴跨膜蛋白，包括至少9個基因家族，其中以ecad最為重要，是鈣依賴的黏附素家族的一個經(jīng)典成員。近年來，有關(guān)緊密連接蛋白及黏附分子功能的研究日趨增多，并證實(shí)了其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要作用〔6〕。當(dāng)腫瘤組織中ecad發(fā)生結(jié)構(gòu)功能異常，如轉(zhuǎn)錄受抑、基因突變、啟動子區(qū)域甲基化、β連接蛋白磷酸化時，其細(xì)胞黏附功能發(fā)生障礙，不僅可使細(xì)胞分化降低，而且可致腫瘤細(xì)胞侵襲性生長，并易脫離原發(fā)部位，向深部浸潤而發(fā)生局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)方法檢測claudin3和ecad在喉鱗癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)claudin3、ecad的陽性表達(dá)率比對照組明顯降低，且都與喉癌的分化程度、腫物大小、是否累及甲狀軟骨及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。這些結(jié)果既提示claudin3和ecad在喉癌發(fā)生發(fā)展中可能起相當(dāng)重要的作用，又由于分化程度、腫物大小、是否累及甲狀軟骨及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是與喉鱗癌患者預(yù)后密切相關(guān)的因素，因此提示二者低表達(dá)可能與患者的預(yù)后不良密切相關(guān)。claudin3促進(jìn)腫瘤生長可能有：①引起緊密連接屏障的破壞，導(dǎo)致營養(yǎng)素、生長因子和其他活性分子向腫瘤內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)，促使腫瘤處于生長狀態(tài)。②claudin3下調(diào)的腫瘤細(xì)胞不能進(jìn)入細(xì)胞程度性死亡過程，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展〔7〕。而claudin3與ecad可能共同參與特定細(xì)胞連接與黏附信號的傳遞，影響細(xì)胞遷移，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

【參考文獻(xiàn)】

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篇7

【關(guān)鍵詞】 眼瞼; 基底細(xì)胞癌; Survivin; 統(tǒng)計(jì)分析

眼瞼基底細(xì)胞癌(basalcell carcinoma，BCC)是最常見的眼瞼惡性腫瘤，約占眼瞼惡性上皮性腫瘤的85%～95%[1]。研究顯示多種癌基因的異常表達(dá)在眼瞼BCC的發(fā)生發(fā)展過程中有重要作用，研究癌相關(guān)基因抗原在BCC發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移機(jī)制中的作用，對于揭示BCC的生物學(xué)行為及探索有效的防治方法有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 收集武漢市中心醫(yī)院和武漢大學(xué)中南醫(yī)院病理科 2002 ～ 2009 年手術(shù)切除及活檢的眼瞼基底細(xì)胞癌( basalcell carcinoma，BCC)標(biāo)本共20例，另取癌周圍正常組織5例作對照。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定， 常規(guī)HE染色，光鏡觀察，病理檢查確診。

1.1.2 主要試劑 即用型鼠抗人Survivin單克隆抗體(北京中山生物技術(shù)有限公司);超敏即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒(福州邁新生物有限公司);DAB顯色試盒及多聚賴氨酸(北京中山生物技術(shù)有限公司)。

1.1.3 主要儀器 YWY781型醫(yī)用微波儀，250W，50Hz，浙江臨安電子器材廠生產(chǎn);家用高壓鍋。

1.2 方法

1.2.1 常規(guī)HE染色 取材、固定、脫水、透明、切片和HE染色。

1.2.2 免疫組織化學(xué)SP法檢測Survivin抗原 主要步驟： ① 4μm組織切片常規(guī)脫蠟至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;② 抗原修復(fù)(檸檬酸緩沖液微波抗原修復(fù)法)，室溫自然冷卻后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗5×3 min;③ 滴加3%過氧化氫，37℃濕盒孵育10min以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;④正常羊血清37℃濕盒孵育10min以減少非特異性背景;⑤ 甩去多余血清，分別滴加一抗，4℃孵育過夜，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×5 min;⑥ 滴加生物素標(biāo)記的二抗37℃濕盒孵育10min，0.01M PBS(Pp 7.4)漂洗3×3 min;⑦ 滴加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物復(fù)合物37℃濕盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;⑧ 滴加新鮮配置的DAB顯色液顯色，光鏡下控制反應(yīng)時間(約3～5 min)，自來水沖洗終止反應(yīng); ⑨ 蘇木素復(fù)染，流水沖洗，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，流水沖洗，0.1%氨水返藍(lán);⑩ 梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢;用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

Survivin抗原以細(xì)胞漿或胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)。陰性對照除細(xì)胞核染成藍(lán)色外，細(xì)胞漿或胞核內(nèi)無棕黃色反應(yīng)物。

采用HPIAS2000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)(同濟(jì)千屏影像公司)對細(xì)胞漿或胞核的表達(dá)進(jìn)行定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野(×400)，測定每個視野下陽性反應(yīng)的平均光密度、陽性反應(yīng)面積和所有細(xì)胞總面積，計(jì)算陽性面積率(陽性面積率=單位面積中陽性反應(yīng)的總面積/單位面積中細(xì)胞的總面積×100%)。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS11. 5 軟件對各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率做單因素方差分析和SNK(q) 檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。

2 結(jié)果

2.1 HE染色

瘤體由基底樣細(xì)胞組成，細(xì)胞核大，呈圓形或橢圓形，胞漿為嗜堿性，可見少量核分裂相。瘤體周邊細(xì)胞呈柵欄狀排列。腫瘤周圍結(jié)締組織增生，有較多纖維母細(xì)胞，產(chǎn)生膠原纖維包繞在瘤體周圍。

2.2 Survivin的表達(dá)

基底細(xì)胞癌組織中可見癌細(xì)胞胞漿內(nèi)棕黃色顆粒較多，Survivin表達(dá)呈陽性;癌旁組織的細(xì)胞胞漿內(nèi)可見極少量的棕黃色顆粒，Survivin表達(dá)呈陰性。圖像分析結(jié)果顯示：眼瞼基底細(xì)胞癌Survivin表達(dá)的平均光密度為0.3853±0.0254，癌旁組織Survivin表達(dá)的平均光密度為0.0246± 0.0029; 眼瞼基底細(xì)胞癌Survivin表達(dá)的陽性面積率為0.3520±0.0263;癌旁組織中Survivin表達(dá)的陽性面積率為0.0305±0.0021。經(jīng)單因素方差分析，組間有顯著性差異(P

3 討論

基底細(xì)胞癌是眼瞼最常見惡性腫瘤，常發(fā)生于長期暴露于陽光下的中年以上的人群，男性略多，好發(fā)于下瞼及內(nèi)眥，病變位置表淺， BCC 是生長緩慢的腫瘤，病程一般較長， 最長可達(dá)20年。BCC一般只局部侵襲， 很少轉(zhuǎn)移， 但若不及時治療， 腫瘤可侵及眼輪匝肌、瞼板和眶骨， 并可經(jīng)眼眶向顱內(nèi)侵犯。近年來隨著人口的高齡化， BCC有逐漸增多的趨勢[2，3]。

人Survivin基因位于17號染色體端粒部位，基因總長度14. 7KB，包含4個外顯子和3個內(nèi)含子。Survivin作為IAP家族中最小的1個新成員，結(jié)構(gòu)獨(dú)特。它只含有1個B IR結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)被認(rèn)為是Survivin發(fā)揮抗凋亡作用的部位[5～7]。目前普遍接受的觀點(diǎn)是， Survivin作用于各個凋亡途徑的匯集點(diǎn): 直接抑制終末效應(yīng)蛋白caspase9、caspase3和caspase7。最新發(fā)現(xiàn)Smac分子是與細(xì)胞色素C同時從線粒體釋放出來的具有拮抗IAP 作用的蛋白小分子， 它是通過其NH2 末端與IAP分子結(jié)合而抑制后者的功能。受Smac分子作用的啟發(fā)，大量的工作致力于發(fā)現(xiàn)能與IAP結(jié)合的非肽類小分子化學(xué)物質(zhì)，這些小分子能夠通過模擬Smac分子的作用而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[8～10]。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成員，Survivin具有腫瘤特異性，只表達(dá)于腫瘤和胚胎組織，且與腫瘤細(xì)胞的分化增殖及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[11]?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，Survivin在所有常見惡性腫瘤中表達(dá)，如乳腺癌、胃癌、腎癌、黑色素癌、腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞癌和卵巢癌等，而在正常組中無表達(dá)。它的這一特性，使得靶向Survivin的免疫治療和基因治療能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制其增殖，正常組織卻能不受損傷和影響。Survivin可以作為抗腫瘤免疫治療的一個廣泛適用的靶基因[12～15]。

實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)方法觀察了Survivin在眼瞼基底細(xì)胞癌組織和癌旁組織中的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)表明眼瞼基底細(xì)胞癌與癌旁組織之間，Survivin的平均光密度及陽性面積率有顯著性差異(P

目前，關(guān)于Survivin在腫瘤中的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展，但是還有不少方面需要更深入地進(jìn)一步研究。如Survivin與腫瘤發(fā)生發(fā)展及其臨床預(yù)后的相關(guān)性，Survivin在細(xì)胞漿和細(xì)胞核中的表達(dá)受到何種調(diào)節(jié)，Survivin的各種異構(gòu)體之間的關(guān)系及作用，以及Survivin在腫瘤靶向治療中的作用等都需要我們?nèi)ヌ骄俊?/p>

參考文獻(xiàn)

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篇8

【關(guān)鍵詞】 IgA腎?。荒I組織；抗原

IgA腎病也稱為Berger病， 是指患者腎小球系膜區(qū)域內(nèi)有IgA或IgA沉積， 可伴隨腎小球系膜區(qū)域有其他免疫球蛋白沉積的原發(fā)性腎小球病變。該病是終末期腎病的重要誘導(dǎo)因素[1]， 其發(fā)病機(jī)制尚不明確， 目前認(rèn)為由免疫、遺傳和環(huán)境因素共同引發(fā)IgA腎病[2]。已有調(diào)查表明， IgA腎病患者35%～40%伴隨有上呼吸道感染癥狀， 而人巨細(xì)胞病毒（HCMV）和腺病毒（ADV）等和上呼吸道感染之間有密切關(guān)聯(lián)。同時， IgA腎病患者乙型肝炎病毒（HBV）感染率明顯比健康人群高。為對HCMV、AdV、HBV抗原在IgA腎病患者腎組織中的表達(dá)和其意義進(jìn)行探討， 作者選取34例IgA腎病患者， 利用免疫組織化學(xué)技術(shù)對腎組織中HCMV、AdV、HBV抗原進(jìn)行檢測， 現(xiàn)將相關(guān)情況報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取本院于2011年7月～2013年8月診治IgA腎病患者34例， 所有患者均臨床癥狀、輔助檢查結(jié)果均與WHO 1999年制定的IgA腎病診斷標(biāo)準(zhǔn)相符， 其中男20例， 女14例， 患者年齡為31～58歲， 平均為（42.3±2.5）歲；病程為1～5周， 平均（2.6±1.1）周；所有患者均有不同程度水腫、高血壓， 24 h尿蛋白定量1～3 g， Lee氏分級為Ⅰ～Ⅳ級。

1. 2 方法 取IgA腎病患者腎活檢組織， 利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測腎組織中HCMV、AdV、HBV抗原表達(dá)情況。在檢測中所用鏈霉親和素-生物素復(fù)合物（sABC）試劑盒、DAB顯色試劑盒、鼠抗人HBsAb多克隆抗體與鼠抗人HCMV抗原單克隆抗體均由北京中杉金橋生物技術(shù)公司提供。鼠抗人AdV抗原單克隆抗體均由Neomarkers公司提供。利用sABC法進(jìn)行檢測， 操作步驟為：載玻片徹底清洗組織包埋切片撈取組織脫蠟抗原修復(fù)封閉血清一抗二抗將sABC加入加入顯色劑復(fù)染脫水封片。

2 結(jié)果

2. 1 IgA腎病患者腎組織中HCMV與AdV的表達(dá) 腎組織中HCMV主要表達(dá)部位是腎小管與腎小球， 且隨著腎小球與腎小管間質(zhì)破壞程度越嚴(yán)重， HCMV表達(dá)越高；AdV主要表達(dá)部位是腎小管上皮細(xì)胞， 部分在腎小球中表達(dá)， 少部分在腎間質(zhì)中表達(dá)。

2. 2 IgA腎病患者腎組織中HBsAg的表達(dá) 在IgA腎病患者腎組織中， HBsAg主要表達(dá)部位為腎小管上皮細(xì)胞， 部分可在腎小球與腎間質(zhì)中表達(dá)。HBsAg表達(dá)和腎小球與腎小管間質(zhì)破壞程度間無相關(guān)性。

3 討論

IgA腎病是臨床常見腎小球病變， 在普通人群中發(fā)病率高于1%， 預(yù)后較差， 每10年內(nèi)約有20%患者進(jìn)至終末期腎病階段。IgA腎病發(fā)病隱匿， 病程較長， 主要有反復(fù)發(fā)作的鏡下血尿或肉眼血尿， 可伴隨不同蛋白尿、高血壓或腎功能不全癥狀?；颊咄ǔＪ窃谛谐Ｒ?guī)尿檢時才發(fā)現(xiàn)， 其診斷、觀察病理損傷情況、評估病情進(jìn)展等均需利用腎組織活檢實(shí)現(xiàn)[3]。

IgA腎病患者通常會伴隨上呼吸道感染癥狀， 其中最常見的為扁桃體炎， 而在 IgA腎病患者中可發(fā)現(xiàn)扁桃體免疫學(xué)異常。當(dāng)通過手術(shù)將扁桃體切除后， IgA腎病臨床癥狀可得到明顯緩解， 部分患者IgA腎病主要癥狀甚至?xí)耆В?IgA腎病得到有效抑制， 轉(zhuǎn)變成腎功能不全， 由此可見IgA腎病起病、發(fā)展均和扁桃體免疫異常有重要關(guān)聯(lián)。而HCMV與ADV是上呼吸道感染常見病因， 特別是和扁桃體發(fā)炎之間有密切聯(lián)系， 由此可推斷， HCMV與ADV和IgA腎病起病有一定關(guān)系。國內(nèi)外多數(shù)專家認(rèn)為， HBV感染和和IgA腎病發(fā)病與進(jìn)展有密切聯(lián)系， HBV抗原引發(fā)IgA腎病的機(jī)制為：當(dāng)患者感染HBV抗原后， 血液循環(huán)與體內(nèi)血清中的抗體會構(gòu)成免疫復(fù)合體， 在病程遷延下， HBsAg復(fù)合體數(shù)量會明顯增加。同時， 血液中持續(xù)存在HBV會對肝細(xì)胞造成損傷， 導(dǎo)致肝細(xì)胞對免疫復(fù)合體清除的能力減弱， 致使腎臟中有大量免疫復(fù)合體沉積， 最終引發(fā)IgA腎病。本次研究通過免疫組織化學(xué)技術(shù)對HCMV、AdV、HBV抗原和IgA腎病間的關(guān)系進(jìn)行探討， 結(jié)果表明， 在IgA腎病腎組織中， HCMV主要在腎小管、腎小球中表達(dá)， 且表達(dá)陽性率可達(dá)90%甚至更高， 同時， 在腎間質(zhì)中存在大量炎細(xì)胞浸潤細(xì)胞；隨著患者腎小球與腎小管間質(zhì)破壞程度越嚴(yán)重， 其HCMV表達(dá)程度越高。AdV主要表達(dá)部位是腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)， 部分在腎小球中表達(dá)， 少部分在腎間質(zhì)中表達(dá)；在腎遠(yuǎn)曲小管內(nèi)， AdV表達(dá)率可達(dá)95%， 同時在腎間質(zhì)中有炎細(xì)胞浸潤現(xiàn)象。HBsAg主要在腎小管上皮細(xì)胞， 部分可在腎小球與腎間質(zhì)中表達(dá)。

綜上所述， 腎組織中HCMV、AdV、HBV抗原的表達(dá)和IgA腎病的發(fā)病及發(fā)展相關(guān)， 可作為IgA腎病診斷與觀察病情進(jìn)展的重要指標(biāo)。同時， 在日常生活中加強(qiáng)HCMV、AdV、HBV感染的預(yù)防， 以促使IgA腎病發(fā)生率大幅降低；在IgA腎病治療中， 應(yīng)將抗HCMV、抗AdV與抗HBV和IgA腎病治療有機(jī)結(jié)合起來， 對這一疾病發(fā)展予以有效控制。

參考文獻(xiàn)

[1] 張建周. IgA腎病采用糖皮質(zhì)激素治療臨床效果觀察.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2013， 7（8）：78-79.

篇9

【關(guān)鍵詞】 骨肉瘤; Fascin基因; 免疫組織化學(xué); 圖像分析; 統(tǒng)計(jì)分析

骨肉瘤是青春期正常骨骼快速生長相應(yīng)發(fā)病高峰期最常見的原發(fā)性惡性腫瘤。其發(fā)生率約為0.1/10萬， 其惡性度高，進(jìn)展快，預(yù)后差，且以青少年好發(fā)。多發(fā)于10～20歲的青少年的長骨， 尤以股骨下段和脛骨上段多見[1]。占骨惡性腫瘤的20%左右，肺轉(zhuǎn)移是其主要死亡原因，80%的病例在確診時已有肺部微小轉(zhuǎn)移灶。骨肉瘤早期臨床癥狀無特異性，且病情進(jìn)展較快，大多數(shù)病例就診時已經(jīng)進(jìn)入臨床ⅡB期[2～4]。Fascin基因?qū)儆趂ascins家族，其蛋白質(zhì)編碼產(chǎn)物是一種結(jié)構(gòu)獨(dú)特、進(jìn)化保守的肌動蛋白( actin)交聯(lián)蛋白，位于細(xì)胞膜皺褶、微棘及應(yīng)力纖維，在各種轉(zhuǎn)化細(xì)胞中促使細(xì)胞膜突起并增加細(xì)胞運(yùn)動性。近年來的研究發(fā)現(xiàn)， fascin在許多惡性腫瘤組織細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，在惡性腫瘤的進(jìn)展中起重要作用[5～7]。研究通過應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和圖像分析技術(shù)檢測骨肉瘤及良性骨軟骨瘤組織中fascin基因的表達(dá)水平，并進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，探討Fascin基因在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機(jī)制，為臨床上防治骨肉瘤提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 材料來源及分組 收集武漢市四大三級甲醫(yī)院病理科2000～2008年骨肉瘤存檔蠟塊20例及良性骨軟骨瘤存檔蠟塊5例。所有切片經(jīng)病理學(xué)專家診斷為骨肉瘤及良性骨軟骨瘤。

1.1.2 材料 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測Fascin基因在骨肉瘤與良性骨軟骨瘤組織中的表達(dá)。

1.2 主要試劑和儀器

1.2.1 主要試劑

①Fascin兔抗人多克隆抗體(北京中山生物技術(shù)有限公司);②超敏即用型SP通用型免疫組織化學(xué)試劑盒(福州邁新公司);③DAB顯色試盒及多聚賴氨酸(北京中山生物技術(shù)有限公司)。

1.2.2 主要儀器 ① YWY781型醫(yī)用微波儀，250 W，50 Hz (浙江臨安電子器材廠生產(chǎn));② 家用高壓鍋;③ 電熱恒溫干燥箱 (湖北黃石醫(yī)療器械廠生產(chǎn));④ 顯微鏡成像系統(tǒng) (Olympus公司)。

1.3 方法

蠟塊切片厚5μm，貼片于涂有多聚賴氨酸的潔凈載玻片上，置于烤箱烤干待用。免疫組織化學(xué)SP法檢測Fascin基因相關(guān)抗原 具體步驟：① 4μm組織切片常規(guī)脫蠟至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;② 抗原修復(fù)(檸檬酸緩沖液微波抗原修復(fù)法)，室溫自然冷卻后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗5×3 min;③ 滴加3%過氧化氫，37℃濕盒孵育10min以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;

④ 正常羊血清37℃濕盒孵育10min以減少非特異性背景;⑤ 甩去多余血清，分別滴加一抗，4℃孵育過夜，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×5 min;

⑥ 滴加生物素標(biāo)記的二抗37℃濕盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;⑦ 滴加鏈霉素抗生物素蛋白過氧化物復(fù)合物37℃濕盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;⑧ 滴加新鮮配置的DAB顯色液顯色，光鏡下控制反應(yīng)時間(約3～5 min)，自來水沖洗終止反應(yīng);

⑨ 蘇木素復(fù)染，流水沖洗，1%鹽酸酒精分色數(shù)秒，流水沖洗，0.1%氨水返藍(lán);⑩ 梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢;用PBS代替一抗作為陰性對照組，購買的陽性片作為陽性對照組。

1.4 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

Fascin陽性染色為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞核和胞質(zhì)內(nèi)。陰性對照組除細(xì)胞核染成藍(lán)色外，應(yīng)無棕黃色反應(yīng)物。采用HPIAS1000 高清晰度彩色病理圖文報(bào)告管理系統(tǒng)(同濟(jì)千屏影像公司)對Fascin基因的表達(dá)進(jìn)行定量分析，每張切片隨機(jī)選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野(×400) ，測定每個視野下陽性反應(yīng)的平均光密度、陽性反應(yīng)面積和所有細(xì)胞總面積，計(jì)算陽性面積率(陽性面積率=單位面積中陽性反應(yīng)的總面積/單位面積中細(xì)胞的總面積×100%)。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS11. 5 軟件對各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率做單因素方差分析和SNK(q) 檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。

2 結(jié)果

Fascin基因的表達(dá)：在骨肉瘤組中可見密集分布的棕黃色顆粒，F(xiàn)ascin基因表達(dá)呈陽性;在良性骨軟骨瘤組中可見少量的棕黃色顆粒，F(xiàn)ascin基因表達(dá)弱陽性或陰性。圖像分析結(jié)果顯示: 骨肉瘤組Fascin基因表達(dá)的平均光密度為0.2659±0.009， 良性骨軟骨瘤組Fascin基因表達(dá)的平均光密度為0.0886±0.0043; 骨肉瘤組Fascin基因表達(dá)的陽性面積率為0.2994±0.0080， 良性骨軟骨瘤組Fascin基因表達(dá)的陽性面積率為0.0987±0.0056，經(jīng)單因素分析骨肉瘤組與良性骨軟骨瘤組比較，差異有顯著性(P

3 討論

原發(fā)性惡性骨腫瘤是罕見的，只占所有新癌癥病例的0.2%。這些罕見腫瘤的治療是復(fù)雜的，對骨外科來說是一項(xiàng)重大的挑戰(zhàn)。骨肉瘤是青春期正常骨骼快速生長相應(yīng)發(fā)病高峰期最常見的原發(fā)性骨腫瘤。近年來強(qiáng)度新佐劑和佐劑化療的使用使得這種疾病患者得以存活。無復(fù)發(fā)存活率已經(jīng)從沒有進(jìn)行化療的不足20%提高到了使用手術(shù)和多化療相結(jié)合治療的55%～70%[8～10]。完全手術(shù)切除和術(shù)前化療良好的組織學(xué)反應(yīng)是患者疾病定位最重要的預(yù)后指標(biāo)?；颊咝g(shù)前化療反應(yīng)良好(>90%壞死)5年存活率為75%～80%，與此相比那些化療反應(yīng)差的(

人類Fascin基因是由Bryan等[13]20 世70 年代從海膽母細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的，其蛋白質(zhì)編碼產(chǎn)物是一種分子量為55 kDa 的細(xì)胞骨架蛋白[14～15]，F(xiàn)ascin蛋白N端11～50之間的氨基酸殘基高度保守，其中第39位的絲氨酸為蛋白激酶C的磷酸化位點(diǎn)，該位點(diǎn)的磷酸化可調(diào)節(jié)Fascin蛋白與F肌動蛋白的結(jié)合活性以及細(xì)胞膜表面絲狀偽足和微棘的形成，提示Fascin蛋白可能在細(xì)胞遷移、細(xì)胞黏附以及細(xì)胞間信息交流等過程中發(fā)揮作用[16，17]。研究發(fā)現(xiàn)， 在正常上皮細(xì)胞中Fascin表達(dá)較低或缺失， 然而在胃癌、肺癌、食管癌等惡性腫瘤中Fascin1 表達(dá)上調(diào)[18～20]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)ascin基因在骨肉瘤的表達(dá)明顯高于對照組(P

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篇10

【關(guān)鍵詞】 子宮頸腺癌 子宮內(nèi)膜腺癌 p16 鑒別診斷

【Abstract】 Objective:TObjectives Observation of p16 protein in cervical adenocarcinoma and endometrial cancer in the differential diagnosis of significance. Also part of the guideline on early cases whether the fertility preservation. Methods SP with Immunohistochemistry assay for the detection of cervical adenocarcinoma and 40 examples of 73 cases of endometrial carcinoma p16， p53， ER and PR of the expression. Results (1) the p16 in 40 examples of cervical adenocarcinoma in 37 cases (92.5%) is diffuse and positive， in 73 cases of endometrial carcinoma in 28 patients (38.4%) is of positive. (2) in cervical adenocarcinoma in p53， ER， PR positive expression of various 20.0% and 5.0% and 7.5%， while in endometrial cancer in p53 38.4% overexpression， Hormone receptor ER， PR in endometrial cancer respectively 78.1% and 71.2% expression. In cervical adenocarcinoma p16 protein in the diffuse nuclear and cytoplasmic-positive， and histological forms resemble endometrial carcinoma irregular of positive， and the overall strength is low . In cervical adenocarcinoma p16 protein displayed prevalent， the strength of expression in to， and histological forms resemble endometrial carcinoma is the weaker of positive. P16 protein p53 protein detection at the joint， hormone receptor ER， PR will not only identify cervical adenocarcinoma and endometrial cancer， can also be used for uterine serous carcinoma and endometrial cancer diagnosis. Conlusions Consultation on biopsy or scraping of uterine cancer samples， selection of p16 protein detection can be used as an auxiliary immunocytochemistry to identification of cervical adenocarcinoma and endometrial cancer.

【Key words】Carcinoma of cervix uterus Endometvial cancer P16 Protein Distinguishing

前言:子宮癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，由于許多子宮頸腺癌可以表現(xiàn)為宮內(nèi)膜樣分化，子宮內(nèi)

膜腺癌也可以呈現(xiàn)漿液性、粘液性、腺鱗癌樣改變，兩者有時在組織形態(tài)上具有相似之處，在活檢和診刮標(biāo)本中來決定子宮腺癌組織來源是比較困難的。尤其腫瘤原發(fā)灶在子宮下段和宮頸時，在缺乏明顯的癌前期病變的情況下，即使子宮全切除術(shù)后標(biāo)本，僅靠組織學(xué)將二者區(qū)別開來是比較困難的。由于兩者臨床手術(shù)方式不同，尤其對于需要保留生育功能的早期病例，鑒別診斷尤為重要。早期國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道免疫組織化學(xué)雌激素受體（ER），孕激素受體（PR）在宮內(nèi)膜腺癌中表達(dá)，而在宮頸內(nèi)膜腺癌中不表達(dá)，可據(jù)此來鑒別子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸內(nèi)膜腺癌。近期研究表明根據(jù)表達(dá)模式不同，p16可以作為一個輔免疫組織化學(xué)標(biāo)記來鑒別子宮頸腺癌和子宮內(nèi)膜腺癌。本文通過對40例子宮頸內(nèi)膜腺癌及73例子宮內(nèi)膜腺癌中p16、p53、ER、PR表達(dá)的檢測，也證實(shí)p16是鑒別二者有效的方法。

1.材料和方法

1.1材料：收集2000年1月-2010年1月中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院病理科和張家界市人民醫(yī)院病理科已確診子宮頸腺癌40例標(biāo)本，其中年齡最大者為54歲，最小者為35歲，平均年齡42歲。1例為子宮頸內(nèi)膜活檢標(biāo)本，4例為子宮頸LEEP術(shù)，3例為錐切標(biāo)本，其余均為子宮全切標(biāo)本。并取相同年月子宮內(nèi)膜腺癌73例，其中年齡最大者為78歲，最小者為43歲，平均年齡55.7歲。8例為宮內(nèi)膜活檢標(biāo)本，其余均為子宮廣泛及次廣泛切除標(biāo)本。

1.2方法：全部標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，5um切片，HE染色和免疫組織化學(xué)法SP法染色。檢測p16蛋白、p53蛋白、ER、PR的表達(dá)。試劑均購自福州邁新生物技術(shù)

有限公司。染色步驟參照試劑說明書進(jìn)行。AEC-H2O2顯色，蘇木精對比染色。

1.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)： p16蛋白陽性定位于胞核或胞質(zhì)，p53蛋白、ER、PR陽性定位于胞核。陽性著色呈棕紅色顆粒。根據(jù)陽性細(xì)胞在組織中所占面積分為4個等級：≤5%為（-）、5-10%為弱（+）或可疑（+）、10-30%為陽性，≥30%為強(qiáng)陽性。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理時將陰性組、弱陽性組及可疑陽性組合并為陰性病例組，陽性及強(qiáng)陽性合并為陽性病例組。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用X2檢驗(yàn)方法和相關(guān)分析，以P

2 結(jié)果

2.1免疫組織化學(xué)：（1）p16蛋白表達(dá)：在40例子宮頸腺癌中37例表達(dá)彌漫、中到強(qiáng)度陽性（見圖一），其中微偏性腺癌均表達(dá)陰性；73例子宮內(nèi)膜癌中35例呈陽性，其中28例灶性陽性且總體強(qiáng)度較弱（見圖二），2例弱陽性， 5例可疑陽性。（2）p53蛋白表達(dá)：在40例子宮頸腺癌8例陽性。73例子宮內(nèi)膜腺癌中28例陽性，其中19例灶性呈陽性，3例弱陽性，6例可疑陽性。（3）PR表達(dá)：在40例子宮頸腺癌中3例陽性。73例子宮內(nèi)膜腺癌中52例呈陽性。（4）ER表達(dá)：在40例子宮頸腺癌中2例陽性。73例子宮內(nèi)膜腺癌中57例呈陽性。

表1 p16、p53、ER、PR在宮頸不同類型腺癌中表達(dá)：

類別

n p16 n(%)

p53 n(%)

PR n(%) ER n(%)

子宮內(nèi)膜樣腺癌 6 6（100.0） 0（0.0） 2（33.3） 2(33.3）

腺鱗癌

4 4（100.0） 0（0.0） 0（0.0）

0（0.0）

漿液性腺癌 6 6（100.0） 5（83.3） 0（0.0）

0（0.0）

粘液性腺癌 21 21（100.0） 1（0.0） 0（0.0）

0（0.0）

p53、ER、PR在不同子宮內(nèi)膜腺癌中表達(dá)：

類別

n p16 n（%） p53 n（%） PR n（%） ERn（%）

子宮內(nèi)膜樣腺癌 47 23（48.9）

15(31.9) 38(80.9) 42(89.4)

腺鱗癌

14

7(50.0)

8(57.1) 10(71.4) 11(78.6)

漿液性腺癌 7

4(57.1)

5(71.4)

2(28.6)

2(28.6)

透明細(xì)胞癌 2

0(0.0)

0(0.0)

1(50.0)

0(0.0)

微偏性腺癌 1

0(0.0)

0(0.0)

0(0.0)

1(100.0)

非典型增生癌變 2

1(100.0)

0(0.0) 1(100.0) 1(100.0)

2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p16蛋白在子宮頸腺癌陽性率明顯高于子宮內(nèi)膜腺癌，差異有極顯著性（X2=30.17，P

2.3 結(jié)論 在子宮頸腺癌中p16蛋白呈彌漫性細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)陽性，而組織學(xué)形態(tài)與其相似的宮內(nèi)膜腺癌中呈不規(guī)則灶性陽性，而且總體強(qiáng)度較弱。根據(jù)上述p16蛋白表達(dá)結(jié)果顯示， p16可用于子宮頸腺癌和子宮內(nèi)膜腺癌的鑒別診斷。當(dāng)子宮頸腺癌和內(nèi)膜的漿液性腺癌均表達(dá)p16陽性且激素受體陰性表達(dá)，此時漿液性腺癌與子宮頸腺癌鑒別要借助p53的表達(dá)。

3 討論

子宮內(nèi)膜腺癌和宮頸腺癌是婦科最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率高。近年來，宮頸腺癌有逐漸增加趨勢，且趨于年輕化。原發(fā)于子宮頸具有子宮內(nèi)膜樣分化的腺癌和子宮內(nèi)膜的子宮內(nèi)膜樣腺癌，還有子宮頸和子宮內(nèi)膜的粘液腺癌，在形態(tài)上有很大的重疊，然而在臨床病理診斷工作中，我們常常不易區(qū)分子宮體下段腺癌和宮頸腺癌，特別是宮頸的子宮內(nèi)膜樣腺癌，其組織學(xué)形態(tài)和一般概念上的子宮內(nèi)膜腺癌相同，尤其在診刮診斷時，雖然內(nèi)膜樣分化或粘液分化等形態(tài)特征可能有所提示，宮頸的腫瘤易于向?qū)m旁及陰道上段浸潤，這種典型的浸潤方式也有利于確認(rèn)腺癌原發(fā)于宮頸，但是如果宮體（特別是子宮下段）和宮頸同時被累及，沒有明顯的癌前病變，子宮腺癌的原發(fā)部位就很難確定。宮頸腺癌無明顯的宮頸間質(zhì)浸潤，卻直接累及子宮內(nèi)膜，甚至侵入宮體肌層，這種宮頸腺癌的浸潤方式在以前的研究中很少報(bào)道過，所以當(dāng)宮頸的腺癌主要累及內(nèi)膜和宮體肌層時，常常被認(rèn)為是原發(fā)于內(nèi)膜的腺癌累及宮頸，尤其當(dāng)宮頸腺癌累及內(nèi)膜無法與不典型復(fù)雜性增生過長的內(nèi)膜區(qū)分時，這種錯誤更易發(fā)生。對于活檢和診刮標(biāo)本，在手術(shù)前確定其原發(fā)部位是非常必要的，因二者手術(shù)方式不同，尤其對于尚未生育的婦女是否保留子宮，尤為重要。以前實(shí)驗(yàn)證明激素受體ER、PR在大多數(shù)宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)，在大多數(shù)宮頸腺癌中為陰性。雖然單獨(dú)使用激素受體可以區(qū)別一些腺癌，但少數(shù)情況下HPV陽性的宮頸腺癌激素受體也陽性（一般ER強(qiáng)于PR），而子宮內(nèi)膜樣內(nèi)膜腺癌也可不表達(dá)激素受體[1]。在近期較多研究表明[2-4]鑒別二者時，人類狀瘤病毒（HPV）DNA的檢測較ER、PR有更高的敏感性和特異性，因?yàn)楦呶Ｐ虷PV對宮頸癌的發(fā)病起作用，對內(nèi)膜癌的發(fā)病不起作用。由于原位雜交不能在各個病理科實(shí)驗(yàn)室普及，所以需要一個和HPV密切相關(guān)的免疫組織化學(xué)標(biāo)記來代替，在一系列的研究中顯示出p16不僅比激素受體的表達(dá)更為穩(wěn)定，而且可以作為檢測高危型HPV相關(guān)性腺癌的方法。這是由于基因p16作為一種腫瘤抑制基因，定位于人類染色體9p21[5，6]，p16蛋白是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白之一，其作用是競爭抑制細(xì)胞素D1與CDK4結(jié)合，并特異性地抑制CDK4的活性，使抑癌基因PRb的蛋白處于非磷酸化的活性狀態(tài)，從而阻止細(xì)胞由G1期進(jìn)入S 期，抑制細(xì)胞繁殖，而高危型HPV病毒蛋白可與PRb結(jié)合并使其失活，導(dǎo)致p16蛋白的過度表達(dá)[4，7]。所以當(dāng)激素受體的表達(dá)不典型時（宮頸癌ER PR，內(nèi)膜癌ER+PR+），組合中加入p16就顯示出重要的意義。p16蛋白在宮頸腺癌中表達(dá)的情況各個學(xué)者研究結(jié)果不盡相同。一些研究表明，在幾乎所有的原位和浸潤性宮頸腺癌中p16蛋白都有彌漫強(qiáng)陽性表達(dá)，而其他研究則顯示較低的陽性率[8]。還有學(xué)者報(bào)道p16蛋白表達(dá)于73%~86%的子宮內(nèi)膜腺癌[9，10]。在本組研究結(jié)果中顯示出40例子宮頸腺癌除3例微偏性腺癌外，其余均表達(dá)彌漫中度至強(qiáng)度陽性，癌細(xì)胞陽性率達(dá)90%以上。微偏性腺癌不表達(dá)，這可能與其形態(tài)學(xué)及組織結(jié)構(gòu)酷似正常宮頸內(nèi)膜腺體有關(guān)。據(jù)李勝水等[11]用免疫組織化學(xué)p16、p53、HPV16/18檢測10例子宮頸微偏性腺癌，證實(shí)了p16、HPV16/18均無表達(dá)，而P53則有85%表達(dá)。本組研究結(jié)果同時也顯示了73例子宮內(nèi)膜腺癌中28例p16呈灶性陽性且陽性程度普遍較弱。

總之，許多研究發(fā)現(xiàn)在HPV相關(guān)性的宮頸腺癌中，p16顯示彌漫的、中到強(qiáng)度的表達(dá)，而組織學(xué)形態(tài)與其相似的宮內(nèi)膜腺癌則顯示弱的灶性陽性， p16蛋白表達(dá)較原位雜交更敏感快捷，因?yàn)樗袑m頸腺癌都確切彌漫表達(dá)p16，而有些原位雜交卻無法檢測到宮頸腺癌的HPV的DNA，因此p16可以作為一個輔的免疫組織化學(xué)標(biāo)記來鑒別子宮頸腺癌和子宮內(nèi)膜腺癌。

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