導(dǎo)語：人類白細(xì)胞抗原基因管理論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

摘要：目的研究人類白細(xì)胞抗原(HLA)-DR3、DR7、DR13、DR53等位基因與乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)宮內(nèi)感染的關(guān)系，探討HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，確定HBV宮內(nèi)感染的易感基因和保護(hù)基因。方法采用聚合酶鏈反應(yīng)/序列特異性引物(PCR-SSP)技術(shù)檢測(cè)HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR7、DRl3、DR53等位基因型分布及頻率。結(jié)果(1)宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3基因頻率為2414％(7／29)，顯著高于非宮內(nèi)感染組孕婦的633％(10／158)(P=0007)。其余各表型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。(2)宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3基因頻率為1724％(5／29)，顯著高于非宮內(nèi)感染組新生兒的506％(8／158)(P=0033)。其余各表型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。(3)母嬰HLA-DR3同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0049)；母嬰HLA-DR7、DR13、DR53同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。結(jié)論HBsAg陽性孕婦及其胎兒同時(shí)或任一攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染；HLA-DR3是HBV宮內(nèi)感染的易感基因。

【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒；宮內(nèi)感染；人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)

肝炎是一種嚴(yán)重危害人類健康的世界性傳染病，我國是乙肝高發(fā)區(qū)，乙肝病毒的母嬰傳播不僅造成人群中眾多的HBsAg攜帶者，而且是引起成人慢性肝炎、肝硬化以及肝癌的重要因素。迄今，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，人類白細(xì)胞抗原DR等位基因(HLA-DR)與乙型肝炎病毒(HBV)感染密切相關(guān)，而HLA-DR等位基因與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系爭(zhēng)議較多。本文通過研究HLA-DR3、DR7、DR13、DR53與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系，探討HBV宮內(nèi)感染的遺傳易感性，為防制HBV宮內(nèi)感染提供理論依據(jù)。

1對(duì)象與方法

11對(duì)象以2003年6月～2004年11月太原市省各市級(jí)醫(yī)院篩檢，并在太原市傳染病院婦產(chǎn)科進(jìn)行產(chǎn)前檢查及分娩的HBsAg陽性孕婦及其新生兒各187例作為研究對(duì)象。并根據(jù)新生兒有無宮內(nèi)感染，分為宮內(nèi)感染組(29例)和宮內(nèi)未感染組(158例)，2組在年齡分布、文化程度、職業(yè)構(gòu)成等均衡可比。

12方法

121標(biāo)本采集及處理收集孕婦肘靜脈血及新生兒出生24h內(nèi)且未注射高效價(jià)免疫球蛋白(HBIG，hepatitisBimmuneglobulin)的股靜脈血各2ml，4℃冰箱保存，6h內(nèi)以4000r/min4℃離心15min，分離血清與血塊，-20℃保存?zhèn)錂z。

122乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，試劑盒（上海科華實(shí)業(yè)總公司）。

123HBVDNA檢測(cè)(1)HBVDNA提取：參考文獻(xiàn)〔1〕，采用異硫氰酸胍一步法提取血清DNA；(2)HBVDNA的擴(kuò)增：采用巢式聚合酶鏈反應(yīng)(nPCR)。

124HLA-DR等位基因檢測(cè)(1)人類基因組DNA的提取十二烷基磺酸鈉（SDS）蛋自酶K法提取血塊基因組DNA。(2)HLA-DR等位基因擴(kuò)增：參考文獻(xiàn)〔2〕的引物設(shè)計(jì)采用聚合酶鏈反應(yīng)／序列特異性引物(PCR-SSP)技術(shù)檢測(cè)孕婦及其新生兒外周靜脈血血塊中HLA-DR3、DR7、DR13、R53基因型分布及頻率。(3)PCR產(chǎn)物的檢測(cè)：取擴(kuò)增產(chǎn)物5～10μl，按5：1(V：V)與溴酚蘭混勻，加樣于15％瓊脂糖凝膠(含05μg／ml溴化乙錠)板，在60V／cm電壓下泳動(dòng)50min，紫外燈下觀察結(jié)果。

125新生兒HBV宮內(nèi)感染診斷標(biāo)準(zhǔn)新生兒外周血血清HBsAg和/或HBVDNA陽性，即診斷為HBV宮內(nèi)感染。

13統(tǒng)計(jì)分析

資料輸入SPSS115軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；計(jì)算各指標(biāo)的陽性率，四格表χ2、Fisher確切概率、OR值及OR95%CI。

2結(jié)果

21HBsAg陽性孕婦及其新生兒HLA-DR擴(kuò)增圖譜提取的血塊DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后呈現(xiàn)明顯條帶，與標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物（Marker）條帶比較，確定HLA-DR基因型（圖1，2，3，4）。中國論文聯(lián)盟

DR3+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為151bp;DR3-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR3陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；M：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(Marker)

圖1HLA-DR3等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果（略）

DR7+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為232bp；DRT-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR7陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；M：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(Marker)

圖2HLA-DR7等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果（略）

DR13+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為130bp；DR13-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR13陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；M：標(biāo)準(zhǔn)分子標(biāo)記物(Marker)

圖3HLA-DR13等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果（略）

DR53+：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增產(chǎn)物片斷長(zhǎng)度為213bp；DR53-：HBsAg陽性孕婦或其新生兒DR53陰性擴(kuò)增產(chǎn)物；C：內(nèi)對(duì)照

注：DR53引物與內(nèi)對(duì)照引物可能發(fā)生了引物間的錯(cuò)配等，故分管同時(shí)擴(kuò)增

圖4HLA-DR53等位基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果（略）

22HLA-DR與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系

221孕婦HLA-DR等位基因分布及頻率比較（表1）宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3基因頻率明顯高于宮內(nèi)未感染組，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=4709,P=0007）；HLA-DR7、DR13、DR53基因頻率在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組孕婦比較，經(jīng)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。

表1宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組孕婦HLA-DR基因分布及頻率比較（略）

注：*為fisher確切概率法計(jì)算結(jié)果

222新生兒HLA-DR等位基因分布及頻率比較(表2)宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3基因頻率明顯高于宮內(nèi)未感染組，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=3906，P=0033)；HLA-DR7、DR13、DR53基因頻率在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組新生兒比較，經(jīng)檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)。

223母嬰HLA-DR等位基因同陽性分布及頻率比較（表3）母嬰HLA-DR3同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比較，經(jīng)檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=596,P=0049），母嬰HLA-DR7、DR13、DR53同陽性在宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組間比較，經(jīng)驗(yàn)驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。

表2宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組新生兒HLA-DR基因分布及頻率比較（略）

注：*為fisher確切概率法計(jì)算結(jié)果

表3宮內(nèi)感染組與宮內(nèi)未感染組母嬰HLA-DR同陽性分布及頻率比較（略）

注：*為fisher確切概率法計(jì)算結(jié)果

3討論

KilpatrickDC〔3〕的研究發(fā)現(xiàn)，HLA-A3是人類免疫缺陷病毒(HIV)宮內(nèi)感染的保護(hù)基因，HLA-DR3是HIV宮內(nèi)感染的易感基因。BosiL等〔4〕采用Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，HLA-DR13與發(fā)生HCV宮內(nèi)感染呈負(fù)相關(guān)，即HLA-DR13是HCV宮內(nèi)感染的保護(hù)因素。在母親同時(shí)感染HIV者中，HLA-DR13和HIV同時(shí)感染在HCV宮內(nèi)感染的發(fā)生中具有獨(dú)立而相反的作用，即HLA-DR13是HCV宮內(nèi)感染的保護(hù)因素；HLA-DR13表達(dá)在未發(fā)生HCV，宮內(nèi)感染和發(fā)生了HCV宮內(nèi)感染者的OR值為84(95％CI=11～608)，且母乳喂養(yǎng)不影響該HCV宮內(nèi)感染的危險(xiǎn)度。王素萍等〔5〕以HBsAg陽性孕婦新生兒為研究對(duì)象，隨機(jī)選擇發(fā)生及未發(fā)生HBV宮內(nèi)感染的新生兒各20例，應(yīng)用試劑盒提供的序列特異性引物(sequencespecificprimers,SSP)采用PCR-SSP技術(shù)擴(kuò)增HLA-DR基因區(qū)18對(duì)等位基因，判定HLA-DR抗原的型別，計(jì)算HLA-DR抗原各型別出現(xiàn)頻率并分析其在2組間的差別，發(fā)現(xiàn)DR3、DR51在宮內(nèi)感染組的頻率較高，分別為45％，40％。在非宮內(nèi)感染組分別為20％，15％，P值分別為018，016。DR53在非宮內(nèi)感染組的頻率較高，為60％，在宮內(nèi)感染組為35％。推測(cè)HLA-DR3、DR51可能是HBV宮內(nèi)感染的易感型，而DR53有可能是具有保護(hù)作用型別。劉海英等〔6〕采用PCR-SSP法合成相應(yīng)的特異性引物序列，對(duì)HLA-DR3、DR4、DR13、DR15進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，宮內(nèi)感染組孕婦HLA-DR3的基因頻率為50％，顯著高于宮內(nèi)未感染組的147％(RR=58，χ2=490,P<005)，其余各基因表型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；宮內(nèi)感染組新生兒HLA-DR3的基因頻率為30％，明顯高于宮內(nèi)未感染組的74％，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>005)，提示孕婦或胎兒攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染，即孕婦或胎兒HLA-DR3陽性是HBV宮內(nèi)感染的易感基因。本文同樣采用PCR-SSP技術(shù)研究HLA-DR特異性等位基因與HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系。結(jié)果表明，HBsAg陽性孕婦及其胎兒同時(shí)或任一攜帶HLA-DR3，易導(dǎo)致HBV宮內(nèi)感染；HLA-DR3是HBV宮內(nèi)感染的易感基因。提示在防制HBV宮內(nèi)感染時(shí)不能忽視人類遺傳因素的作用，應(yīng)采取綜合措施防制HBV宮內(nèi)感染。

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