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【摘要】目的建立白英中總皂苷的含量測(cè)定方法。方法選用薯蕷皂苷元為對(duì)照品，采用分光光度法，高氯酸顯色，在410nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算白英中總皂苷含量。結(jié)果薯蕷皂苷元的質(zhì)量濃度在8.91～29.70μg/ml范圍內(nèi)與吸光度值呈良好線性關(guān)系（r=0.9992），方法的平均回收率為95.9%（n＝9），RSD為1.5%；不同來(lái)源的白英藥材中總皂苷含量有較大差異。結(jié)論該方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重現(xiàn)性好，可用于白英藥材的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】白英總皂苷薯蕷皂苷元分光光度法

白英為茄科植物SolanumlyratumThunb.的干燥全草，性微寒，味苦。最早見(jiàn)于《本經(jīng)》記載，列為上品，為傳統(tǒng)中藥，具有清熱解毒、祛風(fēng)化痰、除濕等功效，用于治療癌癥腫瘤、皰疹、瘧疾、黃疸、水腫、淋病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、白帶異常等病證。白英含有多種化學(xué)成分，主要有甾體皂苷類(lèi)、甾體生物堿類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)等化合物，其中皂苷類(lèi)成分主要包括以薯蕷皂苷元、替高皂苷元、雅姆皂苷元等皂苷元為非糖部分的多種甾體皂苷。藥理研究顯示白英中總皂苷體內(nèi)外具有一定的抗腫瘤作用，且存在一定的選擇性。因此，測(cè)定白英中總皂苷的含量對(duì)評(píng)價(jià)白英藥材質(zhì)量具有重要意義?？傇碥盏臏y(cè)定方法有重量法，UV，TLCS，HPLC，GC－MS法。目前有關(guān)白英中總皂苷的含量測(cè)定尚未見(jiàn)報(bào)道，本文建立了用UV測(cè)定白英中總皂苷含量的方法，并比較了24種不同來(lái)源的白英中總皂苷的含量，為白英的質(zhì)量控制提供一定的依據(jù)。

一、儀器與材料

紫外分光光度計(jì)(上海棱光技術(shù)有限公司)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE-52AA，上海亞榮儀器廠)、水浴鍋(鞏義市杜甫儀器廠)。

薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，I539-200001，含量測(cè)定用），無(wú)水乙醇（AR，天津百盛化工有限公司），甲醇（AR，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司），三氯甲烷（AR，沈陽(yáng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)試劑廠），鹽酸（AR，天津市大茂化學(xué)試劑廠），高氯酸（AR，天津市東方化工廠）。

24種不同來(lái)源的白英藥材均由沈陽(yáng)藥科大學(xué)孫啟時(shí)教授鑒定為茄科植物SolanumlyratumThunb.的干燥全草。

二、方法與結(jié)果

2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)定薯蕷皂苷元對(duì)照品約3mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容即得。

2.2樣品溶液的制備精密稱(chēng)定1.0g白英藥材，置索氏提取器內(nèi)，加60ml三氯甲烷脫脂2h后，揮去三氯甲烷溶劑；用200ml80%乙醇在80℃下提取至無(wú)色，將乙醇液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；殘?jiān)?.5mol·L-1鹽酸50ml加熱回流3h，過(guò)濾；冷卻后用三氯甲烷分3次（30，20，20ml）回流萃取，15min/次；合并三氯甲烷萃取液,水洗至中性，水洗液再加入20ml三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷萃取液，水浴蒸干溶劑,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0.0ml即得。

2.3吸收光譜的測(cè)定分別精密量取薯蕷皂苷元對(duì)照品溶液與樣品溶液1.0ml，置水浴中揮干溶劑，精密加入10.0ml高氯酸，搖勻。65℃水浴加熱15min，取出立即置于冰水浴中15min后，以空白作參比，在200～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)繪制吸收曲線，薯蕷皂苷元在405nm處有最大吸收，樣品溶液在405～412nm處有較強(qiáng)吸收，故選擇410nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取對(duì)照品溶液0.3，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分別置于三角瓶中，揮干溶劑，精密加入10.0ml高氯酸，搖勻。65℃水浴加熱顯色15min，取出后立即置于冰水浴中15min后停止反應(yīng)，以空白作參比，在410nm處測(cè)定吸光度值。計(jì)算得回歸方程為A＝0.0276C+0.0055，r=0.9992，結(jié)果表明薯蕷皂苷元在8.91～29.70μg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.5正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)制備樣品溶液的優(yōu)選本實(shí)驗(yàn)選定鹽酸濃度(mol/L)、乙醇體積分?jǐn)?shù)(%)、水解時(shí)間(h)作為考察因素，每個(gè)因素各取3個(gè)水平，以總皂苷含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，應(yīng)用L9（34）正交表安排實(shí)驗(yàn)。因素水平表見(jiàn)表1，正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

通過(guò)直觀分析表明：影響因素的主次順序?yàn)樗鈺r(shí)間＞鹽酸濃度＞乙醇體積分?jǐn)?shù)，經(jīng)過(guò)分析，選擇優(yōu)化條件為：水解時(shí)間3h，鹽酸濃度2.5mol/L，乙醇體積分?jǐn)?shù)80%。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確吸取樣品溶液1.0ml，按“吸收光譜的測(cè)定”項(xiàng)下顯色，于410nm波長(zhǎng)處每隔10min測(cè)定其吸光度，結(jié)果表明樣品溶液的RSD為0.4%，樣品溶液顯色后在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液1.0ml，共5份，按“吸收光譜的測(cè)定”項(xiàng)下顯色，410nm波長(zhǎng)處測(cè)定，RSD為0.8%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，方法的精密度良好。

2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取樣品5份，按樣品溶液的制備法和顯色法，依法測(cè)定，計(jì)算樣品中總皂苷含量。平均總皂苷含量2.12mg·g-1，RSD=1.4%（n=5），表明方法的重復(fù)性良好。

2.9回收率實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量已知總皂苷含量的白英樣品，每份0.5g，加入一定量的薯蕷皂苷元對(duì)照品，按樣品溶液的制備和測(cè)定步驟進(jìn)行，計(jì)算得回收率。

2.10樣品的測(cè)定準(zhǔn)確吸取樣品溶液1.0ml，按“吸收光譜的測(cè)定”項(xiàng)下進(jìn)行測(cè)定。分別測(cè)定了24種不同來(lái)源的白英藥材中總皂苷的含量。

從上表中可以得出：不同來(lái)源的白英中總皂苷含量不同，產(chǎn)于江蘇與昆明的白英中總皂苷含量最高。

三、討論

皂苷一般易溶于熱水、含水乙醇、熱甲醇、熱乙醇，幾乎不溶或難溶于乙醚、苯、石油醚等極性較小的有機(jī)溶劑。考慮到甲醇對(duì)身體有害，無(wú)水乙醇提取不完全等因素，選擇乙醇水溶液作為提取溶劑。

根據(jù)文獻(xiàn)選用含一定濃度的甲醇水溶液和石油醚（氯仿）回流提取，用TLC檢查得不到薯蕷皂苷元的斑點(diǎn)。原因是苷類(lèi)水解時(shí)有醇存在，長(zhǎng)時(shí)間加熱可引起其他副反應(yīng)，皂苷元往往會(huì)發(fā)生脫水、環(huán)合、雙鍵位移和構(gòu)型改變等變化。

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中根據(jù)文獻(xiàn)采用活性炭脫色5min，結(jié)果測(cè)定吸光度值非常小，原因是活性炭吸附某些苷類(lèi)物質(zhì)。比色法所顯顏色隨顯色溫度和時(shí)間變化而變化，因此，必須嚴(yán)格控制條件，盡量排除干擾。本實(shí)驗(yàn)選用的顯色條件穩(wěn)定。

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