導(dǎo)語(yǔ)：水產(chǎn)養(yǎng)殖多菌種混合培養(yǎng)分析一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

摘要:研究多菌種功能微生物混合培養(yǎng)的條件優(yōu)化，主要采取正交實(shí)驗(yàn)方法，從培養(yǎng)基配方、pH、溫度、菌種接種等方面，研究各功能菌良好生長(zhǎng)的混合培養(yǎng)條件。

關(guān)鍵詞:水產(chǎn)養(yǎng)殖；菌種；混合培養(yǎng)

使用微生態(tài)制劑整治養(yǎng)殖生存環(huán)境，成本低且沒(méi)有抗藥性以及藥物遺留等問(wèn)題，因此成為21世紀(jì)養(yǎng)殖業(yè)的未來(lái)走向。當(dāng)前，光合細(xì)菌、腸球菌等一些單一菌劑和復(fù)合菌是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖中較為常用的菌劑。但從當(dāng)前常用到的水產(chǎn)養(yǎng)殖菌劑來(lái)說(shuō)，出現(xiàn)了多菌種菌劑種類(lèi)少、菌劑耐鹽性能不理想等問(wèn)題。單一菌劑限制了水產(chǎn)養(yǎng)殖水體的生物修復(fù)作用，因此在實(shí)踐應(yīng)用過(guò)程中采用有一定耐鹽性能的多菌種制劑非常具有實(shí)踐性[1-3]。本文主要研究混合培養(yǎng)的條件與它們之間的生長(zhǎng)關(guān)系。

1材料方法

1.1材料。1.1.1試驗(yàn)材料在次試驗(yàn)過(guò)程中選取的菌種有：英膜紅假單胞菌（Rspcapsulata）、地衣芽孢桿菌（Bacilluslicheniformis）和假絲酵母菌（Candida）。1.1.2試劑Na2HP04•12H20、KH2P04、MgSO4•7H20、NaCl、NaOH、葡萄糖、3,5-二硝基水楊酸、酒石酸鉀鈉、亞硫酸鈉、苯酚；蛋白胨、酵母粉、牛肉膏39、瓊脂粉、蒸餾水；結(jié)晶紫液、95%的乙醇、0.5%的番紅水溶液；PER引物、PER常規(guī)操作使用試劑和酶均購(gòu)自TaKaRa公司。1.1.3儀器SPX智能生化培養(yǎng)箱，SW-CJ-IF超凈工作臺(tái)，YXQ-LS-75SII立式電熱壓力滅菌鍋，ZHWY211B回轉(zhuǎn)式搖床，eppendoff5417R高速離心機(jī)，578BR0349PCR擴(kuò)增儀，UnitedGK-3300凝膠成像系統(tǒng)，CHZOBIMF200光學(xué)顯微鏡，V1TEK-32梅里埃微生物全自動(dòng)鑒定儀，UV-2550紫外分光光度儀等。1.2方法。1.2.1三種功能菌的接種時(shí)間前后將地衣芽孢桿菌、假絲酵母菌與莢膜紅假單胞菌通過(guò)不同的接種時(shí)間前后融合到接種于光合細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，設(shè)置30℃、100r•min-1搖床下培養(yǎng)后利用分析其細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量篩查出3種功能菌混合培養(yǎng)的比較理想的接種時(shí)間前后順序。1.2.2三種功能菌混合培養(yǎng)的培養(yǎng)基優(yōu)化在光合細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基條件下，分析不同碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽對(duì)3種功能菌混合培養(yǎng)的影響，在此期間利用因素輪換法進(jìn)行。3種功能菌的最佳培養(yǎng)基方案是采用正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩查。1.2.3三種功能菌混合培養(yǎng)的條件優(yōu)化利用正交實(shí)驗(yàn)法，根據(jù)最佳培養(yǎng)基方案分析各種溫度、pH、溶氧等環(huán)境狀態(tài)下3種功能菌混合培養(yǎng)受到的影響，進(jìn)而提出最優(yōu)混合培養(yǎng)的理想條件。1.2.4三種功能菌混合培養(yǎng)的生長(zhǎng)關(guān)系檢測(cè)3種功能菌通過(guò)混合培養(yǎng)以及純培養(yǎng)狀態(tài)下細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量，對(duì)其中2種培養(yǎng)條件中的細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)的繁殖代數(shù)（n）、生長(zhǎng)速率常數(shù)（R）與世代時(shí)間（G）的區(qū)別，進(jìn)而建立3種功能菌混合培養(yǎng)的生長(zhǎng)關(guān)系。1.2.5生長(zhǎng)量測(cè)定利用平板菌落計(jì)數(shù)法。在光合細(xì)菌培養(yǎng)基中對(duì)英膜紅假單胞菌進(jìn)行培養(yǎng)，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中對(duì)衣芽孢桿菌進(jìn)行培養(yǎng)，假絲酵母菌利用酵母菌培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。1.2.6計(jì)算公式繁殖代數(shù)(n)=3.322(lgx2-1gx1)；生長(zhǎng)速率常數(shù)(R)=n/(t2-t1)；世代時(shí)間(G)=1/R。式中，t1、t2為菌種進(jìn)人對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期初期與末期的培養(yǎng)時(shí)間；x1、x2為菌種進(jìn)人對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期初期與末期的細(xì)胞數(shù)量。

2結(jié)果與分析

2.1各類(lèi)培養(yǎng)基對(duì)功能菌株生長(zhǎng)的影響。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，以光合細(xì)菌培養(yǎng)基作為對(duì)3種功能菌在培養(yǎng)過(guò)程中的伊始基，這也是為了研究由光合細(xì)菌為主的復(fù)合型微生態(tài)制劑。利用測(cè)定地衣芽孢桿菌在細(xì)菌肉湯培養(yǎng)基和光合細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基和假絲酵母菌在酵母菌培養(yǎng)液和光合細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的細(xì)胞生長(zhǎng)量，進(jìn)而掌握每個(gè)菌種中營(yíng)養(yǎng)所需的重要區(qū)分。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，地衣芽孢桿菌以上兩種培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)大致相同，都是以最快的速度生長(zhǎng)，同時(shí)到9h實(shí)現(xiàn)最高生長(zhǎng)數(shù)量；而假絲酵母菌在各種培養(yǎng)基狀態(tài)中的生長(zhǎng)區(qū)別較為明顯：處于酵母菌培養(yǎng)基過(guò)程中進(jìn)入到生長(zhǎng)過(guò)程中非常快，同進(jìn)在24h后處于最大生長(zhǎng)量（1.41×l09CFU•mL-1），當(dāng)放到光合細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基時(shí)，通過(guò)12h之后菌體漸入到生長(zhǎng)過(guò)程中，同時(shí)48h之后才達(dá)到最大生長(zhǎng)量（4.7×107CFU•mL-1）。由此表明，假絲酵母菌和地衣芽孢桿菌相比下，地衣芽孢桿菌更適合在光合細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。2.2.3種功能菌混合培養(yǎng)的微生態(tài)關(guān)系地衣芽孢桿菌、假絲酵母菌與莢膜紅假單胞菌3種菌體間沒(méi)有拮抗關(guān)系。利用3種菌混合培養(yǎng)和自身純種培養(yǎng)的長(zhǎng)征特點(diǎn)分析了將3種菌混合到一起進(jìn)行培養(yǎng)，試驗(yàn)結(jié)果顯示：地衣芽孢桿菌和另外兩株功能菌之間并不存在共棲關(guān)系，假絲酵母菌與莢膜紅假單胞菌之間有利于對(duì)方生長(zhǎng)的作用。這是由于在進(jìn)行混合培養(yǎng)過(guò)程中，英膜紅假單胞菌生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)假絲酵母菌為其提供了小分子產(chǎn)物，反之英膜紅假單胞菌代謝也為其提供了生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成分。對(duì)3種功能菌進(jìn)行混合培養(yǎng)過(guò)程中，其細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量分別是3%～4%，明顯低于各純種培養(yǎng)過(guò)程中的接種量10%，3種功能菌的生長(zhǎng)量莢膜紅假單胞菌生長(zhǎng)量接近于純培養(yǎng)數(shù)值，另外兩種功能菌生長(zhǎng)量不佳，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。由此可以看出，3種菌種之間對(duì)于一些物體可能有著競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系存在，也不排除是因?yàn)榕囵B(yǎng)基pH的因素所致。2.3不同的接種時(shí)間前后對(duì)三種功能菌混合培養(yǎng)的影響。在此次實(shí)驗(yàn)中分別設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)組：實(shí)驗(yàn)1，在光合細(xì)菌的培養(yǎng)基中將3種菌株一起放入培養(yǎng)基中；實(shí)驗(yàn)2，在光合細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基中先對(duì)莢膜紅假單胞菌與假絲酵母菌進(jìn)行培養(yǎng)到48h時(shí)時(shí)再放入地衣芽孢桿菌；實(shí)驗(yàn)3，先將莢膜紅假單胞菌培養(yǎng)到24h和48h時(shí)，再將假絲酵母菌以及地衣芽孢桿菌分別連接。在試驗(yàn)過(guò)程中實(shí)時(shí)檢測(cè)以上3種功能菌各個(gè)接種順序下的細(xì)胞生長(zhǎng)速度，檢測(cè)結(jié)果如圖1、圖2、圖3所示。實(shí)驗(yàn)2的接種前后時(shí)間，3種功能菌在培養(yǎng)過(guò)程中都生長(zhǎng)優(yōu)良，同時(shí)培養(yǎng)時(shí)間到60h時(shí)都到達(dá)到了生長(zhǎng)數(shù)量的最高值；但是使用實(shí)驗(yàn)1的接種前后時(shí)間，地衣芽孢桿菌通過(guò)混合培養(yǎng)過(guò)程后，還沒(méi)有到72h時(shí)就已經(jīng)進(jìn)到了死亡過(guò)程，菌體大面積死亡；根據(jù)接種前后時(shí)間，假絲酵母菌在實(shí)驗(yàn)3中的生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。生長(zhǎng)曲線由圖3所示，夾膜紅假單胞菌在進(jìn)行培養(yǎng)之后由于生長(zhǎng)速度幾乎處于零，因?yàn)橹率古囵B(yǎng)基中的pH呈快速上升狀態(tài)直到出現(xiàn)偏堿性，由于假絲酵母適合在偏酸性狀態(tài)下生存，因此阻礙了假絲酵母菌的生長(zhǎng)。

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作者:孫爭(zhēng)榮 單位:凌海市達(dá)蓮海珍品養(yǎng)殖有限責(zé)任公司