導(dǎo)語：透析靈芝代謝產(chǎn)物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

摘要：目的了解靈芝代謝產(chǎn)物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用。方法①體質(zhì)量為18～22g昆明140只小鼠隨機(jī)分為7組，其中6組左前腋皮下注射S180，然后分別給予生理鹽水、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基、環(huán)磷酰胺、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組、口服含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基組和單純腹腔注射抗血清組處理，未注射S180的20只給予生理鹽水，一周后處死各組動(dòng)物觀察各組腫瘤質(zhì)量大小、血清TNF-α水平、血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶變化。結(jié)果腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組能有效減輕荷瘤小鼠的腫瘤質(zhì)量，其質(zhì)量減輕程度與環(huán)磷酰胺無差異。結(jié)論靈芝代謝產(chǎn)物中的羥基可能參與了抗腫瘤作用。

關(guān)鍵詞：靈芝代謝產(chǎn)物；TNF-α；腫瘤；羥基

靈芝是我國(guó)醫(yī)學(xué)寶庫中的靈芝屬藥、食兩用真菌。其在自然界生長(zhǎng)過程中必然要與細(xì)菌等自然界其他微生物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，而靈芝作為一種真菌，生長(zhǎng)速度要遠(yuǎn)慢于細(xì)菌，所以作為靈芝能獲勝的法寶之一可能就是其代謝產(chǎn)物，而真菌代謝產(chǎn)物的開發(fā)早已被證明是非常有價(jià)值的，比如歷史上青霉素的發(fā)現(xiàn)就是例證，在這方面我國(guó)的發(fā)展步伐卻比較慢，靈芝代謝產(chǎn)物藥理作用的開發(fā)也將豐富我國(guó)中藥的用途。對(duì)于靈芝代謝產(chǎn)物的研究目前并不多而且主要集中在其中靈芝多糖的測(cè)定上［1］。但靈芝的代謝產(chǎn)物是否能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞有所作用？為解決這個(gè)問題，我們進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。

1材料與儀器

1.1試劑環(huán)磷酰胺（CTX）注射液由上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn)（生產(chǎn)批號(hào)為071002）。TNF-αELISA試劑盒購(gòu)于渤海生物公司。肝功能檢測(cè)試劑盒購(gòu)于上海榮盛公司。

1.2含靈芝的代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基取生長(zhǎng)于斜面固體培養(yǎng)基上的靈芝菌泥（約1cm2）接種于100ml液體培養(yǎng)基（含2%黃豆粉，2%蔗糖，0.075%的磷酸二氫鉀，0.03%的硫酸鎂），25℃100r/min條件下培養(yǎng)5d，用濾紙過濾后得到含靈芝的代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基。將這些培養(yǎng)基在-20℃條件下保存待用。

1.3抗血清制備使用李麗華等［2，3］報(bào)道的琥珀酸酐法將含靈芝的代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基中所有成分的羥基與小牛血清白蛋白（BSA）連接。使用連接后的化合物免疫昆明小鼠，制備抗血清。經(jīng)瓊脂雙向擴(kuò)散法測(cè)定該抗血清的效價(jià)是1∶16。

1.4腫瘤細(xì)胞株S180購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。

1.5動(dòng)物昆明小鼠(由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供)146只，體質(zhì)量為18～22g，雌雄各半。

1.6儀器微量加樣器（SOCOREX，瑞士）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），離心機(jī)（國(guó)產(chǎn)），Humalyzer2000型全自動(dòng)生化儀，德國(guó)豪邁公司生產(chǎn)等。

2方法

2.1建立腫瘤模型選擇6只昆明小鼠腹腔接種S180，接種5d后的小鼠，消毒腹部皮膚，用無菌空針抽吸腹水放入無菌容器內(nèi)，置冰塊保存。用0.4%臺(tái)盼藍(lán)染色后計(jì)數(shù)，在倒置式顯微鏡下計(jì)數(shù)，計(jì)算存活率，，用Hank''''s液稀釋細(xì)胞懸液使活細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×109個(gè)?ml-1，隨機(jī)選取120小鼠，每只小鼠左前腋皮下注射0.2ml（活細(xì)胞數(shù)達(dá)到1×109個(gè)?ml-1）細(xì)胞懸液，另外20只小鼠不做任何處理作為正常組。

2.2動(dòng)物分組將120只已經(jīng)注射了S180的小鼠隨機(jī)分為6組，每組動(dòng)物各20只，分為陰性對(duì)照組、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基組（注射產(chǎn)物組）、環(huán)磷酰胺（CTX）組、腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組（注射產(chǎn)物加血清組）、口服含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基組（口服產(chǎn)物組）和抗血清組。陰性對(duì)照組和正常組胃飼生理鹽水0.2ml/（kg?d）；環(huán)磷酰胺組腹腔注射環(huán)磷酰氨0.075g/（kg?d）；腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基組給予腹腔注射靈芝代謝產(chǎn)物2ml/（kg?d），抗血清組給予腹腔注射抗血清2ml/（kg?d），腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基加抗血清組給予腹腔注射靈芝代謝產(chǎn)物2ml/（kg?d）同時(shí)腹腔注射抗血清2ml/（kg?d），口服含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基組給予口服含靈芝代謝產(chǎn)物培養(yǎng)基2ml/（kg?d）。

2.3動(dòng)物處理以上各組在接瘤24h后開始給藥，連續(xù)給藥7d后，處死動(dòng)物，取出腫瘤和肝臟，用電子天平稱出腫瘤質(zhì)量。同時(shí)取血放入肝素抗凝素管內(nèi)分離血清備用。

2.4ELISA法測(cè)定各組血清TNF-α水平應(yīng)用TNF-αELISA試劑盒（購(gòu)于渤海生物公司）按說明書測(cè)定保存血清中的TNF-α水平。

2.5使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定測(cè)量血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)。

2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法均采用SPSS10.0軟件，進(jìn)行t檢驗(yàn)。

3結(jié)果

3.1各組腫瘤質(zhì)量如表1所示，陰性對(duì)照組與抗血清組腫瘤質(zhì)量無差異（P＞0.05）；注射產(chǎn)物與血清組和環(huán)磷酰胺組無差異（P＞0.05）；陰性對(duì)照組與所有組均有差異（P＜0.05）；注射產(chǎn)物組與口服產(chǎn)物組有差異（P＜0.05），注射產(chǎn)物組與口服產(chǎn)物組有差異（P＜0.05）。

3.2各組血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT）如表1所示，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的結(jié)果中只有正常組與其他組有差異（P＜0.05），其余各組間谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的結(jié)果均無差異；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的結(jié)果中只有正常組與其他組有差異（P＜0.05），口服產(chǎn)物組、環(huán)磷酰胺組與注射產(chǎn)物與血清組之間無差異（P＞0.05）；環(huán)磷酰胺與注射產(chǎn)物組有差異（P＜0.05），口服產(chǎn)物組與陰性對(duì)照組有差異（P＜0.05）。

3.3TNF-α水平如表1所示，環(huán)磷酰胺組TNF-α的水平與注射產(chǎn)物與血清組之間無差異（P＞0.05），正常組、陰性對(duì)照組與血清組無差異（P＞0.05），環(huán)磷酰胺組與陰性對(duì)照組有差異（P＜0.05）；注射產(chǎn)物與血清組與陰性組有差異（P＜0.05）。表1各組腫瘤質(zhì)量、肝功能和細(xì)胞因子水平（略）

4討論

有的文獻(xiàn)報(bào)道［4，5］靈芝具有對(duì)抗腫瘤的作用，這次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液也具有抗腫瘤的作用，在我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中不論口服與腹腔注射含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液腫瘤的質(zhì)量均縮小，其結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但作為陽性組的環(huán)磷酰胺組其腫瘤的質(zhì)量要小于口服含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液組，這說明可能經(jīng)口服后存在首關(guān)消除，而肝功能的指標(biāo)也顯示口服含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶要低于陰性對(duì)照組和正常組。而在培養(yǎng)液中到底是何種化學(xué)集團(tuán)起到抗腫瘤作用呢？我們根據(jù)劉文泰等人報(bào)道的琥珀酸酐法用小牛血清白蛋白封閉了代謝產(chǎn)物中的羥基后，用它作為免疫原免疫老鼠產(chǎn)生對(duì)抗除羥基外其他化學(xué)集團(tuán)的抗血清，我們用這些抗血清封閉了含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液的其他化學(xué)集團(tuán)，只保留了部分羥基，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示用抗血清封閉的含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液的抗腫瘤活性增強(qiáng)，這說明可能靈芝代謝產(chǎn)物中的羥基在對(duì)于抗腫瘤起了很大作用。而腹腔注射的作用強(qiáng)于口服的作用說明，這些代謝產(chǎn)物中的羥基可以被肝臟清除。

我們的結(jié)果還顯示同時(shí)含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液與抗血清組與注射環(huán)磷酰胺組的小鼠血清TNF-α水平都很高。而環(huán)磷酰胺對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接的殺傷作用，而這些死亡的腫瘤細(xì)胞可能刺激了小鼠血清TNF-α水平的升高。而同時(shí)含靈芝代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)液與抗血清組的TNF-α水平也同樣升高說明，這些靈芝代謝產(chǎn)物中可能有直接殺傷腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)存在。

參考文獻(xiàn)：

［1］單衛(wèi)華，張玲，時(shí)延增，等．靈芝菌發(fā)酵液制劑中靈芝多糖及總糖含量測(cè)定［J］．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2000，11（9）：797.

［2］李麗華，劉文泰．抗中藥成分的特異性抗體在中藥質(zhì)量檢測(cè)中的應(yīng)用探討［J］．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)理論雜志，2008，14（9）：686.

［3］YamazakiM，SatoA，SaitoK，etal.MolecularphylogenybasedonRFLPanditsrelationwithalkaloidpatternsinLupinusplants［J］．BiolPharmBull，1993，16(2):1182.

［4］劉高強(qiáng)，王曉玲．靈芝多糖的抗癌構(gòu)效關(guān)系及其抗癌作用機(jī)制［J］．菌物學(xué)報(bào)，2006，25（3）：430.

［5］吳珍珠．靈芝孢子抗腫瘤的作用機(jī)制［J］．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2006，22(6)：836.