導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫好一篇凝膠色譜法，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

關(guān)鍵詞 大豆油；特丁基對(duì)苯二酚；凝膠滲透色譜；氣相色譜儀

中圖分類號(hào) TS221 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2016）08-0273-02

Abetract Using gel penetration chromatography （GPC） and gas chromatography （GC） technique to establish analysis method of soybean oil antioxid-ant tertiary butyl hydroquinone （TBHQ）. Sample by GPC automatic gel purification quantitative concentration spectrometer purification， HP-5 （30 m× 0.32 mm，0.25 μm） for the separation and deter mination of chromatographic column.The detection limit was 4 mg/kg.TBHQ had a good linearity in the detection range，the concentration in the range of 1～1 000 mg/L and the peak area was linear correlation，the correlation coefficient was 0.999 6.Recovery rate of oil sample was between 88.3% and 95.4%.The relative standard deviation （RSD） was less than 4%.

Key words soybean oil；TBHQ；gel permeation chromatography；gas chromatography

氧化是導(dǎo)致食品品質(zhì)變劣的重要因素之一，特別是在食用油或者含油量較高的食品中更是如此。大豆油是日常生活中主要的一種食用油，為了防止大豆油氧化酸敗，延長(zhǎng)貨架期，市售大豆油往往需要在其中添加適宜的抗氧化劑[1-3]。特丁基對(duì)苯二酚作為油溶性抗氧化劑的新型產(chǎn)品，它的抗氧化能力大于2，6-二叔丁基對(duì)甲苯（BHT），被廣泛用于延遲或阻止食品油脂的氧化變質(zhì)中。

食用油脂中TBHQ常用的分析方法有比色法、氣相色譜法、液相色譜法，但這些前處理方法比較繁瑣，同時(shí)樣品油脂得不到充分的凈化[2-4]。該文采用凝膠滲透色譜/氣相色譜法測(cè)定大豆油中抗氧化劑特丁基對(duì)苯二酚，具有步驟簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)儀器與試劑

1.1.1 供試儀器。7683 Series自動(dòng)進(jìn)樣器；GPC全自動(dòng)凝膠凈化-定量濃縮聯(lián)用儀：Free StyleTM ；氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：HEIDOLPH；漩渦混合器： IKA GENIUS 3；電子天平：梅特勒-托利多ML204；6890N氣相色譜儀：Aglient。

1.1.2 供試試劑。TBHQ標(biāo)準(zhǔn)品（純度99%）：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所；環(huán)己烷、乙酸乙酯均為色譜純；市售一級(jí)大豆油。

1.2 氣相色譜分析條件

HP-5非極性毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm i.d）， 膜厚0.25 μm （Aglient，USA） ；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；FID檢測(cè)器溫度：250 ℃；程序升溫：初始溫度80 ℃，保留1 min，以10 ℃/min速度升至220 ℃，保持穩(wěn)定1 min；載氣流速1.2 mL/min，高純氮?dú)狻?/p>

1.3 GPC條件

GPC柱填料為BioBeads S- X3 200～400目，規(guī)格（200 mm×22 mm i.d.），流動(dòng)相乙酸乙酯/環(huán)己烷（1∶1，v/v）， 進(jìn)樣量 5 mL， 流速為5.0 mL/min， 樣品收集時(shí)間9～16 min。

1.4 樣品處理

準(zhǔn)確量取大豆油樣0.5 g（精確值0.1 mg）， 用乙酸乙酯/環(huán)己烷（1∶1，v/v）準(zhǔn)確定容至10.0 mL，過(guò)Ф25 0.45 μm有機(jī)膜，漩渦混合2 min，按1.3條件對(duì)樣品進(jìn)行處理，將收集液在30 ℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，再用乙酸乙酯/環(huán)己烷（1∶1，v/v）準(zhǔn)確定容至2 mL。進(jìn)樣量1.0 μL。按照1.2條件進(jìn)行氣相色譜分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 GPC凈化條件優(yōu)化

取TBHQ標(biāo)準(zhǔn)樣品10 mL，按照1.3條件進(jìn)行處理，收集9～16 min的流出液，然后在30 ℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，準(zhǔn)確定容至2 mL，按照1.2條件使用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品、空白樣品加標(biāo)氣相色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 GPC收集時(shí)間的確定

以收集時(shí)間為橫坐標(biāo)，以色譜圖峰面積為縱坐標(biāo)繪制TBHQ隨時(shí)間流出曲線圖，具體見(jiàn)圖2?？梢钥闯觯琓BHQ集中在9～16 min流出，因此初步確定流出時(shí)間為9～16 min。

2.3 未知樣品中TBHQ的含量測(cè)定

利用本方法對(duì)市售的8種樣品進(jìn)行檢測(cè)，由分析結(jié)果可知，TBHQ均未檢出。

2.4 方法的線性關(guān)系與檢出限

按照3倍信噪比進(jìn)行計(jì)算，方法的檢出限約為4 mg/kg。對(duì)系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照上述色譜條件進(jìn)樣分析，以峰面積定量，從而得到標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積之間的線性回歸方程：Y=2 472X+1.330，保留時(shí)間為12.035 min，相關(guān)系數(shù)R2=0.9 996。

2.5 方法的回收率

在空白大豆油樣品中分別添加0.1、0.4、1.0 mg/mL的TBHQ標(biāo)準(zhǔn)溶液， 3次重復(fù)，按上述色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定TBHQ的加標(biāo)回收率分別為88.3%、92.6%、95.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于4%，精密度良好，滿足分析要求。

3 結(jié)論

應(yīng)用凝膠滲透色譜（GPC）和氣相色譜（GC）技術(shù)，建立了大豆油中抗氧化劑特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）的分析方法。樣品經(jīng)GPC全自動(dòng)凝膠凈化定量濃縮聯(lián)用儀凈化，HP-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm）色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定。 本方法的檢出限為4 mg/kg。TBHQ在檢測(cè)范圍內(nèi)具有良好的線性，在濃度1～1 000 mg/L范圍內(nèi)與峰面積呈線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6。加標(biāo)油樣的回收率在88.3%～95.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于4%。該方法具有步驟簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，適用于大豆油中抗氧化劑特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）的檢測(cè)[7-8]。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 許華，穆同娜，李偉.凝膠滲透色譜/氣相色譜法測(cè)定食用油脂中抗氧化劑特丁基對(duì)苯二酚[J].食品科技，2007，35（6）：217.

[2] 余以港，黃偉，林華山.特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）應(yīng)用與檢測(cè)[J].糧食與油脂，2003 （3）：42- 43.

[3] 游飛明，翁其香.氣相色譜法快速測(cè)定油脂及加工食品中的BHA、BHT、TBHQ[J]. 福建分析測(cè)試，2005，14（4）：2290-2292.

[4] 張淑玲，張志勝，邢曉慧.氣相色譜法測(cè)定食品中的抗氧化劑BHA，BHT，THBQ[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，8（12）：2483-2484.

[5] 程航，郭肖媚，梁瑩，等.氣相色譜法測(cè)定飼料中的特丁基對(duì)苯二酚[J].飼料研究，2011（8）：48-49.

[6] 中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫局.食品中抗氧化劑丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）與特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）的測(cè)定：GB/T 23373―2009[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009.

篇2

關(guān)鍵詞：在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜 食品 農(nóng)藥殘留

中圖分類號(hào)：TS207 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-3973（2013）007-131-02

農(nóng)藥，以造福人類，提高農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量走進(jìn)了我們的世界，但是隨著農(nóng)藥的廣泛使用，大量食用含有農(nóng)藥殘留的食品會(huì)導(dǎo)致機(jī)體正常生理功能失調(diào)，引起病理改變和毒性危害，它對(duì)人類健康，生態(tài)環(huán)境構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。食品安全問(wèn)題已經(jīng)受到各國(guó)政府的密切關(guān)注，目前，農(nóng)藥殘留分析技術(shù)已經(jīng)不能滿足當(dāng)前社會(huì)的需求，GPC-GC/MS在線聯(lián)用技術(shù)具備樣品處理簡(jiǎn)單，分析時(shí)間快、溶劑使用量少，定性準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，近幾年，逐漸受到食品檢測(cè)工作者的青睞。在線GPC-GC/MS已經(jīng)用于糧食、蔬菜、水果、堅(jiān)果等中的多農(nóng)藥殘留分析。

1 在線GPC-GC/MS簡(jiǎn)介

GPC-GC/MS主要包括兩部分：凝膠滲透色譜和氣相色譜/質(zhì)譜。GPC主要目的是去除樣品基質(zhì)中可能干擾目標(biāo)化物檢測(cè)的大分子油脂、色素等組分。系統(tǒng)流路圖如圖1，GPC根據(jù)尺寸排阻原理先將分子量較大的脂肪和色素等先從色譜柱中洗脫，通過(guò)六通閥位置的切換將這些基質(zhì)干擾物排出系統(tǒng)，之后將所需檢測(cè)物質(zhì)導(dǎo)入試樣捕集環(huán)中，最后導(dǎo)入GC/MS進(jìn)行分離檢測(cè)。

圖1 系統(tǒng)流路圖

2 在線GPC-GC/MS在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用概況

2.1 蔬菜、水果中的農(nóng)藥殘留測(cè)定

苯氧羧酸類農(nóng)藥憑借其高效、內(nèi)吸、高選擇性的特征廣泛用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，目前在土壤、水體等環(huán)境樣品及糧谷類農(nóng)作物中已經(jīng)測(cè)出苯氧羧酸類農(nóng)藥。張帆等建立了水果中的11種苯氧羧酸類農(nóng)藥在線GPC-GC/MS分析方法。該方法在0.02～0.10mg/kg加標(biāo)范圍內(nèi)，回收率為66%～112%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.4%～11.5%，定量下限為7～10 g/kg。在柑橘樣品中11種苯氧羧酸類農(nóng)藥均有檢出；香蕉中檢測(cè)出2，4-D，含量為0.058mg/kg，其他農(nóng)藥成分未檢出。歐陽(yáng)運(yùn)富等將蔬菜、水果樣品經(jīng)二氯甲烷-丙酮（1：1，v/v）加速溶劑提取，活性炭柱-氨基柱串聯(lián)凈化結(jié)合在線GPC-GC/MS分析了22種農(nóng)藥殘留，在0.02， 0.05， 0.4mg/kg 3個(gè)添加水平下的回收率為70.5%～107.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%～8.7%。在線GPC-GC/MS把GPC凈化和GC-MS分析檢測(cè)合二為一，自動(dòng)化除去為除盡的干擾物質(zhì)，保證了方法的可靠性和有效性，大大的提高了分析的準(zhǔn)確度和有效性。薛麗等利用固相萃取-在線GPC-GC/MS測(cè)定了梅菜干中18種有機(jī)磷和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留，該方法的農(nóng)藥回收率均在80%～120%之間，精密度均小于15%。

2.2 堅(jiān)果中農(nóng)藥殘留測(cè)定

吳巖，康慶賀等線GPC-GC/MS測(cè)定板栗、松子仁中多農(nóng)藥殘留分析。板栗經(jīng)乙腈-水（4：1，v/v）為提取劑，ENVI-18固相萃取柱凈化，除去樣品中的大量脂肪和甾醇等干擾基質(zhì)，在經(jīng)過(guò)在線GPC進(jìn)一步凈化，最后經(jīng)過(guò)GC/MS分析。44種有機(jī)磷農(nóng)藥中大部分農(nóng)藥的回收率為65%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，檢出限為0.002～0.05mg/kg。松子仁也用同樣的方法進(jìn)行了處理，與板栗不同的是提取液經(jīng)Aluminum-N固相萃取柱凈化。28種有機(jī)氯農(nóng)藥和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的回收率為70%～120%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，檢測(cè)限為0.002～0.05mg/kg。固相萃取結(jié)合在線GPC-GC/MS有效的解決了低水分高脂質(zhì)樣品前處理復(fù)雜、基質(zhì)干擾嚴(yán)重的難題。

2.3 茶葉中農(nóng)藥殘留測(cè)定

茶葉作為我國(guó)對(duì)外出口的傳統(tǒng)商品，近年來(lái)，歐盟等國(guó)對(duì)進(jìn)口茶葉的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)日趨嚴(yán)格。因此，茶葉的農(nóng)藥殘留檢測(cè)成為我們面臨的共同問(wèn)題。李軍明等利用乙腈萃取、ENVI-carb固相萃取柱凈化結(jié)合在線GPC-GC/MS測(cè)定了普洱茶、綠茶、紅茶、烏龍茶中的153種農(nóng)藥殘留量。該方法檢出限能夠滿足歐盟等國(guó)的限量要求，為茶葉中的多農(nóng)藥殘留提供了檢測(cè)方法。

2.4 糧食作物中農(nóng)藥殘留測(cè)定

糧食作物作為人們生活的基本食品，糧食安全與人的生活息息相關(guān)，各個(gè)國(guó)家對(duì)糧食中的農(nóng)藥殘留都設(shè)有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。糧食中含有高的脂肪和淀粉，使得糧食中農(nóng)藥殘留的測(cè)定樣品前處理方法較為復(fù)雜。近年利用在線GPC-GC/MS測(cè)定糧食中的農(nóng)藥殘留減少了樣品前處理的繁復(fù)過(guò)程，縮短了分析時(shí)間，挺高了工作效率，減少了溶劑的使用。

3 總結(jié)

在線GPC-GC/MS在能夠有效的去除復(fù)雜基質(zhì)中的干擾物質(zhì)，降低背景、改善峰形、減小基質(zhì)效應(yīng)。簡(jiǎn)化了樣品前處理、提高了檢測(cè)的重現(xiàn)性、縮短了分析時(shí)間、提高了工作效率、減小了有害溶劑的使用，將成為食品檢測(cè)中的一顆璀璨明星。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張帆，付善良，施雅梅，等.在線凝膠滲透色譜/氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定水果中11種苯氧羧酸類農(nóng)藥[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013，32（1）：79-83.

[2] 歐陽(yáng)運(yùn)富，唐宏兵，吳英，等.加速溶劑萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法快速測(cè)定蔬菜和水果中多農(nóng)藥殘留[J].色譜，2012，30（7）：654-659.

[3] 薛麗，鐘艷梅.固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定蔬菜干制品中的 18 種有機(jī)磷和擬除蟲(chóng)菊酯殘留[J].現(xiàn)代食品科技，2012，28（8）：1088-1090.

[4] 吳巖，康慶賀，高凱揚(yáng)，等.固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定板栗中44種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留[J].分析化學(xué)，2009，37（5）：753-757.

[5] 康慶賀，吳巖，高凱揚(yáng)，等.固相萃取-在線凝膠滲透色譜-氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定松子仁中的28種有機(jī)氯農(nóng)藥和擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥[J].色譜，2009，27（2）：181-185.

篇3

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法 風(fēng)濕骨康膠囊 士的寧 馬錢子堿

風(fēng)濕骨康膠囊是由麻黃、馬錢子、防風(fēng)、牛膝等16味中藥組成的復(fù)方制劑，是由風(fēng)濕骨康片［1］通過(guò)改變劑型而得的膠囊劑，具有追風(fēng)散寒、除濕止痛的功效。馬錢子中的主要成分為士的寧和馬錢子堿，其毒性大，具有使中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮等多種作用，安全范圍窄，過(guò)量使用常會(huì)導(dǎo)致驚厥、抽搐、昏迷等嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)［2，3］。已報(bào)道的測(cè)定方法有薄層色譜法、紫外光譜法、高效液相色譜法等［4，5］。為了更有效地控制含量，提高產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定兩者含量。

1 試劑和藥品

天美高效液相色譜儀；千譜工作站。士的寧對(duì)照品（批號(hào)0705-200005）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所、馬錢子堿對(duì)照品購(gòu)于上海順勃生物制品有限公司；風(fēng)濕骨康膠囊為市售，貴州的確神藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；缺馬錢子陰性樣品（自制），乙腈為色譜純，三乙胺、磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取士的寧對(duì)照品、馬錢子堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每毫升含士的寧0.216 mg馬錢子堿0.183 mg的對(duì)照儲(chǔ)備液。各取1 ml置10 ml量瓶中，制成含量分別為21.6，18.3 μg的混合對(duì)照溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備取樣品膠囊20粒，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，精密稱取0.25 g于150 ml具塞錐形瓶中，加1 ml濃氨水潤(rùn)濕樣品后，準(zhǔn)確加入50 ml氯仿，稱重，超聲提取30 min，靜置，冷卻，稱重，加氯仿補(bǔ)足失去的重量，搖勻，過(guò)濾，取其濾液25 ml，揮干，用甲醇溶解殘?jiān)?，定量轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶?jī)?nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例及制備工藝，配制不含馬錢子的陰性對(duì)照品，并照“2.2”項(xiàng)下方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.4 色譜條件和系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)色譜柱：Hypersil BOD C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.3%三乙胺(磷酸調(diào)pH至2.8)（12∶88）；流速1.0 ml/mim；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量10 μl。記錄色譜圖。如圖1～3。

圖1 陰性樣品色譜圖（略）

圖2 對(duì)照品色譜圖（略）

圖3 樣品色譜圖（略）

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密量取士的寧和馬錢子堿的混合對(duì)照品溶液0.25，0.5，1，2，4，8 ml于10 ml容量瓶中，用甲醇至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品混合溶液。在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20 μl，記錄色譜圖。以對(duì)照品進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，對(duì)色譜峰面積（A）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，士的寧在0.010 8～0.345 6 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程（n=6）為：Y=262 606X-21.573（r=0.999 6）；馬錢子堿在0.009 2～0.292 8 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程（n=6）為：Y=4 832.9X-6.475 6（r=0.999 9）。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果RSD分別為1.1%，0.6% 。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)（071002）6份，按“2.2”項(xiàng)下制成供試品溶液，依法測(cè)定，記錄峰面積，RSD分別為1.9%，1.8%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取樣品（071002）5份，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備。各進(jìn)樣10μl，計(jì)算回收率。得到士的寧、馬錢子堿回收率分別為：100.4%，97.78%；RSD為1.1%，0.15%。結(jié)果見(jiàn)表1～2。

表1 士的寧回收率測(cè)定結(jié)果（略）

表2 馬錢子堿回收率測(cè)定結(jié)果（略）

2.9 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0，1，2，4，6，8 h依法測(cè)定。結(jié)果表明，士的寧、馬錢子堿在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD分別為1.7%，2.3%。

2.10 樣品測(cè)定 取本品，按“2.2”項(xiàng)下操作，按擬定方法測(cè)定，分別計(jì)算士的寧和馬錢子堿含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果（略）

3 討論

1 g士的寧能溶于6 400 ml水、150 ml乙醇、5 ml氯仿、260 ml甲醇，極微溶于乙醚和石油醚［6］，故選擇氯仿和甲醇作為提取溶劑進(jìn)行考察。結(jié)果顯示以氯仿提取效果更好。

經(jīng)過(guò)篩選，以乙腈-0.3%三乙胺（12∶88）為流動(dòng)相，pH調(diào)至3.0時(shí)，兩個(gè)對(duì)照峰分離效果不好，且保留時(shí)間短，將pH調(diào)至2.8后，兩者能完全分離，保留時(shí)間合適。

【參考文獻(xiàn)】

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：327.

［2］ 孫 杰，谷學(xué)新 ，趙新穎，等.HPLC測(cè)定風(fēng)濕安泰片中馬錢子堿和士的寧的含量［J］.藥物分析雜志，2007，27（5）：757.

［3］ 黃喜茹，孫澤東，曹 冬，等.馬錢子的質(zhì)量控制方法研究［J］.光譜學(xué)與光譜分析，2006，26(2)：324.

［4］ 武建民，王杏云，顏戰(zhàn)勝，等.薄層掃描法測(cè)定風(fēng)濕骨康片中士的寧的含量［J］.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2004，3：66.

篇4

【關(guān)鍵詞】凝膠滲透色譜；農(nóng)藥殘留分析；全球經(jīng)濟(jì)一體化；監(jiān)測(cè)系統(tǒng)

1 引言

隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展和人民生活水平的不斷提高，健康問(wèn)題已得到社會(huì)各界的廣泛關(guān)注，食品安全問(wèn)題也提上記事議程，環(huán)境的破壞和食品農(nóng)藥殘留問(wèn)題不斷涌現(xiàn)，逐漸成為阻礙我國(guó)出口貿(mào)易發(fā)展的屏障。農(nóng)藥是一種農(nóng)業(yè)生產(chǎn)不可或缺的生產(chǎn)資料，在適量的條件下，對(duì)生存與農(nóng)業(yè)、林業(yè)和畜牧業(yè)之間的害蟲(chóng)和細(xì)菌有積極的預(yù)防作用，也能在一定程度上促進(jìn)動(dòng)植物的生長(zhǎng)，預(yù)防各種蟲(chóng)害，為農(nóng)業(yè)的創(chuàng)收增產(chǎn)和預(yù)防傳染病方面有不可磨滅的突出作用。在有限的科技手段中，農(nóng)藥仍是預(yù)防疾病、增產(chǎn)創(chuàng)收、緩解糧食壓力的最快捷、最便利、最廉價(jià)、最有效的方法之一?？墒?，農(nóng)藥也不是面面俱到，農(nóng)藥的使用本身存在著巨大的隱患，由于我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，農(nóng)藥的大量長(zhǎng)期使用不僅污染土地和大氣，還造成生態(tài)環(huán)境的嚴(yán)重失衡，更嚴(yán)重的是，農(nóng)藥可殘留于食物中，使牲畜和人類中毒，產(chǎn)生嚴(yán)重的后果。然而，農(nóng)藥殘留的原因復(fù)雜繁多：使用了價(jià)格低廉，不易分解的農(nóng)藥；使用農(nóng)藥過(guò)量；畜牧業(yè)藥?。辉趧?dòng)物即將宰殺前仍使用農(nóng)藥；飼養(yǎng)牲畜的飼料為受過(guò)農(nóng)藥污染的產(chǎn)品等。近日，農(nóng)藥殘留分析方法及檢測(cè)技術(shù)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，但食品分類復(fù)雜以及農(nóng)藥品種的化學(xué)性質(zhì)千差萬(wàn)別，為農(nóng)藥殘留分析檢測(cè)帶來(lái)了更大的挑戰(zhàn)。其中，農(nóng)藥殘留分析的樣品前處理技術(shù)包含先進(jìn)的固相萃取技術(shù)、基質(zhì)固相分散萃取技術(shù)、凝膠滲透色譜技術(shù)以及加速溶劑萃取技術(shù)等等。這些技術(shù)的功能特點(diǎn)不盡相同，有的是專門分析水源和土壤的，有的是分析果蔬的，有的是分析生物樣品的，而本文討論的凝膠滲透色譜技術(shù)在大分子樣品分離凈化脂肪、色素等方面有顯著效果。

2 凝膠滲透色譜技術(shù)

前處理和測(cè)定是農(nóng)藥殘留分析處理的主要手段，而分析的關(guān)鍵是樣品的前處理問(wèn)題。凝膠滲透色譜技術(shù)大部分使用的是XAD系列的凝膠，其洗脫劑是配比不同的乙酸乙酯和環(huán)乙烷，將大小分子不同的多孔凝膠分離，把油脂、葉綠素、聚合物和生物堿等大分子物質(zhì)首先淋洗處理，分子質(zhì)小的后淋洗處理。然后將洗脫液收集起來(lái)再次進(jìn)行分析。凝膠滲透色譜分離的關(guān)鍵因素是柱填料，它分為有機(jī)凝膠和無(wú)機(jī)凝膠，這要求其必須具備強(qiáng)韌的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)惰性，還要有流動(dòng)性小，分離廣等特點(diǎn)。一般的分離方法有機(jī)溶劑消耗量極大，誤差也大，從而操作繁瑣，而凝膠滲透色譜技術(shù)分離樣品運(yùn)用物理方法分離蛋白質(zhì)脂肪，并且過(guò)程簡(jiǎn)單，誤差小。

2.1 凝膠滲透色譜技術(shù)的應(yīng)用原理

檢驗(yàn)農(nóng)藥殘留的方法頗多，目前主要有兩種____生化法和色譜法。生化法操作簡(jiǎn)單，測(cè)速快效率高。色譜法是使用色譜分離技術(shù)，選取合適的儀器測(cè)定農(nóng)藥殘留的方法，也是農(nóng)藥殘留檢測(cè)的常見(jiàn)方法。凝膠滲透色譜技術(shù)是根據(jù)溶質(zhì)分子的大小進(jìn)行分離的技術(shù)，它可用于分析化學(xué)性質(zhì)相同但分子體積有差異的同系物質(zhì)。先用洗脫機(jī)把注射進(jìn)色譜柱中的預(yù)處理濃縮樣品洗脫分離完成，使樣品的形狀和分子大小各異，在通過(guò)固定凝膠直徑使大分子樣品首先被洗脫出來(lái)，小分子隨之被洗脫出來(lái)。凝膠滲透色譜是一項(xiàng)十分有發(fā)展前景的分子量測(cè)量方式的課題，從一開(kāi)始的生物學(xué)向生化、高分子化學(xué)、無(wú)機(jī)化學(xué)等廣泛擴(kuò)展領(lǐng)域，可見(jiàn)其應(yīng)用范圍之廣泛，滲透領(lǐng)域之普遍，是農(nóng)藥殘留分析的關(guān)鍵性的凈化方法。

2.2 凝膠滲透色譜技術(shù)在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用

農(nóng)藥殘留分析同時(shí)需要靈敏度極高的檢測(cè)技術(shù)和操作精良的方式方法，其難點(diǎn)就是在除掉雜質(zhì)的時(shí)候保持較高的回收率。提取液的選擇要根據(jù)農(nóng)藥的極性來(lái)判斷，即極性弱的提取液配備極性小的有機(jī)氯農(nóng)藥。，而極性強(qiáng)的農(nóng)藥配備丙酮提取液。對(duì)于特殊的復(fù)雜基質(zhì)，如油脂較高的物質(zhì)常常不能使用較為普遍的液態(tài)萃取或者柱層凈化萃取法，使用凝膠滲透色譜技術(shù)則可以在柱填料和被分離式樣無(wú)相互作用的情況下按自身大小進(jìn)行自動(dòng)分離。值得欣慰的是，此技術(shù)完全可以在常溫下進(jìn)行，沒(méi)有可逆吸附，能使每一個(gè)凝膠滲透色譜技術(shù)的分離樣品完全洗脫。并且凝膠滲透色譜凈化法能夠排除大分子的干涉，對(duì)各種形態(tài)大小復(fù)雜的基質(zhì)都適用。

隨著科技的進(jìn)步，農(nóng)藥品種不斷增多，溶劑體系也不斷加強(qiáng)完善，Bio-Beads SX-3作為凝膠滲透體系的柱填材料也有迅猛發(fā)展。我們對(duì)凝膠滲透色譜技術(shù)在糧食中的應(yīng)用為例做簡(jiǎn)要的分析。糧食中包含脂肪，蛋白質(zhì)，淀粉等多種材料，這位提取農(nóng)藥殘留時(shí)排除干擾物進(jìn)入溶劑增加了困難，因此必須用合適的凈化手段對(duì)基質(zhì)的干擾進(jìn)行解除。將研究人員分為ABCD四個(gè)小組，A組用凝膠滲透色譜技術(shù)對(duì)糙米進(jìn)行凈化，對(duì)糙米中的有機(jī)氯農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯農(nóng)藥進(jìn)行分析時(shí)采用氣相色譜技術(shù)，測(cè)出的平均回收率約為80%-92%。B組還引用了新的氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，分析檢驗(yàn)了玉米中的三唑醇和三唑酮，結(jié)果為農(nóng)藥回收率大約為96%-115%。而C組使用凝膠滲透色譜技術(shù)凈化糙米，對(duì)其中可能存在的60多種有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行殘留分析，其中35種農(nóng)藥回收率在65%-110%之間。D組用詞技術(shù)凈化和氣相色譜技術(shù)建立大豆中8種二硝基苯胺類除草劑的殘留分析方法，去除量很高。又如，運(yùn)用凝膠滲透色譜技術(shù)同樣能對(duì)水果蔬菜的農(nóng)藥殘留凈化起到積極作用。實(shí)驗(yàn)表明，運(yùn)用凝膠滲透色譜技術(shù)對(duì)果蔬進(jìn)行抽樣凈化，其中有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行分析的結(jié)果為回收率67%～105%。

2.3 凝膠滲透色譜技術(shù)的缺陷

運(yùn)用凝膠滲透色譜技術(shù)凈化的方法是利用分離大分子干擾雜質(zhì)，最終可將農(nóng)藥從基質(zhì)中脫離出來(lái)，其最終效果的如何與分子大小、形狀和阻礙情況有關(guān)。但其中也包含一些不可避免的問(wèn)題。首先，分子分離可能不徹底，這是由于小分子可以被洗脫到農(nóng)藥里，可大分子極可能跟隨油脂先流出去，這時(shí)便需要使用柱色譜來(lái)凈化。其次，GPC所耗費(fèi)的溶劑量很大，這樣當(dāng)柱色譜內(nèi)直徑比較大時(shí)，處理較多樣品時(shí)速度就會(huì)減慢，消耗的能量也多。為了避免這一弊端，科學(xué)家研制出了自動(dòng)化的凝膠滲透色譜凈化儀，讓凈化柱更加趨向柱內(nèi)直徑小，載荷量大和體積小的進(jìn)樣發(fā)展，使其分離度得到改善，應(yīng)用范圍得以拓寬。第三，其限制的條件較多?；|(zhì)的選擇和情況對(duì)化合物的準(zhǔn)確定性和定量有較強(qiáng)的影響力，當(dāng)從事食品樣品的殘留分析時(shí)，必須考慮多種因素才能得到精確的結(jié)果，這要求我們既要對(duì)基質(zhì)反復(fù)評(píng)估又要通過(guò)有效途徑進(jìn)行消除和補(bǔ)償。

3 總結(jié)

凝膠滲透色譜技術(shù)目前已日臻成熟，其提取和凈化方法的研究和實(shí)驗(yàn)已十分常見(jiàn)，此方法除了農(nóng)藥外，還被廣泛運(yùn)用到藥材、甘藍(lán)、蜂蜜等成分的分析中，其在農(nóng)藥殘留方面的貢獻(xiàn)還要遠(yuǎn)大的發(fā)展前景。

參考文獻(xiàn)：

[1]趙子剛，王建，賈斌.凝膠滲透色譜-氣相色譜法檢測(cè)小麥中的24種農(nóng)藥殘留[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010（3）.

篇5

[關(guān)鍵詞] 噴昔洛韋；眼用凝膠；制備；質(zhì)量控制

[中圖分類號(hào)]R944 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1673-7210（2008）07（c）-034-02

Preparation and quality control of Penciclovir Ophthalmic Gel

ZHU Ji-feng1, LI Jin-wei2,MENG Xian-li2

(1.The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China;2. Henan Provincial People′s Hospital, Zhengzhou 450003,China)

[Abstract] Objective: To prepare and establish quality control for Penciclovir Ophthalmic Gel.Methods:Penciclovir Ophthalmic Gel was prepared with PVA-124.The content of penciclovir was determined by HPLC at the wavelength of 252 nm.Results: There was a good linear correlation within the range of 5.00~100.00 μg/ml（r=0.999 7）of penciclovir concentration; the average recovery was 98.71%（RSD=0.75%）.Conclusion: This method is convenient,accurate and reproducible ,which can be used for the quality control of Penciclovir Ophthalmic Gel.

[Key words] Penciclovir；Ophthalmic gel；Preparation；Quality control

噴昔洛韋(penciclovir，PCV)是英國(guó)SKB公司開(kāi)發(fā)的開(kāi)環(huán)核苷類抗病毒藥物，是無(wú)環(huán)核苷活性衍生物,是伐昔洛韋的活性代謝物。有抗單純皰疹病毒HSV-Ⅰ, HSV-Ⅱ, VZV(帶狀皰疹)和EB病毒的作用，它的作用機(jī)制與阿昔洛韋相似。與阿昔洛韋相比，其抗病毒效果顯著，是一種抗病毒譜較廣的藥物[1]。主要用于治療單純皰疹病毒引起的感染，也可用于治療帶狀皰疹病毒感染。噴昔洛韋同類藥物的眼用凝膠劑治療病毒引起的皰疹性角膜炎、眼瞼單純皰疹、病毒性角膜炎及流行性結(jié)膜炎等，均有較好療效[2]。故我們研制了噴昔洛韋眼用凝膠并制定了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（美國(guó)Dionex P680）；UV-754 紫外分光光度儀（上海第三分析儀器廠）；噴昔洛韋原料藥(麗珠集團(tuán)常州康麗制藥有限公司，批號(hào)：050608)；噴昔洛韋對(duì)照品(由原料藥精制所得，含量>99.5%)；PVA-124上海化學(xué)試劑站分裝廠分裝；其他試劑均符合分析純或藥用標(biāo)準(zhǔn)。其他試劑均為分析純，水為注射用水。

2 處方與制備

2.1 處方

噴昔洛韋2 g，PAV-124 100 g，甘油50 g，聚山梨酯-80 20 g，5%尼泊金乙酯醇溶液10 ml，注射用水加至1 000 g。

2.2 制法

先取PVA-124、甘油、聚山梨酯-80加適量注射用水，水浴加熱，攪拌使溶解；另取伐昔洛韋用適量注射用水溶解，攪拌加入尼泊金乙酯醇溶液（必要時(shí)加熱），將兩溶液混合，加注射用水至全量。攪拌混勻后，于100℃滅菌30 min，分裝即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為類白色膠體，pH值5~7，符合滴眼液項(xiàng)下其他規(guī)定。

3.2 鑒別

3.2.1 取噴昔洛韋眼用凝膠適量(約相當(dāng)于噴昔洛韋10 mg)，加水20 ml，置水浴中加熱使溶解過(guò)濾，濾液中滴加氨制硝酸銀試液數(shù)滴，即產(chǎn)生白色沉淀。

3.2.2 參照高效液相色譜法[3]操作，樣品主峰保留時(shí)間與噴昔洛韋對(duì)照品峰保留時(shí)間(均為8.282 min)一致。

3.3 含量測(cè)定

3.3.1 色譜條件Diamonsil C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.01 mol/L磷酸二氫鉀(KH2PO4)緩沖液(用三乙胺調(diào) pH值至7. 0)(10∶90)；檢測(cè)波長(zhǎng)：252 nm；進(jìn)樣量：20 μl；理論塔板數(shù)按噴昔洛韋峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取干燥至恒重的噴昔洛韋對(duì)照品50 mg，置于100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0，5.0，10.0，15.0，20.0 ml分別置100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，進(jìn)樣20 μl，照高效液相色譜法測(cè)定峰面積，記錄色譜圖，將峰面積（Y）對(duì)相應(yīng)的噴昔洛韋濃度（X）進(jìn)行回歸處理，得方程：Y=-7 627.76X+60 800.52，r=0.999 7。結(jié)果表明，噴昔洛韋在5.00~100.00 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)取“3.3.2”項(xiàng)下溶液1份（50 μg/ml），分別在0，1，2，4，6，8 h進(jìn)樣20 μl，照高效液相色譜法測(cè)定峰面積，結(jié)果樣品在8 h內(nèi)穩(wěn)定，峰面積的RSD=0.91%。

3.3.4 精密度試驗(yàn) 取“3.3.2”項(xiàng)下溶液（50 μg/ml），進(jìn)樣量20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得RSD=0.51%。

3.3.5 回收率試驗(yàn)?zāi)M處方配制高、中、低3種濃度，每種濃度取樣3次。精密稱取不同濃度的噴昔洛韋和適量輔料，置100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻、過(guò)濾。精密量取續(xù)濾液10 ml，置100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻。進(jìn)樣20 μl，照高效液相色譜法測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

3.3.6 樣品含量測(cè)定精密稱取噴昔洛韋眼用凝膠適量（約相當(dāng)于噴昔洛韋50 mg）置100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻、過(guò)濾。精密量取續(xù)濾液10 ml，置100 ml容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，進(jìn)樣20 μl，照高效液相色譜法測(cè)定。三批制劑的測(cè)定結(jié)果詳見(jiàn)表2。

3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將噴昔洛韋眼用凝膠劑于55℃恒溫水浴放置6 h，于-15℃ 冰箱放置24 h，以2 500 轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速離心30 min，室溫放置2個(gè)月，在以上條件下凝膠均未發(fā)生分層。

3.5 刺激性實(shí)驗(yàn)

取健康成年家兔5只(由鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重(2.5±0.5) kg， 每只均于右眼涂敷噴昔洛韋眼用凝膠，左眼滴入生理鹽水1滴作對(duì)照，tid，每次用藥后觀察，家兔無(wú)躁動(dòng)，眼部無(wú)充血、紅腫、流淚、羞明、分泌物增多等現(xiàn)象。連續(xù)用藥兩周后將家兔處死，取眼部組織作病理切片檢查，未發(fā)現(xiàn)任何病理變化。

4 討論

緩釋制劑可以比較持久地釋放藥物，減少給藥次數(shù)，避免或減少血藥濃度的峰谷現(xiàn)象而提供平穩(wěn)有效的血藥濃度，提高藥物的安全性和有效性。目前眼用凝膠的研究已越來(lái)越多，制劑中加入適當(dāng)?shù)幕|(zhì)，可增加藥液的黏度，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間和具有較好的流變學(xué)性質(zhì)。噴昔洛韋是以抗皰疹病毒特異性抑制藥物而開(kāi)發(fā)研制的，對(duì)HV、ADV也有抗病毒作用，主要通過(guò)直接滅活病毒或阻止病毒吸附與進(jìn)入細(xì)胞兩環(huán)節(jié)而發(fā)揮作用，可以替代伐昔洛韋成為一種有希望的新型抗皰疹病毒藥物[1]。

[參考文獻(xiàn)]

[1]侯煒，肖紅，毛琳，等.噴昔洛韋體外抗病毒的藥效學(xué)研究[J].華西藥學(xué)雜志，2004，19，(2):87-89.

[2]孫文武，江先義，張小平，等. 復(fù)方阿昔洛韋眼用凝膠的制備及臨床應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21（11）：695.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.附錄32.

篇6

摘要介紹了農(nóng)藥殘留分析中常用的6種樣品前處理新技術(shù),并對(duì)氣相色譜及氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用作了綜述。

關(guān)鍵詞氣相色譜;氣質(zhì)聯(lián)用;農(nóng)藥殘留分析

abstractin the paper,six new technologies of analytic sample preparation commonly used in the analysis of pesticide residues were introduced. and the applications of gc and gc-ms in pesticide residue anlysis were summaried.

key wordsgc;gc-ms;pesticide residue analysis

目前,農(nóng)藥殘留分析方法很多,其中以色譜技術(shù)為主。常見(jiàn)色譜方法有氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法,新興色譜技術(shù)如免疫親合色譜法、凝膠滲透色譜法等。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(gc-ms)既具有氣相色譜高分離效能,又具有質(zhì)譜準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)[1],可同時(shí)、準(zhǔn)確、快速測(cè)定微量的多種農(nóng)藥殘留。

1農(nóng)藥殘留的現(xiàn)狀及危害

20世紀(jì)50年代以來(lái),化學(xué)合成農(nóng)藥在全世界的廣泛應(yīng)用,無(wú)疑在防治病蟲(chóng)害、鏟除雜草、增加農(nóng)業(yè)產(chǎn)量方面發(fā)揮了舉足輕重的作用,對(duì)人類社會(huì)進(jìn)步和生產(chǎn)力發(fā)展起到了巨大的促進(jìn)和推動(dòng)作用。但是農(nóng)藥是一類有毒化學(xué)物質(zhì),而且是人們主動(dòng)投放到環(huán)境中的[2],長(zhǎng)期大量使用,對(duì)環(huán)境生物安全和人體健康產(chǎn)生了較大的不利影響。近年來(lái)因農(nóng)藥污染造成人和牲畜中毒的事件屢見(jiàn)報(bào)道,特別是蔬菜、水果類食品的中毒。目前,農(nóng)藥已成為世界上主要的污染源之一,田間噴灑的農(nóng)藥只有10%～30%粘附在作物上,其他大部分通過(guò)各種方式散播出去,污染大氣、土壤和水等[3]。

2農(nóng)藥殘留分析技術(shù)

農(nóng)藥殘留分析是對(duì)復(fù)雜混合物中痕量農(nóng)藥的母體化合物、有毒代謝物、降解產(chǎn)物和農(nóng)藥雜質(zhì)進(jìn)行的分析,是一種需要精細(xì)的微量操作手段和高靈敏度的痕量檢測(cè)技術(shù)[2]。隨著人們對(duì)食品、環(huán)境安全的日益關(guān)注以及新的、更高要求的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的出臺(tái),農(nóng)藥殘留分析技術(shù)發(fā)展迅速?，F(xiàn)代農(nóng)藥殘留分析技術(shù)通常包括樣品前處理和測(cè)定兩部分。

2.1樣品前處理技術(shù)

目前,已報(bào)道或已取得廣泛應(yīng)用的新技術(shù)主要有:固相萃取(spe)、固相微萃取(spme)、超臨界流體提取(sfe)、加速溶劑萃取(ase)、微波輔助萃取(mae)等[4]。

2.1.1固相萃取(spe)。固相萃取是液固萃取和液相色譜柱技術(shù)相結(jié)合的發(fā)展,其基本原理是利用固體吸附劑對(duì)液體樣品中目標(biāo)化合物或雜質(zhì)的吸附,選用合適強(qiáng)度的洗脫溶劑,使目標(biāo)化合物選擇性地洗脫或保留在柱上,與樣品基體和干擾物分離,從而達(dá)到分離和富集的目的。固相萃取節(jié)省時(shí)間,可減少雜質(zhì)引入,對(duì)操作者安全,重現(xiàn)性好,同時(shí)對(duì)農(nóng)藥殘留物能夠快速富集。

2.1.2固相微萃取(spme)。固相微萃取是一種新型的無(wú)溶劑化樣品前處理技術(shù),由pawliszyn在1989年首次報(bào)道。固相微萃取以特定的固體(一般為纖維狀萃取材料)作為固相提取器將其浸入樣品溶液或頂空提取,然后直接進(jìn)行g(shù)c、hplc等分析[5]。該技術(shù)集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體,靈敏度高、成本低、所需樣品量少,重現(xiàn)性及線性好,操作簡(jiǎn)單、方便快捷。它通過(guò)吸附/脫吸附技術(shù),富集樣品中的揮發(fā)性和半揮發(fā)性成分,克服了一些傳統(tǒng)樣品處理技術(shù)的缺點(diǎn),已經(jīng)廣泛應(yīng)用于水、食品、環(huán)境以及生物樣品分析。spme技術(shù)在食品分析中的應(yīng)用很廣泛,如酒、果汁、蔬菜、肉、蛋等。還用于食品中其他一些有害殘留組分的分析上,如牛奶中的磺胺類和四環(huán)素類抗生素殘留;熏制火腿中的致癌物n-亞硝胺;谷物中丙烯酞胺殘留以及人乳中多氯聯(lián)苯及其他含氯有機(jī)化合物的分析等[6]。

2.1.3超臨界流體提取(sfe)。超臨界流體(scf)是臨界溫度(tc)和臨界壓力(pc)狀態(tài)下的高密度流體。超臨界流體既具有液體對(duì)溶質(zhì)有較大溶解度,又具有氣體易于擴(kuò)散和運(yùn)動(dòng)的特點(diǎn)。由于超臨界流體的粘度、密度、擴(kuò)散系數(shù)、溶劑化能力等性質(zhì)隨溫度和壓力變化很大[7],因此對(duì)選擇性的分離非常敏感。早在1879年,hannay等就發(fā)現(xiàn)超臨界乙醇流體對(duì)無(wú)機(jī)鹽固體具有顯著的溶解能力,但超臨界萃取技術(shù)(sfe)卻是在近30年才迅速發(fā)展起來(lái)的一種新型物質(zhì)分離、精致技術(shù)[8]。付玉杰等[9]用scf-co2技術(shù)萃取甘草中甘草次酸,并與索氏提取法、超聲法進(jìn)行了比較,提取率是索氏提取法的13倍、超聲法的5倍,且溶劑用量小,周期短。目前,sfe已應(yīng)用于植物樣品、動(dòng)物組織、土壤、水等樣品中多種殺蟲(chóng)劑、殺菌劑和除草劑的萃取。

2.1.4凝膠滲透色譜(gpc)。凝膠滲透色譜是一種快速凈化技術(shù),它是基于體積排阻的分離機(jī)理,通過(guò)具有分子篩性質(zhì)的固定相,用來(lái)分離相對(duì)分子質(zhì)量較小的物質(zhì),并且可以分析不同分子體積、具有相同化學(xué)性質(zhì)的高分子同系物。gpc現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析中脂類提取物與農(nóng)藥的分離,是含脂類食物樣品農(nóng)藥殘留分析的主要凈化手段[10]。陸繼偉等[11]經(jīng)冰浴超聲提取,gpc凈化,測(cè)定了靈芝中24種有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量,回收率在75.28%~117.18%,rsd在3.19%~15.57%,效果較好。

2.1.5加速溶劑萃取(ase)。加速溶劑萃取是在提高溫度(50～200℃)和壓力(1 000~3 000pa)下用溶劑萃取固體或半固體樣品的新型樣品前處理方法。相比于其他萃取方法,ase法具有快速、溶劑用量少、萃取效率高、安全等優(yōu)點(diǎn)[12],已被美國(guó)epa收錄為處理固體樣品的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。ase現(xiàn)已在環(huán)境、藥物、食品等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,特別是在殘留檢測(cè)方面,被用于土壤、動(dòng)植物組織、蔬菜和水果等樣品中的pcb、多環(huán)芳烴、有機(jī)磷殺蟲(chóng)劑、苯氧基除草劑等有害物質(zhì)的萃取。

2.1.6微波輔助萃取(mae)。微波輔助萃取是微波和傳統(tǒng)的溶劑萃取法相結(jié)合后形成的一種新萃取方法。它是利用微波能來(lái)提高萃取速率的一種最新發(fā)展起來(lái)的技術(shù)。微波萃取具有設(shè)備簡(jiǎn)單、萃取效率高、重現(xiàn)性好、快速、節(jié)省試劑、污染小等優(yōu)點(diǎn),有較大的推廣價(jià)值。onuska等[13]用多種溶劑從泥渣中微波提取有機(jī)氯農(nóng)藥殘留,實(shí)驗(yàn)僅用3.5min就獲取了索氏萃取法6h的結(jié)果。lopez-avila等[14]以乙烷-丙酮(體積比為1∶1)為溶劑,在115℃下從土壤中提取有機(jī)物,萃取15min,45種有機(jī)氯農(nóng)藥中的38種回收率在80%~120%,并證明用微波萃取法所得的有機(jī)氯農(nóng)藥的回收率比索氏萃取或超聲波萃取法至少提高7%。

 

2.2gc及gc-ms在樣品測(cè)定中的應(yīng)用

2.2.1氣相色譜法(gc)。20世紀(jì)50年代農(nóng)藥殘留分析局限于化學(xué)法、比色法和生物測(cè)定法,檢測(cè)方法缺乏專一性,靈敏度也不高。60年代初氣相色譜開(kāi)始應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析,許多高靈敏度檢測(cè)器的使用,推動(dòng)了農(nóng)藥殘留分析技術(shù)的發(fā)展,大大提高了農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)精度。由于氣相色譜法具有分離效率高、分析速度快、選擇性好、樣品用量少、檢測(cè)靈敏度較高等優(yōu)點(diǎn),因此廣泛應(yīng)用于分離氣體和易揮發(fā)或可轉(zhuǎn)化為易揮發(fā)的液體及固體樣品。目前該方法已成為農(nóng)藥殘留分析中最常用、最主要的方法。

氣相色譜儀的檢測(cè)器具有各種不同靈敏度和選擇性的種類,通過(guò)靈活應(yīng)用這些檢測(cè)器,可以用于各種試樣的分析。電子俘獲檢測(cè)器(ecd)可以實(shí)現(xiàn)多種有機(jī)氯、菊酯類農(nóng)藥的分離和測(cè)定;火焰光度檢測(cè)器(fpd)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥有很好的響應(yīng)值;氮磷檢測(cè)器(npd)對(duì)氮、磷等化合物的響應(yīng)大大提高,成為測(cè)定有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥的有效檢測(cè)器[15]。

王建華等[16]采用乙腈均質(zhì)提取,psa固相萃取柱凈化,再用gc-ecd及fid檢測(cè)含硫蔬菜中的有機(jī)磷、有機(jī)氯和擬除蟲(chóng)菊酯多類農(nóng)藥殘留組分,樣品的回收率在70%~110%,rsd為3.5%~14.2%。李慧冬等[17]將甘藍(lán)預(yù)制樣品經(jīng)高速勻漿法提取、弗羅里硅土層析柱凈化后用gc-ecd檢測(cè)啶蟲(chóng)脒的殘留量,外標(biāo)法定量,回收率為80.2%~99.8%,最低檢出濃度為0.001mg/kg,測(cè)定結(jié)果的rsd不大于3.4%。宋家玉等[18]建立了食品和中藥中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的毛細(xì)管氣相色譜檢測(cè)方法。樣品經(jīng)有機(jī)溶劑超聲提取,硫酸凈化,采用ov-1701毛細(xì)管柱,不分流進(jìn)樣,程序升溫分離,ecd檢測(cè),外標(biāo)法定量,平均回收率為84.3%~100.6%,rsd為1.28%~3.56%。任紅波[19]建立了氣相色譜檢測(cè)氟胺氰菊酯的方法。蜂蜜樣品用水溶解后,經(jīng)正己烷-二氯甲烷提取,提取液經(jīng)c18固相萃取小柱凈化,采用gcd-ecd測(cè)定,回收率在80%以上,檢出限為0.001 3mg/kg。呂芬等[20]用石油醚提取蔬菜、水果中痕量擬除蟲(chóng)菊酯,濃縮后經(jīng)florisil固相萃取柱凈化,用氣相色譜-ecd測(cè)定,結(jié)果小白菜中的平均回收率為86.2%~93.4%,rsd為3.4%~8.6%;蘋果中的回收率為87.3%~92.8%,rsd為2.8%~8.1%。

2.2.2氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gc-ms)。將高效分離與高性能鑒定儀器組成聯(lián)用技術(shù),是20世紀(jì)末期儀器分析領(lǐng)域的重大技術(shù)進(jìn)展。其中,現(xiàn)代gc-ms聯(lián)用技術(shù)是目前技術(shù)最成熟、普及應(yīng)用最廣泛的一種聯(lián)用模式。

質(zhì)譜法具有靈敏度高、定性能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),但要求進(jìn)樣要純,且定量分析較復(fù)雜。氣相色譜法則分離效率高,定量分析簡(jiǎn)便,但定性能力較差。因此,這2種方法聯(lián)用,可以相互取長(zhǎng)補(bǔ)短,既發(fā)揮色譜法的高分離能力,又發(fā)揮了質(zhì)譜法的高鑒別能力,適用于做多組分混合物中未知物的定性鑒定,可以判定化合物的分子結(jié)構(gòu)、準(zhǔn)確測(cè)定未知組分的相對(duì)分子質(zhì)量、鑒定部分分離甚至未分離的色譜峰等。

朱靜等[21]利用spe對(duì)環(huán)境水中噻唑硫磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行凈化,用gc-ms對(duì)其進(jìn)行測(cè)定,對(duì)環(huán)境水中噻唑硫磷的最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為56.4ng/l,加樣回收率大于85.5%,rsd小于4.42%,適用于環(huán)境水中痕量農(nóng)藥的監(jiān)測(cè)。eiji ueno等[22]首先用乙腈提取蔬菜中89種農(nóng)藥,鹽析后乙酸乙酯再溶解,共溶物自動(dòng)過(guò)凝膠色譜和活性碳串聯(lián)雙柱,之后再用氣質(zhì)聯(lián)用分析,回收率在70%~120%,rsd小于5%,方法已應(yīng)用到188種果蔬的日常檢測(cè)中。李云飛等[23]用gc-ms以選擇離子(sim)檢測(cè)方式對(duì)果蔬類農(nóng)產(chǎn)品中含有機(jī)氯、有機(jī)磷、氨基甲酸酯及除蟲(chóng)菊酯類4類12種農(nóng)藥的殘留量進(jìn)行定性和定量分析,結(jié)果表明,方法回收率在80%~120%,變異系數(shù)在6%~20%。胡貝貞等[24]采用c18固相萃取小柱對(duì)啤酒中的有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行提取、凈化,用乙酸乙酯洗脫后供gc-ms分析。當(dāng)添加濃度為50μg/kg和100μg/kg時(shí),平均回收率為80.3% ~95.0%,rsd為1.97%~8.28%(n=6),方法的檢出限為1.20~15.3μg/kg。該方法可用于啤酒中痕量有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定。趙鳳英等[25]以丙酮-石油醚(v/v=3∶1)為提取劑,采用超聲波提取土壤中農(nóng)藥殘留,經(jīng)弗羅里硅土層析柱凈化,gc-ms以選擇離子監(jiān)測(cè)法同時(shí)測(cè)定土壤中多種有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥,取得了較好的效果。在0.1、0.5μg/ml 2個(gè)質(zhì)量濃度添加水平的回收率分別為70.1%~119.0%和78.1%~119.0%,rsd分別為6.30%~9.80%和5.20%~8.23%。

3參考文獻(xiàn)

[1] 萬(wàn)鄭凱,何娟,康長(zhǎng)安,等.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用在農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面的應(yīng)用進(jìn)展[j].分析測(cè)試技術(shù)與儀器,2006,12(1):51-54.

[2] 岳永德.農(nóng)藥殘留分析[m].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2004.

[3] 戴修純,徐漢虹,王佛嬌.我國(guó)農(nóng)藥殘留檢測(cè)現(xiàn)狀與發(fā)展方向[j].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2006(5):117.

[4] 高海英.農(nóng)藥殘留提取方法概述[j].內(nèi)蒙古石油化工,2009(2):40-41.

[5] 蔣鵬忠.一種新型的樣品前處理技術(shù)探討——固相微萃取技術(shù)[j].現(xiàn)代商貿(mào)工業(yè),2008(9):375-377.

[6] 周圍,劉紅衛(wèi),周小平,等.固相微萃取-色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在食品風(fēng)味和食品安全分析中的應(yīng)用研究[j].檢驗(yàn)檢疫科學(xué),2007(s1):23-28.

[7] sarrade s,guizard c,rios g m.new applications of supercritical fluids and supercritical fluids processes in separation[j].separation and purification technology,2003(32):57-63.

[8] 趙春海.超臨界流體萃取技術(shù)原理及應(yīng)用研究簡(jiǎn)述[j].生命科學(xué)儀器,2006,4(12):33-34.

[9] 付玉杰,祖元?jiǎng)?李春英,等.超臨界co2萃取甘草中甘草次酸的工藝研究[j].中草藥,2003,34(1):31-33.

[10] 王敏,葉非.凝膠滲透色譜在農(nóng)藥殘留分析前處理中的應(yīng)用進(jìn)展[j].農(nóng)藥科學(xué)與管理,2008,29(6):9-13.

[11] 陸繼偉,夏晶,苗水,等.gc測(cè)定靈芝中24種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量[j].中國(guó)藥學(xué)雜志,2007,42(3):227-231.

[12] 王華,彭小燕,李繼蘭.加速溶劑萃取結(jié)合gc-ms法測(cè)定葡萄酒中甲霜靈的殘留[j].食品工業(yè),2008(1):71-74.

[13] onuska f i,terry k a.extraction of pesticides from sediments using a microwave technique[j].chromatography,2003(36):191-196.

[14] lopez-avila v,young r,beckert w f.microwave-assisted extraction of organic compounds from standard reference soils and sediments[j].anal.chem.,2005(66):1097-1106.

[15] 吳麗華,李建科.氣相色譜法在農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用[j].糧油食品科技,2006,14(4):57-58.

[16] 王建華,張藝兵,湯志旭,等.微波處理-氣相色譜法測(cè)定含硫蔬菜中的多類農(nóng)藥殘留[j].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2005,24(1):100-102.

[17] 李慧冬,杜紅霞,陳子雷,等.氣相色譜法測(cè)定甘藍(lán)中啶蟲(chóng)脒殘留量[j].化學(xué)分析計(jì)量,2006,15(6):22-23.

[18] 宋家玉,李澤國(guó),王大衛(wèi),等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定食品、中藥中的有機(jī)氯農(nóng)藥[j].化學(xué)分析計(jì)量,2006,15(6):8-10.

[19] 任紅波.氣相色譜法測(cè)定蜂蜜中氟胺氰菊酯的殘留量[j].農(nóng)藥,2007,46(2):125-126.

[20] 呂芬,梁春穗,黃偉雄,等.氣相色譜法快速測(cè)定蔬菜水果中痕量擬除蟲(chóng)菊酯[j].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2008,20(5):413-417.

[21] 朱靜,周欣,付春梅,等.固相萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定環(huán)境水中噻唑硫磷農(nóng)藥殘留[j].色譜,2004,22(6):655-657.

[22] ueno e,oshima h,saito i,et al.multiresidue analysis of pesticides in vegetables and fruits by gas chromatography/mass spectrometry after gel permeation chromatography and graphitized carbon column cleanup [j]. j aoac int,2004,87(4):1003-1015.

[23] 李云飛,彭云霞,張承聰.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定果蔬中12種農(nóng)藥殘留量[j].云南大學(xué)學(xué)報(bào),2004,26(s1):176-180.

篇7

關(guān)鍵詞：電力絕緣油色譜；分析方式；注意事項(xiàng)

中圖分類號(hào)：TM205 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

構(gòu)建電網(wǎng)內(nèi)含多樣的操控步驟，各環(huán)節(jié)都設(shè)定了高水準(zhǔn)的操控要求。解析絕緣油表現(xiàn)出來(lái)的色譜狀態(tài)，慎重把控了油液本體的特性。在這種基礎(chǔ)上，操作者應(yīng)能精確予以調(diào)配油液，發(fā)揮了最佳范圍內(nèi)的絕緣實(shí)效。絕緣油擁有冷卻及絕緣的多樣性能，解析這些性能，依循設(shè)定好的標(biāo)準(zhǔn)流程予以完善。調(diào)配各階段內(nèi)消耗的絕緣油都應(yīng)依照規(guī)程，不應(yīng)忽視細(xì)微的分析事項(xiàng)。

一、絕緣油的價(jià)值

電力體系含有內(nèi)在多類設(shè)備，可綜合調(diào)度某一區(qū)段的電能，維持了長(zhǎng)久的輸電供電。在送電線路內(nèi)不可缺失絕緣油，耗電設(shè)備也留存了這種油液。電力系統(tǒng)配有日?？蛇x用的絕緣油，這種油液被留存至指定好的用電設(shè)備。從總體來(lái)看，絕緣油可確保常規(guī)的電力構(gòu)件性能，防控緩慢的裝置磨損。由此可見(jiàn)，電力絕緣油擁有自身的必要價(jià)值。

首先，作為絕緣材料，電力絕緣油首先可用作絕緣，防控電荷的傷害。從絕緣特性看，運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)下的各類設(shè)備都會(huì)附帶電荷。添加了絕緣油，是為防控某一時(shí)點(diǎn)的電流及電壓擊打因而損毀外在表層。這是由于，電力設(shè)備有著本身較高的運(yùn)轉(zhuǎn)負(fù)荷，絕緣油含有優(yōu)良的絕緣特性以此來(lái)妥善防控外在的流通電流。這樣做，防控了過(guò)載態(tài)勢(shì)的設(shè)備被損毀，有序保護(hù)系統(tǒng)。高峰耗電期內(nèi)，若突發(fā)了某一故障則會(huì)減低總體架構(gòu)內(nèi)的絕緣特性，減弱根本的內(nèi)在性能。涂抹絕緣油液以后，額外負(fù)荷即可被減低，由此也避免故障。

其次，絕緣油可用作冷卻。電力體系預(yù)設(shè)了高低溫彼此的互換，針對(duì)這種流程增添絕緣油品，冷卻了原本的電力體系。經(jīng)過(guò)油液的冷卻，慎重防控了超標(biāo)情形的設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)，限定了最合適的溫度。油添加了某比值的抗氧劑，依照設(shè)定好的比例著手調(diào)配了油液。這種混合油品可用作設(shè)備介質(zhì)，導(dǎo)出了構(gòu)件冗余的內(nèi)在熱能以此來(lái)制冷。遇有較高溫度，擴(kuò)散形態(tài)下的油液也可增設(shè)絕緣；與之相比，低溫油液還可防控凝結(jié)，發(fā)揮絕緣的更高價(jià)值。

第三，絕緣油也可減低本體的損耗，帶有穩(wěn)定的作用。在給定電場(chǎng)內(nèi)，油液維持了較長(zhǎng)的穩(wěn)定，減低損耗的總體油液。絕緣油有著抵抗氧化這類的優(yōu)良特質(zhì)，可以保持穩(wěn)定。隨著技術(shù)進(jìn)步，調(diào)配絕緣油可選的若干技術(shù)都日漸更新，配置新式絕緣油且提升了更高的穩(wěn)定性。經(jīng)過(guò)了改進(jìn)后，絕緣材質(zhì)延長(zhǎng)了原本的可運(yùn)轉(zhuǎn)年限，改善絕緣屬性。

二、色譜分析選用的方式

采納色譜法調(diào)配了不同樣態(tài)及特質(zhì)的油液，針對(duì)混合狀態(tài)的固定相物質(zhì)設(shè)定了流動(dòng)相的洗脫。經(jīng)過(guò)洗脫步驟，不同速率流動(dòng)著的各類物質(zhì)將會(huì)流向固定相，這樣即可分離雙重的固液相。20世紀(jì)初創(chuàng)設(shè)了色譜法，歷經(jīng)快速的進(jìn)步，現(xiàn)今色譜法可歸入獨(dú)立的色譜學(xué)。科技調(diào)研可選取常見(jiàn)的這種探析方法，色譜法可選取的配套儀器也趨向于完整。測(cè)定絕緣特性時(shí)，色譜法擁有必要的價(jià)值，可迅捷測(cè)定油液濃度、內(nèi)含的多成分。色譜解析得出的數(shù)值也可用作后續(xù)參照。

色譜分析依循的機(jī)理為：洗脫液相及固相兩類的物質(zhì)，這種基礎(chǔ)上可以分離不同特質(zhì)的油液。這種洗脫利用了不等的液體流動(dòng)速率。歷經(jīng)多年的進(jìn)展，現(xiàn)今色譜儀整合了敏銳及自動(dòng)的特性，更加穩(wěn)定且可用作多樣的測(cè)定流程。從分類視角看，色譜儀含有液相、氣相及凝膠性的儀器。針對(duì)化學(xué)產(chǎn)品，色譜儀可測(cè)定某一高分子材質(zhì)，解析內(nèi)在的多成分。此外，測(cè)定某一成分內(nèi)含的分布狀態(tài)、內(nèi)在分子量等可選取凝膠色譜。電力配備的絕緣油可采納色譜分析，這種途徑已被采納并推廣。

例如：氣相色譜辨析了可溶解的內(nèi)在氣體，識(shí)別了油液內(nèi)含的若干成分。針對(duì)充油設(shè)備，測(cè)定內(nèi)在顯現(xiàn)的某一故障點(diǎn)。監(jiān)測(cè)充油狀態(tài)下的配套設(shè)備，是現(xiàn)今檢測(cè)進(jìn)展的總體趨向。充油設(shè)備可承載某規(guī)格的絕緣油，借助色譜辨析了裝置潛在隱患，從而妥善予以消除。由此可知，色譜解析可測(cè)定潛在的細(xì)微故障，反映了裝置設(shè)定的某類構(gòu)件故障。

三、解析注意事項(xiàng)

電力系統(tǒng)設(shè)定了絕緣，絕緣油被廣泛用作電力類裝置的絕緣。可選色譜分析，這類分析流程依循了根本的色譜原理。在科學(xué)指引下，解析了絕緣油常態(tài)的性能。色譜分析可協(xié)助電力人員以便于確保銜接著的電力設(shè)備是完備且安全的，調(diào)控穩(wěn)定態(tài)勢(shì)下的電力運(yùn)轉(zhuǎn)。從現(xiàn)存進(jìn)展看，色譜分析日漸完善了可用的儀器、裝置性能等，但仍存有潛在的弊病有待于整改。慎重把控細(xì)節(jié)，確保絕緣特質(zhì)的油液可被有序調(diào)用。分析絕緣油呈現(xiàn)的色譜時(shí)，尤為注重如下的事項(xiàng)：

（一）初期篩選樣本

色譜分析針對(duì)選定的絕緣油，為此先要妥善選樣。選取了樣本后，再去進(jìn)入測(cè)定環(huán)節(jié)。解析絕緣油可得的數(shù)據(jù)要吻合給出來(lái)的數(shù)據(jù)指標(biāo)，可篩選適量的油液當(dāng)成調(diào)研對(duì)象。調(diào)配絕緣油、進(jìn)行后續(xù)分離，也都要顧及不同特質(zhì)的物質(zhì)形態(tài)。若篩選的絕緣油本身?yè)碛歇?dú)特的某類屬性，那么真正去解析以前還應(yīng)增設(shè)處理環(huán)節(jié)。為了便利操控，抽檢篩選的樣本應(yīng)能搭設(shè)自動(dòng)調(diào)控依托的平臺(tái)，最好設(shè)定自動(dòng)平臺(tái)。

（二）選取探測(cè)的必要裝置

色譜分析借助了色譜儀，順利展開(kāi)后續(xù)解析。色譜分析必備配套的儀器，這些儀器辨析了絕緣油呈現(xiàn)出來(lái)的理化特性，反映油液本身的各類特質(zhì)。這樣做，在根本上反映了絕緣油屬性，測(cè)定信息應(yīng)是客觀且完備的。篩選色譜儀時(shí)，要慎重辨別型號(hào)規(guī)格、裝置的精度、可操控的屬性等。針對(duì)選取時(shí)的細(xì)節(jié)尤為注重，不可忽視細(xì)節(jié)。從現(xiàn)存市面看，常見(jiàn)氣相的、液相及凝膠3類的色譜儀。真正去選用時(shí)還應(yīng)衡量真實(shí)的檢測(cè)現(xiàn)狀，適當(dāng)予以選取。

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Abstract: In the process of using high-performance liquid chromatography, unavoidably will encounter all sorts of problems, from the valve, chromatographic column and flow equal to introduce the correct use of chromatography, common failure causes and eliminating methods.

關(guān)鍵詞:高效液相色譜儀;故障排除;正確使用

Key words: high performance liquid chromatography;troubleshooting;used correctly

中圖分類號(hào):TS207 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1006-4311(2010)20-0097-01

0引言

高效液相色譜儀是分析實(shí)驗(yàn)室常用的測(cè)試儀器之一,其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。此種儀器在使用過(guò)程中,難免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題,并將直接影響到所測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作。

1使用試管的問(wèn)題

①試管的潔凈問(wèn)題。高效液相色譜分析法是一個(gè)很靈敏的分析方法,如果因使用不潔凈的試管,便會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。②塑料試管的溶解問(wèn)題?？捎孟嗤膶?shí)驗(yàn)條件先行試驗(yàn)一下,看看不含被抽提物時(shí),提取液在檢測(cè)器上能否產(chǎn)生干擾信號(hào),如確有干擾信號(hào)存在,就只能換用耐有機(jī)溶劑的玻璃試管了。③被測(cè)樣品在試管壁上的吸附問(wèn)題。操作中宜采用聚丙烯管,為防止提取中吸附現(xiàn)象發(fā)生,可采用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑,可有效地防止吸附。

2操作進(jìn)樣閥的問(wèn)題

在高效液相色譜法的試驗(yàn)過(guò)程中,有時(shí)會(huì)有異常色譜峰的出現(xiàn)以及重現(xiàn)性不好的問(wèn)題,這主要是由于操作方法不當(dāng)所引起,要想解決此類問(wèn)題,需從以下幾個(gè)方面入手。①進(jìn)樣量的控制。用進(jìn)樣閥來(lái)進(jìn)樣時(shí),閥內(nèi)的樣品環(huán)是定量的,由于進(jìn)樣時(shí),注射到進(jìn)樣閥內(nèi)的樣品溶液在樣品環(huán)的管路中有徑向的速度梯度。因此,要想使樣品環(huán)中充滿樣品溶液,從而使用進(jìn)樣閥來(lái)準(zhǔn)確地定量,則必須使進(jìn)樣量大于樣品環(huán)體積的兩倍。②進(jìn)樣閥的清潔問(wèn)題。如果樣品環(huán)中有上次進(jìn)樣時(shí)樣品的殘留,必然會(huì)污染下次注射進(jìn)的樣品,為防止這種現(xiàn)象的發(fā)生,應(yīng)按下列步驟操作:1)進(jìn)樣閥有兩個(gè)位置,INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時(shí),以注射器將流動(dòng)相注入進(jìn)樣閥內(nèi)清洗幾次,每次用量大約40ul;2)然后將進(jìn)樣閥板手扳至INJECT位置時(shí),再以流動(dòng)相清洗幾次,每次用量還是40ul;3)再將樣品注射到進(jìn)樣閥里.按照上述的步驟操作,可以避免由進(jìn)樣閥引起的污染,從而使干擾峰消除并提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。③進(jìn)樣閥溢流管的堵塞。堵塞的原因多半是由于溶解樣品的流動(dòng)相用的是鹽溶液,而其中的鹽在溢流管的排空端口處結(jié)晶所致。此時(shí),可用小燒杯盛少量蒸餾水對(duì)溢流管口稍加浸泡,端口處鹽的結(jié)晶就能被溶解掉,故障排除。如能在每次進(jìn)樣完成之后,用蒸餾水反復(fù)沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出,則可避免此故障的發(fā)生。

3流動(dòng)相的問(wèn)題

甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來(lái)配制流動(dòng)相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級(jí)的專用試劑,如色譜純?cè)噭?。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測(cè)器,因此,從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來(lái)考慮,應(yīng)該使用紫外吸收小且雜質(zhì)含量少的色譜純?cè)噭?。①流?dòng)相的過(guò)濾。配制好的流動(dòng)相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來(lái)過(guò)濾。這是因?yàn)槿芤褐泻泻芏嗳庋垭y以發(fā)現(xiàn)的微小顆粒,如果不把它們?yōu)V除掉,就會(huì)堵塞泵口、柱頭上的過(guò)濾器,這樣就堵塞了流動(dòng)相的正常通道,使色譜柱的阻力增加,柱壓升高,柱效下降。碰到這種情況時(shí),要換用經(jīng)過(guò)濾的流動(dòng)相,并將堵塞的濾器拆下來(lái)浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機(jī)清洗20分鐘,以除去濾片上的堵塞物。②流動(dòng)相的脫氣。流動(dòng)相在使用前必須脫氣,以盡可能的除去溶解在流動(dòng)相中的氣體,否則,這些氣體會(huì)使柱填料的性能降低,還能夠?qū)z測(cè)器的信號(hào)產(chǎn)生很大的干擾。水和甲醇混合后會(huì)產(chǎn)生大量的氣泡,如果不脫氣就使用,氣泡就會(huì)進(jìn)入色譜柱和檢測(cè)器,并將影響分析工作的正常進(jìn)行。

4色譜柱的使用和保養(yǎng)

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件,被測(cè)物質(zhì)能否被很好的分離和測(cè)定,色譜柱的性能起著決定性的作用。在日常工作中,應(yīng)特別注意色譜柱的正確使用和維修保養(yǎng),以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。

4.1 使用預(yù)柱和保護(hù)柱預(yù)柱安裝于泵和進(jìn)樣器之間,它給色譜柱中的流動(dòng)相提供了完全的平衡,并防止了對(duì)柱填料有破壞作用的組分或污染物進(jìn)入色譜柱。保護(hù)柱可以阻擋能夠牢固地吸附于色譜柱上的組分進(jìn)入色譜柱,保護(hù)柱應(yīng)與色譜柱的填料相同。

4.2 防止氣體進(jìn)入色譜柱有些色譜柱是不允許氣泡進(jìn)入的,否則將會(huì)使柱效降低甚至形成微小的難以驅(qū)除的氣室。因此,為了防止氣泡進(jìn)入色譜柱,一定要使用經(jīng)過(guò)脫氣的流動(dòng)相,并且要嚴(yán)格按照下列步驟來(lái)安裝色譜柱。①拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲,觀察是否有溶劑滲出;②如有溶劑滲出,即可將色譜柱接到管路上,以避免氣泡的進(jìn)入;③如無(wú)溶劑滲出時(shí),表明色譜柱的此端已經(jīng)進(jìn)去空氣了,可將色譜柱的出口端接到進(jìn)樣閥上,以流動(dòng)相來(lái)反方向沖洗色譜柱,以便將柱內(nèi)的空氣排除。④如果流出的溶劑里不含有氣泡,說(shuō)明柱內(nèi)的氣體已經(jīng)被排出了,再將色譜柱以正確的方向接好,這樣氣泡就進(jìn)不到色譜柱里面了。

4.3 色譜柱的清洗為了不使被測(cè)物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應(yīng)及時(shí)地清洗色譜柱。首先要用對(duì)被測(cè)樣品洗脫能力強(qiáng)的溶劑來(lái)洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì),此時(shí)應(yīng)用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來(lái),洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。凝膠濾過(guò)色譜法中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動(dòng)相,用完之后當(dāng)然要用蒸餾水來(lái)沖洗。

4.4 色譜柱的存放如果色譜柱暫時(shí)不用,存放時(shí)要注意:①幾天之內(nèi)的短期放置,應(yīng)先用溶劑沖洗好色譜柱,再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。②如果色譜柱長(zhǎng)期不用,僅用上述方法來(lái)處理就不行了,這時(shí)應(yīng)使用色譜柱使用說(shuō)明書(shū)中所指明的溶劑來(lái)充滿色譜柱,反相柱一般使用甲醇,正相柱則可用正已烷或庚烷,而凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長(zhǎng)則會(huì)使柱效降低,此時(shí)應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液來(lái)沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴(yán)。

篇9

護(hù)理

【關(guān)鍵詞】  僵蠶　抗凝活性部位　化學(xué)成分　凝膠色譜法　高效液相色譜法　氮測(cè)定法

Abstract：Objective To explore the anticoagulating active components in water extraction, alcohol sedimentation and fraction separated by gelfiltration chromatography of Bombyx Batryticatus. Methods Anticoagulating active fractions were prepared by the methods of water extraction, 70% alcohol sedimentation and gelfiltration chromatography. Components (such as porteins or polypeptide, amino acids, oxalic acid ammonium) in each fraction were determined by chemical reaction indentification, Kjeldahl method, conductance, UV and HPLC. Results Polypeptide, amino acids and oxalic acid ammonium were the main components in anticoagulating active fractions, content of which reached more than 80%. The content of oxalic acid ammonium decreased about 52% processed by alcohol sedimentation, while the content of polypeptide and amino acids only decreased about 8%. The content of peptides and amino acids increased about 28% purified by gelfiltration chromatography compared with the one in water extraction and about 39% compared with the one in alcohol sedimentation. The content of oxalic acid ammonium was the same as the one in alcohol sedimentation, but decreased about 1 time compared with the one in water extraction. The content of 15 kinds of amino acids were 40%～50% in the solids of each fractions, which maked up to 60%～76% of the content of proteins determined by Kjeldahl method. Molecular weight range of peptides is 1.0～4.4 kDa. Conclusion This study provides a experimental basis for further separation and purification of anticoagulating active components from Bombyx Batryticatus.

Key words：Bombyx Batryticatus；anticoagulating active fractions；chemical components；gelfiltration chromatography；HPLC；Kjeldahl method

  　  僵蠶為蠶蛾科昆蟲(chóng)家蠶Bombyx mori L.4～5齡的幼蟲(chóng)感染(或人工接種)白僵菌而致死的干燥體,為傳統(tǒng)中藥,性味咸、辛、平,歸肝、肺、胃經(jīng)[1]。具熄風(fēng)止痙、活血通絡(luò)、化痰散結(jié)等功效,可用于治療急性驚風(fēng)、癲癇、中風(fēng)、面癱及頑固性頭痛等。僵蠶含有蛋白質(zhì)、脂肪酸、氨基酸、草酸銨、白僵菌素以及微量元素等成分[2-4],其水提液在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗凝、抗血栓、促纖溶及抗內(nèi)毒素所致紅細(xì)胞膜損傷等作用[5-7],草酸銨和蛋白質(zhì)(或多肽)、氨基酸等可能為其主要活性成分[8]。為進(jìn)一步研究僵蠶的抗凝活性成分,本實(shí)驗(yàn)探討了僵蠶水煎煮液的醇沉液和凝膠色譜分離凈化,及其抗凝活性成分中氨基酸和草酸銨等的定性定量分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

1  實(shí)驗(yàn)材料

護(hù)理

Waters 515 HPLC系統(tǒng)(Waters 公司)；BS100A自動(dòng)部分收集系統(tǒng)(上海市滬西儀器廠)；Start-4半自動(dòng)四通道血凝儀(法國(guó)STAGO公司)；4300-Pro紫外分光光度計(jì)(瑞士安瑪西亞公司)；HR2838型勻漿機(jī)(菲力普公司)；LP115 pH計(jì)(METTER TOLEDO公司)；DDS-ⅡA電導(dǎo)率儀(上海理達(dá)儀器廠)；移液槍(0.1 mL和1.0 mL,日本)；半微量凱氏定氮裝置；Z-16和Z-26層析柱(上?；瘜W(xué)儀器廠)。制僵蠶(購(gòu)自湖南振興中藥飲片有限公司)；葡聚糖凝膠(Biotech公司)；凝血酶試劑(上海太陽(yáng)生物技術(shù)公司,批號(hào)N25006)；兔血漿(自制)；15種氨基酸對(duì)照品(Sigma公司)；水為超純水；甲醇(色譜純)、三氟乙酸(THF)、2-巰基乙醇、鄰苯二甲醛(OPA)、三羥甲基氨基甲烷(Tris)等化學(xué)試劑均為分析純。

2  方法與結(jié)果

2.1  樣品溶液的制備

   

稱取制僵蠶1 500 g(樣品A),用8倍量水浸泡過(guò)夜,以3 000 r/min勻漿,然后煎煮2次,每次30 min,過(guò)濾,合并濾液,離心,得提取液8 450 mL(樣品B),將其濃縮至含原藥材2 g/mL,加無(wú)水乙醇濃度至60%,4 ℃放置過(guò)夜,3 000 r/min離心,取上清液水浴濃縮至含原藥材約6 g/mL,即得粗提液240 mL(樣品C)。將30 mL該液加到用0.05 mol/L NaCl的0.02 mol/L Tris-HCl (pH 7.4)緩沖液平衡的Sephadex G-25凝膠柱(φ2.6 cm×80 cm)上,用相同緩沖液洗脫,自動(dòng)分步收集器收集,2.5 mL/ (10 min·管),每2～3管按文獻(xiàn)方法[8]測(cè)定凝血酶時(shí)間(TT,s)、紫外吸收光譜,用重量法測(cè)定質(zhì)量百分濃度(m/v)、電導(dǎo)率儀測(cè)定溶液電導(dǎo)率,得洗脫曲線(見(jiàn)圖1)。將TT在40～100 s之間的組分合并得洗脫液69 mL(樣品D),TT≥100 s的組分合并得洗脫液82.5 mL(樣品E),E即為抗凝活性部位。

圖1表明, 紫外吸收光譜法(UV)檢測(cè)的最強(qiáng)色譜峰的前半部分為具有抗凝活性的部位,與UV法測(cè)得的G-25凝膠色譜峰值不重合,而按質(zhì)量百分濃度(M/V)和電導(dǎo)率法測(cè)得的色譜峰值與抗凝活性峰值基本重合。

2.2  抗凝活性部位的化學(xué)成分理化鑒別

2.2.1  茚三酮反應(yīng)、pH值、電導(dǎo)率、AgNO3/HNO3反應(yīng)和CaCl2/HNO3反應(yīng)  分別取B～E樣品溶液進(jìn)行理化測(cè)定,結(jié)果表明,僵蠶提取分離后的B～E樣品所檢測(cè)的理化性質(zhì)結(jié)果一致,提示所含主要成分基本相同。茚三酮反應(yīng)陽(yáng)性,活性部分電導(dǎo)很大,與AgNO3產(chǎn)生白色沉淀,滴加HNO3后沉淀部分溶解,與CaCl2產(chǎn)生沉淀,滴加HNO3沉淀溶解。提示抗凝活性成分可能是鹽類(如氯化物、草酸鹽等)、蛋白質(zhì)、肽類或其它含氨基酸的化合物。

2.2.2  紫外吸收光譜

取各樣品稀釋適當(dāng)后在200～400 nm掃描,其紫外吸收光譜見(jiàn)圖2。

圖2表明,樣品B～E的UV光譜形狀均不相同,表明提取分離所得樣品化學(xué)成分有所不同。提取分離后除去了大量的無(wú)活性物質(zhì),特別是經(jīng)過(guò)凝膠色譜純化后,UV光譜變化較大。

2.2.3  樣品E的凝膠色譜分析及其分子量分析

取樣品E中TT≥600 s的餾分2 mL上Sephadex G-15(φ1.6 cm×50 cm)柱,用水洗脫鹽,4.0 mL/(10 min·管),自動(dòng)分步收集器收集,測(cè)定各管的TT值、260 nm和280 nm處的吸光度及化學(xué)反應(yīng)特性,結(jié)果見(jiàn)表1。表1  TT≥600 s餾分的凝膠柱脫鹽中餾分的抗凝活性和理化特性檢

測(cè)結(jié)果（略）注：*必要時(shí),通過(guò)稀釋餾分,測(cè)定吸光度在0.2～0.8之間,計(jì)算而得

2.3  定量分析護(hù)理

2.3.1  固形物含量測(cè)定

精密吸取樣品B～E各2.0 mL,80 ℃下烘至近干,100 ℃下烘至恒重,精密稱定,按每1 mL樣品溶液扣除5.0 mg的Tris和NaCl重量,得固形物重量和濃度(各樣品均為n＝3,RSD不超過(guò)0.8%),結(jié)果見(jiàn)表2。表2  僵蠶各部位中的固形物和蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果（略）注：*與樣品A比

2.3.2  指標(biāo)檢測(cè)

蛋白質(zhì)：按《中華人民共和國(guó)藥典》中半微量氮測(cè)定法操作,計(jì)算總氮含量。將該氮含量扣除銨態(tài)氮含量,再與6.25相乘,即為蛋白質(zhì)質(zhì)量和百分濃度(W/V)。各樣品均為n＝3,RSD不超過(guò)1.4%。銨根[9]：按《中華人民共和國(guó)藥典》中半微量氮測(cè)定法操作(40% NaOH試液用120 g/L氧化鎂懸濁液代替),計(jì)算銨根質(zhì)量和百分濃度(W/V)。各樣品均為n＝3,RSD不超過(guò)1.2%。草酸根[3]：精密取B～E樣品液約5 mL,氯化鈣沉淀-高錳酸鉀滴定法測(cè)定(各樣品均為n＝3,RSD不超過(guò)1.0%)。結(jié)果見(jiàn)表3、表4。表3  僵蠶各部位中銨根和草酸根的測(cè)定結(jié)果（略）注：*與樣品B比表4  僵蠶各部位固形物中蛋白質(zhì)和草酸銨含量比較（略）

2.3.3  HPLC法測(cè)定氨基酸含量

2.3.3.1  色譜條件

色譜柱：Agilent ODS(4.6 mm×200 mm, 5 μm)；流動(dòng)相A為50 mmol/L NaAc(pH 6.8)-甲醇-THF(82∶17∶1),流動(dòng)相B為50 mmol/L NaAc(pH 6.8)-甲醇-THF(22∶77∶1),梯度洗脫；柱溫：27 ℃；流速：1.0 mL/min；熒光檢測(cè)器：λex 338 nm,λem 425 nm。

2.3.3.2  樣品測(cè)定  樣品溶液B～E經(jīng)5.7 mol/L鹽酸液,在110 ℃水解24 h,OPA試劑衍生化,然后取20 μL注入液相色譜儀。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。表5  僵蠶各部位中氨基酸的測(cè)定結(jié)果(略)

3  討論

  

本研究表明,僵蠶的水煎煮提取、醇沉和凝膠色譜分離所得抗凝活性部位中,多肽、氨基酸類和草酸銨都是其中的主要成分。已有報(bào)道,草酸銨具有抗凝活性[8],本研究表明,凝膠色譜分離部位中不含草酸銨,但含多肽和氨基酸類成分的餾分具有抗凝活性,因此,僵蠶中的多肽類或氨基酸類成分可能是抗凝活性成分之一。本研究對(duì)僵蠶抗凝活性部位的化學(xué)成分和理化特性進(jìn)行的初步探索,也為今后對(duì)僵蠶抗凝成分的分離純化提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】

 

[1] 張貴君.現(xiàn)代中藥材商品通鑒[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2001. 2447－2449.

[2] 衛(wèi)功慶,鞠貴春,李慧萍,等.白僵蠶化學(xué)成分的分析[J].吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1995,17(3)：46－49.

[3] 彭新君,彭延古,曾序求,等.僵蠶提取液中蛋白質(zhì)和草酸銨等成分的定量分析[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2005,12(9)：38－40.

護(hù)理

[4] 趙建國(guó),彭延古,彭新君,等.薄層色譜法分離僵蠶中蛋白質(zhì)和氨基酸類成分的研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,25(2)：26－27.

[5] 彭延古,葛金文,鄧奕輝,等.僵蠶抗凝活性成分的研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,20(4)：18－19.

[6] 彭延古,曾序求,徐愛(ài)良,等.僵蠶抗內(nèi)毒素所致細(xì)胞膜損傷作用研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,24(3)：1－2.

[7] 彭延古,李露丹,鄧奕輝.僵蠶抗實(shí)驗(yàn)性靜脈血栓及作用機(jī)理的研究[J].血栓與止血,2001,20(4)：104－105.

篇10

【摘要】 目的 優(yōu)選大蒜油β-環(huán)糊精(β-CD)包合物緩釋片處方，制備中藥揮發(fā)油固體緩釋制劑。方法 以大蒜油中有效成分大蒜素的釋放度為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化緩釋片的制劑處方工藝。結(jié)果 優(yōu)化所得處方為羥丙基甲纖維素9%，乳糖15%，聚維酮10%，微晶纖維素10%。以此處方制備的大蒜油β-CD包合物緩釋片在體外可緩釋8 h。結(jié)論 優(yōu)化所得處方合理穩(wěn)定，緩釋片達(dá)到了緩釋效果。

【關(guān)鍵詞】 大蒜油β-環(huán)糊精包合物緩釋片；正交設(shè)計(jì)；制備工藝

Abstract：Objective To optimize the formulation of the Garlic oil β-CD sustained-release tablet. Methods The preparation formulation of the sustained-release tablet was optimized by orthogonal design which took the released rate as the index. Result The optimized formulation contained 9% HPMC， 15% lactose， 10% PVP， 10% microcrystalline cellulose. The ingredient of Garlic oil sustained-release tablet by this formulation was released slowly in 8 h. Conclusion The optimized formulation is rational and stable， the tablet could be released slowly.

Key words：Garlic oil β-CD sustained-release tablet；orthogonal design；preparation technology

大蒜油是從大蒜(Allium sativum L.)中提取的揮發(fā)油，具有抗菌消炎、提高機(jī)體免疫力、防治心血管系統(tǒng)疾病及防癌抗癌等功效。用大蒜做成的中藥制劑已有多種劑型，如膠囊、口服液、滴丸、糖衣片、軟膠囊、微囊、注射劑、乳劑等，并已在降血脂、降血糖、心腦血管病等諸多方面用于臨床。但因直接口服大蒜對(duì)胃黏膜有刺激性、靜注使用不便、肌注疼痛，使其應(yīng)用受到一定程度的限制[1]。通過(guò)對(duì)大蒜油進(jìn)行β-環(huán)糊精(β-CD)包合，再制成凝膠骨架緩釋片，可以延長(zhǎng)作用時(shí)間、減少用藥次數(shù)、降低不良反應(yīng)、提高制劑的生物利用度以及降低大蒜油對(duì)胃腸道黏膜的刺激性，比純大蒜油具有更好的應(yīng)用價(jià)值。

1 儀器與材料

DP-120型單沖打片機(jī)(丹東市制藥設(shè)備廠)；D-800型智能藥物溶出儀(天津大學(xué)精密儀器廠)；H66MC型超聲波發(fā)生儀(無(wú)錫超聲電子儀器廠)；Waters 600E-2487型高效液相色譜儀(美國(guó)沃特斯公司)。大蒜素對(duì)照品(購(gòu)于青島江興生物科技有限公司)；聚維酮(PVP，廣州市化學(xué)試劑批發(fā)部)；乳糖、微晶纖維素(天津市巴斯夫化工有限公司)；羥丙甲纖維素(HPMC)K15M(上?？?lè)康包衣技術(shù)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 大蒜油的提取

稱取剝皮大蒜2.5 kg，用攪拌機(jī)適當(dāng)粉碎，加2倍量水于55 ℃發(fā)酵2 h，以揮發(fā)油提取器提取6 h，得大蒜油約5 mL。

2.2 大蒜油β-環(huán)糊精包合物的制備

取β-CD 60 g溶入30 ℃蒸餾水中，制成飽和溶液，將大蒜油用少量乙醇稀釋后，在不斷攪拌下滴入β-CD飽和水溶液中， 于30 ℃超聲40 min使大蒜油被包合，所得包合物混懸液于0～5 ℃，冷藏放置24 h，抽濾，40 ℃干燥，研細(xì)，即得白色粉末狀的大蒜油β-CD包合物。

2.3 大蒜油凝膠骨架緩釋片的制備

2.3.1 正交設(shè)計(jì)

本制劑選用親水凝膠骨架材料HPMC K15M為基本骨架，選用乳糖、PVP及微晶纖維素作為填充劑、致孔劑及崩解劑，片重約0.6 g，β-CD包合物占50%(0.3 g)。各因素分別選取3個(gè)水平，正交設(shè)計(jì)因素與水平見(jiàn)表1。表1 大蒜油緩釋片制劑工藝因素水平表（略）

2.3.2 方法

將β-CD包合物與HPMC、乳糖、PVP及微晶纖維素等輔料分別過(guò)8O目篩。精密稱取處方量的β-CD包合物與輔料，充分混勻，用95%的乙醇制軟材，過(guò)2O目篩制粒，5O ℃以下干燥，18目篩整粒，加1%硬脂酸鎂、3%滑石粉，混合壓片。

2.3.3 試驗(yàn)安排與結(jié)果

本試驗(yàn)采用L9(34)表正交試驗(yàn)法優(yōu)選最佳條件?？疾熘笜?biāo)為大蒜油中有效成分大蒜素的釋放度，分別測(cè)定2、6、8 h的釋放度(P)，再綜合評(píng)分：Yi＝(︱P2 h－30%︱＋︱P6 h－50%︱＋︱P8 h－85%︱)×100，以Yi小者為佳。正交試驗(yàn)安排見(jiàn)表2。

2.3.4 釋放度測(cè)定方法

取本片劑，照2005版《中華人民共和國(guó)藥典》(二部)附錄ⅩD規(guī)定的釋放度測(cè)定法(第一法)，采用2005版《中華人民共和國(guó)藥典》(二部)附錄ⅩC規(guī)定的溶出度測(cè)定法(第二法)的裝置，以(37±0.5)℃水600 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為150 r/min，將片劑置于轉(zhuǎn)籃中，在2、6、8 h分別取溶液2 mL(并及時(shí)在操作容器中補(bǔ)充空白介質(zhì)溶液2 mL)，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，分別精密吸取續(xù)濾液200 μL，以高效液相色譜法測(cè)定大蒜素的溶出量。另分別取各批試驗(yàn)號(hào)片劑10片，研細(xì)，取粉末約30 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加水40 mL超聲提取30 min，取出，放冷，加水定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，以0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，濾液以高效液相色譜法測(cè)定該片劑中大蒜素的含量。按二者之間的比值分別計(jì)算每片藥物不同時(shí)間點(diǎn)的釋放度。

色譜柱：DiamonsilTM C18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水-甲酸(80∶20∶0.1)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：218 nm；柱溫：25 ℃。

精密稱取大蒜素對(duì)照品10 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液(每1 mL含大蒜素100 μg)。

分別精密吸取大蒜素對(duì)照品溶液10 μL與供試品溶液200 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。正交試驗(yàn)釋放度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表2 大蒜油β-CD包合物緩釋片制劑工藝正交試驗(yàn)及結(jié)果（略）

對(duì)上述試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行極差直觀分析，結(jié)果各因素對(duì)制劑緩釋效果的影響程度為A>B>D>C，緩釋片處方以A2B1C2D1為最佳。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

為進(jìn)一步驗(yàn)證上述輔料配比和制備工藝的可行性和穩(wěn)定性，以此輔料配比制備了3批樣品，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。表3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（略）

由表3結(jié)果可見(jiàn)，優(yōu)化處方所得試驗(yàn)結(jié)果綜合評(píng)價(jià)優(yōu)于正交設(shè)計(jì)中各次試驗(yàn)，結(jié)果令人滿意，說(shuō)明優(yōu)化成功。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)大蒜油的提取及其β-CD包合物的制備工藝均經(jīng)試驗(yàn)考察后而確定的最佳工藝，制得的包合物亦經(jīng)薄層色譜及紫外分光光度法檢驗(yàn)證實(shí)大蒜油已被包合。因本試驗(yàn)為制劑工藝研究，在此未加細(xì)述。制劑處方正交設(shè)計(jì)的考察因素是經(jīng)過(guò)單因素考察后，根據(jù)各因素及其不同水平對(duì)釋放度的影響而確定的，制得的片劑在外觀及硬度等方面均符合片劑的要求。

大蒜油的含量測(cè)定可以采用分光光度法，最大吸收波長(zhǎng)在215 nm左右，但在此波長(zhǎng)處輔料也有吸收，對(duì)含量測(cè)定有干擾，因此，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法[2]測(cè)定大蒜素的含量作為考察指標(biāo)，因溶出液中大蒜素含量較低，又不宜濃縮，因而進(jìn)樣體積定為200 μL。大蒜油β-CD包合物緩釋片為凝膠骨架片。骨架材料為親水性凝膠骨架HPMC，遇水或消化液膨脹，形成凝膠屏障而具控制有效成分溶出的作用，達(dá)到緩釋的目的。該緩釋片的釋藥機(jī)理是骨架溶蝕和藥物擴(kuò)散的綜合效應(yīng)過(guò)程。

【參考文獻(xiàn)】