分娩胎兒溶血病微柱凝膠檢測論文
時間:2022-12-02 09:58:00
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摘要:新生兒溶血病一般特指母嬰血型不合而引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾病(haemolyticdiseaseofthenewborn),簡稱HDN。在我國,因ABO血型不合引起的新生兒溶血病較為常見,Rh血型不合引起的新生兒溶血病次之。新生兒溶血病嚴(yán)重時,可出現(xiàn)核黃疸,導(dǎo)致智力發(fā)育不全、腦癱等后遺癥。新生兒溶血病是嚴(yán)重影響新生兒健康的疾病。采用微柱凝膠技術(shù)對新生兒溶血病診斷的三項試驗(直接抗球蛋白試驗、抗體放散試驗、血清游離抗體試驗)的快速檢出,更有利于臨床及時對患兒的診斷和治療。
關(guān)鍵詞:微柱凝膠技術(shù)新生兒溶血病血清學(xué)檢測
微柱凝膠技術(shù)(microcolumngetImmunoassay)是目前國內(nèi)外血型血清學(xué)檢查方法之一。其設(shè)計理論先進(jìn),具有操作簡單迅速、標(biāo)本用量少、結(jié)果易判斷、敏感性高和特異性強(qiáng)的優(yōu)點。
一、材料與方法
1.1試劑與儀器試劑:DianaGeLcoombs卡(每卡含8個微柱孔管),每個微柱孔管含低離子強(qiáng)度緩沖液(LISS)浸泡中的微粒篩,加上多價抗人球蛋白(兔多克隆抗IG和單克隆抗C3d克隆12011.D10)。
標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞:0.8%O型篩查細(xì)胞()批號:8004801801001801101801201900201900101900301900401。0.8%A型細(xì)胞0.8%B型細(xì)胞批號:8001801800190180078018002501900201901001900501900601901001。
DiasnvsticGrifolsS.A卡:用于ABO、Rh血型、直接抗球蛋白試驗,批號:500401016001010180010201800103018003010180060201。
DianaGeLCoombs卡(抗人球卡)批號:800801018042010180750101811801018138010181470101。
儀器:專用的DianaFuag離心機(jī)和Diana孵育器。
以上試劑和儀器均為GRIFULS公司產(chǎn)品,由沈陽麥迪卡爾有限公司提供。
1.2樣本來源2007年1月-2009年5月住在我院新生兒科患兒(母親是O型,患兒是A型或B型)出生后1-3天皮膚鞏膜黃染,血紅蛋白降低,血清膽紅素高于正常值,對患兒采集EDTA抗凝血3毫升共541份標(biāo)本,實驗室對所送標(biāo)本必須在接到后24小內(nèi)檢查完畢。
1.3實驗方法
1.3.1標(biāo)本處理取患兒EDTA抗凝血3毫升,將血漿分離,剩余紅細(xì)胞經(jīng)0.9%生理鹽水洗滌4遍后,取壓積紅細(xì)胞5微升加入Diana稀釋液2(低離子介質(zhì)液)500微升中制成1%紅細(xì)胞懸液。剩余的壓積紅細(xì)胞加入和壓積紅細(xì)胞一倍的生理鹽水,經(jīng)56℃水?。ㄊ帜迷嚬懿粩嘣谒休p輕震動10分鐘),拿出保溫離心提取粉紅色上清(放散液)備用。
1.3.2取DignosticGrifols.SA微柱凝膠卡一張,各孔加入患兒1%紅細(xì)胞懸液50微升,放入DianaFuge離心機(jī)離心10分鐘,觀察結(jié)果。
1.3.3取DianaGeLcoombs卡一張,拿出6孔分別標(biāo)識ABO、ABO,按標(biāo)識的血型分別在各孔中加入0.8%A型紅細(xì)胞、0.8%B型紅細(xì)胞和0.8%O型紅細(xì)胞(等量Ⅰ、Ⅱ、ⅢO型紅細(xì)胞混合液)50微升。前3孔各加入患兒血漿50微升(游離抗體試驗),后3孔各加入患兒紅細(xì)胞放散液50微升(抗體放散試驗)。置Diana孵育器15分鐘后,放DianaFuge專用離心機(jī)離心10分鐘,按照微柱凝膠卡式法的三項試驗說明書判讀結(jié)果。
1.4實驗室新生兒溶血病診斷標(biāo)準(zhǔn)三項試驗同時陽性或放散試驗陽性可確診為新生兒溶血病。若直抗試驗和游離試驗1項或2項陽性者,可判斷為疑似新生兒溶血病。公務(wù)員之家
二、討論
目前,在我國診斷新生兒溶血病的實驗室檢查主要是三項試驗(直接抗球蛋白試驗、游離抗體試驗、放散試驗),直接抗球蛋白試驗主要檢測新生兒紅細(xì)胞是否被來自母親IgG抗A(B)所致敏;游離抗體試驗是患兒血清的IgG抗A(B)來自母親,如果新生兒血清中發(fā)現(xiàn)與其紅細(xì)胞不配合的IgG抗A(B)時,表明嬰兒體內(nèi)有抗體,可能受害;放散試驗采用的是試管抗球蛋白技術(shù)和微柱凝膠技術(shù),用放散液與標(biāo)準(zhǔn)ABO型紅細(xì)胞反應(yīng),(與O型紅細(xì)胞反應(yīng)視做陰性對照)均無凝集者,表明未查出抗體,A型新生兒紅細(xì)胞放散液只與標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞凝集,表明放散液檢出抗-A,而B型新生兒紅細(xì)胞放散液只與標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞凝集,表明放散液檢出抗-B,而A型新生兒紅細(xì)胞放散液與標(biāo)準(zhǔn)B型紅細(xì)胞凝集或B型新生兒紅細(xì)胞放散液與標(biāo)準(zhǔn)A型紅細(xì)胞凝集,表明放散液中檢出抗-A,B。我們采用微柱凝膠技術(shù)對我院541例母嬰血型不合且有嚴(yán)重的新生兒黃疸或高膽紅素血癥患兒的血標(biāo)本進(jìn)行了三項試驗,結(jié)果表明:ABO母嬰血型不合新生兒溶血?。℉DN)171例,其中OA115例,OB56例。ABO溶血病因紅細(xì)胞的抗體結(jié)合較少,直接抗球蛋白試驗常為陰性或弱陽性,血清游離抗體陽性,抗體釋放試驗陽性。Rh溶血病直接抗球蛋白試驗強(qiáng)陽性,游離抗體強(qiáng)陽性,抗體釋放試驗強(qiáng)陽性。我院新生兒科對溶血嚴(yán)重的患兒及時進(jìn)行了換血治療(ABO溶血采用O型洗滌紅細(xì)胞+AB血漿的血液,Rh溶血采用ABO血型同患兒,Rh血型同母親的血液)微柱凝膠技術(shù)用于新生兒溶血病的檢測,方法簡便、快速、判斷結(jié)果標(biāo)準(zhǔn),可成為醫(yī)院實驗室常規(guī)檢測方法。實驗室能為臨床快速準(zhǔn)確提供試驗報告,有利于患兒的早期診斷、早期治療,對提高新生兒健康水平有很重要的意義。
參考文獻(xiàn):
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