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關(guān)鍵詞：食品安全 微生物檢驗(yàn) 內(nèi)容 質(zhì)量 必要性

中圖分類號：TS207.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）22-0010-02

近年來頻發(fā)的食品安全事故使得人們越來越關(guān)注食品安全與健康，食品安全監(jiān)測備受人們關(guān)注。而在食品安全的相關(guān)項(xiàng)目中，微生物及其衍生的各種霉素對食品的污染最受人們的關(guān)注，食品微生物檢驗(yàn)也順應(yīng)潮流發(fā)展而備受人們關(guān)注。在食品的生產(chǎn)過程中，微生物會隨著食品的生產(chǎn)、加工、包裝、運(yùn)輸、儲存等環(huán)節(jié)進(jìn)入到食品中去，進(jìn)而使食品在短期內(nèi)變質(zhì)，失去使用價(jià)值，甚至還會對人體造成一定的傷害，所以說，必須進(jìn)行嚴(yán)格的食品微生物檢驗(yàn)，確保食品安全。

1 食品微生物檢驗(yàn)的基本內(nèi)容

隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)越來越先進(jìn)了，檢驗(yàn)步驟也越來越簡化了，目前常用的檢驗(yàn)技術(shù)主要有：電阻抗法、核酸探針技術(shù)、PCR技術(shù)、免疫酶技術(shù)等。而檢驗(yàn)的內(nèi)容則主要是食品樣品中的指示菌和致病菌。

（1）指示菌。檢驗(yàn)食品中的菌落總數(shù)和大腸菌群。菌落總數(shù)表明食品的受污染程度，從而得出食品的保質(zhì)期是多長。而大腸菌群多產(chǎn)生于糞便中，因此也可以將其作為食品受污染程度的指標(biāo)之一。飲用水和食品中的大腸菌群的定義是不一樣的，在飲用水中，大腸菌群是指1000ml飲用水中所檢驗(yàn)出來的菌群數(shù)量；而在食品中則指100ml中檢驗(yàn)出來的菌群數(shù)量。通過檢驗(yàn)食品中的菌落總數(shù)和大腸菌群，可以為食品的安全質(zhì)量做出科學(xué)評價(jià)。

（2）致病菌。在食品檢驗(yàn)中，相關(guān)法律法規(guī)明確規(guī)定了霉菌毒素、酵母菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌的含量，一旦超過就會危及到人體的健康。比如說：食品中的霉菌毒素超標(biāo)，那么就有可能帶來腹瀉、嘔吐等不良反應(yīng)，帶來食物中毒現(xiàn)象。

2 食品微生物檢驗(yàn)的必要性

食品微生物檢驗(yàn)是保證食品安全的一道重要門檻，其檢驗(yàn)質(zhì)量直接關(guān)系到我國食品安全監(jiān)測的工作效果，關(guān)系到國計(jì)民生。一般而言，食品生產(chǎn)出來之后，就要以最快的速度流入市場，使消費(fèi)者得到最為新鮮的食品。因此，食品微生物檢驗(yàn)必須快速、準(zhǔn)確，盡快得出檢驗(yàn)結(jié)果，從而確定食品安全是否達(dá)標(biāo)，對預(yù)防食源性疾病、提高食品質(zhì)量起到重要作用，維護(hù)老百姓的身心健康。

如果沒有食品微生物檢驗(yàn)，市場上就很有可能出現(xiàn)許多不合格的食品，在人們食用后帶來嚴(yán)重的不良社會影響。通過食品微生物檢驗(yàn)，相關(guān)人員可以獲知食品的清潔指數(shù)以及受污染程度，確定食品是否安全，確定食品的安全保質(zhì)期，從而使人們在食品變質(zhì)前使用，既讓老百姓吃到健康食品，又減少經(jīng)濟(jì)損失。因?yàn)?，一旦某種不合格的食品大量流入市場之后，在造成嚴(yán)重的食品中毒、致病等食品安全事故之后，就會導(dǎo)致人心惶惶，流入市場的食品也必須銷毀，帶來了嚴(yán)重的社會影響和經(jīng)濟(jì)損失。所以說，食品微生物檢驗(yàn)對提高食品質(zhì)量、減少經(jīng)濟(jì)損失起到重要作用。

如果沒有食品微生物檢驗(yàn)，當(dāng)發(fā)生食品安全事故后，醫(yī)護(hù)人員無法迅速得出病因，不利于患者迅速恢復(fù)健康。而食品微生物檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)資料可以成為衛(wèi)生學(xué)上的評價(jià)依據(jù)，所以說，進(jìn)行食品微生物檢驗(yàn)是非常有必要的。而《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分》則明確提出了微生物檢驗(yàn)中的各項(xiàng)指標(biāo)要求，這推動了微生物檢驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化。進(jìn)行食品微生物檢驗(yàn)時(shí)，嚴(yán)格按照有關(guān)法律法規(guī)的要求進(jìn)行檢驗(yàn)，從而有效減少誤差，提高檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的正確性，更好的進(jìn)行食品安全監(jiān)測工作，為老百姓帶來放心食品，促進(jìn)社會穩(wěn)定。

沒有食品微生物檢驗(yàn)，食品安全就會受到極大威脅，而頻繁發(fā)生的食品安全事故又會給人們帶來焦慮感，不利于社會穩(wěn)定，進(jìn)而不利于社會主義建設(shè)的健康發(fā)展。我們都知道，食品在生產(chǎn)、加工、包裝、運(yùn)輸、儲存等環(huán)節(jié)中極容易受到細(xì)菌的污染，影響到老百姓的身體健康。而食品微生物檢驗(yàn)則正好可以得出食品的受污染程度，從而為食品的衛(wèi)生管理提供合理化建議。而且，通過微生物檢驗(yàn)，我們還可以獲知食品是在哪些生產(chǎn)環(huán)節(jié)中遭受細(xì)菌污染的，從而改善食品生產(chǎn)的環(huán)境，生產(chǎn)出更多合格的食品，減少經(jīng)濟(jì)損失，保證老百姓的身體健康。

食品安全關(guān)系到國計(jì)民生，沒有食品安全，老百姓的正常生活就會受到極大影響，影響社會穩(wěn)定，進(jìn)而不利于我國社會主義建設(shè)的可持續(xù)發(fā)展。食品微生物檢驗(yàn)為食品安全工作提供必要的科學(xué)依據(jù)，科學(xué)評價(jià)食品衛(wèi)生質(zhì)量，有助于保證老百姓的飲食衛(wèi)生安全。

3 食品微生物檢驗(yàn)的發(fā)展

國家越來越重視食品安全，而食品微生物檢驗(yàn)也在這種形勢下迅速發(fā)展起來，出現(xiàn)了越來越多的先進(jìn)檢驗(yàn)技術(shù)，檢驗(yàn)的質(zhì)量也越來越高。比如說：分子生物學(xué)技術(shù)、電阻抗法等技術(shù)就是食品微生物檢驗(yàn)的新方法。在未來，微生物檢驗(yàn)將會變得高效、快速、精確，檢驗(yàn)的步驟將會逐漸簡化，檢驗(yàn)質(zhì)量受自然環(huán)境的影響也會越來越小。比如說：全自動微生物分析檢驗(yàn)系統(tǒng)是一種非常高效的檢驗(yàn)系統(tǒng)，是未來微生物檢驗(yàn)技術(shù)的一個(gè)重要發(fā)展方向。而檢驗(yàn)條件也將隨著檢驗(yàn)技術(shù)而發(fā)展，標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化的檢驗(yàn)條件，提高檢驗(yàn)的精確度和靈敏度。

4 結(jié)語

食品微生物檢驗(yàn)是食品安全監(jiān)測中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，它對保證食品安全起到重要作用，對促進(jìn)社會穩(wěn)定、減少經(jīng)濟(jì)損失起到重要作用。只有不斷運(yùn)用先進(jìn)科學(xué)技術(shù)成果來提高檢驗(yàn)的質(zhì)量和效率，才能不斷提高食品安全檢驗(yàn)效果。而食品微生物檢驗(yàn)質(zhì)量的影響因素多，檢驗(yàn)人員必須以高度責(zé)任感和使命感做好檢驗(yàn)工作，提高檢驗(yàn)的質(zhì)量，為食品安全提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]閆莉莉.淺談食品微生物檢驗(yàn)體系[J].大家健康（下旬刊），2013，7（10）.

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關(guān)鍵詞：微生物限度；無菌檢查；方法驗(yàn)證；影響因素；微生物檢測

微生物學(xué)檢查方法包括微生物限度檢查法和無菌檢查法。微生物限度檢查法是檢查非規(guī)定滅菌制劑及原輔料受微生物污染程度，包括細(xì)菌、霉菌等菌種的數(shù)目及控制菌檢查。無菌檢查法是檢查藥典要求的無菌藥品、原輔料等是否無菌。如外用制劑須檢查和驗(yàn)證銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌；若制劑含藥材原粉等， 還需檢查和驗(yàn)證大腸菌群和（或） 沙門菌。通過不同給藥途徑，因此臨床給藥途徑在微生物限度檢查和方法驗(yàn)證中有著舉足輕重的地位。

1 方法驗(yàn)證的模式及影響因素

1.1 培養(yǎng)基的無菌檢查及菌株準(zhǔn)備 使用時(shí)應(yīng)仔細(xì)觀察培養(yǎng)基碟子， 檢查是否有微生物污染或干燥收縮。經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)基按照相應(yīng)測定的微生物， 選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株（不超過5代） 試驗(yàn)?？刂凭€應(yīng)設(shè)定對照組， 以檢測其專屬性。

1.2 微生物方法驗(yàn)證的內(nèi)容

1.2.1 細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證內(nèi)容 至少進(jìn)行3次平行試驗(yàn)， 分別計(jì)算每次各試驗(yàn)菌的回收率。驗(yàn)證菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、枯草桿菌。驗(yàn)證方法分試驗(yàn)組、菌液組、稀釋劑對照組以及供試品對照組，方法如下：試驗(yàn)組：采用平皿法計(jì)數(shù)時(shí)，每株試驗(yàn)菌均制備2個(gè)平皿；也可采用薄膜過濾法計(jì)數(shù)。菌液組：應(yīng)檢測添加的試驗(yàn)菌數(shù)。稀釋劑對照組：檢查供試液制備時(shí)，微生物受污染程度，采用薄膜過濾法計(jì)算其菌數(shù)。供試品對照組：定量取供試液，采用薄膜過濾法計(jì)算其供試品本底菌數(shù)。無菌檢查可采用：①薄膜過濾法：采用微孔濾膜攔截細(xì)菌，去除可溶性成分。驗(yàn)證重點(diǎn)：確定濾膜的適用性、沖洗方法以及沖洗液用量。②中和法：中和劑應(yīng)對微生物無毒性，與抑菌性成分結(jié)合后的產(chǎn)物，也應(yīng)對微生物無毒性。驗(yàn)證重點(diǎn)：確定中和劑有效，并證明對污染微生物無毒性。

1.2.2 控制菌檢查法的驗(yàn)證內(nèi)容 控制菌檢查包括大腸菌群、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌、銅綠假單胞菌和梭菌檢查。試驗(yàn)菌株嚴(yán)格按照規(guī)定檢查的控制菌，選取相應(yīng)的驗(yàn)證菌株。方法如下：試驗(yàn)組：按照相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查。采用薄膜過濾法時(shí)，添加試驗(yàn)菌應(yīng)選在最后一次沖洗液后， 過濾后方可注入培養(yǎng)基中。對照組：驗(yàn)證該檢查方法的專屬性。

1.2.3 細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證結(jié)果判斷指標(biāo) 根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，可計(jì)算供試品組的菌回收率、稀釋劑對照組的菌回收率。如果任意一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率，低于70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、薄膜過濾法等方法消除供試品的抑菌活性，并重新驗(yàn)證。

1.2.4 控制菌方法驗(yàn)證的結(jié)果判斷 按《中國藥典》2005年版規(guī)定，陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。如果試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，則按照相應(yīng)方法進(jìn)行控制菌檢查。如果試驗(yàn)組未檢出，則需重新驗(yàn)證?？刂凭鷻z查還應(yīng)設(shè)有專屬性試驗(yàn)。驗(yàn)證試驗(yàn)及結(jié)果的判斷：①目標(biāo)菌陽性對照管菌和供試品加目標(biāo)菌管生長良好；②陰性對照管以及陰性菌對照必須無菌生長。如果上述試驗(yàn)成立，表示可按照該方法進(jìn)行該品種的控制菌檢查。

1.3 特殊供試品的制備 由于供試品本身的特性，可能會產(chǎn)生假陰性。在正常生產(chǎn)過程中，利用供試品與微生物的差異，消除供試品對藥品中微生物的影響，從而準(zhǔn)確檢測藥品中微生物的真實(shí)含量，是較為普遍使用的方法。具體包括：①培養(yǎng)基稀釋法：取規(guī)定量供試品/供試液，加至培養(yǎng)基中，使單位體積內(nèi)的供試品濃度稀釋至無明顯抑菌作用。適用范圍：不能使用薄膜過濾法，抑菌活性較弱的樣品。驗(yàn)證重點(diǎn)：把握好培養(yǎng)基增加量與供試品/供試液不顯抑菌活性的關(guān)系。②離心沉淀法：利用沉降系數(shù)差異除去藥渣以及含抑菌活性的部分。適用范圍：不能采用薄膜過濾等方法的樣品。驗(yàn)證重點(diǎn)：設(shè)置有效離心率，確定能將藥渣、抑菌部分除去。③薄膜過濾法：采用微孔濾膜攔截細(xì)菌，去除可溶性成分。④中和法：中和劑應(yīng)對微生物無毒性，與抑菌性成分結(jié)合后的產(chǎn)物，也應(yīng)對微生物無毒性。

2 微生物檢查方法驗(yàn)證的難點(diǎn)問題

人們對藥品生產(chǎn)、保存和使用過程中，對于可能出現(xiàn)的微生物污染問題進(jìn)行了大量的研究考察。很多研究資料表明[1，2]：藥品中污染的微生物數(shù)量以及微生物種類有不確定性，在藥品生產(chǎn)環(huán)節(jié)中， 微生物污染存在著隨機(jī)性。因此，為了監(jiān)控藥品生產(chǎn)過程中的微生物污染。所有的藥品必須在安全性檢查后，才能應(yīng)用于臨床。無論是無抑菌性藥物還是抑菌性藥物，都要進(jìn)行微生物限度檢查， 特別是某些微生物在一定環(huán)境下可能受到損傷， 但當(dāng)服用至人體后， 條件適宜時(shí)仍可生長繁殖，破壞人體健康。抑菌藥物內(nèi)微生物能夠?qū)θ梭w健康造成危害的情況必須警惕， 因此必須對抑菌性藥物進(jìn)行微生物限度檢查，但由于其本身的抑菌作用， 這嚴(yán)重影響了微生物的檢出。

3討論

藥品微生物限度檢查方法驗(yàn)證工作是錯(cuò)綜復(fù)雜的過程，控制不當(dāng)很難達(dá)到驗(yàn)證要求以及預(yù)想的試驗(yàn)效果。嚴(yán)格按照操作規(guī)范操作， 盡量避免試驗(yàn)過程中的誤差。

參考文獻(xiàn)：

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關(guān)鍵詞：高職；微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)；教學(xué)改革

中圖分類號：G712 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-5727（2012）09-0032-02

《微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)》是高職院校生物食品類專業(yè)的重要專業(yè)基礎(chǔ)課程之一，是一門融基礎(chǔ)微生物理論和實(shí)踐操作技能于一體的課程。2010年，我院生物類專業(yè)實(shí)現(xiàn)了大類招生，統(tǒng)一了生物類各專業(yè)的相關(guān)專業(yè)基礎(chǔ)課程，《微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)》課程同時(shí)面向生物技術(shù)及應(yīng)用、食品營養(yǎng)與檢測、生物制藥三大專業(yè)的全體學(xué)生，旨在為學(xué)生對農(nóng)產(chǎn)品、食品及藥品檢測等后續(xù)課程的學(xué)習(xí)，考取食品、藥品檢驗(yàn)工等職業(yè)資格證書，為從事食品藥品生產(chǎn)、檢驗(yàn)等崗位工作及日后發(fā)展奠定良好的基礎(chǔ)。但該課程現(xiàn)有的教材體系都是按傳統(tǒng)學(xué)科知識體系的框架編排的，教學(xué)過程中雖然加強(qiáng)了實(shí)踐技能的培養(yǎng)，但理論教學(xué)與實(shí)踐相脫離，難以充分發(fā)揮學(xué)生的主觀能動性，從而使培養(yǎng)的學(xué)生操作技能不強(qiáng)，職業(yè)素質(zhì)不高。因此，如何使該課程的教學(xué)目標(biāo)與社會的職業(yè)需求建立起有機(jī)聯(lián)系，開展與實(shí)際操作技能有機(jī)結(jié)合的“教學(xué)做”一體化教學(xué)和行動導(dǎo)向的課程項(xiàng)目化教學(xué)，就成為該門課程研究和探索的重要內(nèi)容。筆者擬主要結(jié)合專業(yè)培養(yǎng)目標(biāo)，從《微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)》這門課程的設(shè)計(jì)理念、課程教學(xué)目標(biāo)、教學(xué)內(nèi)容設(shè)計(jì)和教學(xué)方法等方面，探討該課程的項(xiàng)目化教學(xué)改革，以期使所培養(yǎng)的學(xué)生能熟練掌握微生物的操作技能，為將來從事微生物檢測工作奠定良好的職業(yè)基礎(chǔ)。

課程設(shè)計(jì)理念

將整體化的職業(yè)分析作為教學(xué)設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)，構(gòu)建突出職業(yè)能力培養(yǎng)的課程培養(yǎng)體系。根據(jù)畢業(yè)生反饋和企業(yè)調(diào)研等方式對微生物檢測崗位進(jìn)行分析，確定該崗位的典型工作任務(wù)，在此基礎(chǔ)上明確完成相關(guān)工作任務(wù)所需要的知識、能力與素質(zhì)，以行動導(dǎo)向完成課程內(nèi)容的整體項(xiàng)目化設(shè)計(jì)。

在具體的課程設(shè)計(jì)過程中，按照理論與實(shí)踐一體化的教學(xué)原則和要求進(jìn)行課程教學(xué)內(nèi)容的編排，打破原有學(xué)科體系教材《微生物學(xué)》的章節(jié)界限，整合實(shí)用性教學(xué)內(nèi)容，將技能教學(xué)內(nèi)容以項(xiàng)目的形式組成教學(xué)單元，將需要的每部分理論知識點(diǎn)和技能加以組合，以微生物培養(yǎng)和檢驗(yàn)技能為主線，將《微生物學(xué)》學(xué)科體系的理論知識融入微生物的各項(xiàng)操作任務(wù)之中，確定教學(xué)內(nèi)容，設(shè)計(jì)實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目。通過由簡單到復(fù)雜，由基礎(chǔ)到綜合的項(xiàng)目工作任務(wù)的完成，培養(yǎng)學(xué)生具體的實(shí)踐操作能力，使其掌握微生物檢驗(yàn)的技巧與方法，并在此過程中培養(yǎng)學(xué)生處理和解決實(shí)際工作問題的能力。

課程教學(xué)目標(biāo)

《微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)》課程參照食品、藥品檢驗(yàn)工等職業(yè)資格要求和學(xué)生將來從事食品藥品生產(chǎn)、檢驗(yàn)等崗位工作的行業(yè)規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)要求，實(shí)現(xiàn)職業(yè)技能培養(yǎng)目標(biāo)。具體知識目標(biāo)、技能目標(biāo)、態(tài)度目標(biāo)如表1所示。

課程內(nèi)容設(shè)計(jì)

課程內(nèi)容設(shè)計(jì)以具體的工作項(xiàng)目為載體，以典型工作任務(wù)整合課程的理論與實(shí)踐，增強(qiáng)學(xué)生的職業(yè)觀念，在完成項(xiàng)目工作任務(wù)的過程中掌握職業(yè)崗位（群）技能。結(jié)合認(rèn)知規(guī)律，每個(gè)教學(xué)項(xiàng)目按照從簡單到復(fù)雜，從易到難的循序漸進(jìn)的方法進(jìn)行課程內(nèi)容的構(gòu)建。教學(xué)項(xiàng)目的安排要具有代表性、覆蓋性、典型性。第一個(gè)項(xiàng)目主要訓(xùn)練、培養(yǎng)學(xué)生掌握微生物的基本理論知識和基本操作技能，后面三個(gè)項(xiàng)目主要根據(jù)企業(yè)微生物檢驗(yàn)崗位工作任務(wù)要求，以某一類食品為項(xiàng)目載體，培養(yǎng)學(xué)生熟練掌握企業(yè)常檢微生物的檢驗(yàn)技術(shù)，熟悉相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，具備良好的微生物檢驗(yàn)技能和職業(yè)素質(zhì)。具體的教學(xué)項(xiàng)目設(shè)計(jì)如表2所示。

行動導(dǎo)向教學(xué)模式的改革實(shí)踐

在具體教學(xué)過程中實(shí)現(xiàn)“教中學(xué)、學(xué)中做，學(xué)做結(jié)合”一體化教學(xué)，以能力訓(xùn)練為中心，以能力培養(yǎng)為主線，側(cè)重于培養(yǎng)學(xué)生的職業(yè)能力。積極推行“學(xué)生為主體、教師為主導(dǎo)、項(xiàng)目為載體”的教學(xué)模式。對原有教材體系中偏重理論知識，缺少可操作性和實(shí)用性的教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行摒棄，探索項(xiàng)目課程設(shè)計(jì)教案，以能力訓(xùn)練方式將要用到的學(xué)科理論知識融入學(xué)習(xí)項(xiàng)目中，使學(xué)生了解微生物檢測崗位典型的工作內(nèi)容和形式。通過項(xiàng)目工作任務(wù)的完成，實(shí)現(xiàn)學(xué)生實(shí)訓(xùn)環(huán)節(jié)，培養(yǎng)學(xué)生具體的實(shí)踐操作能力、處理和解決實(shí)際工作問題的能力。每個(gè)項(xiàng)目均以“資訊、決策、計(jì)劃、實(shí)施、檢查、評價(jià)”六步法進(jìn)行教學(xué)實(shí)施，具體如表3所示。

《微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)》是一門基礎(chǔ)性、應(yīng)用性、實(shí)踐性都很強(qiáng)的課程，根據(jù)人才培養(yǎng)方案中的微生物檢測崗位的職能要求選擇和設(shè)計(jì)教學(xué)實(shí)訓(xùn)項(xiàng)目，對傳統(tǒng)教學(xué)中理論學(xué)習(xí)與技能訓(xùn)練割裂的教學(xué)內(nèi)容重新整合，進(jìn)行課程項(xiàng)目化教學(xué)改革與實(shí)踐，可以大大激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性。但在教學(xué)改革過程中，也出現(xiàn)了一些新的問題，如在項(xiàng)目實(shí)施過程中，因微生物培養(yǎng)特性需要連續(xù)幾天才能完成某個(gè)微生物指標(biāo)的檢驗(yàn)，這就需要在制定人才培養(yǎng)方案的過程中，注意根據(jù)課程的要求安排教學(xué)進(jìn)程。另外，因?qū)W生人數(shù)較多，教師在操作指導(dǎo)上不能同時(shí)兼顧所有的學(xué)生，因此，需要在日后的教學(xué)實(shí)踐中不斷探索，使所培養(yǎng)的學(xué)生能正確掌握微生物的操作技能和檢驗(yàn)技術(shù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]包永華，葉素丹.高職《食品標(biāo)準(zhǔn)與法規(guī)》課程設(shè)計(jì)初探[J].職業(yè)教育研究，2011（5）：35-36.

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篇4

關(guān)鍵詞：教學(xué)目標(biāo)；中職學(xué)校；微生物；實(shí)踐教學(xué)

在日常教學(xué)中，教學(xué)目標(biāo)的制訂是非常關(guān)鍵的一環(huán)。尤其在實(shí)踐教學(xué)中，如果沒有目標(biāo)，就如航海時(shí)沒有燈塔，很容易迷失了方，向。因?yàn)榻虒W(xué)目標(biāo)在教學(xué)活動中處于核心位置，它決定著教學(xué)行為，不僅是教學(xué)的出發(fā)點(diǎn)，而且是教學(xué)的歸屬，同時(shí)還是教學(xué)評價(jià)的依據(jù)，它既有定向功能，又有調(diào)控功能。教學(xué)目標(biāo)是教師的主觀愿望和客觀教學(xué)實(shí)際的統(tǒng)一。只有依據(jù)課程標(biāo)準(zhǔn)，制訂符合實(shí)際的教學(xué)目標(biāo)，才能實(shí)現(xiàn)教學(xué)的預(yù)期效果。這樣的教學(xué)目標(biāo)能夠發(fā)揮其功能性，是有效的教學(xué)目標(biāo)，才能夠提高教學(xué)活動的實(shí)效性。

為了突出職業(yè)教育課程的邏輯核心是“工作實(shí)踐”，強(qiáng)化“以實(shí)踐為導(dǎo)向，以服務(wù)為宗旨，以職業(yè)能力為本位，以職業(yè)實(shí)踐為主線”的職教理念，實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)目標(biāo)與社會對人才需求的對接，提高教學(xué)的有效性，我們以微生物課程為突破口，嘗試從以下幾個(gè)方面制訂微生物實(shí)踐教學(xué)目標(biāo)：了解學(xué)生，了解企業(yè)，進(jìn)行課程分析。具體過程如下：

一、了解學(xué)生的特點(diǎn)和實(shí)習(xí)、工作情況

在新課程下要制訂恰當(dāng)?shù)慕虒W(xué)目標(biāo)，了解學(xué)生是非常重要的。就我們中職學(xué)校而言，學(xué)習(xí)對象為中職學(xué)生，要制訂適合學(xué)生的教學(xué)內(nèi)容和培養(yǎng)目標(biāo)，我們首先要了解中職學(xué)生的特點(diǎn)。中職學(xué)生是指正在接受中等職業(yè)技術(shù)教育的學(xué)生，其年齡一般在15～18歲之間。其年齡正處在青年的早期，這時(shí)學(xué)生的生理發(fā)育已趨于成熟，而心理上的成熟度卻遠(yuǎn)未跟上，與一般高中生相比，其心理也有一定差異。一般來說，他們中的一部分人考不上普通高中，在家長督促下被迫去上中職學(xué)校，這就造成這些人在心理方面缺乏自信。由于學(xué)習(xí)成績不理想，他們往往覺得低人一等，極易自暴自棄。在學(xué)習(xí)上，他們一方面對一般的學(xué)習(xí)生活沒有興趣，厭學(xué)情緒明顯；另一方面在學(xué)習(xí)上也易產(chǎn)生畏難情緒，尤其是難度較大的專業(yè)課，常常使他們無所適從，產(chǎn)生畏懼心理。然而，中職生的思維能力發(fā)展很迅速。他們在行為特點(diǎn)上有個(gè)明顯的長項(xiàng)，就是喜歡實(shí)際操作，喜歡動手。雖然他們厭學(xué)文化理論課，但對于實(shí)踐課、實(shí)驗(yàn)課以及其他需要實(shí)際操作的課程，往往興趣濃厚，而這正是中職學(xué)校學(xué)生適應(yīng)社會市場需求的必備條件。如何因勢利導(dǎo)，進(jìn)一步加強(qiáng)中職生實(shí)際操作技能的培養(yǎng)，是中職課改的重要任務(wù)。

其次，作為中職教師的我們，更要積極了解學(xué)生的實(shí)習(xí)、工作情況，以使教學(xué)目標(biāo)制訂得更具針對性和實(shí)效性。我校學(xué)生畢業(yè)后可以在醫(yī)藥、食品、化妝品等行業(yè)以及醫(yī)院中西藥房、化驗(yàn)室、藥品檢驗(yàn)部門和衛(wèi)生防疫部門從事相關(guān)行業(yè)的生產(chǎn)、流通、銷售以及藥品的調(diào)劑、化驗(yàn)等崗位工作。通過走訪、座談、問卷、企業(yè)實(shí)踐等方法，對廣州白云山天心制藥股份有限公司、廣州白云山明興制藥有限公司、荔灣區(qū)中醫(yī)醫(yī)院、廣州百山制藥有限公司等單位進(jìn)行了了解。通過了解近五年我校某些中職實(shí)習(xí)生、畢業(yè)學(xué)生的實(shí)習(xí)和工作情況發(fā)現(xiàn)，學(xué)校與企業(yè)合作不足，課程內(nèi)容與實(shí)際工作有一定的距離。因此，我們需要通過教學(xué)改革，完善微生物課程的教學(xué)目標(biāo)，更好地確定微生物課程的實(shí)際應(yīng)用。

二、了解用人單位對學(xué)生的要求

為了更好地制訂微生物實(shí)踐教學(xué)目標(biāo)，我們要主動了解用人單位對學(xué)生的要求。學(xué)生是學(xué)習(xí)的主體，脫離學(xué)生實(shí)際的教學(xué)目標(biāo)是沒有任何實(shí)用價(jià)值的。因此，目標(biāo)的制訂要適合學(xué)生，適應(yīng)社會的需要。一般而言，大綱和教材都是靜態(tài)的，往往幾年不變，而社會發(fā)展卻是動態(tài)的，可以說教材內(nèi)容對時(shí)代進(jìn)步來說總是滯后的。在制訂教學(xué)目標(biāo)時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮到這一點(diǎn)，適當(dāng)?shù)馗鶕?jù)社會需要，充實(shí)必要的內(nèi)容。為此，我們通過走訪、座談、問卷、企業(yè)實(shí)踐等方法，對廣州潘高壽藥業(yè)股份有限公司、廣州百山制藥有限公司、廣東粵興醫(yī)藥有限公司、廣州天賜高新材料股份有限公司、廣州星群(藥業(yè))股份有限公司、荔灣區(qū)中醫(yī)醫(yī)院、深圳市龍崗區(qū)南灣人民醫(yī)院、廣州白云山明興制藥有限公司、廣州白云山光華制藥有限公司等相關(guān)用人單位進(jìn)行調(diào)研。通過企業(yè)反映發(fā)現(xiàn)，職業(yè)學(xué)校人才培養(yǎng)的效果與企業(yè)需求之間存在著差距，主要表現(xiàn)為學(xué)生的專業(yè)知識不夠扎實(shí)，實(shí)際操作能力較低；知識面窄，學(xué)習(xí)能力、分析和解決問題的能力薄弱；團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神、吃苦耐勞、個(gè)人道德行為欠佳等。造成這樣的差距的原因是多方面的，其中職業(yè)學(xué)校的課程與企業(yè)的工作實(shí)際脫節(jié)是一個(gè)重要的方面。這讓我們深深體會到教學(xué)改革的迫切性。

三、了解微生物課程的開設(shè)情況

不同教材有不同的特點(diǎn)，不同的教學(xué)內(nèi)容也有不同的教學(xué)要求。因此，我們要了解教材、吃透教材，把握編者意圖，順著編者思路去設(shè)計(jì)教學(xué)目標(biāo)，要根據(jù)教學(xué)內(nèi)容的實(shí)際情況去考慮目標(biāo)的側(cè)重點(diǎn)。如，我們通過走訪、問卷和上互聯(lián)網(wǎng)搜索資料等方法，對廣東食品藥品職業(yè)學(xué)院、廣州衛(wèi)生學(xué)校等相關(guān)學(xué)校進(jìn)行調(diào)研，從而了解到相關(guān)學(xué)校的專業(yè)設(shè)置、微生物課程的開設(shè)情況、教材的選用情況、實(shí)踐(實(shí)訓(xùn))教學(xué)的組織和設(shè)置、實(shí)踐(實(shí)訓(xùn))設(shè)備、技能競賽的開展情況等，從而有助于我們更好地組織實(shí)踐教學(xué)。

四、確定微生物實(shí)踐教學(xué)的內(nèi)容和學(xué)生職業(yè)能力培養(yǎng)的目標(biāo)

職業(yè)學(xué)校應(yīng)緊密結(jié)合行業(yè)發(fā)展，培養(yǎng)與企業(yè)需求相匹配的專業(yè)技術(shù)人才。以廣州市醫(yī)藥職業(yè)學(xué)校為例，微生物實(shí)踐教學(xué)目標(biāo)應(yīng)結(jié)合我校近兩年來新的專業(yè)設(shè)置(由原來的藥物制劑、中藥藥劑、藥品營銷、藥物分析檢驗(yàn)、中藥營銷、生物技術(shù)制藥、食品化妝品檢驗(yàn)、制藥設(shè)備維護(hù)、商務(wù)英語等專業(yè)改為制藥技術(shù)、中藥制藥、藥劑專業(yè)、藥品食品檢驗(yàn)、中藥專業(yè)、生物技術(shù)制藥、制藥設(shè)備維修、商務(wù)英語等專業(yè))，結(jié)合專業(yè)的課程設(shè)置、專業(yè)就業(yè)方向和企業(yè)的需要。根據(jù)上述原則，現(xiàn)把我校涉及微生物課程的六大專業(yè)分為三大類。其中第一類主要是制藥技術(shù)、中藥藥劑、藥劑專業(yè)、中藥專業(yè)等，第二類主要是藥品食品檢驗(yàn)專業(yè)，第三類主要是生物技術(shù)制藥專業(yè)。通過把專業(yè)分類，更好、更恰當(dāng)?shù)卮_訂微生物實(shí)踐教學(xué)的內(nèi)容和能力培養(yǎng)的目標(biāo)，使學(xué)生更好地適應(yīng)社會市場的需求。最后，通過技術(shù)人員、專家、教師們討論，歸納出我校微生物課程的典型工作任務(wù)主要為微生物技術(shù)基本要求、安全要求與實(shí)驗(yàn)常用設(shè)備的操作；微生物形態(tài)觀察技術(shù)；微生物人工培養(yǎng)技術(shù)；菌種的選育及保藏技術(shù)；微生物分布檢測技術(shù)；微生物代謝產(chǎn)物的測定技術(shù)；藥物體外抗菌試驗(yàn)；藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)技術(shù)；常用血清學(xué)試驗(yàn)等。

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【關(guān)鍵詞】 硝酸咪康唑搽劑；微生物限度檢查；方法學(xué)驗(yàn)證

Abstract:Objective To establish a method of microbial limit test for miconazole nitrate liniment. Methods Centrifugal sedimentation and culture medium diluted method were used to validate the accuracy and feasibility of microbial limit test.Results The recovery of bacteria， yeast and mould were above 70%. P. aeruginosa and S.aureus were positive and Gramnegative organisms were negative. Conclusions Membrane filtration and the polysorbate 80 sodium chloridepeptone buffer can be used to test the total viable aerobic count and specifiedorganisms (include S. aureus and P. aeruginosa) for miconazole nitrate liniment.

Key words:miconazole nitrate liniment；microbial limit test；method validation

微生物限度檢查法是檢查非規(guī)定制劑及原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、真菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查［1］。但具有抑菌成分的藥品由于其抑菌活性的干擾，常規(guī)檢查結(jié)果不能真實(shí)地反映出藥品中污染微生物的情況，必須先消除供試品中的抑菌活性，再根據(jù)《中國藥典》規(guī)定的方法進(jìn)行檢查，并必須對所采取的檢查方法進(jìn)行驗(yàn)證，以確認(rèn)抑菌活性的消除和檢查方法的可靠性。具有抑菌作用的藥品，每個(gè)品種抑菌效果不同，因此適合各個(gè)品種的微生物限度檢查法也不同。

作者曾用常規(guī)法、培養(yǎng)基稀釋法及薄膜過濾法（用pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗）對硝酸咪康唑搽劑進(jìn)行微生物限度檢查，結(jié)果均不能達(dá)到藥典要求。吐溫80是親水性表面活性劑，具有增溶作用，因此本文選擇用薄膜過濾法聯(lián)用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液做沖洗劑檢查該藥品的細(xì)菌、真菌、酵母菌數(shù)和控制菌，結(jié)果滿意，可為同類藥品的微生物限度檢查法提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

1.1菌種大腸埃希菌(Escherichia coli)［CMCC(B) 44 102］， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］， 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)［CMCC（B）63 501］， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）［CMCC(B)10 104］白色念珠菌(Candida albicans)［CMCC(F) 980011］， 黑曲霉(Asperg illus niger)［CMCC(F) 98003］，由廣東生物研究所提供，菌種代數(shù)均為第3代。

1.2培養(yǎng)基及試劑pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、營養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、虎紅培養(yǎng)基、膽鹽乳糖培養(yǎng)基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂、二鹽酸二甲基對苯二胺試劑、PDP瓊脂培養(yǎng)基、三氯甲烷、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基和革蘭氏染色劑。

1.3樣品硝酸咪康唑搽劑，阿特維斯（佛山）制藥有限公司，批號：0606950，成分：硝酸咪康唑、玫瑰麝香香精、乙醇、二甲基亞砜。

2方法與結(jié)果

2.1菌液制備［1］

2.1.1取經(jīng)37 ℃ 培養(yǎng)18～24 h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌與大腸埃希菌的肉湯培養(yǎng)物1 mL，加入9 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數(shù)50～100 cfu的菌懸液，做活菌計(jì)數(shù)。

2.1.2取經(jīng)25 ℃培養(yǎng)18～24 h的白色念珠菌液體培養(yǎng)物1 mL，加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數(shù)50～100 cfu的菌懸液，做活菌計(jì)數(shù)。

2.1.3接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，培養(yǎng)5～7 d，加入3～5 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含孢子數(shù)50～100 cfu的孢子懸液，做活菌計(jì)數(shù)。

2.2供試液的制備［2］取本品10 mL，加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為1∶10的供試液。

2.3驗(yàn)證方法

2.3.1細(xì)菌、真菌和酵母菌計(jì)數(shù)法回收率的測定

薄膜過濾法聯(lián)用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液作沖洗劑對各試驗(yàn)菌的回收率進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，3次獨(dú)立平行試驗(yàn)結(jié)果的均值見表1［3］。

①試驗(yàn)組：取供試液10 mL到薄膜過濾器中，用無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液沖洗3次，每次100 mL， 并在最后1次沖洗液中加入1 mL的試驗(yàn)菌液（50～100 cfu/mL）沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或虎紅培養(yǎng)基平板上，置30～35 ℃培養(yǎng)48 h或23～28 ℃培養(yǎng)72 h。記錄菌落數(shù)。試驗(yàn)組的菌回收率=(試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對照組的平均菌落數(shù))÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%。

②菌液組［4］：在過濾器中預(yù)先加入大約20 mL的無菌0.9%氯化鈉溶液，再吸取1 mL的試驗(yàn)菌液（50～100 cfu/mL）到過濾器中，過濾。再用100 mL無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗1次，取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或虎紅培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)，培養(yǎng)方法同試驗(yàn)組。

③供試品對照組：方法同試驗(yàn)組，但不加試驗(yàn)菌液。

④稀釋劑對照組：方法與試驗(yàn)組同，其中供試液用pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液代替。稀釋劑對照組的菌回收率=稀釋劑對照組平均菌落數(shù)÷菌液組的平均菌落數(shù)×100%

表1各試驗(yàn)菌株的回收率　略

從表1可知，在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對照組的菌回收率、試驗(yàn)組的菌回收率均不低于70%。可用薄膜過濾法聯(lián)用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗方法檢查硝酸咪康唑搽劑的細(xì)菌、真菌及酵母菌數(shù)。

2.3.2控制菌檢查方法驗(yàn)證

①試驗(yàn)組：取供試液10 mL到薄膜過濾器中， 用無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗3次，每次100 mL， 并在最后一次沖洗液中加入50～100 cfu的試驗(yàn)菌（驗(yàn)證銅綠假單胞菌時(shí)，試驗(yàn)菌為銅綠假單胞菌），沖洗后取出濾膜放入預(yù)先制備好的相應(yīng)培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法檢查。

②陰性菌對照組：方法同試驗(yàn)組，試驗(yàn)菌改為50～100 cfu陰性對照菌（2個(gè)控制菌驗(yàn)證的陰性對照菌均為大腸埃希菌）。

③菌液組 ：在過濾器中預(yù)先加入約20 mL的無菌0.9%氯化鈉溶液，在吸取50～100 cfu試驗(yàn)菌到薄膜過濾器中，用100 mL 0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗1次。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預(yù)先制備好營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，置（36±1）℃培養(yǎng)48 h，記錄活菌數(shù)［5］。

3次平行試驗(yàn)結(jié)果一致，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2對銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的驗(yàn)證結(jié)果　略

從表2可見，用薄膜過濾法聯(lián)用0.1%吐溫pH7.080氯化鈉蛋白胨緩沖溶液作沖洗劑檢查銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌，方法成立。

3討 論

硝酸咪康唑搽劑為廣譜抗真菌藥，主要含有硝酸咪康唑、乙醇和二甲基亞砜等成分，對皮膚癬菌、念珠菌等有抗菌作用，對某些細(xì)菌也有一定抑制作用?！吨袊幍洹?005版規(guī)定，對藥品在微生物限度檢查時(shí)，其方法應(yīng)通過驗(yàn)證，以確認(rèn)供試品的抑菌活性已被消除而保證檢查方法的可靠性。從本品的微生物限度檢查法的建立研究可見，選用薄膜過濾法聯(lián)用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液作沖洗劑來檢查本品的細(xì)菌數(shù)、真菌、酵母菌數(shù)及控制菌（銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌）的方法有效，在細(xì)菌總數(shù)、真菌及酵母菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)菌回收率均能達(dá)到70%以上；銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌檢查實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)組呈陽性反應(yīng)，陰性菌對照組呈陰性反應(yīng)。本文結(jié)果可為同類產(chǎn)品的微生物限度檢查方法驗(yàn)證提供科學(xué)的依據(jù)。

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關(guān)鍵詞：中藥 中藥制劑 微生物限度 滅菌方法 控制方法

Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.550

【中圖分類號】R9 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1671-8801（2013）08-0473-01

在現(xiàn)代醫(yī)療活動中，中藥制劑憑借著其療效確切、毒副作用小、相對安全等特點(diǎn)，在臨床上發(fā)揮著重大的作用。中藥制劑的劑型經(jīng)過不斷革新也逐漸適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療的需要，但中藥制劑都是經(jīng)過原藥材處理加工而來的，尤其對于一些提純程度不高的常用劑型，如散劑、片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑等，有的含有生藥原粉、有的需要加入蜂蜜、糖等輔料，生產(chǎn)工藝相對繁雜、工序多，這些因素都使中藥制劑受微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)加大。下面針對各個(gè)控制點(diǎn)如何防范逐一分析探討。

1 中藥材的預(yù)處理

中藥原藥材因其生長特性，在采收加工過程中不可能完全將附帶的雜質(zhì)和泥沙等除去，這就給微生物的存在和繁殖帶來?xiàng)l件。同時(shí)中藥材本身帶有大量細(xì)菌、蟲卵和泥沙，而且大部分藥材含有糖類、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)成分，在適宜的溫度和濕度下，微生物容易生長繁殖。在實(shí)際生產(chǎn)中，大部分的原藥材都可以進(jìn)行水洗，有資料表明，藥材水洗一般除菌率可達(dá)50%以上。經(jīng)過水洗的藥材可除去大量泥沙和附著在藥材表面的微生物及蟲卵，用流動水來清洗，才會得到較好的效果，同時(shí)清洗前要將個(gè)別霉敗品挑揀干凈，但水洗時(shí)間不宜過長，以防有效成份流失，干燥溫度在80℃以上，否則會造成微生物的再繁殖。

2 選擇合適的中藥材滅菌方法

大部分經(jīng)過預(yù)處理的中藥材，含菌量都會大大降低，但有一些產(chǎn)品僅經(jīng)過預(yù)處理而加工得到的成品微生物限度仍會超標(biāo)，這就需要對原藥材采取適當(dāng)?shù)臏缇胧?/p>

2.1 濕熱滅菌法：現(xiàn)大多數(shù)企業(yè)采用了中藥潤藥機(jī)，在溫度（115±5）℃，蒸汽壓力0.2-0.4Mpa條件下30-60min即可實(shí)現(xiàn)中藥的浸潤、滅菌過程，與傳統(tǒng)方式相比藥材的微生物菌落數(shù)明顯下降。

2.2 干熱滅菌法：干熱滅菌法就是溫度控制在110-130℃滅菌2-3h，主要適用于濕熱方法滅菌無效的非水性物質(zhì)，對熱不穩(wěn)定的含有揮發(fā)性成份藥材不適用。

2.3 輻照滅菌法：主要針對花粉類及花類不能清洗而且不能濕熱滅菌的藥材可采用照射藥材滅菌，用100萬-300萬倫琴射線輻照后能徹底滅菌且對其有效成份的影響很小，滅菌效果幾乎達(dá)到100%。

3 中藥材的粉碎后滅菌

中藥材也可以經(jīng)過預(yù)處理后粉碎成生藥粉再進(jìn)行滅菌，其常用方法有濕熱滅菌、乙醇?xì)怏w滅菌、臭氧滅菌和輻照滅菌，但在方法選擇上一定要保障藥效，考察其主要有效成份受影響程度，慎重選擇滅菌方法。

4 制劑生產(chǎn)過程的工藝衛(wèi)生控制

在中間體得到控制時(shí)，中藥制劑生產(chǎn)過程微生物控制的核心就是工藝衛(wèi)生控制，簡單的說，就是防止外部微生物進(jìn)入半成品中。

4.1 在實(shí)際生產(chǎn)中，清場不徹底往往是導(dǎo)致微生物超標(biāo)的一個(gè)重要原因。設(shè)備死角或操作間的角落遺留的物料就會成為微生的的繁殖地，在下次生產(chǎn)前如不能采取有效的消毒措施，則加工出的半成品微生物限度很可能超標(biāo)。

4.2 對于一些難于清潔的設(shè)備管路處及密閉的部位，要注意在清場后保持干燥，破壞微生物的生存環(huán)境，或在清潔后噴灑75%乙醇來進(jìn)行消毒，乙醇揮發(fā)后也易于干燥。像一步制粒機(jī)、高效包衣機(jī)等設(shè)備，在清潔后可直接用熱風(fēng)烘干。

4.3 通過控制區(qū)的壓差來防止非控制區(qū)或可能造成污染的區(qū)域?qū)刂茀^(qū)造成污染也是一個(gè)很有效的方法。相對潔凈的房間保持正壓，易產(chǎn)生污染的房間保持負(fù)壓，這樣會大大降低污染的風(fēng)險(xiǎn)。

5 其它影響因素控制

5.1 人員：人體是最大的污染源，為了避免人體所帶的細(xì)菌污染藥品，進(jìn)入潔凈控制區(qū)的人員必須按程序更衣、洗手、消毒，按照“穩(wěn)、準(zhǔn)、輕”的原則來操作。同時(shí)要建立嚴(yán)格的衛(wèi)生制度，養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣。

5.2 環(huán)境：空氣可以說是微生物的世界，據(jù)統(tǒng)計(jì)，藥品生產(chǎn)上的污染有20%是由空氣系統(tǒng)帶入的。因此必須保障空氣凈化系統(tǒng)的良好狀態(tài)，按期清洗更換初、中效濾袋，并每周使用臭氧對空間環(huán)境進(jìn)行滅菌。

5.3 輔料：生產(chǎn)中所用的蜂蜜、蔗糖、淀粉等各種輔料都帶有一定數(shù)量的微生物，臨用前也必須嚴(yán)格選擇和適當(dāng)處理。如蜂蜜必需煉制；蔗糖、淀粉等必要時(shí)應(yīng)作微生物檢查。

5.4 工藝用水：中藥制劑使用的飲用水至少應(yīng)符合國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)，而純化水在制備過程中應(yīng)嚴(yán)格控制水質(zhì)并在使用部位取樣監(jiān)控微生物。應(yīng)該注意的是純化水管路的清洗和消毒，一般使用10%食用堿溶液來消毒，根據(jù)管網(wǎng)長度循環(huán)1-2小時(shí)，再用飲用水、純化水中洗至PH呈中性即可。

6 嚴(yán)格執(zhí)行GMP是對微生物限度控制的重要保障

中藥口服固體制劑生產(chǎn)中的許多方面和許多環(huán)節(jié)都有被微生物污染的可能，而把微生物污染降低到最低限度是GMP的主要精髓之一。只有嚴(yán)格執(zhí)行GMP，根據(jù)GMP的要求采取相應(yīng)的措施才能保證中藥制劑的質(zhì)量。實(shí)施GMP，硬件是基礎(chǔ)，但關(guān)鍵是企業(yè)員工執(zhí)行GMP意識的，只有認(rèn)識到執(zhí)行GMP對保障藥品的質(zhì)量的重要性，才能把被動的執(zhí)行GMP轉(zhuǎn)變到自覺的操作中去，這才是對藥品質(zhì)量的最好保障。

參考文獻(xiàn)

[1] 楊工昶.中藥口服固體制劑微生物污染防范措施，時(shí)珍國醫(yī)國藥，2000年第2期第11卷

[2] 林毅等.中藥制劑微生物限度控制方法的研究，中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009年12月第六卷第36期

篇7

關(guān)鍵詞：微生物；轉(zhuǎn)化技術(shù)；現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)；具體應(yīng)用

過去三十年間，微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)在化學(xué)領(lǐng)域內(nèi)不斷地進(jìn)行常識性試驗(yàn)，并且得到了全面的發(fā)展，而在實(shí)際的使用方面，也得到了極為長足的發(fā)展?，F(xiàn)在社會中，大量的運(yùn)用化學(xué)制品，而許多化學(xué)制品都是制作工藝十分復(fù)雜的產(chǎn)品，例如藥品、食品添加劑、化妝品等日常生活中極為常見的生活必需品。而在這些產(chǎn)品的具體合成過程之中，許多重要性的反應(yīng)已經(jīng)可以使用微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)加以代替。因此，本文主要針對這一技術(shù)在現(xiàn)代社會中的具體應(yīng)用加以分析。

1 微生物轉(zhuǎn)化的簡要概況

所為的微生物轉(zhuǎn)化就是使用微生物將一種物質(zhì)轉(zhuǎn)化為另一種物質(zhì)的這樣一個(gè)過程，這一個(gè)過程主要是建立在微生物產(chǎn)生一種特殊的細(xì)胞內(nèi)部的酶作為生物催化劑展開的化學(xué)反應(yīng)。簡單來說，是使用一種以微生物為基礎(chǔ)進(jìn)行合成的技術(shù)。這些酶對于微生物來說，是生命過程中的必需品，而在具體微生物的轉(zhuǎn)換過程中，這些酶僅僅是作為一種催化劑而存在的。另外，在使用微生物進(jìn)行處理過程之中，不僅僅是需要利用相似的產(chǎn)品，并且在相似產(chǎn)品中增加的底物也存在著同樣的催化作用，所以我們可以將微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)看做有機(jī)化學(xué)的一個(gè)特殊的分支。

之所以微生物能夠?qū)⒛撤N物質(zhì)轉(zhuǎn)化成為另一種物質(zhì)，主要是因?yàn)槊傅淖饔?。我們不需要對酶進(jìn)行解釋，只需要了解酶的轉(zhuǎn)化和微生物的轉(zhuǎn)化之間存在著細(xì)小的差別，酶是一種單一的化學(xué)反應(yīng)，后者則是提供了一種合成酶的場所和反應(yīng)。所以，從這一個(gè)方面來看，微生物轉(zhuǎn)化是一種真正的生物轉(zhuǎn)化。另外，因?yàn)樯镛D(zhuǎn)化過程中所使用的酶多數(shù)來自微生物，我們也可以從動植物中找到所需要的酶。因此再具體的微生物轉(zhuǎn)化過程中，究竟是選擇使用酶還是微生物進(jìn)行轉(zhuǎn)化，需要綜合考慮多種因素，比如成本、例如環(huán)境以及生產(chǎn)機(jī)構(gòu)的設(shè)備質(zhì)量等方面。

同時(shí)，在研究微生物的具體轉(zhuǎn)化過程中，需要充分考慮多個(gè)方面的問題，例如如何選擇要轉(zhuǎn)換的物質(zhì)，所選擇微生物的具體應(yīng)用那個(gè)能力，轉(zhuǎn)化的方式以及具體轉(zhuǎn)化反應(yīng)的選擇等。這其中最關(guān)鍵的一點(diǎn)在于選擇轉(zhuǎn)化過程中的合適的微生物，以及如何提高這種微生物的轉(zhuǎn)化能力，也就是酶的活力應(yīng)該如何的提高。另外，一旦發(fā)現(xiàn)一種新的酶或者一種新的反應(yīng)就要設(shè)計(jì)一種新的轉(zhuǎn)化過程。要想尋找十分合適的微生物，除了要十分了解酶的反應(yīng)，更加有效方法是通過篩選的方式來選擇酶。

篩選的方式選擇酶，所要涉及的范圍必須盡可能的寬廣，因?yàn)榻刂沟浆F(xiàn)在已經(jīng)出現(xiàn)了將近3000多種的酶，這些酶中有些酶的催化效果明顯好過化學(xué)催化劑。另外，微生物呈現(xiàn)出多樣性，從而能夠幫助我們找到我們在預(yù)先設(shè)計(jì)中所想要得到的一種反應(yīng)。

2 具體藥物開發(fā)過程中的使用

現(xiàn)在越來越多的專家研究發(fā)現(xiàn)，作為藥物使用的一種混合物有著不容忽視的弊端，而在最近一段時(shí)期美國FDA公布的一些藥物使用原則加快了轉(zhuǎn)換技術(shù)從已經(jīng)開發(fā)出來的藥物中開發(fā)出單一藥物的腳步。

而制作手性藥物的關(guān)鍵之處在于不能對稱的一張合成型技術(shù)，并且長久以來，許多化學(xué)專家都開發(fā)使用化學(xué)藥品來展開不對稱合成技術(shù)的研究和發(fā)展。然而在最近的20年間，越來越多的化學(xué)專家將研究的目光頭像到如何將微生物轉(zhuǎn)化更好地運(yùn)用到有機(jī)合成之中產(chǎn)生了興趣。應(yīng)用微生物進(jìn)行催化的技術(shù)要比使用化學(xué)合成以及不對稱合成的方式具有更加明顯的優(yōu)勢，主要在于這樣幾點(diǎn)：（1）轉(zhuǎn)化物質(zhì)具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移性，也就是不需要專門的基因保護(hù)；（2）使用微生物進(jìn)行轉(zhuǎn)化條件更加優(yōu)越，有著極高的轉(zhuǎn)化率；（3）而在生物轉(zhuǎn)化過程中對于外界的影響更小，尤其是對環(huán)境的污染方面。特別是近年來DNA重組技術(shù)的應(yīng)用和新的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的開發(fā)應(yīng)用，使愈來愈多的原來使用化學(xué)方法進(jìn)行不對稱合成的化合物有可能被生物催化轉(zhuǎn)化的方法來替代。

利用生物轉(zhuǎn)化技術(shù)進(jìn)行手性藥物的開發(fā)主要進(jìn)行兩個(gè)方面的工作：一是進(jìn)行藥物關(guān)鍵中間體的制備，因?yàn)槔蒙锎呋D(zhuǎn)化方法制備對映體純化合物具有很大的吸引力，但試圖利用這種方法來完成所期望的復(fù)雜的有機(jī)合成往往是困難的，甚至是不可能的，而利用這種方法獲得某一關(guān)鍵中間體是切實(shí)可行的；另外，盡管用化學(xué)的方法能夠在實(shí)驗(yàn)室條件下獲得所需要的手性藥物，但往往是由于成本和技術(shù)問題難以實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。因此用化學(xué)一生物一化學(xué)的制備路線具有獨(dú)特的優(yōu)越性，即所謂的“綠色合成工藝”；二是進(jìn)行消旋化合物的生物拆分或轉(zhuǎn)化，得到單一構(gòu)型的藥物分子。

3 組合生物催化與新藥發(fā)現(xiàn)

組合生物轉(zhuǎn)化/催化，是指利用一種以上的具有特殊轉(zhuǎn)化功能的微生物或酶，對同一個(gè)母體化合物進(jìn)行組臺轉(zhuǎn)化，以得到化學(xué)結(jié)構(gòu)的多樣性，它是從已知化合物中尋找新型衍生物以及從簡單化臺物制備復(fù)雜化合物的有效手段。從某種角度講，它比化學(xué)合成的方法更為簡單和有效。這是一個(gè)新的研究領(lǐng)域。

天然產(chǎn)物的多樣性和其結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，是存在于生物體內(nèi)大量酶的作用結(jié)果。生物體內(nèi)負(fù)責(zé)一系列重要生命活動的酶，在體外同樣具有相同的催化能力。因此，只要體外的催化環(huán)境與體內(nèi)相仿，則能夠?qū)崿F(xiàn)一系列復(fù)雜的，特別是用傳統(tǒng)化學(xué)合成方法難以實(shí)現(xiàn)的化學(xué)反應(yīng)。利用生物催化劑或化學(xué)合.成一酶催化相結(jié)合的方法，能夠大大地增加衍生物的多樣性，以及能夠有效地對復(fù)雜天然產(chǎn)物的結(jié)果修飾和從簡單的分子構(gòu)建新的化合物庫，在這過程中，往往能夠發(fā)現(xiàn)新的生理活性物質(zhì)。生物催化劑為擴(kuò)大組合化學(xué)提供了各種合成的可能性。

利用生物催化發(fā)現(xiàn)先導(dǎo)化合物的優(yōu)越性在于：（1）可能進(jìn)行反應(yīng)的范圍廣；（2）能夠定向進(jìn)行區(qū)域選擇性和立體選擇性；（3）不需基團(tuán)保護(hù)和脫保護(hù)，一步實(shí)現(xiàn)所需的反應(yīng)；（4）在溫和和均一的條件下可容易地實(shí)現(xiàn)自動化和一步反應(yīng)的重現(xiàn)性；（5）溫和的反應(yīng)條件保證了復(fù)雜易變的分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性；（6）高的催化活性可以降低催化劑的用量；（7）酶的固定化可以使催化劑反復(fù)和循環(huán)使用；（8）生物催化劑可在環(huán)境中完全被降解。

結(jié)束語

綜上所述，微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)在現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)中起到十分重要的作用，并且對于藥物等日常生活用品的生產(chǎn)方面也起到十分突出的作用。這就要求我們做好這一方面的具體工作，并且詳細(xì)考慮在合適的場所選擇合適的酶或者生物轉(zhuǎn)化技術(shù)來進(jìn)行生產(chǎn)和轉(zhuǎn)化，從而確保生產(chǎn)產(chǎn)品的優(yōu)異質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]陳代杰，朱寶來.微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)在現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用[J].全國抗生素學(xué)術(shù)會議，2005.

篇8

關(guān)鍵詞:微生物檢驗(yàn);質(zhì)量控制;培養(yǎng)基

引言

當(dāng)前，隨著食品安全問題關(guān)注度的不斷提高，很多食品制造企業(yè)日益重視檢驗(yàn)食品微生物，以此來對食品生產(chǎn)進(jìn)行監(jiān)測，盡早檢測出食品所受微生物的污染狀況，這樣企業(yè)就可采取有效措施最大限度降低微生物的危害，盡可能地保障食品的安全性。在有關(guān)食品衛(wèi)生的微生物檢驗(yàn)方法及檢驗(yàn)步驟等方面，國家相關(guān)部門雖然已作了很詳細(xì)的說明，但在實(shí)際操作中還存在很多對檢驗(yàn)結(jié)果帶來偏差的復(fù)雜因素，由于對這些因素的不夠重視，致使檢驗(yàn)結(jié)果不夠準(zhǔn)確，從而無法對食品的衛(wèi)生狀況進(jìn)行正確評價(jià)，也就未能對產(chǎn)品生產(chǎn)進(jìn)行有效監(jiān)督和指導(dǎo)?；诖?，對食品微生物檢驗(yàn)中的質(zhì)量控制問題，進(jìn)行一些分析和探討。

1做好培養(yǎng)基的制備

1.1配制培養(yǎng)基

要嚴(yán)格依據(jù)處方來進(jìn)行培養(yǎng)基配制，且應(yīng)做好仔細(xì)記錄。在培養(yǎng)基處方中，其成分多數(shù)為生物制品，不同廠家所生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量會存在一些差異，故應(yīng)做好配方中不同原理成分的質(zhì)量控制。此外，所用到的各成分的所有特征應(yīng)及時(shí)做好記錄，對于自制培養(yǎng)基各成分，應(yīng)按順序分別進(jìn)行添加，在分裝滅菌之前應(yīng)確保各成分完全均勻。

1.2應(yīng)用干粉培養(yǎng)基

當(dāng)前已有一系列專業(yè)化干燥培養(yǎng)基用于微生物實(shí)驗(yàn)行業(yè)中，這些干燥培養(yǎng)基不僅使用高效，而且使用便利，故被廣泛應(yīng)用于微生物實(shí)驗(yàn)行業(yè)中。通常那些專業(yè)培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家都有一套規(guī)范的生產(chǎn)工藝，可嚴(yán)格控制好原材料及產(chǎn)品，以此來確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。微生物檢驗(yàn)所用的那些藥品、干燥培養(yǎng)基或試劑，一定要滿足以下條件:①專業(yè)廠家所生產(chǎn)的質(zhì)量符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品。②具有生產(chǎn)商所提供的編號、名稱、批號及各組成成分。③具有生產(chǎn)商所提供的培養(yǎng)基使用前的pH值、有效期及儲存資料。這樣就可讓使用者及時(shí)記錄產(chǎn)品和比較產(chǎn)品。

2做好培養(yǎng)基的水化

2.1選擇好培養(yǎng)基水化的容器

為避免離子進(jìn)入培養(yǎng)基，不得把鐵鍋或銅鍋等容器用于培養(yǎng)基的水化中，以此來確保微生物的正常生長。此外，為不改變培養(yǎng)基的pH值，在加熱過程中盡可能地避免新玻璃瓶釋放出堿性物質(zhì)。為避免加熱溶解過程中溢出培養(yǎng)基，所用容器大小應(yīng)不小于兩倍的復(fù)水后培養(yǎng)基總體積。

2.2選擇好培養(yǎng)基水化的用水

所用的水，一定不得含有可影響微生物生長的物質(zhì)，最好是蒸餾水，特別不得用那些受到污染的去離子水，因?yàn)檫@些水即使通過過濾也還是含有一些抑制微生物生長的東西。由于自來水含有諸如氯等抗菌物質(zhì)，故一般不用這類水。在水化培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)按步驟不斷把適量的水加入，首先在容器中加入三分之一的水量并予以一定的震蕩，然后再把剩下的三分之二水量加滿，并把容器壁上的那些培養(yǎng)基粉順勢沖下。

2.3稱量培養(yǎng)基

為預(yù)防交叉污染而對實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來影響，在稱量過程中一定要使用專用的角匙，并確保在這一過程中盡可能地不吸入諸如選擇性培養(yǎng)基等粉末，盡可能地避免在濕度高的房間稱取培養(yǎng)基，這樣可有效防止因培養(yǎng)基吸潮二酸化培養(yǎng)基等結(jié)果的產(chǎn)生。對于干粉培養(yǎng)基，一定要基于生產(chǎn)商所提供的相關(guān)說明來完成配制。

3做好培養(yǎng)基的物理學(xué)和生物學(xué)的質(zhì)量控制

3.1關(guān)于培養(yǎng)基的物理學(xué)質(zhì)控

商品化的干燥培養(yǎng)基，為能獲得長期保存培養(yǎng)基的光敏感性成分的活性劑干燥性，其包裝一定要充分密封，所制備的培養(yǎng)基平板一定要具備相應(yīng)的顏色，例如，血平板通常就制作為血紅色。正常情況下，所制備的培養(yǎng)基一定是沒有沉淀、沒有渾濁。不管是在實(shí)施培養(yǎng)基的溶解、還是凝固，都必須做好其適宜溫度的檢測，例如，就傾注平板的培養(yǎng)基而言，為便于低溫傾注平板，其凝固溫度一般應(yīng)低于40℃，這樣可最大限度避免樣品中的微生物受到熱損傷。

3.2關(guān)于培養(yǎng)基的生物學(xué)質(zhì)控

在完成培養(yǎng)基滅菌之后，為檢驗(yàn)和獲得所需滅菌的效果，一定要進(jìn)行無菌實(shí)驗(yàn)的操作，具體可選用培養(yǎng)基目標(biāo)菌生長率和非目標(biāo)菌的選擇因子進(jìn)行測試。此外，對于菌落大小以及相應(yīng)的生理生化特性也必須進(jìn)行檢測。對于不同批次的產(chǎn)品，都要使用與其相對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行檢定，而且對于每1次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，都要加以詳細(xì)地記錄。

4結(jié)語

做好微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作的重要前提就是要控制好培養(yǎng)基的質(zhì)量，這直接關(guān)系到整個(gè)檢驗(yàn)工作的可靠性及準(zhǔn)確性，這個(gè)環(huán)節(jié)在整個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作中處于極為重要的地位。因此，在實(shí)際生產(chǎn)過程中，就食品微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基的質(zhì)量控制這個(gè)問題進(jìn)行深入分析和探討，這對于培養(yǎng)基質(zhì)量控制水平的不斷提高并不斷為微生物實(shí)驗(yàn)室檢測提供質(zhì)量可靠的培養(yǎng)基，均具有極為重要的意義。

參考文獻(xiàn):

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［2］杜偉．微生物檢測用培養(yǎng)基、試劑質(zhì)量控制方法研究［J］．中國微生物雜志，2013(5)．

篇9

論文摘要：介紹了獸醫(yī)用抗微生物藥當(dāng)前發(fā)展及應(yīng)用的現(xiàn)狀，指出必須根據(jù)動物疾病的種類、藥物的理化性質(zhì)、動物的生理特性，科學(xué)規(guī)范地使用抗微生物藥物（抗生素），才能很好地解決生產(chǎn)實(shí)踐中的問題。

抗微生物藥是指對病原微生物（細(xì)菌、病毒、支原體、真菌等）具有抑制或殺滅作用的藥劑，主要用于全身感染的藥物，包括抗生素、化學(xué)合成抗菌藥、抗真菌藥與抗病毒藥?？刮⑸锼幤酚糜谂R床獸醫(yī)已有多年，在促進(jìn)動物生長、提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益方面發(fā)揮了重要的作用。從20世紀(jì)50年代開始至今，大量的試驗(yàn)表明，抗微生物類藥物具有較好的免疫調(diào)節(jié)作用，能增強(qiáng)或減弱機(jī)體免疫功能。但廣泛應(yīng)用也帶來了許多新問題，如不合理使用和濫用造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失、藥物殘留間接危害人類健康等。

1抗微生物藥物免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制

抗微生物藥物的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制常見的有：

（1）影響巨噬細(xì)胞粘附、趨化、吞噬和殺菌作用。

（2）影響抗原或有絲分裂原刺激下淋巴細(xì)胞向母細(xì)胞分化、增殖。

（3）影響抗體生成和補(bǔ)體活化。

（4）使免疫器官受到抑制，進(jìn)而使免疫活性細(xì)胞的生長受到抑制，或使其易于破壞。

（5）穿過細(xì)胞膜進(jìn)入某些細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞和免疫活性細(xì)胞，直接破壞細(xì)胞的吞噬功能、生長代謝功能以及產(chǎn)生各種細(xì)胞因子的功能。

2藥物殘留的檢驗(yàn)方法

抗菌藥物的廣泛使用，使耐藥問題日益突出。肉類、蛋類及乳品內(nèi)的藥物殘留成為影響人類健康最為嚴(yán)重的問題。藥物殘留的檢驗(yàn)成為控制藥物殘留的關(guān)鍵。測定藥物殘留的方法很多，大致可分為3種：一是利用生物測定法（Bioassay），二是化學(xué)分析法（Chemicalanaiysis），三是兼生物和化學(xué)的酶聯(lián)免疫檢查法（Enzymeimmunoassay）。

為能快速確定動物食品中是否有殘留及大致確定殘留藥物的類別，國外通常做法是遵循一定程序?qū)Ρ粶y產(chǎn)品進(jìn)行取樣，按規(guī)范要求對樣品進(jìn)行快速篩選檢驗(yàn)，然后再用更精確的方法確證超標(biāo)藥物的品種和準(zhǔn)確含量。在快速篩選檢驗(yàn)的程序中，細(xì)菌抑菌試驗(yàn)法起到非常重要的作用，它可在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行大批量樣品的實(shí)驗(yàn)，而且經(jīng)濟(jì)、敏感性好。

3藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)是臨床選用抗生素藥物的重要論據(jù)。不斷推出的新抗生素藥物在與疾病斗爭中做出了巨大的貢獻(xiàn)，但由于抗生素的濫用，導(dǎo)致臨床致病菌耐藥率越來越高，多重耐藥菌感染日益增多，臨床抗感染工件日趨困難，這種現(xiàn)象必須引起醫(yī)藥工作者的高度關(guān)注。

由于經(jīng)濟(jì)原因及部分地區(qū)缺乏相應(yīng)的臨床用藥監(jiān)測條件，個(gè)體化給藥無法開展。細(xì)菌藥敏試驗(yàn)也不普及，在使用抗生素時(shí)只憑經(jīng)驗(yàn)和習(xí)慣性用藥，常造成本地區(qū)抗生素的亂用和濫用，致使耐藥株增加。

4抗微生物藥物PK-PD研究

藥代動力學(xué)（Pharmacokinetics，PK）和藥效動力學(xué)（Phar-macodynamics，PD）研究可以描述藥物對微生物產(chǎn)生效應(yīng)的時(shí)間動力學(xué)過程及時(shí)間作用類型，對評價(jià)藥物的有效性、推測最佳治療劑量和用藥間隔、不良反應(yīng)最小化以及避免或減少藥物耐藥性都有指導(dǎo)性的作用。因此，PK-PD研究是抗菌藥物合理應(yīng)用的基礎(chǔ)，對于全面反映藥物、宿主及微生物三者之間的關(guān)系，評價(jià)藥物療效，制定最佳臨床給藥方案具有重要的理論和實(shí)際意義。

PK-PD整合用于優(yōu)化獸藥給藥方案剛剛起步，相比人藥在此方面的研究仍有較大的差距，應(yīng)進(jìn)行各種藥物在動物體內(nèi)體外的試驗(yàn)來獲得數(shù)據(jù)并用于獸藥給藥方案的優(yōu)化。給藥方案的優(yōu)化體現(xiàn)在細(xì)菌的清除和癥狀的痊愈、耐藥菌出現(xiàn)的幾率最低、不良反應(yīng)減少等方面。在獸藥抗微生物藥物的臨床應(yīng)用中，PK-PD參數(shù)對制訂合理有效的給藥方案、降低獸醫(yī)臨床上細(xì)菌耐藥性有重要意義，有望成為未來獸藥生產(chǎn)廠家藥物開發(fā)與研究、設(shè)計(jì)合理劑型與給藥方案的重要依據(jù)。

5獸用微生物制品技術(shù)開發(fā)

作為畜禽疾病預(yù)防控制的有力武器，獸用生物制品在畜牧業(yè)的發(fā)展中發(fā)揮著越來越重要的作用。畜牧業(yè)的發(fā)展帶動了獸用生物制品的技術(shù)進(jìn)步，后者的進(jìn)步又促進(jìn)了畜牧業(yè)的繁榮。同時(shí)也應(yīng)該看到，作為一種特殊的獸藥，其研究成果為動物與人類的健康、現(xiàn)代生物科學(xué)探索等做出了巨大貢獻(xiàn)。但由于生物制品本身的特性和安全防護(hù)方面的漏洞，也會出現(xiàn)某些生物災(zāi)害，造成不應(yīng)有的損失。

微生物制品是抗生素、化學(xué)藥品、激素類的理想替代品。它除具有中草藥的優(yōu)點(diǎn)外，還有一般中草藥沒有的優(yōu)點(diǎn)，即對畜禽的營養(yǎng)作用。微生物制品的研制、應(yīng)用理論目前日趨成熟和完善，微生物制品生產(chǎn)工藝由實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)向工廠化，生產(chǎn)品種規(guī)格日益豐富，為獸用微生物制品的開發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。

微生物制品的生產(chǎn)應(yīng)用也存在一些問題，如發(fā)酵生產(chǎn)難度大、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)難統(tǒng)一，加工儲運(yùn)過程中耗氧、高溫均使其大量失活，動物胃酸對微生物有滅活作用，在胃腸道定植能力不強(qiáng)，顆粒飼料制粒過程中微生物失活，使用效果不穩(wěn)定。因此，微生物制品生產(chǎn)、應(yīng)用技術(shù)開發(fā)要圍繞以下問題進(jìn)行：一是微膠囊包埋；二是研制微生物在動物消化道中賴以生存的營養(yǎng)物質(zhì)，如寡糖。

6抗微生物藥的合理應(yīng)用

抗微生物藥物是目前獸醫(yī)臨床使用最廣泛和最重要的藥物，對控制家禽傳染病起著巨大的作用，但當(dāng)前不合理用藥較為嚴(yán)重，常造成治療失敗、不良反應(yīng)增多、藥品浪費(fèi)、細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生、獸藥殘留等，為了充分發(fā)揮抗菌藥物的療效，必須切實(shí)合理地使用抗菌藥物。

（1）嚴(yán)格掌握適應(yīng)癥。推斷或判定病原微生物，選用適當(dāng)藥物，如革蘭氏陽性菌感染可選用青霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類等，革蘭氏陰性菌感染可選用氨基糖苷類、氯霉素類和氟喹諾酮類等，雞慢性呼吸道病選用氟喹諾酮類、泰樂菌素、泰妙菌素等。

（2）制定給藥方案。根據(jù)藥動學(xué)特征，制定合理的給藥方案，保證劑量合適、療程充足和防止不良反應(yīng)。

（3）避免耐藥性的產(chǎn)生。不濫用抗菌藥物，能不用盡量不用，單一藥物有效不要聯(lián)合用藥；及時(shí)、足量、療程恰當(dāng)；盡量避免局部用藥和長期用藥；病因不明或病毒性感染不要輕易使用抗菌藥物。

（4）強(qiáng)調(diào)綜合性治療措施。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，改善家禽體況，增強(qiáng)機(jī)體免疫力；糾正水、電解質(zhì)平衡失調(diào)等。

（5）抗菌藥物的聯(lián)合應(yīng)用要合理。①聯(lián)合用藥必須有明確的特征：一種藥物不能控制的嚴(yán)重感染或混合感染；病因未明危及生命的嚴(yán)重感染；易出現(xiàn)耐藥性的細(xì)菌感染；需長期治療的慢性疾病。②必須根據(jù)抗菌藥的作用特性和機(jī)理進(jìn)行選擇，避免盲目組合。根據(jù)抗菌藥物作用特點(diǎn)，可將抗微生物藥分為4類：Ⅰ類為速效殺菌劑，如青霉素類、頭孢菌素類；Ⅱ類為慢效殺菌劑，如氨基糖苷類、多黏菌素類；Ⅲ類為速效抑菌劑，如四環(huán)素類、氯霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類；Ⅳ類為慢效抑菌劑，如磺胺類。I類與Ⅱ類合用出現(xiàn)協(xié)同作用，I類與Ⅲ類合用出現(xiàn)拮抗作用，I類與Ⅳ類合用無明顯影響，其他合用多出現(xiàn)相加或無關(guān)作用。作用機(jī)理相同的藥物合用療效并不增強(qiáng)，但可能相互增加毒性或出現(xiàn)拮抗作用，如氨基糖苷類之間或氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、林可霉素類之間。③注意藥物間配伍禁忌。

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篇10

[關(guān)鍵詞] 腎寧合劑；微生物限度檢查；驗(yàn)證；大腸埃希菌

[中圖分類號] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2013）06（b）-0078-02

腎寧合劑是本院結(jié)合臨床研制的醫(yī)院制劑，由黃芪、益母草、敗醬草、川芎等組成，具有益氣活血、利水消腫、調(diào)節(jié)免疫功能的功效，用于急慢性腎炎、腎病綜合征、糖尿病性腎病、急慢性腎功能衰竭等疾病。據(jù)調(diào)查目前微生物限度不合格是醫(yī)院制劑不合格的主要因素之一[1]，為控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究按照2010年版《中華人民共和國藥典》（簡稱“中國藥典”）附錄的相關(guān)規(guī)定[2]，參考相關(guān)文獻(xiàn)對腎寧合劑微生物限度檢查方法進(jìn)行了驗(yàn)證[3-4]，以保證患者用藥的安全有效，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 供試品

腎寧合劑，規(guī)格：100 ml，由本院制劑室生產(chǎn)；批號：20120413。

1.2 培養(yǎng)基

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，批號：110116；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，批號：110112；玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，批號：110112；4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養(yǎng)基（MUG），批號：100820；pH 7.0改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基，批號：101106；無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，批號：100824。以上培養(yǎng)基均由北京三藥科技開發(fā)公司提供。

1.3 驗(yàn)證試驗(yàn)用菌種

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]，大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]，枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63501]，黑曲霉（Aspergil1us niger）[CMCC（F）98003]，白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98001]。以上菌種均由中國藥品生物制品檢定研究院提供。

1.4 儀器和設(shè)備

SHINVA立式壓力蒸汽滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司），超凈工作臺（蚌埠凈化設(shè)備廠），LRH-250生化培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），HTY-2000A集菌儀，HTY反復(fù)使用集菌培養(yǎng)器（杭州高得醫(yī)療器械有限公司）等。

2 細(xì)菌、真菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證

2.1 菌液制備

接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基上，經(jīng)25℃培養(yǎng)18～24 h，取1 ml加入到9 ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5，為50～100 CFU/ml菌懸液備用。

接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌與枯草芽胞桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基上，經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24 h，取1 ml加入到9 ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-6～10-7（50～100 CFU/ml）的菌懸液備用。

接種黑曲霉菌的新鮮培養(yǎng)物于改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，25℃培養(yǎng)5 d，加入0.05% 聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液5 ml，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每毫升含孢子數(shù)50～100 CFU的孢子懸液，備用。

將上述5種菌液分別接種至相應(yīng)的培養(yǎng)基上，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌，35℃培養(yǎng)2 d；黑曲霉、白色念珠菌，25℃培養(yǎng)2～3 d。

2.2 供試液制備

取供試品10 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，制成1︰10的供試液。

2.3 細(xì)菌、真菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證

供試品對照組：取1∶10的供試液1 ml，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，凝固后，置規(guī)定溫度下，細(xì)菌培養(yǎng) 24～48 h，白念珠菌和黑曲霉菌培養(yǎng) 48～72 h，按菌落計(jì)數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。試驗(yàn)組：取1∶10的供試液1 ml和50～100 CFU/ml試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基及玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，5種試驗(yàn)菌株每株試驗(yàn)菌分別制備2個(gè)平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。菌液組：取各試驗(yàn)菌 50～100 CFU注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個(gè)平皿，凝固后，置規(guī)定溫度下，細(xì)菌培養(yǎng)24～48 h，白色念珠菌和黑曲霉菌培養(yǎng)48～72 h，測定所加入的實(shí)驗(yàn)菌數(shù)。

試驗(yàn)組回收率計(jì)算：回收率=（試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對照組平均菌落數(shù)）/菌液組的平均菌落數(shù)×100%。

驗(yàn)證結(jié)果提示，5株試驗(yàn)菌人工染菌回收率達(dá)到70%以上，表明采用常規(guī)法做驗(yàn)證試驗(yàn)，方法可行（表1）。

3 控制菌檢查方法的驗(yàn)證（常規(guī)法）

試驗(yàn)組：取1∶10的供試液10 ml和小于100 CFU/ml大腸埃希菌試驗(yàn)菌液加到100 ml膽鹽乳糖増菌培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)24～48 h。取培養(yǎng)物0.2 ml，接種至含MUG培養(yǎng)基5 ml的試管中，35℃培養(yǎng)24 h，在366 nm紫外燈下觀察熒光，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對照。試驗(yàn)管MUG為陽性，靛基質(zhì)試驗(yàn)為陽性，本底對照管為陰性。

陰性菌對照組：同試驗(yàn)組，取小于100 CFU的金黃色葡萄球菌加入到100 ml膽鹽乳糖増菌培養(yǎng)基中。陰性菌對照組MUG為陰性，靛基質(zhì)試驗(yàn)為陰性，本底對照管為陰性。

上述驗(yàn)證結(jié)果提示試驗(yàn)組檢出了大腸埃希菌，而陰性菌對照組未檢出金黃色葡萄球菌，說明可采用常規(guī)法對本品進(jìn)行控制菌（大腸埃希菌）檢查。

根據(jù)以上驗(yàn)證結(jié)果，腎寧合劑的微生物限度檢查按照中國藥典2010年版第一部附錄微生物限度檢查法（附錄ⅧC）檢查，細(xì)菌、真菌及酵母菌數(shù)測定和控制菌檢查均可采用常規(guī)法檢驗(yàn)。具體方法如下：

供試液制備：取本品供試液10 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，制成1∶10的供試液。

細(xì)菌數(shù)測定：取1∶10、1∶100、1∶1000的供試液，采用平皿法測定，符合規(guī)定。

真菌及酵母菌數(shù)測定：取1∶10、1∶100、1∶1000的供試液，采用平皿法測定，符合規(guī)定。

大腸埃希菌的檢查：取1∶10的供試液10 ml，加入到膽鹽乳糖增菌培養(yǎng)基100 mL中，依法檢查，符合規(guī)定。

4 討論

腎寧合劑是由多種中藥材經(jīng)水煎煮醇沉提取后制成的澄明液體，含有多糖、淀粉、蛋白質(zhì)類物質(zhì)，這些物質(zhì)為微生物繁殖提供了營養(yǎng)條件。如果微生物度檢查呈假陰性，當(dāng)樣品存放后使用，會產(chǎn)生大量微生物甚至致病菌，因此對腎寧合劑進(jìn)行微生物限度檢查具有重要意義[5]。

本試驗(yàn)中菌液經(jīng)稀釋至適宜濃度后，若在室溫下放置，應(yīng)在2 h內(nèi)使用，若保存在2～8℃可在24 h內(nèi)使用，以確保細(xì)菌活性及菌數(shù)穩(wěn)定[6-7]。本試驗(yàn)經(jīng)過考查證明，以1∶10腎寧合劑樣品作為最低稀釋級供試液，能夠消除藥品在微生物限度檢查中的抑菌作用，5種試驗(yàn)菌的回收率均大于70%，表明稀釋劑 pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液無抑菌作用[8]，對實(shí)驗(yàn)無干擾，符合中國藥典要求。

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