生物藥劑及藥物動力學(xué)范文
時(shí)間：2023-11-20 17:53:45
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篇1
1合理規(guī)劃教學(xué)內(nèi)容，突出教學(xué)重點(diǎn)
徐州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥學(xué)專業(yè)生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)課程設(shè)有70學(xué)時(shí)(其中理論課48學(xué)時(shí)，實(shí)驗(yàn)課22學(xué)時(shí))，開課時(shí)間為大四第一學(xué)期，所用教材為印曉星教授、楊帆教授主編的《生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)》。教學(xué)內(nèi)容分為生物藥劑學(xué)和藥物動力學(xué)兩部分:生物藥劑學(xué)部分主要闡明生物藥劑學(xué)的基本理論，從藥物的體內(nèi)過程出發(fā)，詳細(xì)介紹藥物的理化性質(zhì)、劑型因素以及機(jī)體的生物因素對藥物療效的影響，討論生物藥劑學(xué)對新藥開發(fā)的指導(dǎo)作用;而藥物動力學(xué)則詳細(xì)闡述藥物動力學(xué)的傳統(tǒng)理論，并對其在新藥研發(fā)和臨床合理用藥等具體應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)的闡述。由于教學(xué)內(nèi)容多，課程課時(shí)并不充足，這就需要充分理解教材，把握教學(xué)重點(diǎn)，在教學(xué)過程中結(jié)合實(shí)際情況對教材內(nèi)容適當(dāng)取舍。對于生物藥劑學(xué)部分的內(nèi)容，如影響藥物吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)的生理因素和劑型因素等，與藥理學(xué)課程知識內(nèi)容具有一定的重復(fù)性，我們在講解過程中主要以復(fù)習(xí)提要為主，簡要概述相關(guān)內(nèi)容即可。而對藥物動力學(xué)部分的內(nèi)容，我們在教學(xué)中對冗長的數(shù)學(xué)公式推導(dǎo)進(jìn)行了精簡，并對晦澀繁雜的理論構(gòu)建過程適當(dāng)壓縮。以藥動學(xué)理論經(jīng)典的四大模型(房室模型、統(tǒng)計(jì)矩模型、生理藥動學(xué)模型、藥動－藥效結(jié)合模型)為基礎(chǔ)重點(diǎn)介紹，并著重闡述指導(dǎo)新藥研發(fā)及臨床用藥的主要理論公式的意義及應(yīng)用。將治療藥物監(jiān)測、給藥方案設(shè)計(jì)、特殊人群藥物代謝動力學(xué)、藥物相互作用、疾病狀態(tài)下的臨床藥物代謝動力學(xué)等內(nèi)容以專題講座的形式進(jìn)行講解，使學(xué)生不斷鞏固藥動學(xué)原理在臨床實(shí)際工作中的具體應(yīng)用。這種對教學(xué)內(nèi)容的調(diào)整，突出了臨床用藥評價(jià)的重要性，培養(yǎng)了學(xué)生藥學(xué)服務(wù)的理念。此外，在教學(xué)內(nèi)容上注重知識的更新，及時(shí)將本領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)及前沿問題融入教學(xué)中。如在講解口服藥物吸收的評價(jià)方法時(shí)向?qū)W生介紹Caco－2細(xì)胞模型的應(yīng)用;在講解藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝過程時(shí)，向?qū)W生介紹藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體在藥物相互作用及腫瘤耐藥中的重要作用等。
2合理應(yīng)用多種教學(xué)形式
2．1多媒體教學(xué)與板書相結(jié)合現(xiàn)代教學(xué)中，多媒體作為一種現(xiàn)代化教學(xué)手段已經(jīng)被廣泛運(yùn)用。多媒體能夠極大地提高信息傳輸通量，將教師從“寫寫擦擦”的板書中解放出來，還能夠形象生動地展示教學(xué)的重點(diǎn)難點(diǎn)，活躍課堂氛圍，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。因此，在教學(xué)過程中，可利用多媒體的特點(diǎn)，多元化地展示知識內(nèi)容，增加學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性。多媒體教學(xué)在擴(kuò)充課程內(nèi)容、增加信息量方面占絕對的優(yōu)勢，但也正因?yàn)槿绱?，在課堂教學(xué)中，教師授課的節(jié)奏加快，可能導(dǎo)致學(xué)生很難有效吸收、消化教學(xué)內(nèi)容，造成了教學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)不夠明確。因此，我們認(rèn)為不同教學(xué)內(nèi)容應(yīng)采用適宜的授課方式。如教材中生物藥劑學(xué)部分有關(guān)制劑的吸收、分布、代謝和排泄等內(nèi)容，利用多媒體以動畫的形式對藥物的在體過程進(jìn)行生動的演示，有利于學(xué)生更好地理解和記憶，從而增加學(xué)習(xí)興趣;而在部分章節(jié)仍應(yīng)堅(jiān)持使用板書，如藥物動力學(xué)某些章節(jié)有大量公式，為了使學(xué)生牢固掌握有關(guān)公式的內(nèi)涵及相互關(guān)系，我們在授課中采用板書進(jìn)行公式的推導(dǎo)和例題的講授，以強(qiáng)化學(xué)生對各種藥動學(xué)參數(shù)意義的認(rèn)識，為其今后利用軟件處理數(shù)據(jù)、解析數(shù)據(jù)奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
2．2案例教學(xué)生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)是一門應(yīng)用性很強(qiáng)的藥學(xué)專業(yè)課程。然而，在傳統(tǒng)的教學(xué)模式下，學(xué)生從課堂上學(xué)到的只是與藥物體內(nèi)過程相關(guān)的基本理論，對運(yùn)用這些理論指導(dǎo)新藥設(shè)計(jì)及個(gè)體化給藥卻鮮有涉及。這樣的理論教學(xué)不僅會讓學(xué)生感到枯燥和乏味，還會導(dǎo)致學(xué)生在實(shí)習(xí)或者走上工作崗位后，對工作環(huán)境感到陌生和不適應(yīng)，不能靈活運(yùn)用學(xué)到的理論知識。因此，在理論教學(xué)中適當(dāng)結(jié)合案例討論，更容易激發(fā)學(xué)生對生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)的學(xué)習(xí)興趣，增強(qiáng)課堂教學(xué)效果［8］。在案例分析時(shí)，教師應(yīng)根據(jù)教學(xué)目的、內(nèi)容、學(xué)生的知識水平和知識規(guī)律，合理運(yùn)用啟發(fā)式教學(xué)引導(dǎo)學(xué)生，培養(yǎng)主動參與意識，激發(fā)學(xué)習(xí)的興趣。例如，在講解生物利用度及生物等效性章節(jié)時(shí)，設(shè)計(jì)實(shí)例分析:“某藥廠生產(chǎn)抗凝血藥雙香豆素片17年，療效一直受到肯定。后因藥師反映，某些輕癥病人常要服用半片，用時(shí)不便，該廠就將藥片做大，中間刻上線條，以便分服。但應(yīng)用后很快發(fā)現(xiàn)此藥無效。該廠遂將新舊兩種片劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)新片劑的溶出速度比原制劑慢，試分析其中的原因?！痹趯W(xué)生閱讀實(shí)例后，我們引導(dǎo)學(xué)生思考:即使是同一廠家生產(chǎn)的同一藥物，由于制劑生產(chǎn)條件的變更，往往給藥效帶來舉足輕重的影響，因此在進(jìn)行藥典規(guī)定的評價(jià)項(xiàng)目之外，需要考慮制劑因素和生理因素，進(jìn)行更加直接的有效性和安全性評價(jià)。那么，有沒有方法可以對生物體攝取利用制劑中藥物的效率進(jìn)行評價(jià)呢?由此引出我們這一章節(jié)重點(diǎn)介紹的內(nèi)容，即生物利用度及生物等效性研究。這樣的教學(xué)方法可在很大程度上激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，有利于學(xué)生將理論聯(lián)系實(shí)踐，在我們的教學(xué)過程中取得了較好的效果。
2．3PBL教學(xué)與LBL教學(xué)相結(jié)合目前，國內(nèi)生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)教學(xué)的普遍缺點(diǎn)是課程教學(xué)體系以教師授課為主，即通常所說的“l(fā)ecture-basedlearing，LBL”(以授課為基礎(chǔ)的學(xué)習(xí))。這種模式多采取灌輸式教學(xué)，學(xué)生始終處于消極被動地位。加之整個(gè)課程內(nèi)容較多，講授時(shí)都集中于教學(xué)大綱重點(diǎn)知識的講解，大部分學(xué)生在上課時(shí)普遍反映課程內(nèi)容抽象枯燥，不感興趣，記憶困難［9］。而采用“以問題為基礎(chǔ)的學(xué)習(xí)”(problem-basedlearning，PBL)的教學(xué)方法是目前國外比較流行的一種教學(xué)模式［10］，即以問題為基礎(chǔ)、學(xué)生為中心、教師為指導(dǎo)的小組討論及自學(xué)的教學(xué)模式，通過在教學(xué)過程中啟發(fā)學(xué)生回答一系列問題，提高學(xué)生自主學(xué)習(xí)的能力，培養(yǎng)創(chuàng)新性思維。該種教學(xué)模式強(qiáng)調(diào)把學(xué)習(xí)引入復(fù)雜的、有意義的問題情境中，通過讓學(xué)生合作解決問題，來學(xué)習(xí)隱含于問題背后的科學(xué)知識，形成解決問題的技能［11］。但如果在生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)教學(xué)中，單純使用PBL模式，則受制于學(xué)生學(xué)習(xí)深度不夠、學(xué)生數(shù)量多教師數(shù)量少以及課程授課學(xué)時(shí)相對短的矛盾。針對現(xiàn)狀，在生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)課程教學(xué)中，我們采用了PBL和LBL相結(jié)合的模式。對于國內(nèi)教材較為明確的概念、理論學(xué)習(xí)，我們采用LBL教學(xué)法。對于和實(shí)際銜接較為緊密的部分或者學(xué)科前沿內(nèi)容使用PBL教學(xué)模式。例如，我們在藥動學(xué)基本理論學(xué)習(xí)完成后進(jìn)行了一次PBL法教學(xué)，題目是:應(yīng)用藥物動力學(xué)原理如何指導(dǎo)腎衰病人進(jìn)行地高辛用藥劑量的調(diào)整?通過指導(dǎo)學(xué)生查閱地高辛藥動學(xué)參數(shù)、治療窗、藥品說明書等資料，組織學(xué)生進(jìn)行小組討論，采用小組匯報(bào)的方式進(jìn)行給藥方案的調(diào)整與設(shè)計(jì)。這種教學(xué)方式有力促進(jìn)了學(xué)生動手查閱資料、相互協(xié)作、語言表達(dá)與溝通能力及創(chuàng)新能力和自學(xué)能力的培養(yǎng)，最終使得學(xué)生從根本上掌握了相關(guān)教學(xué)內(nèi)容，促進(jìn)了教學(xué)質(zhì)量的提高。通過LBL和PBL法相結(jié)合的教學(xué)模式，既可以使學(xué)生牢固掌握相應(yīng)的知識，還可以激發(fā)學(xué)生對生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)課程的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力、自學(xué)能力和自我解決問題的能力，受到了歷屆學(xué)生的好評。
3總結(jié)與思考
篇2
[關(guān)鍵詞] 多媒體技術(shù)；生物藥劑學(xué)
[中圖分類號]R94 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]B [文章編號]1673-7210（2008）05（c）-109-02
生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)是藥學(xué)類專業(yè)本科生的主要專業(yè)課程之一。生物藥劑學(xué)(Biopharmaceutics)是研究藥物及其劑型在體內(nèi)的吸收、分布、代謝與排泄過程，闡明藥物的劑型因素、機(jī)體生物因素和藥物治療之間相互關(guān)系的科學(xué)。而藥物動力學(xué)(Pharmacokinetics)是應(yīng)用動力學(xué)原理和數(shù)學(xué)處理方法，定量地描述藥物通過各種途徑進(jìn)入體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄(即ADME)過程的“量時(shí)”變化或“血藥濃度經(jīng)時(shí)”變化及動態(tài)規(guī)律的科學(xué)[1]。
生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)是一門實(shí)驗(yàn)操作性很強(qiáng)的課程，而實(shí)驗(yàn)課是鞏固學(xué)生學(xué)習(xí)的理論知識，培養(yǎng)學(xué)生掌握操作技能，提高學(xué)生分析解決問題能力的有效教學(xué)手段。然而，在傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中我們發(fā)現(xiàn)，僅用傳統(tǒng)的板書教學(xué)手段難以在學(xué)生的大腦中留下深刻印象，尤其是對于生物藥劑學(xué)和藥物動力學(xué)的動物實(shí)驗(yàn)部分（如大鼠在體小腸灌流實(shí)驗(yàn)和撲熱息痛家兔血藥濃度測定實(shí)驗(yàn)），更難以準(zhǔn)確操作。而使用多媒體教學(xué)手段，可以將抽象的理論做成生動、形象的課件，引發(fā)學(xué)生的興趣，充分調(diào)動學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性[2~4]。近年來，我教研室錄制了相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作的視頻，在實(shí)驗(yàn)時(shí)以播放視頻作為主要的教學(xué)手段，并輔助以板書、圖片進(jìn)行講解，取得了較好效果。
1 教學(xué)改革內(nèi)容
1.1 簡化實(shí)驗(yàn)教材文字
之前使用的生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)教材具有理論性、邏輯性強(qiáng)的特點(diǎn)，但其內(nèi)容抽象、復(fù)雜，知識量有限，重點(diǎn)不突出，教學(xué)目的不明確，教材內(nèi)容不符合學(xué)生的認(rèn)知規(guī)律。有的太簡單，只有文字和簡單的插圖，缺乏動態(tài)效果。在新版的生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)教材中，我們在簡化文字內(nèi)容的基礎(chǔ)上，使新教材內(nèi)容更豐富，信息量更充足，聯(lián)系問題更廣泛。如大鼠在體小腸灌流實(shí)驗(yàn)中關(guān)于大鼠的腹腔麻醉、腸管的剝離、小腸位置的確定等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容著重突出；減少文字?jǐn)⑹觯詧D表形式勾畫實(shí)驗(yàn)操作步驟；強(qiáng)調(diào)操作中的細(xì)節(jié)和提出的注意事項(xiàng)，以求文字教材簡單、易懂、重點(diǎn)突出。
1.2 加入圖片多媒體課件和相關(guān)影音文件素材
我們收集了主流教學(xué)資料包括雜志、教科書、相關(guān)書籍上的圖片，并摘錄了相關(guān)解剖學(xué)圖譜，還從互聯(lián)網(wǎng)上下載高清圖片。圖片素材盡量做到內(nèi)容簡明、重點(diǎn)突出，同時(shí)，盡可能減少圖片間的頻繁切換，以免分散學(xué)生的注意力。視頻方面，我們攝錄了《大鼠在體小腸吸收實(shí)驗(yàn)》、《家兔口服撲熱息痛血藥濃度的測定》等總片長100分鐘的資料，內(nèi)容包括從儀器準(zhǔn)備、動物處理、動物給藥到動物在體操作的全過程，特別突出在體操作技術(shù)中相關(guān)步驟等，以上教學(xué)片基本涵蓋了操作中的重點(diǎn)、難點(diǎn)及應(yīng)急處理等知識。
1.3 加入實(shí)驗(yàn)flas
在教學(xué)中，使用flash軟件，設(shè)計(jì)制作了生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的動畫，可從4個(gè)不同方位（正視圖、仰視圖、俯視圖和側(cè)視圖）觀察實(shí)驗(yàn)操作，加深了學(xué)生對實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的理解。
2 多媒體技術(shù)在實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用體會
2.1 簡化文字教材，突出重點(diǎn)，易于學(xué)生理解和記憶
生物藥劑學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容具有理論性強(qiáng)、抽象、復(fù)雜的特點(diǎn)，如果單純通過板書的形式來說明實(shí)驗(yàn)原理、操作過程、注意事項(xiàng)等，學(xué)生不易理解，如能采用相關(guān)軟件制作關(guān)于實(shí)驗(yàn)原理的流程圖，并以錄像視頻作為內(nèi)容，那么學(xué)生更易理解該實(shí)驗(yàn)的目的和原理。如大鼠在體小腸灌流實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于大鼠的腹腔麻醉、腸管的剝離、小腸位置的確定、插管方向、循環(huán)控制等都是該實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)內(nèi)容，學(xué)生在第一次做實(shí)驗(yàn)時(shí)，由于沒有直觀的接觸，常常會出現(xiàn)錯(cuò)誤操作導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗，而對學(xué)生播放實(shí)驗(yàn)視頻錄像可以對需要注意的地方重點(diǎn)講解，加深學(xué)生理解，提高生物藥劑實(shí)驗(yàn)的成功率。
2.2 豐富實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式
以往的實(shí)驗(yàn)教學(xué)程序是由學(xué)生課前預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，教師在課堂上講解本次實(shí)驗(yàn)相關(guān)內(nèi)容并提出該實(shí)驗(yàn)的要求和操作注意事項(xiàng)，學(xué)生按講義或要求進(jìn)行操作，然后進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、撰寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。這種教學(xué)模式單調(diào)、呆板，難以激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，達(dá)不到真正學(xué)習(xí)知識、運(yùn)用知識、解決實(shí)際問題的目的。由于被動接受式學(xué)習(xí)沒有充分調(diào)動學(xué)生的積極性和主動性，學(xué)生普遍存在重理論輕實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象。而采用多媒體技術(shù)可以激發(fā)學(xué)生自主學(xué)習(xí)的興趣，使認(rèn)知過程由被動傳授轉(zhuǎn)變?yōu)橹鲃訉W(xué)習(xí)[5]。
2.3 加強(qiáng)理論課教學(xué)與實(shí)驗(yàn)課教學(xué)的結(jié)合
生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)理論課的教學(xué)中有一節(jié)內(nèi)容為應(yīng)用藥物動力學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，在講解的過程中，讓學(xué)生應(yīng)用3P97動力學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件及自行編寫的非隔室模型法計(jì)算藥動學(xué)數(shù)的Excel 程序處理自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并與手動計(jì)算的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，這樣不僅可以提高理論課學(xué)習(xí)的效果，還能提高學(xué)生對實(shí)驗(yàn)課的興趣，引起學(xué)生的重視，真正做到理論學(xué)習(xí)與實(shí)驗(yàn)的有機(jī)結(jié)合。
3 多媒體技術(shù)應(yīng)用的教學(xué)效果
2006學(xué)年(未采用多媒體教學(xué))與2007學(xué)年(采用多媒體教學(xué))相比，考題難度基本持平，其中理論和實(shí)際操作各占50%，難度也基本相當(dāng)。采用多媒體教學(xué)的2007學(xué)年學(xué)生成績有明顯提高：學(xué)生平均成績?yōu)?4.8分，較2006學(xué)年提高13.5個(gè)百分點(diǎn)，優(yōu)秀率達(dá)到15.7%；良好率提高11.5個(gè)百分點(diǎn)，達(dá)到73.3%；不及格率下降了4.2個(gè)百分點(diǎn)。我們在對2007學(xué)年學(xué)生(總?cè)藬?shù)366人)的問卷調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，87.5%的學(xué)生認(rèn)為利用多媒體進(jìn)行教學(xué)，效果明顯好于傳統(tǒng)的教學(xué)方法，主要表現(xiàn)在同學(xué)上課注意力集中，具有比較高的學(xué)習(xí)積極性，動物實(shí)驗(yàn)操作形象直觀，通俗易懂。因此，我們認(rèn)為，正確處理好多媒體教學(xué)和傳統(tǒng)教學(xué)的關(guān)系，能明顯提高教學(xué)效能，起到事半功倍的作用。
[參考文獻(xiàn)]
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篇3
【關(guān)鍵詞】藥物代謝物 藥代動力學(xué) 生物等效性
新藥的臨床藥代動力學(xué)研究旨在闡明藥物在人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄的動態(tài)變化規(guī)律。對藥物上述處置過程的研究，是全面認(rèn)識人體與藥物間相互作用不可或缺的重要組成部分，也是臨床制定合理用藥方案的依據(jù)。生物等效性是指藥學(xué)等效制劑或可替換藥物在相同試驗(yàn)條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通常意義的生物等效性研究是指用生物利用度研究方法，以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)，根據(jù)預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較研究。藥物的代謝物是指藥物進(jìn)入機(jī)體后，部分藥物經(jīng)過體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化，經(jīng)過I相（氧化、還原、水解）和II相（結(jié)合）代謝途徑，產(chǎn)生的化合物。本文對藥物代謝物在藥代動力學(xué)及生物等效性評價(jià)中需要考慮的一些問題進(jìn)行綜述。
1 藥物的代謝產(chǎn)物在藥代動力學(xué)評價(jià)中的一般考慮
SFDA指出[1]，根據(jù)非臨床藥代動力學(xué)研究結(jié)果，如果藥物主要以代謝方式消除，其代謝物可能具有明顯的藥理活性或毒性作用，或作為酶抑制劑而使藥物的作用時(shí)間延長或作用增強(qiáng)，或通過競爭血漿和組織的結(jié)合部位而影響藥物的處置過程，則代謝物的藥代動力學(xué)特征可能影響藥物的療效和毒性。對于具有上述特性的藥物，在進(jìn)行母體藥物單次給藥、多次給藥的藥代動力學(xué)研究時(shí)，應(yīng)考慮同時(shí)進(jìn)行代謝物的藥代動力學(xué)研究。
FDA指出[2]，一般情況下，對于僅在人體中出現(xiàn)的代謝產(chǎn)物，或人體中代謝物水平遠(yuǎn)高于任何經(jīng)過測試的動物種屬時(shí)，應(yīng)考慮進(jìn)行安全性評估。在人體中的代謝產(chǎn)物，如果其水平高于穩(wěn)態(tài)時(shí)母體藥物系統(tǒng)暴露量的10%，則可引起安全性擔(dān)憂。
因此，在藥代動力學(xué)研究中：⑴如果代謝物影響藥物的安全性和有效性，則需要檢測母體藥物和代謝物。⑵如果代謝物的活性不清楚，則如果代謝物水平高于穩(wěn)態(tài)時(shí)母體藥物系統(tǒng)暴露量的10%時(shí)，則需要檢測母體藥物和代謝物；如果代謝物水平低于于穩(wěn)態(tài)時(shí)母體藥物系統(tǒng)暴露量的10%時(shí)，一般只測定母體藥物。⑶母體藥物體液濃度很低，代謝物為體內(nèi)的主要存在形式時(shí)，如果母體藥物可測到，應(yīng)測定母體藥物和代謝物。⑷ 對于前體藥物，如果能測到母體藥物濃度，則應(yīng)測定母體藥物和代謝物濃度；如果母體藥物濃度非常低，檢測非常困難，則測定代謝物。
2 藥物的代謝產(chǎn)物在生物等效性評價(jià)中的一般考慮
SFDA指出[3]，某些藥物在體內(nèi)迅速代謝無法測定生物樣品中原形藥物，也可采用測定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物利用度和生物等效性試驗(yàn)。
FDA指出[4]，對于生物等效性研究，一般建議只測量從該制劑中釋放的原型藥物，而不測量代謝產(chǎn)物。
這一建議的依據(jù)是原型藥物的濃度時(shí)間曲線對制劑表現(xiàn)的變化比代謝產(chǎn)物更加敏感，代謝產(chǎn)物更多地是反映了代謝產(chǎn)物的形成、分布和消除。下列情況屬于例外，⑴原型藥物濃度太低，不能在足夠長的時(shí)間內(nèi)對血液、血漿或血清中的原型藥物進(jìn)行可靠測定時(shí)，最好是測定代謝產(chǎn)物。⑵代謝產(chǎn)物可能在腸壁或經(jīng)進(jìn)入體循環(huán)之前的其他代謝形成。如果代謝產(chǎn)物對安全性和/或療效有一定的貢獻(xiàn)，建議代謝產(chǎn)物和原型藥物都要測定。如果代謝產(chǎn)物的相對活性低，對安全性和/或療效沒有什么意義，那么不一定需要測定代謝產(chǎn)物。 轉(zhuǎn)貼于
EMEA指出[5]，可用代謝物數(shù)據(jù)來評價(jià)生物等效的情況僅限于以下情況：⑴ 生物基質(zhì)中活性物質(zhì)濃度太低以至于無法準(zhǔn)確檢測，并導(dǎo)致顯著變異時(shí)。此時(shí)，申辦者應(yīng)提供令人信服的證據(jù)說明母體化合物的檢測不可靠，才能使用代謝物數(shù)據(jù)。⑵ 當(dāng)代謝物活性是體內(nèi)活性物質(zhì)總活性的主要部分并且其藥代動力學(xué)特征是非線性時(shí)。此時(shí)，先要評價(jià)代謝物的作用，如果代謝物活性是體內(nèi)活性物質(zhì)總活性的主要部分并且其藥代動力學(xué)特征是非線性的，就有必要同時(shí)檢測母體化合物和活性代謝物的血藥濃度并且對他們單獨(dú)評價(jià)。
前體藥物生物等效性試驗(yàn)的問題[6]，⑴ 測定前藥是首選：生物等效性是評價(jià)試驗(yàn)制劑和參比制劑在藥物吸收速度和程度上的異同，而測定母體藥物是評價(jià)生物等效性的首選方法。因此對于前體藥物，雖然具有藥理活性的是代謝產(chǎn)物，但假如前體藥物從制劑中釋放并被完整吸收，同時(shí)其在體循環(huán)中的測定方法是可靠的，那么，最好的方法仍應(yīng)當(dāng)是以原型藥（即前藥）來評價(jià)兩藥的生物等效性。⑵ 同時(shí)測定前藥和代謝物：一般很少考慮同時(shí)測定原型藥和代謝物的水平用于評價(jià)生物等效性，但在有些情況下，如藥物本身是無活性的前體藥物，它在體內(nèi)能快速轉(zhuǎn)化成有活性的代謝物，而療效和毒性主要與此代謝物有關(guān)。那么，代謝物的測定在生物等效性決策中也有重要參考價(jià)值，增加代謝物的生物等效性特征參數(shù)可以降低消費(fèi)者替換使用藥物的風(fēng)險(xiǎn)。⑶測定代謝產(chǎn)物的考慮：有些情況下，一些藥物本身是無活性的前體藥物，由于某種原因，如前藥在生物基質(zhì)中不穩(wěn)定、快速代謝或分析方法學(xué)上有困難，無法測定生物樣品中原形藥物時(shí)；或者藥物活性代謝物與藥物療效和安全性密切相關(guān)時(shí)，一般認(rèn)為可采用測定生物樣品中相應(yīng)活性代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物等效性試驗(yàn)。例如：頭孢呋辛酯是頭孢呋辛的口服前體藥物，服用后，迅速被胃腸道粘膜細(xì)胞中非特異性酯酶水解為活性成分頭孢呋辛而發(fā)揮藥理作用。服用后被快速代謝，體內(nèi)很難測到前藥原型，所以等效性試驗(yàn)中，只能測定血液中的代謝物頭孢呋辛作為替代檢測指標(biāo)。類似的情況還有頭孢泊肟酯、頭孢妥侖匹酯、頭孢特侖新戊酯、鹽酸頭孢他美酯等。
因此，在生物等效性研究中：⑴ 如果代謝物影響藥物的安全性和有效性，則需要檢測母體藥物和代謝物，但生物等效性評價(jià)時(shí)以母體藥物濃度作為主要判斷指標(biāo)。 ⑵如果代謝物的活性不清楚，一般只測定母體藥物 ⑶ 母體藥物體液濃度很低，代謝物為體內(nèi)的主要存在形式時(shí)，一般測定代謝物 ⑷ 對于前體藥物，如果母體藥物可以測定時(shí)，一般測定母體藥物；如果母體藥物濃度非常低，檢測非常困難，則測定代謝物。
總之，藥物代謝物在藥代動力學(xué)及生物等效性評價(jià)中發(fā)揮著重要作用，因此，本文會促進(jìn)和完善對新藥藥代動力學(xué)和生物等效性的評價(jià)。
參 考 文 獻(xiàn)
[1] 化學(xué)藥物臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則，2005年3月，藥品審評中心.
[2] 藥物代謝產(chǎn)物安全性試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則，2008年2月，美國FDA，藥審中心最后審核.
[3] 化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則，2005年3月，藥品審評中心.
[4] FDA《口服制劑的生物利用度和生物等效性研究:一般性考慮》，F(xiàn)DA.
篇4
1提高學(xué)習(xí)動機(jī)的意義分析
研究顯示，學(xué)習(xí)動機(jī)對于提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，驅(qū)動學(xué)生進(jìn)行主動的學(xué)習(xí)具有極大的作用，對于初中物理教學(xué)而言具有以下作用：
1.1促發(fā)作用
學(xué)習(xí)動機(jī)對于促發(fā)學(xué)生積極主動地去學(xué)習(xí)物理知識具有極大的促發(fā)作用，例如當(dāng)學(xué)生對于物理教材中某一知識點(diǎn)、物理現(xiàn)象、或是實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了強(qiáng)烈的興趣時(shí)，就會促發(fā)學(xué)生主動地去了解和學(xué)習(xí)這一知識點(diǎn)，運(yùn)用原有認(rèn)知經(jīng)驗(yàn)去分析物理現(xiàn)象，自己嘗試著探究，引起學(xué)生的學(xué)習(xí)行為.
例如，《大氣壓強(qiáng)》這節(jié)內(nèi)容的教學(xué)，演示覆杯實(shí)驗(yàn)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)學(xué)生自己課后也可以完成，所以當(dāng)教師演示物理實(shí)驗(yàn)，學(xué)生通過現(xiàn)象的觀察和分析感知大氣壓強(qiáng)的存在，當(dāng)然也有同學(xué)會存有疑問，這進(jìn)一步觸發(fā)了學(xué)生自己課后嘗試的欲望，課后自己嘗試覆杯實(shí)驗(yàn)，實(shí)現(xiàn)對現(xiàn)象、規(guī)律的再思考.
1.2定向作用
學(xué)習(xí)動機(jī)可以為學(xué)生的初中物理學(xué)習(xí)提供一個(gè)明確的方向，使得學(xué)生在學(xué)習(xí)動機(jī)的驅(qū)使下去完成一定的目標(biāo)，為了達(dá)到這一目標(biāo)學(xué)生就會積極主動地去解決問題、分析問題，從而幫助學(xué)生更好地掌握物理知識點(diǎn).
例如，學(xué)生學(xué)習(xí)“液體內(nèi)部壓強(qiáng)”這一知識點(diǎn)，那么學(xué)生可能會產(chǎn)生疑問，液體內(nèi)部壓強(qiáng)是怎么產(chǎn)生的？液體內(nèi)部壓強(qiáng)與哪些因素有關(guān)？生活中有哪些應(yīng)用？這些疑問恰是驅(qū)動學(xué)生主動地查找資料，尋求問題的答案，深化對這一知識點(diǎn)的理解與掌握.
1.3保持作用
不少學(xué)生尤其是初二的學(xué)生會感覺物理難學(xué)，概念學(xué)習(xí)枯燥，導(dǎo)致其物理學(xué)習(xí)興趣不高，學(xué)習(xí)物理往往開始好奇，接著就半途而廢不能持之以恒.那些學(xué)習(xí)動機(jī)高的學(xué)生往往能在一個(gè)較長的時(shí)間里一直保持著一種認(rèn)真、刻苦的精神面貌；而那些學(xué)習(xí)動機(jī)水平較低的學(xué)生往往對物理課程沒有興趣，即使突然因?yàn)樾缕娴奈锢韺?shí)驗(yàn)，對物理學(xué)習(xí)有了一定的興趣，也往往因?yàn)槠渌虿荒艹种院?，因此學(xué)習(xí)動機(jī)對于學(xué)生的物理學(xué)習(xí)具有很好的保持作用，可以不斷地保持學(xué)生對于物理學(xué)習(xí)的興趣.
1.4調(diào)節(jié)的作用
學(xué)習(xí)動機(jī)不僅能夠幫助學(xué)生定向?qū)W習(xí)的目標(biāo)，而且還可以不斷在這一過程中去調(diào)節(jié)學(xué)生的具體的每一個(gè)步驟和小的目標(biāo)，不斷地去調(diào)節(jié)學(xué)生在進(jìn)行這一目標(biāo)的過程中堅(jiān)持下去，直到完成具體的學(xué)習(xí)目標(biāo).
2創(chuàng)設(shè)情境提升學(xué)生的學(xué)習(xí)動機(jī)水平
2.1結(jié)合學(xué)生的實(shí)際生活創(chuàng)設(shè)情境
學(xué)生在學(xué)習(xí)物理知識時(shí)，如果對物理知識的認(rèn)知出現(xiàn)偏差，他們會不愿意積極學(xué)習(xí)物理知識.教師要讓學(xué)生真正理解學(xué)習(xí)物理知識的意義，就要結(jié)合學(xué)生的生活實(shí)際為學(xué)生創(chuàng)設(shè)情境，讓學(xué)生理解到物理知識來源于生活，學(xué)好物理知識才能夠改善自己的生活.
比如教師在引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)《物態(tài)變化》時(shí)，引導(dǎo)學(xué)生觀察自己吃冰棒時(shí)剛撕開冰棒紙，冰棒有時(shí)會出現(xiàn)冒煙的現(xiàn)象；冰棒靜置一段時(shí)間后四周會出現(xiàn)細(xì)小的水滴，待到靜置得更久，小水滴逐漸變大，當(dāng)冰棒水滴在地上后，過一會就會干掉消失.通過以上的物理現(xiàn)象，教師引導(dǎo)學(xué)生理解物體在怎樣的外界因素下，它們會改變自己的物態(tài)，如果我們要物體保持特別的物態(tài)，可以從哪些外部條件著手控制？當(dāng)學(xué)生發(fā)現(xiàn)自己學(xué)習(xí)的物理知識能改變實(shí)際的生活時(shí)，他們會有濃厚的探索物理知識的興趣.
2.2結(jié)合物理的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象創(chuàng)設(shè)情境
教師在引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)物理時(shí)，一味地對學(xué)生說物理概念和定律，學(xué)生也不一定能明白這些概念的意義是什么.教師可以給學(xué)生觀察物理現(xiàn)象，讓學(xué)生了解到物理現(xiàn)象的規(guī)律，當(dāng)學(xué)生發(fā)現(xiàn)物理現(xiàn)象能有規(guī)律的變化時(shí)，他們會愿意自發(fā)地學(xué)習(xí)物理知識.比如教師引導(dǎo)學(xué)生觀察《透鏡及應(yīng)用》時(shí)，教師要引導(dǎo)學(xué)生不斷地觀察透鏡的變化.學(xué)生如果能透徹地掌握透鏡的變化就能理解到凸透鏡變化的規(guī)律為：
表1
物距(u)像距(v)正倒大小虛實(shí)應(yīng)用特點(diǎn)
u>2ff
U=2fV=2f倒立等大實(shí)像測焦距大小分界點(diǎn)
f
幻燈機(jī)―
U=f不成像―――平行光源
測焦距實(shí)虛分界點(diǎn)
Uu
與物同側(cè)正立放大虛像放大鏡虛像在物體同
側(cè)，物像同側(cè)，
虛像在物體之后
2.3結(jié)合學(xué)生的團(tuán)體合作創(chuàng)設(shè)情境
不同的學(xué)生有不同的性格、不同的特長、不同的潛力，學(xué)生在一起學(xué)習(xí)，教師如果能夠讓學(xué)生在進(jìn)入情境時(shí)互相提示、互相取長補(bǔ)短，情境創(chuàng)設(shè)的效果也能因此而事倍功半.所以教師在引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)入情境時(shí)，可以根據(jù)教學(xué)的實(shí)際情況引導(dǎo)學(xué)生用團(tuán)隊(duì)的方法一起進(jìn)入情境.
比如教師在引導(dǎo)學(xué)生學(xué)習(xí)《浮力的應(yīng)用》時(shí)，教師可以將數(shù)個(gè)學(xué)生組成學(xué)習(xí)小組，給每個(gè)學(xué)習(xí)小組100克薄鐵皮、一盆水、一枚一元的硬幣.如果直接將一元硬幣投入水中，硬幣會沉下去，教師要讓學(xué)生合理改變薄鐵皮的結(jié)構(gòu)，讓薄鐵皮承載起一元硬幣，讓硬幣能浮在水面上.學(xué)生共同學(xué)習(xí)時(shí)，要克服薄鐵皮可能會進(jìn)水的問題、薄鐵皮的結(jié)構(gòu)不足以承載硬幣的問題、薄鐵皮能承載多少硬幣的問題.通過共同合作，學(xué)生們提出種種承載硬幣的方案，一起動手、一起改進(jìn)，通過這種進(jìn)入情境的方法，學(xué)生會非常愿意積極地探索物理知識.
3提升學(xué)生學(xué)習(xí)動機(jī)水平應(yīng)關(guān)注的幾個(gè)方面
3.1讓學(xué)生關(guān)注物理現(xiàn)象
教師在引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)入情境時(shí)，無論是用講故事的方法也好、讓學(xué)生觀看多媒體也好、用實(shí)驗(yàn)的方法也好，教師需要用種種方法讓學(xué)生觀察物理的現(xiàn)象和物理的變化.如果學(xué)生不能細(xì)心觀察物理現(xiàn)象，他們就不能了解這節(jié)課到底需要了解哪些知識，不會明白自己學(xué)習(xí)的范圍.
3.2讓學(xué)生關(guān)注物理變化
教師在引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)入學(xué)習(xí)情境后，如果學(xué)生僅僅只了解現(xiàn)在眼前發(fā)生的物理現(xiàn)象，學(xué)生依然不能從物理現(xiàn)象中提煉到物理知識.因此教師引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)入情境后，就要鼓勵(lì)他們自己去動手嘗試、動手探索，學(xué)生如果能夠了解到外部條件的變化能使物理現(xiàn)象產(chǎn)生變化，他們就能提出猜想，嘗試?yán)斫膺@些物理現(xiàn)象背后的本質(zhì).
3.3讓學(xué)生總結(jié)物理現(xiàn)象
學(xué)生在學(xué)習(xí)物理時(shí)，要真正的掌握物理知識，就需要把感性的認(rèn)知轉(zhuǎn)化為理性的認(rèn)知.因此教師在引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)入情境時(shí)，要引導(dǎo)學(xué)生總結(jié)自己觀察到的物理現(xiàn)象，讓他們把具體的知識經(jīng)過提煉，重新通過抽象的方式理解.
篇5
【摘要】 目的 建立人血漿中羅紅霉素濃度的高效液相分析方法，用于研究羅紅霉素膠囊在人體的藥代動力學(xué)和生物等效性。方法 血漿樣品采用己烷異戊醇(98∶2)液液萃取，反相高效液相法測定。結(jié)果 羅紅霉素的線性范圍為0.25-32.06mg/L(r為0.9992)，最低檢出質(zhì)量濃度為0.25mg/L，最低檢出量為12.5ng，提取回收率為68.0%-72.8%，方法回收率為90.7%-99.4%。單次服用300mg羅紅霉素膠囊受試制劑或參比制劑后的藥動學(xué)參數(shù)AUC0-48h、Cmax、tmax、t1/2分別為(101.84±27.69)(mg·h)/L和(103.5±30.83)(mg·h)/L，(8.54±1.95)mg/L和(8.07±1.81)mg/L，(1.6±0.6)h和(1.8±0.6)h，(10.4±2.9)h和(10.5±2.6)h。受試制劑相對生物利用度為(100.5±19.1)%。結(jié)論 該方法專一性較好，血漿內(nèi)源性雜質(zhì)無干擾，結(jié)果準(zhǔn)確。羅紅霉素的兩種制劑間主要藥動學(xué)參數(shù)無明顯差異，具有生物等效性。
【關(guān)鍵詞】 羅紅霉素；HPLC；生物等效性；藥代動力學(xué)
Pharmacokinetics and bioequivalence of roxithromycin capsules in human
ABSTRACT: Objective To establish the method of assaying roxithromycin in human plasma by high performance liquid chromatography (HPLC)， and to study its pharmacokinetics and bioequivalence. Methods The plasma samples were extracted by hexane isoamylalcohol (98∶2) and reversed phase chromatography to determine the concentration of roxithromycin. Results The calibration curve was linear from 0.25mg/L to 32.06mg/L， the minimum concentration was 0.25mg/L(r=0.9992) and the minimum quantitation was 12.5ng. The extraction recovery rate was 68.0%-72.8% and the method recovery rate was 90.7%-99.4%. After a single oral dose of 300mg roxithromycin test or reference capsules， the main pharmacokinetic parameters were as follows: AUC0-48h(101.84±27.69)(mg·h)/L and (103.5±30.83)(mg·h)/L， Cmax(8.54±1.95)mg/L and (8.07±1.81)mg/L， tmax(1.6±0.6)h and (1.8±0.6)h， t1/2(10.4±2.9)h and (10.5±2.6)h， respectively. Relative bioavailability of the test fomulation was (100.5±19.1)%. Conclusion This method can be used in the analysis of roxithromycin in the plasma without endogenic substance interference. The method is specific and accurate. No significance difference exists among the main pharmacokinetic parameters for the test capsules and the reference capsules. The two formulations are bioequivalent.
KEY WORDS: roxithromycin; high performance liquid chromatography (HPLC); bioequivalence; pharmacokinetics
羅紅霉素是半合成的十四元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，具有口服吸收好、半衰期長等特點(diǎn)。在較低波長處，羅紅霉素具有較高的吸收，可采取分光光度方法檢測。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography， HPLC)測定血漿中羅紅霉素的含量，最低檢測濃度為0.25mg/L，可滿足羅紅霉素藥動學(xué)的研究。此方法簡便迅速，結(jié)果準(zhǔn)確。
1 材料與方法
1.1 藥品、試劑與儀器 受試制劑：羅紅霉素膠囊(T)，規(guī)格：150mg/粒，批號：030701，山東天順?biāo)帢I(yè)股份有限公司生產(chǎn)。參比制劑：羅紅霉素膠囊(R)，規(guī)格：150mg/粒，批號：03121202，江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司。羅紅霉素對照品含量946u/mg，批號：30351-200303，由中國藥品生物制品檢定所提供。試劑：甲醇由美國Fishers公司生產(chǎn)，色譜純；正己烷由德國Merck公司生產(chǎn)，色譜純；異戊醇以及其余試劑均為分析純，異戊醇用前經(jīng)重蒸餾；水為超純水。儀器： 美國Waters公司高效液相色譜儀，包括486可變紫外檢測器，510型高壓泵，7725I型進(jìn)樣閥，AS938色譜工作站；TDL40B臺式高速離心機(jī)。
1.2 受試對象 20名男性健康志愿者，年齡(24±2.8)歲，身高(173±4.9)cm，體重(64±5.8)kg。肝、腎功(GPT、GOT、BUN、CR)、心電圖、血糖、血壓、血常規(guī)試驗(yàn)前檢測均正常。受試者試驗(yàn)前兩周至試驗(yàn)結(jié)束未服用其他藥物，受試期間忌煙、酒和含咖啡因的飲料。試驗(yàn)期間統(tǒng)一食譜，試驗(yàn)前簽署知情同意書。試驗(yàn)方案獲院倫理委員會批準(zhǔn)。
1.3 色譜條件 色譜柱：Hypersil柱(250mm×4.6mm，5μm)，美國熱電公司提供；流動相：甲醇15mmol/L磷酸二氫鉀=70∶30(氨水調(diào)pH=6)；流速：0.7mL/min；檢測波長：220nm；進(jìn)樣量：50μL；柱溫：60℃。
1.4 給藥方案及血漿樣品的采集與處理 實(shí)驗(yàn)采用單劑量雙周期交叉實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，受試者隨機(jī)分為兩組，分別單劑量口服受試制劑和參比制劑，劑量均為每人300mg，受試者用藥前12h及用藥后4h內(nèi)禁食，實(shí)驗(yàn)期間統(tǒng)一進(jìn)餐。間隔一周清洗期后再交叉。受試者于給藥前及給藥后0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24、36、48h取靜脈血4mL置肝素化試管中，3000r/min離心10min，分離血漿，-20℃冰箱凍存待測。
吸取血漿樣品1mL于10mL帶塞試管中，加入0.1mL 1mol/L NaOH溶液，渦旋混勻后放置5min，加入4mL正己烷與異戊醇的混合液(正己烷∶異戊醇=98∶2)，渦旋混勻2min，2500r/min離心5min，移去上層有機(jī)溶液，45℃水浴下氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)?00μL流動相溶解，取50μL進(jìn)入HPLC分析。
1.5 數(shù)據(jù)處理 所得血藥濃度時(shí)間數(shù)據(jù)用3P97藥動學(xué)軟件計(jì)算藥動學(xué)參數(shù)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)矩計(jì)算得AUC0-t，AUC0-∞，MRT及t1/2。按公式t1/2=0.693/ke計(jì)算ke，Cmax和tmax為實(shí)測值，用3P97藥動學(xué)軟件進(jìn)行生物等效性分析。兩制劑的AUC，Cmax 經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)，并計(jì)算90%的可信區(qū)間。tmax進(jìn)行Wilcoxon檢驗(yàn)。
相對生物利用度(F)=AUC試驗(yàn)藥/AUC參比藥×100%
2 結(jié)果
2.1 方法的專屬性 在已建立的色譜條件下，測得空白血漿、標(biāo)準(zhǔn)血漿、受試者血漿的色譜圖。由圖1可見血漿中的內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾羅紅霉素的測定。羅紅霉素的保留時(shí)間為9.5min。
2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及定量下限 取正常人空白血漿1mL，精密加入不同量的羅紅霉素的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，配制質(zhì)量濃度為32.06、16.03、8.02、4.01、2.01、1.00、0.50、0.25mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品，按“血漿樣品”的處理與測定方法操作。以羅紅霉素峰面積(y)對濃度(x)回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=295.6+42874.1x，r=0.9992(n=6)，在(0.25-32.06)mg/L范圍內(nèi)線性良好，羅紅霉素在血漿中的定量下限(S/N=3)為0.25mg/L，最低檢出量為12.5ng。
圖1 血漿中羅紅霉素的HPLC圖（略）
Fig.1 HPLC chromatograms of roxithromycin in human plasma
A: blank plasma; B: blank plasma with roxithromycin (4.408mg/L); C: subject plasma sample 2.0h after oral administration
2.3 回收率的考察結(jié)果 取空白血漿加入羅紅霉素對照液配成的16.548、4.408、0.547mg/L樣品各5份，按“血漿樣品”的處理與測定方法操作，測定其含量，再與加入量相比即為相對回收率。以3個(gè)濃度對應(yīng)相同的進(jìn)樣量的對照品進(jìn)行分析，計(jì)算血漿樣品的絕對回收率，結(jié)果見表1。
表1 人血漿中羅紅霉素的回收率的測定結(jié)果（略）
Table 1 The recovery of roxithromycin in human plasma
2.4 精密度的考察結(jié)果 取空白血漿加入羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)液配成的16.548、4.408、0.547mg/L三個(gè)樣品各5份，按血漿樣品的處理與測定方法操作，于同日不同時(shí)間測定和不同日內(nèi)重復(fù)測定，計(jì)算日內(nèi)、日間精密度，結(jié)果見表2。
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表2 人血漿中羅紅霉素的精密度的測定結(jié)果（略）
Table 2 The precision of roxithromycin in human plasma
2.5 血漿穩(wěn)定性的考察結(jié)果 取1mL空白血漿若干份，加入羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)液配成的濃度為15.960、4.409、0.547mg/L的標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品。分別對室溫放置穩(wěn)定性(12h)、凍融穩(wěn)定性(反復(fù)凍融2次)、長期冷凍穩(wěn)定性(-20℃保存3周)以及血漿樣品處理后流動相復(fù)溶穩(wěn)定性(室溫放置12h)進(jìn)行考察，結(jié)果表明羅紅霉素標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品室溫放置12h、反復(fù)凍融2次、冷凍保存3周后顯示穩(wěn)定，血漿樣品處理后流動相復(fù)溶室溫放置12h顯示穩(wěn)定。
2.6 羅紅霉素藥動學(xué)和生物等效性的研究 20名受試者單劑量口服羅紅霉素受試制劑或參比制劑300mg后，藥時(shí)曲線見圖2。主要藥動學(xué)參數(shù)見表3。單劑量口服羅紅霉素受試藥和參比藥的lgAUC0-∞、lgAUC0-t進(jìn)行三因素方差分析，結(jié)果表明二者試驗(yàn)制劑間、周期間、個(gè)體間差異均無顯著性(P>0.05)；進(jìn)一步進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn)及(1-2α)置信區(qū)間分析，以80%-125%為等效標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果判定均具有生物等效性(表4)。受試制劑的相對生物利用度F0-t為(100.3±19.1)%；F0-∞為(100.5±19.6)%。
圖2 20例志愿者服用羅紅霉素后的平均血藥質(zhì)量濃度的經(jīng)時(shí)曲線（略）
Fig.2 Mean plasma concentrationtime curves of roxithromycin after a single oral dose of 300mg in 20 healthy volunteers
表3 20名健康受試者口服羅紅霉素300mg后的藥動學(xué)參數(shù)（略）
Table 3 Pharmacokinetic parameters of roxithromycin after a single oral dose of 300mg in 20 healthy volunteers
表4 羅紅霉素的生物等效性分析（略）
Table 4 The bioequivalant statistical analysis of roxithromycin
3 討論
羅紅霉素的測定方法有抗生素微生物檢定法[13]、HPLCCED法[45]、HPLCMS法[67]和HPLCUV法[810]。HPLCUV法具有定量快速、精確的特點(diǎn)，方法明顯優(yōu)于微生物效價(jià)測定法。本試驗(yàn)采用了反相高效液相法測定血漿中的羅紅霉素的濃度，具有較高的選擇性。此方法專屬性強(qiáng)，精密度、靈敏度較好，能夠滿足該藥的藥動學(xué)研究的要求。用二氯甲烷或乙醚作為萃取溶媒回收率低，乙醚提取雜質(zhì)成分較多。在測定血漿羅紅霉素濃度的文獻(xiàn)[9]中，樣品預(yù)處理用特殊的固相提取柱提取，其方法操作極其復(fù)雜。根據(jù)Macek[10]的方法，本文用己烷異戊醇(98∶2)的液液萃取方法提高了回收率，改進(jìn)了樣品提取純化效果。在220nm波長處檢測羅紅霉素?zé)o雜質(zhì)干擾峰。
20名健康受試者的自身對照試驗(yàn)表明，受試藥羅紅霉素膠囊和參比藥羅紅霉素膠囊在健康人體內(nèi)的過程基本一致，其主要藥動學(xué)參數(shù)相近，具有生物等效性。受試者在試驗(yàn)過程中未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。
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篇6
【關(guān)鍵詞】 中藥;藥代動力學(xué);方法學(xué)
藥物動力學(xué)是應(yīng)用動力學(xué)的原理與數(shù)學(xué)處理方法,定量地描述藥物通過各種給藥途徑進(jìn)入機(jī)體后的吸收、分布、代謝和排泄等過程的動態(tài)變化規(guī)律,即研究給藥后藥物在體內(nèi)的位置、數(shù)量、療效與時(shí)間之間的關(guān)系。藥物動力學(xué)又被稱為“藥物代謝動力學(xué)”、“藥代動力學(xué)”等,其中“代謝”含義包括了藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄。藥物動力學(xué)是一門新興的介于藥學(xué)與數(shù)學(xué)之間的邊緣學(xué)科,已成為生物藥劑學(xué)、臨床藥劑學(xué)、藥理學(xué)、臨床藥理學(xué)、分子藥理學(xué)、生物化學(xué)、藥劑學(xué)、毒理學(xué)等學(xué)科的基礎(chǔ)推動著這些學(xué)科的蓬勃發(fā)展。近幾十年藥物動力學(xué)的研究成果對指導(dǎo)新藥研究、制定臨床最佳給藥方案、評價(jià)制劑質(zhì)量、改進(jìn)藥物劑型等方面發(fā)揮了重要作用。中藥藥代動力學(xué),其研究對象是中藥及其復(fù)方,是指在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下,利用動力學(xué)的原理與數(shù)學(xué)處理方法,定量地描述中藥有效成分、有效部位、單味中藥和中藥復(fù)方通過各種給藥途徑進(jìn)入機(jī)體后的吸收、分布、代謝和排泄等過程的動態(tài)變化規(guī)律。中藥藥物動力學(xué)對中藥現(xiàn)代化和中藥走向世界具有極為重要的意義。其研究方法大體可分為:血藥濃度法和生物效應(yīng)法兩大類。同時(shí)隨著中藥藥代動力學(xué)研究的越來越受重視,先進(jìn)檢測技術(shù)的不斷增加,出現(xiàn)了一些新技術(shù)新方法,如臨界流體萃取、在體微透析、核磁共振、生物電阻抗、細(xì)胞培養(yǎng)研究體外吸收模型、證治藥動學(xué)[1]、中藥血清藥理學(xué)[2]、中藥胃腸藥動學(xué)等。下面就對常用的藥代動力學(xué)研究方法進(jìn)行簡要介紹。
1 血藥濃度法
適用于有效成分比較明確的中藥及其復(fù)方制劑,通過中藥復(fù)方給藥后,用現(xiàn)代分析儀器如氣相色譜法、氣-質(zhì)聯(lián)用法、高效液相色譜法或液-質(zhì)聯(lián)用等,分析生物樣品中有效成分原型或代謝物,進(jìn)行中藥復(fù)方的體內(nèi)成分分析、體內(nèi)過程和動力學(xué)研究。目前用藥物濃度法進(jìn)行藥代動力學(xué)研究已成為中藥復(fù)方藥代動力學(xué)研究的熱點(diǎn),近年這方面的研究報(bào)道很多。如報(bào)道大鼠口服黃芩湯后用HPLC法測定血漿中的多種成分:黃芩苷、漢黃芩苷、千層紙素A苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A、芍藥苷、甘草苷、甘草素、甘草酸、烏拉爾甘草次酸、paeonimetabolin-I(PM-I),再分別計(jì)算各自的藥動學(xué)參數(shù)[3];用HPLC法測定大鼠口服甘草附子湯后血漿中烏拉爾甘草次酸的藥動學(xué)參數(shù)[4];用SPE和HPLC法研究大鼠口服四物湯后血漿中白花素、芍藥苷的藥動學(xué)特征[5];用LC-ESI-MS法研究大鼠口服黃連解毒湯后血漿中小檗堿、巴馬丁的藥動學(xué)特征[6]。然而,在采用藥物濃度法進(jìn)行中藥復(fù)方藥代動力學(xué)研究中,盡管有些報(bào)道檢測了復(fù)方給藥后體內(nèi)多種成分,再對每一種成分逐一進(jìn)行動力學(xué)分析,從而避免了單一成分的藥動學(xué)脫離了中醫(yī)藥整體觀思想,但這些研究仍沒有闡明多種成分與復(fù)方藥效的關(guān)系,因此,這種多種成分的藥動學(xué)研究也難以合理地闡明中藥復(fù)方的藥代動力學(xué)特征。中藥復(fù)方藥代動力學(xué)研究中,上述常用的藥物濃度法也存在缺陷[7]。由于中藥復(fù)方化學(xué)成分的復(fù)雜性、中藥藥效的多效性和中醫(yī)臨床應(yīng)用的辨證施治及復(fù)方配伍的中醫(yī)特色等特點(diǎn),使得中藥復(fù)方藥代動力學(xué)研究有別于化學(xué)藥品的藥代動力學(xué)研究,而有其特殊性和復(fù)雜性[8]。
2 生物效應(yīng)法
適用于有效成分尚不明確的中藥及其復(fù)方制劑。采用單一組分為指標(biāo),用體液藥物分析方法求得的藥動學(xué)參數(shù)代表中藥整體的藥動學(xué)有很大的局限性。20世紀(jì)80年代初期產(chǎn)生了以藥效為指標(biāo)進(jìn)行藥動學(xué)研究的理論和方法,主要包括毒理效應(yīng)法、藥理效應(yīng)法和微生物指標(biāo)法。這些方法體現(xiàn)了整體觀,從而使中藥藥動學(xué)研究邁向了一個(gè)新階段。
2.1 毒理效應(yīng)法 該法分為急性累計(jì)致死率法及LD50補(bǔ)量法。急性累計(jì)致死率法基本原理是將藥物動力學(xué)中的血藥濃度多點(diǎn)測定原理與用動物急性致死率測定藥物蓄積性的方法結(jié)合起來,即給多組動物不同時(shí)間間隔給藥,求出不同時(shí)間體存百分率的動態(tài)變化,由此推算藥動學(xué)參數(shù)。LD50補(bǔ)量法在急性累計(jì)致死率法基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn),將第2次腹腔注射同量藥物改為求測LD50(t)。其優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果更精確,誤差小;但動物用量成倍增加,操作更加復(fù)雜。用此法進(jìn)行藥代動力學(xué)研究的有含劇毒藥馬錢子的九分散和疏風(fēng)定痛丸,結(jié)果表明:兔體內(nèi),兩者均符合一房室模型;馬錢子在體內(nèi)吸收迅速,而疏風(fēng)定痛丸吸收較九分散慢,從而降低毒性和不良反應(yīng)[9],為臨床合理用此類中藥提供了依據(jù)。劉延福等[10]研究附子理中丸在小鼠體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù),結(jié)果表明:按一級動力學(xué)消除,呈二室開放模型。此法觀察指標(biāo)明確,實(shí)驗(yàn)操作簡便,但只適用于藥理效應(yīng)和毒理效應(yīng)是同一組分的中藥。同時(shí)它以藥物毒性為主要指標(biāo)來反映藥代動力學(xué)規(guī)律,不能代表有效量的藥代動力學(xué)規(guī)律。
2.2 藥理效應(yīng)法 基本原理和方法是假定藥物在體內(nèi)呈線性配置,藥物在作用部位的藥量Q(t)與藥物效應(yīng)強(qiáng)度(E)存在函數(shù)關(guān)系Q(t)=f[E(t)],而Q(t)又與給藥劑量(D)成正比。所以給藥后某時(shí)刻生物相藥量Q(t)與該時(shí)刻的效應(yīng)強(qiáng)度E之間的函數(shù)關(guān)系便可以用給藥劑量D與效應(yīng)強(qiáng)度E的函數(shù)關(guān)系D=f[E(t)]來表示,建立“時(shí)間-效應(yīng)曲線”,然后再變換為“血藥濃度-時(shí)間曲線”,求出動力學(xué)參數(shù)。該法以越來越廣泛地用于中藥及其復(fù)方制劑地藥動學(xué)研究中。如富杭育等[11-14]分別以解熱、發(fā)汗、抗炎、抑制腸蠕動等藥理效應(yīng)為指標(biāo),研究了麻黃湯、桂枝湯、銀翹散、桑菊飲等的藥物動力學(xué)。盧賀起等[15]以血小板聚集抑制率為藥效指標(biāo),研究了四物湯的藥動學(xué),結(jié)果表明:家兔經(jīng)口服給藥后體內(nèi)過程符合一室模型,t1/2α=0.37 h,t1/2β=0.4 h。藥理效應(yīng)法研究中藥復(fù)方藥動學(xué),更能體現(xiàn)中醫(yī)藥的整體思想,符合中醫(yī)藥的基本理論,是一極具發(fā)展前景的方法。但由于生物差異性,以及測定方法的準(zhǔn)確度、精密度等限制,所得參數(shù)具有表觀性;難于找到靈敏又準(zhǔn)確地定量療效的藥理指標(biāo);而且由于所選藥效指標(biāo)的不同,測得的藥動學(xué)參數(shù)差異較大。
2.3 微生物指標(biāo)法 其原理主要是含試驗(yàn)菌株的瓊脂平板中抗菌藥擴(kuò)散產(chǎn)生的抑菌圈直徑與其濃度的對數(shù)呈線性關(guān)系。選擇適宜的標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)細(xì)菌菌株,可以測定體液生物樣品濃度,計(jì)算藥動學(xué)參數(shù)。王西發(fā)等[16]選用金葡菌為試驗(yàn)菌株,用此法測定了鹿蹄草素在兔體內(nèi)的藥動學(xué)參數(shù)。潘嘉等[17]以抑菌效應(yīng)為指標(biāo),測定川芎揮發(fā)油藥動學(xué)參數(shù),符合一室開放模型。此法適用于具有或以抗菌活性為主要藥效的中藥制劑,有簡便易行,體液用量少等優(yōu)點(diǎn)。但特異性不高,測定結(jié)果包括具有抗菌活性的代謝物;機(jī)體內(nèi)外抗菌效應(yīng)作用機(jī)制的差異、細(xì)菌選擇的得當(dāng)與否、可在一定程度上影響藥代參數(shù)的準(zhǔn)確性。
3 PK-PD模型、PB-PK模型的建立及應(yīng)用
3.1 PK-PD模型應(yīng)用 藥物PK-PD模型[18]反應(yīng)了藥物濃度-時(shí)間-效應(yīng)的三維關(guān)系,體現(xiàn)了特定時(shí)間內(nèi)藥物濃度與藥效之間的關(guān)系,故能描述和預(yù)測一定劑量下藥物的時(shí)間-效應(yīng)過程。藥物動力學(xué)(PK)解釋的是“機(jī)體對藥物的處置”問題;藥效動力學(xué)解釋的是“藥物對機(jī)體的作用”問題,將二者分開研究所得到的信息并不全面和充分。與藥效或不良反應(yīng)密切相關(guān)的被測藥物濃度隨時(shí)間的變化過程是我們迫切需要掌握的信息,這樣的PK研究才有意義;PD研究只涉及時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系,未涉及到效應(yīng)室中藥物濃度隨時(shí)間變化的藥效變化過程,實(shí)際情況中藥效峰值出現(xiàn)時(shí)間常滯后于血藥濃度峰值(藥效與血藥濃度之間存在逆時(shí)針滯后環(huán)),孤立的進(jìn)行PK或PD研究不能闡明藥物的體內(nèi)過程,故有必要建立PK-PD結(jié)合模型,對藥物的濃度-時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系進(jìn)行估算,通過對靶部位藥物濃度及藥效的關(guān)聯(lián)度分析,評估藥物的體內(nèi)過程。
3.2 PB-PK模型應(yīng)用 血藥濃度法和生物效應(yīng)法目前占據(jù)了復(fù)方藥動學(xué)研究的主導(dǎo)地位。PB-PK模型結(jié)構(gòu)與生物體解剖結(jié)構(gòu)大致對應(yīng)[19],參數(shù)來自生理解剖資料和藥物理化性質(zhì),PB-PK模型以生理解剖資料和藥物理化性質(zhì)為基礎(chǔ)來分析藥時(shí)數(shù)據(jù),且有強(qiáng)大的種屬間外推(Interspecies Extrapolation)能力[20],所得參數(shù)更具有實(shí)際的生理意義,相比房室模型更有優(yōu)越性和實(shí)用價(jià)值,可提供其他模型不能提供的參數(shù)(如藥物在人體器官內(nèi)的代謝速率常數(shù)、進(jìn)入器官的彌散系數(shù)等等),故有必要加強(qiáng)中藥復(fù)方的PB-PK模型研究以PB-PK模型參數(shù)提供更多有實(shí)際意義的參數(shù)為復(fù)方配伍規(guī)律進(jìn)行參考。
4 小結(jié)
目前中藥藥代動力學(xué)研究尚處于探索階段。對中藥藥動學(xué)研究,雖然已經(jīng)取得了很大進(jìn)展,但仍然在許多方面存在著問題需要我們?nèi)ソ鉀Q。首先對中藥的整體觀難以把握,目前對于中藥復(fù)方的研究多數(shù)以其中一種或幾種成分為代表以此成分的代謝過程來表示整個(gè)復(fù)方的代謝過程。很明顯中藥方劑中依靠單一成分作用于單一靶點(diǎn)而發(fā)揮全部藥效功能的情況很少見,無論復(fù)方還是單方都是個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng),多個(gè)成分相互拮抗和協(xié)同產(chǎn)生的綜合作用。所以在研究中不應(yīng)背離中醫(yī)藥整體觀的理論基礎(chǔ),過分依賴西藥化模式和西藥植物藥的研究思路。其次中藥化學(xué)成分是復(fù)雜和多樣的,中藥處方的變異性和狀態(tài)的不可預(yù)測性,給藥物治療的物質(zhì)基礎(chǔ)研究帶來許多問題,上述對純化學(xué)來源的藥物可以分析的方法,還是難以全面認(rèn)識中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。還有眾多的中藥復(fù)方雖然臨床療效確切,但長期臨床應(yīng)用是按中醫(yī)理論和經(jīng)驗(yàn)用藥的,對其作用機(jī)制的內(nèi)涵以及與物質(zhì)基礎(chǔ)的關(guān)系,尤其是從藥代動力學(xué)角度進(jìn)行研究與國際水平還有相當(dāng)差距。但是我相信隨著藥代動力學(xué)的不斷發(fā)展,不斷涌現(xiàn)出來的新方法和理論許多新技術(shù)如:超臨界流體萃取、在體微透析、核磁共振、生物電阻抗、細(xì)胞培養(yǎng)研究體外吸收模型等,將會將為單味和復(fù)方中藥的藥代動力學(xué)研究開辟了新思路。
參 考 文 獻(xiàn)
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篇7
中藥藥劑學(xué)是以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，研究中藥藥劑的配制理論、生產(chǎn)技術(shù)、質(zhì)量控制和合理應(yīng)用等內(nèi)容的一門綜合性應(yīng)用技術(shù)科學(xué)。
《中藥藥劑學(xué)》是中藥學(xué)專業(yè)的主干專業(yè)課，它不僅與本專業(yè)的各門基礎(chǔ)課、專業(yè)基礎(chǔ)課和其他專業(yè)課有著密切的聯(lián)系，而且與中藥工業(yè)化生產(chǎn)和臨床醫(yī)療密切相關(guān)，也是連接中醫(yī)與中藥的紐帶，是實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的重要組成部分。
根據(jù)中藥學(xué)專業(yè)（專升本）入學(xué)需要，中藥藥劑學(xué)知識考試內(nèi)容的總體要求分為掌握、熟悉、了解三個(gè)層次：
掌握中藥常用劑型的概念、特點(diǎn)、制備工藝和質(zhì)量控制等的基礎(chǔ)理論、基本知識和技能，掌握現(xiàn)代藥劑學(xué)的有關(guān)理論與技術(shù)；熟悉藥劑常用輔料，專用設(shè)備的基本構(gòu)造、性能及使用保養(yǎng)方法等內(nèi)容；了解國內(nèi)外藥劑學(xué)研究新進(jìn)展。
二、考試內(nèi)容
第一章 緒 論
1．掌握中藥藥劑學(xué)的含義、理論體系的特點(diǎn)與任務(wù)；中藥劑型選擇的基本原則；《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）、《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（簡稱《部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》）及有關(guān)藥品管理法規(guī)的性質(zhì)、特點(diǎn)與使用方法。
2．熟悉《中藥藥劑學(xué)》常用術(shù)語的概念；中藥藥劑學(xué)在中醫(yī)藥事業(yè)中的地位與作用；《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（簡稱CMP）、《藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》（簡稱CLP）、《藥品臨床試驗(yàn)管理規(guī)范》（簡稱GCP）及《甲藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（簡稱CAP）等。
3．了解《中藥藥劑學(xué)》的發(fā)展簡史、研究進(jìn)展與方向；中藥劑型的分類方法；現(xiàn)代藥劑學(xué)的分支學(xué)科。
第二章 中藥調(diào)劑
1．掌握處方的調(diào)配程序與注意事項(xiàng)。
2．熟悉中藥“斗譜”排列的一般原則，處方藥、非處方藥的基本概念；中藥毒性藥品種及用量；處方禁忌藥。
3．了解處方種類與格式；非處方藥的遴選原則；中藥學(xué)的配伍變化與現(xiàn)代研究簡況。
第三章 制藥衛(wèi)生
1．掌握常用的滅菌方法和主要防腐劑的正確用法。
2．熟悉制藥衛(wèi)生的意義和基本要求，預(yù)防藥劑污染的主要環(huán)節(jié)。
3．了解制藥環(huán)境衛(wèi)生的要求與管理、無菌操作法和無菌檢查法。
第四章 粉碎、篩析、混合與制粒
1．掌握藥料粉碎、篩析、混合與制粒的目的與基本原理。
2．掌握常用的粉碎、混合、制粒方法。
3．熟悉粉碎、篩析、混合、制粒常用機(jī)械的構(gòu)造、性能及使用保養(yǎng)方法。
4．了解粉粒學(xué)在藥劑中的應(yīng)用。
第五章 散 劑
1．掌握散劑的一般制備方法，以及含毒性藥物散劑、低共熔物散劑、含液體藥物散劑、眼用散劑等的制備原則和方法。
2．熟悉散劑的含義、特點(diǎn)、分類、質(zhì)量要求及檢查方法。
第六章 中藥的浸提、分離與精制
1．掌握中藥浸提的過程及其影響因素；常用的浸提方法與選用；各種分離方法的特點(diǎn)與選用；常用精制方法的原理與選用。
2．熟悉中藥浸提、分離、精制的目的；浸提常用設(shè)備的構(gòu)造、性能與使用保養(yǎng)。
3．了解中藥浸提常用溶劑和漫提輔助劑；藥材成分與療效的關(guān)系。
第七章 提取液的濃縮與干燥
1．掌握影響藥液濃縮的因素，常用的濃縮方法、原理及其選用；影響藥物干燥的因素，常用的干燥方法、原理及其選用。
2．熟悉中藥常用濃縮、干燥設(shè)備的性能及使用保養(yǎng)。
第八章 浸出藥劑
1．掌握湯劑、中藥合劑、口服液、糖漿劑、煎膏劑、藥酒、酊劑、流浸膏劑、浸膏劑、茶劑的制備方法與注意事項(xiàng)。
2．熟悉浸出藥劑的含義、特點(diǎn)及劑型種類；各種劑型的含義、特點(diǎn)、質(zhì)量要求及控制方法。
3．了解湯劑研究及劑改的進(jìn)展；煎膏“返砂”原因及解決途徑；液體類浸出藥劑的生霉發(fā)酵、渾濁、沉淀的原因及解決途徑等。
第九章 液體制劑
1．掌握液體藥劑的含義、分類、應(yīng)用特點(diǎn)；分散度與療效的關(guān)系；表面活性劑的基本性質(zhì)與選用；藥劑中增加藥物溶解度的方法；真溶液型藥劑、膠體溶液型藥劑、乳濁液型藥劑、混懸液型藥劑的特點(diǎn)與制法。
2．熟悉溶解、增溶、助溶、乳化、混懸的概念；增溶機(jī)制；膠體溶液的穩(wěn)定性及其影響因素；乳劑形成理論及其穩(wěn)定性，乳化劑的選用；混懸劑的穩(wěn)定性；真溶液、膠體溶液、乳濁液、混懸液的質(zhì)量評定。
3．了解按給藥途徑和應(yīng)用方法分類的各種液體劑型的概念及特點(diǎn)；液體藥劑的色、香、味及包裝貯藏與產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)系。
4．了解灌腸劑等其他液體藥劑的概念與制法。
第十章 注射劑（附眼用溶液劑）
1．掌握中藥注射劑、輸液劑的含義、特點(diǎn)、分類和質(zhì)量要求；中藥注射用原液的制備；中藥注射劑制備的工藝過程與技術(shù)關(guān)鍵；熱原的性質(zhì)、污染途徑及除去方法，熱原的檢查方法。
2．熟悉注射劑常用溶劑的種類；注射用水的質(zhì)量要求及蒸餾法制備注射用水；注射用油的質(zhì)量要求及精制法；注射劑常用附加劑的種類、性質(zhì)、選用和質(zhì)量要求及處理；中藥注射劑的質(zhì)量控制與存在的問題及解決途徑；中藥注射劑指紋圖譜。
3．了解中藥注射劑的發(fā)展概況：注射劑容器的種類；血漿代用液、粉針劑、注射用混懸液及乳濁液的質(zhì)量要求和制備要點(diǎn)；容器處理及分裝等。
第十一章 外用膏劑
1．掌握軟膏劑、黑膏藥、橡膠膏劑的含義、特點(diǎn)與制法。
2．熟悉外用膏劑的透皮吸收機(jī)理及影響藥物釋放、穿透、吸收的因素；凝膠劑、巴布劑、糊劑、涂膜劑及透皮貼劑的含義、特點(diǎn)與制法；軟膏劑與黑膏藥基質(zhì)種類和性質(zhì)。
3．了解外用膏劑的質(zhì)量要求，了解凝膠劑、巴布劑、糊劑、涂膜劑及透皮貼劑基質(zhì)的種類。
第十二章 栓 劑
1．掌握栓劑的含義和特點(diǎn)；藥物吸收的途徑與影響吸收的因素；熱熔法制備栓劑的工藝要求；置換價(jià)的含義及其計(jì)算方法。
2．熟悉栓劑常用基質(zhì)的種類、特點(diǎn)以及栓劑的質(zhì)量要求。
3．了解栓劑的發(fā)展概況以及包裝貯藏要求。
第十三章 膠 劑
1．掌握膠劑的含義、特點(diǎn)與制備。
2．熟悉膠劑原輔料的選擇與處理。
第十四章 膠囊劑
1．掌握硬膠囊劑、軟膠囊劑的含義、特點(diǎn)與制法。
2．熟悉硬膠囊劑、軟膠囊劑的質(zhì)量評定；腸溶膠囊劑的特點(diǎn)與制法。
第十五章 丸 劑
1．掌握泛制法、塑制法制備丸劑的方法、基本理論和技能；水丸、蜜丸、濃縮丸、滴丸的含義與應(yīng)用。
2．熟悉滴制法制備丸劑的基本原理與過程；糊丸、蠟丸的含義、特點(diǎn)與制法；丸劑的包衣與質(zhì)量檢查方法。
3．了解丸劑包衣種類與方法；丸劑的染菌與防腐；丸劑的包裝與貯藏。
第十六章 顆粒劑
1．掌握顆粒劑的含義、特點(diǎn)、質(zhì)量要求和制備方法。
2．熟悉顆粒劑的類型。
第十七章 片 劑
1．掌握片劑的含義、特點(diǎn)、種類與應(yīng)用；片劑常用輔料的種類、性質(zhì)和應(yīng)用；中藥片劑的一般制法。
2．熟悉壓片機(jī)的構(gòu)造、性能及其使用保養(yǎng)；壓片過程中可能發(fā)生的問題和解決方法；片劑包衣的目的、種類，素片的要求與包衣工藝；片劑的質(zhì)量檢查。
3．了解片劑形成的理論；腸溶衣崩解或溶解機(jī)理與質(zhì)量控制；中藥片劑新產(chǎn)品設(shè)計(jì)中應(yīng)注意的主要問題。
第十八章 氣霧劑與氣壓劑
1．掌握氣霧劑和氣壓劑的含義、種類與特點(diǎn)；氣霧劑的制備方法和質(zhì)量要求。
2．熟悉氣霧劑的組成；藥物經(jīng)肺吸收的機(jī)理。
3．了解氣壓劑的含義、分類和制備方法。
第十九章 其它劑型
1．掌握膜劑的處方組成及制備方法。
2．熟悉膜劑成膜材料的性質(zhì)與選用；熟悉海綿劑的特點(diǎn)與質(zhì)量要求
3．了解煙劑、煙熏劑、香囊（袋）劑、離子透入劑與沐浴劑的特點(diǎn)及應(yīng)用；了解丹藥的特點(diǎn)、制備和防護(hù)措施；了解錠劑、糕劑、釘劑、線劑、條劑、灸劑、熨劑與棒劑的含義與用法。
第二十章 藥物制劑新技術(shù)
1．掌握β－環(huán)糊精包合技術(shù)、單凝聚法、復(fù)凝聚法微型包囊技術(shù)；固體分散體成型技術(shù)；脂質(zhì)體制備技術(shù)。
2．熟悉緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑的含義、作用特點(diǎn)、制備方法。
3．了解其他新技術(shù)（如磁性微球制備技術(shù)、前體藥物制劑的制備技術(shù)等）在中藥藥劑中的應(yīng)用。
第十一章 中藥制劑的穩(wěn)定性
1．掌握中藥制劑穩(wěn)定性的考察方法及有效期的求解。
2．熟悉影響中藥制劑穩(wěn)定性的主要因素及常用的穩(wěn)定化措施。
3．了解研究藥劑穩(wěn)定性的意義；包裝材料與藥劑穩(wěn)定性的關(guān)系。
第二十二章 生物藥劑學(xué)與藥物動力學(xué)
1．掌握生物藥劑學(xué)的概念、研究的基本內(nèi)容，藥物的體內(nèi)過程，藥物動力學(xué)的慨念和研究的基本內(nèi)容，生物利用度的含義及測定方法，溶出度測定的意義及方法。
2．熟悉影響制劑療效的劑型因素，藥物動力學(xué)參數(shù)的意義和求算，藥物動力學(xué)和生物藥劑學(xué)的研究方法。
3．了解影響制劑療效的生物因素，中藥制劑生物利用度和藥物動力學(xué)的研究進(jìn)展。
第二十三章 藥物制劑的配伍變化
1．掌握藥物制劑配伍變化的含義；藥劑學(xué)配伍變化的內(nèi)容；溶液中配伍變化的實(shí)驗(yàn)方法；發(fā)生配伍變化后的處理方法。
2．熟悉藥理學(xué)和注射液配伍變化的分類及其發(fā)生原因。
第二十四章 中藥新藥的研制
1．掌握新藥的含義與中藥、天然藥物的注冊管理規(guī)定。
篇8
【摘要】
目的探討多烯紫杉醇脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)代謝過程。方法優(yōu)化色譜條件，以萃取濃集法處理生物樣品，內(nèi)標(biāo)法測定樣品中藥物含量；SD大鼠尾靜脈給藥后測定設(shè)定時(shí)間點(diǎn)體內(nèi)藥物濃度，用2.0版DAS軟件分析藥物體內(nèi)動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果經(jīng)優(yōu)化色譜條件，在0.05～25 μg/ml濃度范圍內(nèi)，多烯紫杉醇線性關(guān)系良好。藥物體內(nèi)過程符合雙室模型，主要藥物代謝動力學(xué)參數(shù)均值為：分布半衰期(T1/2α)為2.374 min；消除半衰期(T1/2β)為299.038 min；清除率(CL)為0.026 L/(min·mg)；表觀分布容積(V1)為0.219 L/kg。結(jié)論該研究為開發(fā)多烯紫杉醇脂質(zhì)體提供體內(nèi)動力學(xué)參考。
【關(guān)鍵詞】 多烯紫杉醇； 脂質(zhì)體； 藥物代謝動力學(xué)； 大鼠
Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for in vivio docetaxel determination and do some research on pharmacokinetics of docetaxel liposomes in rats. MethodsHPLC method was optimized and samples were concentrated via ether extraction and determined with inner-standard method. Docetaxel liposome was given intravenously at 10 mg/kg to SD rats and blood sample was taken at chosen time interval and docetaxel conentration was determined， according to which pharmacokinetic parameters were gained via DAS 2.0.ResultsThe chosen mobile phase was methonol: water(45∶55) and wavelength was 233nm. Within the range of 0.05～25 μg/ml there was an excellent linear correlation and the regression equation of peak area ratio to concentration was Y =0.396 8 X +0.680 8 ( r = 0.999 4). The pharmacokinetic result revealed it a double-department model and the kinetic parameters were T1/2α=2.374min， T1/2β=299.038 min， CL=0.026 L/(min·mg)and Vl=0.219 L/kg.ConclusionThe study focused on kinetic properties of docetaxel liposome in order to provide theoratical support for clinical researches.
Key words：Docetael; Liposome; Pharmacokineties; Rats
紫杉醇和多烯紫杉醇在腫瘤預(yù)防、治療方面的作用，國內(nèi)外許多研究已經(jīng)證實(shí)［1］，但受其理化性質(zhì)的制約，現(xiàn)上市的一些制劑不能有效發(fā)揮其臨床療效［2］。而脂質(zhì)體靶向給藥技術(shù)研究日益成熟，使開發(fā)多烯紫杉醇新制劑成為可能。目前，紫杉醇脂質(zhì)體制劑已上市，并取得了良好的療效，而國內(nèi)多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑研究未見報(bào)道。為此，本研究探討該藥物制劑大鼠體內(nèi)代謝過程，以期為開發(fā)多烯紫杉醇脂質(zhì)體提供體內(nèi)動力學(xué)參考。
1 儀器與試藥
1.1 儀器 高效液相色譜儀（LC-20AT泵，SPD-20AC檢測器，AT-330柱溫箱，CBM-102）； TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。
1.2 藥品與試劑 紫杉醇及多烯紫杉醇對照品（中國藥品與生物制品檢定所），多烯紫杉醇脂質(zhì)體（四川大學(xué)華西藥學(xué)院提供），乙腈（色譜純）；甲醇（色譜純）；純凈水，其余試劑均為分析純。
1.3 動物 健康雄性SD大鼠5只，體重180～220g，四川大學(xué)華西動物中心提供。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件［3，4］色譜柱為Hypersil ODS C18（4.0mm×200 mm，5 μm）；流動相為乙腈∶水(45∶55，加磷酸調(diào)pH至4.5)，流速1 ml/min；柱溫35℃；檢測波長233 nm，內(nèi)標(biāo)為1 μg/ml紫杉醇甲醇溶液。
2.2
實(shí)驗(yàn)方案 健康雄性SD大鼠5只，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，給藥前編號并稱重，按10 mg/kg分別尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑（1 mg/ml），給藥后5，10，15，30，60，120，240，480 min，斷尾取血0.5 ml，分離血漿，-20℃保存待測。
2.3
溶液配制
2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液精密稱取多烯紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg，置100 ml容量瓶中，甲醇溶解并定容，搖勻得 100 μg /ml的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，4℃避光保存。精密吸取適量，用甲醇稀釋配成濃度分別為0.1，0.3，0.5，1.0，10.0，50.0 μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
轉(zhuǎn)貼于
2.3.2
內(nèi)標(biāo)溶液精密稱取紫杉醇對照品適量，甲醇溶解并稀釋，制成濃度為1 μg/ml的內(nèi)標(biāo)溶液。
2.4
血漿樣品處理 取大鼠血漿100 μl，加入醋酸緩沖液10 μl，充分混勻，加入內(nèi)標(biāo)液100 μl、甲醇100 μl、乙醚1 ml，旋渦混合5min，離心（5 000 r/min）10 min。精密吸取上清液0.8 ml，置于1 ml尖底離心管中，氮?dú)饬鲹]干，殘?jiān)?0 μl甲醇溶解，離心（10 000 r/min）10 min，待測。
2.5 色譜專屬性考察以“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定標(biāo)準(zhǔn)溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、空白血漿及血漿樣品，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。圖中基線平穩(wěn)，峰形銳利，說明血漿中內(nèi)源性成分對測定成分無干擾。
圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液、內(nèi)標(biāo)溶液、空白血漿及血漿樣品色譜圖（略）
2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系 取大鼠空白血漿100 μl，共6份，分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μl，制成含標(biāo)準(zhǔn)溶液分別為0.05，0.15，0.25，0.5，5，25 μg/ml的質(zhì)控樣品，按“2.4” 項(xiàng)下操作，10 μl進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)，樣品峰面積（As）與內(nèi)標(biāo)峰面積（Ai）的比值（As/Ai）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=0.396 8X+0.680 8（r=0.999 4），表明多烯紫杉醇在0.05～25 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.7
精密度考察取大鼠空白血漿100 μl，按“2.6”項(xiàng)，配制低、中、高3種濃度（0.3，1.0，10 μg/ml）的質(zhì)控樣品，每一濃度5個(gè)樣品，連續(xù)測定3 d，并做隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算日內(nèi)精密度（n=5）RSD分別為4.36%，3.78%，4.21%，日間精密度（n=15）RSD分別為5.48%，5.21%，4.72%，表明該方法符合生物樣品分析要求。
2.8
萃取回收率測定 取大鼠空白血漿100 μl，按“2.6”項(xiàng)，配制低、中、高3種濃度（0.3，1.0，10μg/ml）質(zhì)控樣品，每一濃度5個(gè)樣品，按“2.4”項(xiàng)下，10 μl進(jìn)樣測定，以萃取后多烯紫杉醇的峰面積與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積之比（As/Ai），考察萃取回收率，3種濃度樣品萃取回收率分別為87.23%，91.46%，88.27%，表明采用乙醚做萃取溶劑，藥物回收率良好。
2.9 藥物動力學(xué)研究 取單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑的血漿樣品，按“2.4”項(xiàng)下，10μl進(jìn)樣測定，每天做隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線，5只大鼠單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體制劑后，平均藥-時(shí)曲線（見圖2、表1），采用2.0版DAS軟件處理表1數(shù)據(jù)，進(jìn)行模型擬合。結(jié)果見表2。
圖2 單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體后血藥濃度平均藥-時(shí)曲線（略）
表1 單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體后血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)（略）
表2 黃芩苷對SMMC7721細(xì)胞生長周期的影響（略）
3
討論
本研究首次以多烯紫杉醇脂質(zhì)體為對象，探討其在大鼠體內(nèi)的代謝過程。研究表明該方法線性關(guān)系良好，萃取回收率、方法回收率、日內(nèi)精密度、日間精密度均較高，符合生物樣品分析要求［5］。
大鼠單劑量尾靜脈注射多烯紫杉醇脂質(zhì)體后，采用2.0版DAS軟件分析不同時(shí)間點(diǎn)血藥濃度，表明血漿藥-時(shí)曲線符合雙指數(shù)線性動力學(xué)模型。
目前國內(nèi)有關(guān)紫杉醇脂質(zhì)體新制劑研究較多，而多烯紫杉醇脂質(zhì)體研究尚未見報(bào)道，因此本研究探討大鼠體內(nèi)行為，為促進(jìn)多烯紫杉醇在臨床中的應(yīng)用研究，提供一定的理論基礎(chǔ)及科學(xué)依據(jù)。
參考文獻(xiàn)
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篇9
同一種藥物,同一劑量,在一天中的不同時(shí)間服用,其療效和毒性可能相差幾倍甚至幾十倍。所以人們用藥必須考慮合理的給藥時(shí)間,這在醫(yī)學(xué)上又稱“時(shí)間藥理學(xué)”。時(shí)間藥理學(xué)是研究藥物和生物周期相互關(guān)系的一門學(xué)科。時(shí)間藥理學(xué)研究表明,機(jī)體內(nèi)藥物濃度的動態(tài)變化和機(jī)體的反應(yīng)性往往受到機(jī)體節(jié)律性的影響,只有在認(rèn)識晝夜節(jié)律性的前提下來設(shè)計(jì)給藥方案,才能最大限度地提高療效,并使不良反應(yīng)減少到最小。時(shí)間藥理學(xué)包括時(shí)間藥物動力學(xué)和時(shí)間藥效學(xué),在臨床用藥中應(yīng)用這些原理制定最佳給藥方案,以及進(jìn)行藥理學(xué)研究具有重要意義。
1時(shí)間藥物動力學(xué)
藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程中也具有時(shí)辰節(jié)律性。通過時(shí)間藥物動力學(xué)研究,結(jié)果表明:有一些代謝酶的活性具有時(shí)間節(jié)律性,如嚙齒動物肝藥酶峰相大約在午夜2:00,而午后14:00活性最低。同時(shí)時(shí)間對藥物的排泄(尿、糞、汗和唾液等)也有顯著的晝夜節(jié)律,如酒在下午至晚上(14:00～20:00)在體內(nèi)的代謝和血清廓清率、腎小球?yàn)V過率、尿排出量最高[1]。近年來對中藥的有效成分也進(jìn)行了一些時(shí)間藥物動力學(xué)的研究工作,并取得了較好的成績。應(yīng)用現(xiàn)代酶學(xué)實(shí)驗(yàn)方法觀察了鼠肝微粒體藥物代謝酶的三項(xiàng)指標(biāo)隨時(shí)間變化的情況,結(jié)果表明:細(xì)胞色素P450總量、NADPH細(xì)胞色素C還原酶和二甲基亞硝胺脫甲基酶三項(xiàng)指標(biāo)均具有晝夜節(jié)律性變化。這一結(jié)果對探討中醫(yī)學(xué)擇時(shí)用藥原則有一定意義。擇時(shí)用藥即選擇藥物最佳作用時(shí)間,從而達(dá)到臨床效果的時(shí)間治療學(xué)方法[2]。在自然光照條件下研究青藤有效成分對大鼠的藥動學(xué),于卯時(shí)(7:00)和酉時(shí)(19:00)給予相同劑量青藤堿,結(jié)果表明:卯時(shí)給藥血漿及腦中青藤堿濃度明顯高于酉時(shí)(P
2時(shí)間藥效學(xué)
藥物的作用及不良反應(yīng)不僅取決于藥物的性質(zhì)、給藥劑量和時(shí)間,也取決于靶器官、靶組織的敏感性及狀態(tài)。現(xiàn)已證明,許多靶組織、器官對藥物的敏感性具有晝夜節(jié)律依賴性[4],造成時(shí)間藥效學(xué)呈時(shí)間依賴性。在研究大承氣湯對小鼠瀉下作用的時(shí)間差異時(shí),應(yīng)用糞便色點(diǎn)測定法觀察正常小鼠排便的晝夜變化及擇時(shí)應(yīng)用大承氣湯對小鼠瀉下作用的影響。結(jié)果表明:正常小鼠排便存在著明顯的晝夜節(jié)律,且在酉(18:00)、子(24:00)、卯(6:00)、午(12:00)四個(gè)時(shí)辰分別用大承氣湯(22 g/kg)給小鼠灌胃,引起小鼠瀉下的作用以卯時(shí)最強(qiáng),與其他各時(shí)辰給藥組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[5]。用大柴胡湯對膽囊的利膽作用進(jìn)行了時(shí)間藥效學(xué)的研究,對20例胸脅苦滿患者于午、酉、卯、亥、巳時(shí)口服小柴胡湯后,膽囊的收縮率、擴(kuò)張率表明:利膽作用在子時(shí)與午時(shí),酉時(shí)與卯時(shí),亥時(shí)與巳時(shí)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
根據(jù)時(shí)間藥理學(xué)原則用藥可進(jìn)一步減少用藥的盲目性,使藥物投藥時(shí)間與人體生理、病理節(jié)律相適應(yīng),提高臨床治療效果。因此掌握藥物時(shí)間節(jié)律對指導(dǎo)安全合理用藥有重要意義。而且它的發(fā)展必將推動我們重新審識藥物的應(yīng)用,真正把藥物的經(jīng)驗(yàn)應(yīng)用轉(zhuǎn)變成科學(xué)應(yīng)用。
參考文獻(xiàn):
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[5]羅衛(wèi)芳.大承氣湯的時(shí)間藥理學(xué)[J].中藥藥理與臨床,1995,11(3):7.
篇10
[關(guān)鍵詞] 燈盞細(xì)辛注射液；綠原酸；咖啡酸；大鼠；藥代動力學(xué)；LC-MS/MS
[稿件編號] 2013-03-13
[基金項(xiàng)目] 國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（2012ZX09303009-002）；江蘇省中醫(yī)藥領(lǐng)軍人才項(xiàng)目（LJ200906）；江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目（2010）
[通信作者] *居文政，Tel：（025）86617141-60310，E-mail：wzhju333@163、com 燈盞細(xì)辛注射液為燈盞細(xì)辛的干燥全草經(jīng)提取制成的中藥注射液，收載于2010年版《中國藥典》一部[1]，具有活血化瘀，通絡(luò)止痛的功效，是目前臨床上使用較為廣泛的治療心腦血管疾病的傳統(tǒng)中藥之一。以往研究表明燈盞細(xì)辛的有效成分主要為黃酮類成分――燈盞乙素。通過深入研究，發(fā)現(xiàn)酚酸類成分也具有擴(kuò)張血管和抑制血栓形成的藥理活性[2]。中藥酚酸類成分包括咖啡酸、綠原酸等，因其顯著的抗炎、抗氧化、抗凝血等多種生物活性而被國內(nèi)外廣泛研究[3-5]。
在燈盞細(xì)辛注射液中，已證實(shí)黃酮類與酚酸類協(xié)同發(fā)揮藥效作用[6-7]，而燈盞乙素在體內(nèi)代謝過程已有較多文獻(xiàn)報(bào)道[8-10]，對酚酸類成分的體內(nèi)代謝過程研究卻比較少。因此深入研究酚酸類成分對明確燈盞細(xì)辛注射液的藥動藥效至關(guān)重要。本文旨在建立高效、靈敏的LC-MS/MS用于測定大鼠尾靜脈注射燈盞細(xì)辛注射液后綠原酸和咖啡酸的血藥濃度，并用于燈盞細(xì)辛注射液在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究。
1 材料
1、1 試藥 燈盞細(xì)辛注射液（云南生物谷燈盞花藥業(yè)有限公司，批號20120551，規(guī)格10 mL/支）；對照品咖啡酸（批號110885-200102）、綠原酸（批號110753-200413）和替硝唑（批號100336-200402）均購于中國食品藥品檢定研究院。水為超純水，甲酸、甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。
1、2 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀；API 4000 LC-MS/MS三重四級桿質(zhì)譜儀，配有電噴霧化離子源（ESI），色譜工作站：Analyst 1、4、2；AE240電子天平（上海梅特勒-托利多有限公司）；MICRO-17R冷凍離心機(jī)（美國Thermo公司）；WH-2微型旋渦混合儀（上海滬西分析儀器廠）；Drict-Q5超純水機(jī)（法國Millipore公司）。
1、3 動物 SD大鼠，雌雄各半，6只，體重250～270 g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號SCXK（浙）2008-0033。
2 方法
2、1 色譜及質(zhì)譜檢測條件 Agilent ZOBAX SB C18色譜柱（4、6 mm×150 mm， 5 μm）；流動相為甲醇-2 mmol?L-1醋酸銨水溶液（60∶40）；流速為500 μL?min-1；柱溫30 ℃。離子源ESI；離子化模式負(fù)離子；定量模式為多反應(yīng)檢測模式（MRM）；離子源電壓4 000 V；離子源溫度400 ℃；綠原酸的DP，EP，CE，CXP-56 ，-11，-30，-4 V；咖啡酸的DP，EP，CE及CXP分別為-50，-10，-25，-5 V；替硝唑的DP，EP，CE，CXP分別為-25，-10，-15，-8 V；檢測對象綠原酸m/z 353、1/191、0；咖啡酸m/z 178、9/134、9；替硝唑m/z 246、0/125、8。
2、2 對照品溶液的配制 精密稱取適量綠原酸對照品，用甲醇配制成3、84 mg?L-1的儲備液；精密吸取適量，用甲醇分別稀釋成3 840，1 920，960，480，240，120，30 μg?L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密稱取適量咖啡酸對照品，用甲醇配制成1、28 mg?L-1的儲備液；精密吸取適量，用甲醇分別稀釋成1 280，640，320，160，80，40，20 μg?L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。以上溶液于4 ℃保存，備用。
2、3 內(nèi)標(biāo)物溶液的配制 精密稱取適量替硝唑?qū)φ掌?，用甲醇溶解并稀釋?、2 mg?L-1，于4 ℃保存，備用。
2、4 血漿樣品處理 取血漿樣品100 μL，加入1、2 mg?L-1替硝唑溶液（內(nèi)標(biāo)）20 μL，1 mol?L-1鹽酸溶液50 μL，渦旋30 s，再加入乙酸乙酯800 μL，渦旋振搖3 min，12 000 r?min-1離心5 min。取上清液750 μL，40 ℃氮?dú)饬鞔蹈?，?00 μL 50%甲醇復(fù)溶，12 000 r?min-1離心5 min，取上清液5 μL進(jìn)樣分析。
2、5 給藥劑量的確定 燈盞細(xì)辛注射液靜脈注射臨床給藥劑量為20～40 mL?d-1，每日1～2次，人的平均體重按60 kg計(jì)算，則其臨床給藥劑量為0、33～1、33 mL?kg-1。按大鼠每千克體重的臨床等效量是人的6倍計(jì)算，則燈盞細(xì)辛注射液大鼠尾靜脈注射給藥劑量為1、98～7、98 mL?kg-1，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定大鼠給藥劑量為4 mL?kg-1。經(jīng)測定，該注射液中綠原酸質(zhì)量濃度為170、3 mg?L-1，咖啡酸質(zhì)量濃度為135、1 mg?L-1
2、6 藥代動力學(xué)研究 SD大鼠6只，給藥前12 h禁食不禁水，分別尾靜脈注射燈盞細(xì)辛注射液4 mL?kg-1。于給藥前及給藥后5，10，20，30，45 min，1，1、5，2，3，4，6，8，10，12 h經(jīng)眼眶后靜脈叢取血約0、3 mL，置于肝素化試管中，以4 000 r?min-1離心10 min，取上層血漿于-40 ℃保存待測。
2、7 數(shù)據(jù)處理 大鼠靜脈給藥后測得的血藥濃度（C）-時(shí)間（t）數(shù)據(jù)應(yīng)用DAS 1、0軟件進(jìn)行處理。選擇適宜的數(shù)學(xué)模型擬合，計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)。
3 結(jié)果
3、1 專屬性實(shí)驗(yàn) 在本實(shí)驗(yàn)所采用的LC-MS/MS條件下，咖啡酸、綠原酸和替硝唑的保留時(shí)間分別為2、6，2、5，3、4 min?？Х人?、綠原酸和內(nèi)標(biāo)互不干擾，峰形良好，無雜峰干擾，基線平穩(wěn)，見圖1。
3、2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 取空白血漿100 μL，分別加入綠原酸、咖啡酸對照品系列標(biāo)準(zhǔn)溶液各10 μL，配制成相當(dāng)于綠原酸及咖啡酸血漿質(zhì)量濃度分別為3，12，24，48，96，192，384 μg?L-1和2，4，8，16，32，64，128 μg?L-1的血漿樣品。按2、4項(xiàng)下操作，取5 μL進(jìn)樣分析。以各成分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值Y對血漿質(zhì)量濃度X進(jìn)行線性回歸運(yùn)算，求得的回歸方程即為標(biāo)準(zhǔn)曲線。綠原酸回歸方程：Y=0、435 7X-0、010 7（r = 0、998 7），定量下限為3 μg?L-1。咖啡酸回歸方程Y=1、109 8X-0、058 7（r = 0、998 1），定量下限為2 μg?L-1。
3、3 準(zhǔn)確度和精密度 取空白血漿100 μL，按上述2、4項(xiàng)下制備綠原酸和咖啡酸低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度（綠原酸血漿質(zhì)量濃度為3，48，192 μg?L-1；咖啡酸血漿質(zhì)量濃度為2，16，64 μg?L-1）的質(zhì)量控制（QC）樣品，每個(gè)濃度平行做5份，連續(xù)測定3 d。根據(jù)隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線求得實(shí)測濃度。實(shí)測濃度的RSD即為精密度，實(shí)測濃度和加入濃度的比值即為準(zhǔn)確度。結(jié)果表明，綠原酸日內(nèi)、日間準(zhǔn)確度分別為97、7%～101、3%（RSD≤8、5%，n=5）和96、1%～103、8%（RSD≤9、4%，n=15）；咖啡酸日內(nèi)、日間準(zhǔn)確度分別為92、3%～106、7%（RSD≤8、8%，n=5）和98、2%～108、1%（RSD≤9、8%，n=15），實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合生物樣品分析方法的要求。
3、4 提取回收率 取空白血漿100 μL，配制3、3項(xiàng)下低、中、高3個(gè)不同濃度含藥血漿質(zhì)控樣品，按上述2、4項(xiàng)下操作后進(jìn)樣分析，以血漿中綠原酸、咖啡酸的峰面積與相應(yīng)質(zhì)量濃度對照品溶液中綠原酸、咖啡酸峰面積的比值計(jì)算出上述3種質(zhì)量濃度的提取回收率，每個(gè)濃度平行做5份。經(jīng)LC-MS/MS測定后，低、中、稿3種濃度下的提取回收率分別為綠原酸（84、3±5、5）%，（89、1±3、3）%，（92、4±6、3）%；咖啡酸（82、1±1、9）%，（85、2±6、0）%，（88、2±4、6）%。采用同樣的方法考察了內(nèi)標(biāo)的提取回收率為（90、1±2、4）%。
A、 空白血漿樣品；B、 混合對照品；C、 血漿樣品；1、 咖啡酸；2、綠原酸；3、替硝唑。
圖1 樣品的液-質(zhì)聯(lián)用離子流圖
Fig、1 Combined LC-MS/MS ion chromatograms of samples
3、5 穩(wěn)定性考察 取空白血漿100 μL，配制3、3項(xiàng)下低、中、高3個(gè)不同濃度含藥血漿質(zhì)控樣品，按上述2、4項(xiàng)下操作方法處理樣品?？疾旌幯獫{樣品處理好后溶液中分析物在室溫放置24 h、含藥血漿樣品-20 ℃反復(fù)凍融3次、含藥血漿樣品-40 ℃長期冷凍28 d的穩(wěn)定性，每個(gè)濃度平行3份。結(jié)果表明，經(jīng)處理后的血漿樣品室溫放置24 h后綠原酸及咖啡酸血藥濃度的RSD均小于9、82%，-40 ℃保存28 d血藥濃度的RSD 均小于8、65%，經(jīng)過3個(gè)凍融周期后2個(gè)分析物的血藥濃度RSD均小于9、57%。
3、6 介質(zhì)效應(yīng)考察 取離心管數(shù)只，分別精密加入低、中、高的3個(gè)濃度綠原酸對照品溶液（30，480，1 920 μg?L-1）及咖啡酸對照品溶液（20，160，640 μg?L-1）各10 μL，再分別加入內(nèi)標(biāo)替硝唑溶液20 μL，水60 μL，旋渦1 min，于12 000 r?min-1離心5 min，進(jìn)行LC-MS/MS分析，進(jìn)樣量5 μL，記錄峰面積A1。除不加內(nèi)標(biāo)外，另按“血漿樣品處理”項(xiàng)下操作提取空白血漿數(shù)管，揮干后同上操作，記錄峰面積A2。A1和A2的比值（A2/A1×100%）即為介質(zhì)效應(yīng)ME（%）。綠原酸及咖啡酸血漿樣品低、中、高3種濃度LC-MS/MS介質(zhì)效應(yīng)（n=3）分別為83、14%，86、32%，83、90%和86、79%，92、15%，88、24%，內(nèi)標(biāo)替硝唑介質(zhì)效應(yīng)（n=9）為82、53%。
3、7 大鼠體內(nèi)藥代動力學(xué) 大鼠單劑量（4 mL?kg-1）尾靜脈注射燈盞細(xì)辛注射液后綠原酸和咖啡酸的血藥濃度-時(shí)間曲線見圖 2。所測數(shù)據(jù)使用DAS 1、0軟件進(jìn)行處理，主要藥動學(xué)參數(shù)見表 1。由分析結(jié)果可知，綠原酸和咖啡酸在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)符合二室開放模型。
圖2 大鼠體內(nèi)綠原酸和咖啡酸的平均血藥濃度-時(shí)間曲線（n=6）
Fig、2 Mean plasma concentration-time curves for chlorogenic acid and caffeic acid in rat plasma（n=6）
4 討論
目前文獻(xiàn)報(bào)道的中藥復(fù)方制劑中綠原酸和咖啡酸的血藥濃度測定方法大多為HPLC[11-13]，且目前燈盞細(xì)辛注射液在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究主要測定燈盞乙素和總咖啡酸酯[14-15]，對于注射液中單
個(gè)酚酸化合物的藥代動力學(xué)研究較少。
本實(shí)驗(yàn)采用LC-MS/MS測定血漿中綠原酸和咖啡酸的濃度，提高了靈敏度。另外，本文對血樣中酚酸類成分的提取方法進(jìn)行了考察：甲醇沉淀、乙腈沉淀、乙酸乙酯提取、乙酸乙酯/乙醚（3∶1）提取，每個(gè)提取或沉淀?xiàng)l件考察了不同的酸化條件（加10，20，30，50，100 μL不同量的1 mol?L-1鹽酸），結(jié)果發(fā)現(xiàn)50 μL 1mol?L-1鹽酸酸化后乙酸乙酯的提取回收率高，無內(nèi)源性物質(zhì)干擾，重現(xiàn)性好。
蘇美英等[16]靜脈給予大鼠咖啡酸單體50 mg?kg-1后，咖啡酸單體在大鼠體內(nèi)的半衰期（t1/2）為（0、45±0、05） h，體內(nèi)駐留時(shí)間（MRT）為（0、24±0、06） h。本實(shí)驗(yàn)中大鼠給予燈盞細(xì)辛注射液的劑量為4 mL?kg-1，若以咖啡酸含量計(jì)，咖啡酸的靜脈給藥劑量為540、4 μg?kg-1，而此時(shí)咖啡酸在大鼠體內(nèi)的t1/2為（130、91±38、77） min，MRT為（198、74±18、45） min。本實(shí)驗(yàn)中咖啡酸的給藥劑量遠(yuǎn)低于50 mg?kg-1，但是注射液中咖啡酸在大鼠體內(nèi)的t1/2和MRT卻明顯高于單獨(dú)給予咖啡酸單體。由此推測，燈盞細(xì)辛注射液中的某些成分與咖啡酸發(fā)生相互作用，延長了咖啡酸在大鼠體內(nèi)的時(shí)間，但發(fā)生該現(xiàn)象的原因還不清楚，有待進(jìn)一步研究。
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Study on determination of caffeic acid， chlorogenic acid in rat plasma and
their pharmacokinetics with LC-MS/MS
DAI Guo-liang1， MA Shi-tang1 ， LIU Shi-jia2 ， CHENG Xiao-gui1 ， ZANG Yu-xin1 ， JU Wen-zheng2* ， TAN Heng-shan3
（1、 College of Pharmacy of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210029， China；
2、 Department of Clinical Pharmacology， Affiliated Hospital of Nanjing University of
Traditional Chinese Medicine， Nanjing 210029， China；
3、 Department of Clinical Pharmacology， General Hospital of Nanjing Military Area Command， Nanjing 210002， China）
[Abstract] To establish a LC-MS/MS method to determine caffeic acid， chlorogenic acid in rat plasma and study their pharmacokinetics in rats、 Six Sprague-Dawley rats were intravenously injected with 4 mL?kg-1 of Dengzhanxixin injection， respectively、 Their drug plasma concentration was determined by LC-MS/MS， with tinidazole as an internal standard、 The pharmacokinetic parameters were calculated by DAS 1、0、 The linear concentration ranges of caffeic acid， and chlorogenic acid were 2-128 μg?L-1 （r=0、998 1） and 3-384 μg?L-1 （r=0、998 7）， respectively、 The methodological test showed conformance to the requirements、 The intraday and inter-day variable coefficients were both less than 10、0%， indicating that both of legitimate precise and accuracy were in conformity with the requirements of biological sample analysis、For caffeic acid， the pharmacokinetic parameter t1/2β， AUC0-t， and CL were （130、91±38、77） min， （4、89±0、96） mg?min?L-1 and （0、12±0、02） L?min-1?kg-1， respectively、 For chlorogenic acid， the pharmacokinetic parameter t1/2β， AUC0-t and CL were （49、38±8、85） min， （9、54±0、95） mg?min?L-1 and （0、09±0、003） L?min-1?kg-1， respectively、 The LC-MS/MS analysis method established in this study was proved to be so accurate and sensitive that it can be applied to the pharmacokinetic study of caffeic acid and chlorogenic acid、
