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基因定量分析技術(shù)的應(yīng)用價(jià)值

近年來(lái)基因定量分析的價(jià)值受到越來(lái)越多研究者的重視。過(guò)去由于過(guò)分強(qiáng)調(diào)了感染后過(guò)強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答介導(dǎo)肝細(xì)胞損傷，忽視了對(duì)病毒復(fù)制水平與致病性之間因果關(guān)系的研究。目前普遍認(rèn)為，盡管不直接破壞寄生細(xì)胞，但病毒的活躍復(fù)制是啟動(dòng)或激發(fā)肝臟組織炎癥反應(yīng)的因素。這表明確定感染者體內(nèi)復(fù)制狀態(tài)，即從基因定量的角度作病情分析是十分有意義的。事實(shí)上，真正引起人們關(guān)注基因定量分析價(jià)值的重要原因是最近發(fā)現(xiàn)了干擾素治療與基因水平兩者之間有非常密切的關(guān)系?；蚨糠治鲞€在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、基因治療、蛋白疫苗和核酸疫苗、抗藥物體外試驗(yàn)和動(dòng)物試驗(yàn)及耐藥研究、流行病學(xué)研究、血液制品污染監(jiān)測(cè)等方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

一、基因定量分析在干擾素治療中的應(yīng)用公務(wù)員之家版權(quán)所有

尚無(wú)藥物可以清除所有感染者體內(nèi)顆粒。干擾素是目前唯一有一定療效的一類(lèi)生物制劑它在病毒等誘導(dǎo)下由幾種相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生，并發(fā)揮抗病毒作用。但是無(wú)論使用何種干擾素，也無(wú)論治療劑量或療程如何，干擾素治療后轉(zhuǎn)陰率迄今仍保持在左右，無(wú)法進(jìn)一步提高，究竟有哪些制約因素起作用尚無(wú)定論。

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)干擾素的治療效果，即干擾素治療后的反應(yīng)性很大程度上取決于在體內(nèi)的復(fù)制水平。以下幾點(diǎn)事實(shí)值得注意⑴治療前低水平復(fù)制者的反應(yīng)性明顯優(yōu)于高水平復(fù)制者。轉(zhuǎn)陰的幾乎都是那些治療前血清含量較低者，而治療前含量特別高者大多沒(méi)有療效；⑵治療中病毒復(fù)制水平迅速降低者，有望治愈。相反，治療期間基因水平下降較慢，或下降幅度較小，或變化不明顯者，大多是無(wú)效者；⑶治療結(jié)束后，采用定量法檢測(cè)，完全轉(zhuǎn)陰者可能不再?gòu)?fù)發(fā)，而終止治療后仍保持較低水平者，反跳的可能性較大?？梢?jiàn)，使用干擾素治療感染時(shí)，在各種近期和遠(yuǎn)期療效指標(biāo)中，除了病人的臨床表現(xiàn)是否好轉(zhuǎn)，生化指標(biāo)是否改善，肝組織炎癥反應(yīng)是否減輕等以外，血清定量分析是一個(gè)十分重要的觀察項(xiàng)目。從現(xiàn)有研究資料看，除病理檢查外，定量檢測(cè)，也許是干擾素治療效果判斷依據(jù)中最直接、最可靠和最有價(jià)值的指標(biāo)。多數(shù)研究者認(rèn)為，通過(guò)定量分析來(lái)指導(dǎo)干擾素治療，有重大意義。首先，在治療對(duì)象的選擇方面，即確定干擾素治療適應(yīng)癥時(shí)，應(yīng)對(duì)各侯選病例在某個(gè)時(shí)間段內(nèi)定期反復(fù)檢測(cè)水平，那些長(zhǎng)期保持高復(fù)制水平者不宜接受干擾并素治療，或應(yīng)當(dāng)聯(lián)合治療；其次，干擾素治療期間，可根據(jù)基因水平的動(dòng)態(tài)變化適時(shí)調(diào)整治療劑量，決定是否縮短或延長(zhǎng)療程，及是否終止治療。這不僅對(duì)制訂合理的治療方案，也對(duì)減輕病人負(fù)擔(dān)，避免不恰當(dāng)用藥有指導(dǎo)意義。筆者認(rèn)為，目前國(guó)際上普遍采用的所謂“六個(gè)月療程”及某些中高劑量治療方案均缺乏充分和足夠的立論依據(jù)，有必要結(jié)合基因定量分析結(jié)果，重新評(píng)價(jià)和制訂干擾素治療計(jì)劃；最后，干擾素治療結(jié)束后，對(duì)有反應(yīng)者定期作定量分析，有助于發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)者，并根據(jù)血清含量波動(dòng)情況決定是否實(shí)施再治療。有人報(bào)告，首次干擾素治療有效者，再治療的效果亦佳。如果第一次治療無(wú)反應(yīng)或反應(yīng)較差者，第二次干擾素治療仍不能取得理想療效。

二、基因定量分析的其他臨床價(jià)值

感染后，在臨床表現(xiàn)方面的差異非常明顯可以表現(xiàn)為無(wú)癥狀攜帶者、急性肝炎、慢性肝炎、暴發(fā)型肝炎、肝硬化及肝癌等多種疾病狀態(tài)。病毒在肝細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制水平與各種臨床疾病狀態(tài)之間可能存在著某些必然聯(lián)系。由于基因定量技術(shù)的發(fā)展和成熟，目前已有可能從某些現(xiàn)象上闡明復(fù)制與致病性之間的“量效”關(guān)系。

㈠“無(wú)癥狀攜帶者”可能為活動(dòng)性乙肝患者。有部分感染者，由于免疫耐受或其它原因，體內(nèi)呈復(fù)制不活躍的“潛伏”狀態(tài)，但并不意味著不存在進(jìn)行性肝損害。等研究發(fā)現(xiàn)無(wú)癥狀攜帶者在其自然發(fā)展史上，復(fù)制處于波動(dòng)狀態(tài)，時(shí)有加劇，病毒復(fù)制積累到一定程度后水平增加。一般規(guī)律是血清水平上升活性增加抗滴度提高。因此無(wú)癥狀攜帶者應(yīng)采取積極治療措施，否則這類(lèi)人群不僅作為重要的病毒庫(kù)傳播，而且由于隱匿性肝細(xì)胞損傷的不斷積累，不經(jīng)過(guò)慢性肝炎階段，直接向肝硬化和肝癌發(fā)展。

㈡水平與感染者病情和預(yù)后的關(guān)系密切。上述無(wú)癥狀攜帶者是一個(gè)特殊群體。而對(duì)那些急性和慢性乙型肝炎患者而言，水平對(duì)預(yù)后判斷有幫助。研究發(fā)現(xiàn)一直保持較高水平的急性肝炎患者易慢性化，而復(fù)制水平較高的慢性肝炎患者不僅對(duì)干擾素治療的反應(yīng)性差，而且肝組織炎癥反應(yīng)更明顯，病情更重，更易發(fā)生肝硬化和肝癌。目前在能否用血清水平來(lái)判斷肝組織炎癥損傷程度這類(lèi)問(wèn)題上尚有爭(zhēng)議。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，鴨肝被廣泛感染的同時(shí)，并不伴隨明顯病毒血癥肝細(xì)胞清除病毒的同時(shí)也無(wú)病毒血癥加重的證據(jù)。然而最近有人對(duì)感染者進(jìn)行基因定量分析研究，發(fā)現(xiàn)水平與水平以及肝臟分級(jí)之間有密切關(guān)系。

㈢肝移植者定量的意義

等報(bào)告肝移植前患者血清水平的高低決定移植后肝臟是否再感染。作者觀察到，例移植前血清含量低于拷貝，移植后不間斷地采用免疫預(yù)防，隨訪個(gè)月，無(wú)一例再發(fā)肝炎，但另外兩例移植前病毒拷貝數(shù)大于則發(fā)生了嚴(yán)重再感染。建議移植前使用抗藥物，最大限度降低血清濃度，有助于防止侵犯移植后肝臟，提高肝臟移植的效果。

㈣前核基因突變定量意義公務(wù)員之家版權(quán)所有

前核基因突變可導(dǎo)致表達(dá)缺失。感染不表達(dá)的突變株，或野生型在體內(nèi)突變并成為優(yōu)勢(shì)株均產(chǎn)生較嚴(yán)重的后果，如易發(fā)生暴發(fā)性肝炎，預(yù)后差，干擾素治療無(wú)效等。目前已能采用核酸序列測(cè)定技術(shù)、技術(shù)、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析技術(shù)等來(lái)定性檢測(cè)前核基因突變。最近建立了一種及產(chǎn)物的顯色反應(yīng)點(diǎn)突變分析技術(shù)，用來(lái)定量分析突變前核基因，有助于進(jìn)一步探討突變與致病性之間的關(guān)系。

基因定量分析是一項(xiàng)臨床應(yīng)用型技術(shù)，但對(duì)基礎(chǔ)研究也有一定的應(yīng)用價(jià)值，尤其是在當(dāng)前基因治療、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、核酸疫苗等熱點(diǎn)研究領(lǐng)域，基因定量分析可能是一種很好的輔助手段，對(duì)發(fā)現(xiàn)一些有意義的現(xiàn)象也許有一定幫助。比如在轉(zhuǎn)基因小鼠組織臟器分布規(guī)律可用定量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)衡量，以及用定量手段觀察各種藥物、細(xì)胞因子和其它物質(zhì)對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠基因復(fù)制的調(diào)節(jié)作用。又如對(duì)核酸疫苗注入肌組織后的各種動(dòng)力學(xué)變化的研究遠(yuǎn)未深入，如能采用定量手段，分析抗原表達(dá)基因在體內(nèi)的存在狀態(tài)無(wú)疑是有益的。至于各種抗藥物，無(wú)論是在體外細(xì)胞模型包括轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型還是在動(dòng)物模型的研究，或在人體研究，采用基因定量分析，應(yīng)當(dāng)是考核藥物療效的最佳手段。