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1儀器與試藥

1．1儀器電子天平（AY120，SHAMAOZUCORPOPAITIONJAPAN）、HH－6－恒溫水浴鍋（江蘇金壇市宏華儀器廠）、超聲波清洗器（250W，上海之信儀器有限公司）、電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱（3100W，上海訊能電熱設(shè)備有限公司）、UV－1800紫外可見分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；雙B循環(huán)水式多用真空泵（SHB－IV，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）。

1．2試藥葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品Sigma公司產(chǎn)品；苯酚，硫酸、丙酮、乙醚、三氯乙酸、氫氧化鈉試劑均為分析純，醫(yī)用乙醇（廣州市新升華玻有限公司），苯酚試液參照文獻(xiàn)［8］配制。

魚腥草購(gòu)于廣州清平市場(chǎng)，經(jīng)廣東藥學(xué)院陳幼竹博士鑒定為三白草科蕺菜屬植物HouttuyniacordataThunb．

2方法與結(jié)果

2．1魚腥草多糖的提取與精制取魚腥草干品200g，以95％乙醇回流脫脂3次，藥渣置通風(fēng)處晾干，加水10倍量、8倍量、8倍量，于90～100℃依次提取3，2，1h，過(guò)濾，合并濾液，濃縮至約200ml，加入等體積30％三氯乙酸溶液脫蛋白，4℃靜置，離心，上清液用0．01mol／L的氫氧化鈉調(diào)pH＝7，溶液減壓濃縮，濃縮液對(duì)水透析，透析液減壓濃縮至100ml，加入95％乙醇調(diào)含醇量為80％，靜置，離心，沉淀用無(wú)水乙醇、丙酮、無(wú)水乙醚依次洗滌，真空干燥，得除蛋白精制魚腥草多糖。

2．2多糖含量測(cè)定方法的建立

2．2．1標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖0．0964g，加水溶解并定容至100ml，再取1ml，定容至10ml的容量瓶中，即制得濃度為0．0964mg／ml的葡萄糖對(duì)照品貯備液。

2．2．2供試品溶液的制備稱取魚腥草50g，按正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行提取，得粗多糖。稱取105℃干燥至恒重的粗多糖約30mg，精密稱定，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2．2．3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0．1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7ml，分別置10ml具塞試管中，加蒸餾水補(bǔ)充至1．0ml，搖勻，加5％苯酚溶液1ml，濃硫酸5ml，室溫放置40min。另取1ml蒸餾水，加同量苯酚和濃硫酸，同法操作，作為空白對(duì)照。置UV－1800型分光光度計(jì)中，于490nm測(cè)定吸收度，以吸收度（Y）對(duì)葡萄糖含量（X）進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y＝9．1073X＋0．0102，相關(guān)系數(shù)r＝0．9998。結(jié)果表明葡萄糖在0．0193～0．0964mg／ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2．2．4換算因素的測(cè)定精密稱取60℃干燥至恒重的魚腥草多糖101．2mg，置100ml容量瓶中，加入少量蒸餾水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取此液1ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法測(cè)定吸收度，從回歸方程中求出多糖供試液中葡萄糖的濃度。按下式計(jì)算換算因素：F＝W／（C×D）。F為換算因素；W為多糖重量（mg）；C為多糖稀釋液中葡萄糖的濃度（mg／ml）；D為稀釋因素。

2．2．5樣品測(cè)定方法取各供試品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法操作，測(cè)定吸收值，從回歸方程中求出供試液中葡萄糖的含量，按下式計(jì)算樣品中多糖含量：多糖含量（％）＝C×D×F×100／W。C為供試液中葡萄糖的濃度（mg／ml）；D為供試液的稀釋因素；F為換算因素，W為供試樣品重量（mg）。

2．3正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化超聲波提取魚腥草多糖最佳工藝

2．3．1制定因素水平表根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［9］并結(jié)合實(shí)際，超聲波提取多糖的影響因素有超聲時(shí)間、料液比、醇沉濃度，為此選擇3因素作為考察因素，并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，每因素又選取3個(gè)水平，按L9（34）正交表安排實(shí)驗(yàn)，以多糖得率及含量作為衡量提取效率的雙重客觀指標(biāo)，優(yōu)選最佳工藝，為了提高統(tǒng)計(jì)分析的可靠性，每一條件下都作了重復(fù)實(shí)驗(yàn)（n＝3），測(cè)定結(jié)果取其平均值供統(tǒng)計(jì)分析用。因素水平安排見表1。結(jié)果見表2。

2．3．2加權(quán)法綜合評(píng)價(jià)魚腥草多糖提取工藝最佳提取條件要滿足多糖得率高并且含量也高，因此采用加權(quán)評(píng)分法綜合評(píng)估魚腥草多糖提取條件。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：將各項(xiàng)指標(biāo)除以該列最大值再乘以100，為其該項(xiàng)得分。通過(guò)這樣處理，使多糖得率和多糖含量轉(zhuǎn)化為0～100之間的數(shù)。根據(jù)多糖得率（x）和多糖含量（y）作用，而確定兩者的權(quán)重系數(shù)分別為0．4和0．6，對(duì)兩項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行加權(quán)求和，通過(guò)公式z＝0．4x＋0．6y，就得到綜合評(píng)分（z）。加權(quán)評(píng)分結(jié)果及方差分析見表2～3。

表1正交因素水平（略）

表2正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果（略）

表3方差分析（略）

*表示差異顯著，F(xiàn)0.10(2,2)=9.00，F(xiàn)0.05(2,2)=19.00

2．3．3結(jié)果分析正交實(shí)驗(yàn)方差分析表明，因素A（超聲時(shí)間）對(duì)魚腥草多糖的提取有顯著影響，而因素B（料液比）、因素C（醇沉濃度）對(duì)魚腥草多糖的提取無(wú)顯著影響。由Rj得出影響因素大小順序?yàn)锳＞C＞B，由此得出最佳工藝為A3B1C3，即魚腥草料液比1∶30，超聲60min，醇沉濃度為90％。

2．3．4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)按照理論最佳工藝A3B1C3，進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，魚腥草多糖得率及多糖含量分別為14．61％，12．22％，實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

2．4不同提取方法的比較

2．4．1水煎煮提取魚腥草多糖稱取魚腥草50g，加30倍體積的水，90℃提取3次，2h／次，過(guò)濾，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計(jì)算得率和多糖的含量。結(jié)果見表4。

2．4．2堿法提取魚腥草多糖稱取魚腥草50g，加0．2mol／L30倍體積的氫氧化鈉水溶液，65℃恒溫水浴中浸提3h，過(guò)濾，濾液調(diào)pH為中性，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計(jì)算得率和多糖的含量。結(jié)果見表4。

2．4．3酸法提取魚腥草多糖稱取魚腥草50g，加30倍體積的水，調(diào)pH＝3，60℃浸提3次，3h／次，過(guò)濾，濾液調(diào)pH為中性，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計(jì)算得率和多糖的含量。結(jié)果見表4。

2．4．4超聲提取按該試驗(yàn)所得最佳工藝提取，即稱取魚腥草50g，加30倍體積的水，超聲60min，過(guò)濾，90％乙醇醇沉得粗多糖，分別計(jì)算得率和多糖的含量，結(jié)果見表4。

表4不同提取方法比較（略）

3討論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定了超聲波提取魚腥草多糖最佳工藝為魚腥草料液比1∶30，超聲60min，醇沉濃度為90％。與水提、酸提、堿提方法進(jìn)行比較，結(jié)果看出超聲波提取多糖得率和含量略低于其它提取方法，但提取時(shí)間是酸提法的1／9，水提法的1／6，堿提法的1／3，大幅度降低成本；同時(shí)超聲提取所得多糖顏色最淺，可降低下一步的脫色純化的難度；另外超聲提取全過(guò)程避免了高溫加熱，從而減少了酸堿對(duì)多糖結(jié)構(gòu)的破壞，所用儀器簡(jiǎn)單，操作方便，因此也不失為一種好的提取方法。

魚腥草目前主要是開發(fā)揮發(fā)油類成分的制劑如魚腥草注射液等相關(guān)產(chǎn)品，而對(duì)于水溶性多糖以廢棄物處理，本實(shí)驗(yàn)對(duì)魚腥草多糖的提取工藝研究對(duì)于魚腥草資源的合理充分利用具有重要的意義。

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【摘要】目的建立超聲波提取魚腥草多糖的最佳工藝。方法以多糖得率、多糖含量為指標(biāo)成分，采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)魚腥草多糖的超聲提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果最佳工藝為：魚腥草料液比1∶30，超聲60min，醇沉濃度為90％。多糖得率及含量分別為14．61％，12．22％。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，靈敏度高，適合于魚腥草多糖的提取。

【關(guān)鍵詞】魚腥草多糖超聲提取正交實(shí)驗(yàn)