導(dǎo)語(yǔ)：冠心病患者血漿含量測(cè)定論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的:測(cè)定冠心病患者與健康對(duì)照者血漿中MBL含量,分析其變化情況,從固有免疫的角度探討冠心病的可能致病機(jī)制。方法:采集100例冠心病(CHD)患者空腹靜脈血,健康對(duì)照者60例,采用ELISA法對(duì)血漿中MBL含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L,標(biāo)準(zhǔn)差為3209;60例健康對(duì)照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L,標(biāo)準(zhǔn)差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對(duì)照組,經(jīng)t檢驗(yàn),t=4071,P<001,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:冠心病組血漿MBL水平高于健康對(duì)照組,二者均值比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,血漿MBL參與了冠心病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。

【關(guān)鍵詞】冠心病;MBL;ELISA;含量

【ABSTRACT】Objective:ThemainpurposeofthisstudyistomeasuretheMBLlevelinplasmawithcoronaryheartdiseaseandtrytoanalyzethepossiblemechanismofCHDsdevelopmentfromtheviewofinnateimmune.Methods:100bloodsamplesofCHDpatientsand60thatofhealthcontrolswerecollectedandtestedbyELISA.Results:TheplasmalevelofMBLwere3900μg/L,SD3209incases,while2056μg/L,SD1824incontrols.TheplasmalevelofMBLincasesishigherthanthatofcontrols(t=4071,P<001).Conclusion:TheplasmalevelofMBLishigherinCHDpatientsthanthatincontrols.

【KEYWORDS】CHD;MBL;ELISA;Plasmalevel

冠心病(coronaryheartdisease,CHD)是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的疾病,其發(fā)病率和死亡率居首位,尤其在發(fā)達(dá)國(guó)家更為嚴(yán)重,而在我國(guó)也呈逐年上升趨勢(shì)[1]。其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,近年來(lái),冠心病發(fā)病的炎癥學(xué)說(shuō)越來(lái)越得到重視[2],對(duì)一些炎性因子和急性期蛋白的研究也越來(lái)越深入。甘露聚糖結(jié)合凝集素(mannanbindinglectin,MBL)是一種兼有調(diào)理素和直接激活補(bǔ)體功能的免疫分子,參與構(gòu)成抗感染的第一道防線[3]。國(guó)外有些學(xué)者報(bào)道MBL與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[4~7],但國(guó)內(nèi)尚無(wú)報(bào)道,因此本研究主要測(cè)定冠心病患者血漿中MBL含量,并對(duì)其變化進(jìn)行分析,從天然免疫的角度探討冠心病的可能致病機(jī)制,為其輔助診斷和治療提供資料。

1材料與方法

11實(shí)驗(yàn)材料

主要設(shè)備:低溫冰柜(thermo,美國(guó));酶標(biāo)儀(Starfax2100,美國(guó));普通高速離心機(jī)(TGL168,上海)

主要試劑:MBLELISA試劑盒(北京現(xiàn)代高達(dá)生物技術(shù)有限責(zé)任公司)

12實(shí)驗(yàn)方法

121標(biāo)本的收集:空腹靜脈血標(biāo)本用EDTAK2抗凝管(2ml)收集。

冠心病(CHD)組:共100例,為河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院20049~200510月住院的冠心病患者,男51例,女49例;年齡45~70歲,平均(6041±9443)歲。病例均經(jīng)心電圖、心肌酶譜和臨床癥狀等綜合診斷,符合WHO冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)。

健康對(duì)照組:60例,為來(lái)院進(jìn)行健康體檢者,男性32例,女28例,年齡43~71歲,平均(6027±7198)歲,病例無(wú)冠心病癥狀、體征,超聲心動(dòng)圖及心電圖均正常。冠心病組與健康對(duì)照組組間年齡無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

122標(biāo)本的處理

取1ml全血放入15ml離心管中,5000轉(zhuǎn)/min離心5min,分離血漿,-86℃保存,供測(cè)定血漿MBL含量。

123血漿中MBL含量測(cè)定

按MBLELISA試劑盒說(shuō)明書(shū),基本操作如下:

標(biāo)本及試劑準(zhǔn)備:冠心病、健康對(duì)照血漿標(biāo)本從低溫冰柜(-86℃)中取出,溶解并恢復(fù)至室溫,離心(3500轉(zhuǎn)/min5min)。取上清2μl,用標(biāo)本稀釋液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行200倍稀釋(加入398μl標(biāo)本稀釋液[PBS+005%BSA]),混勻。所有實(shí)驗(yàn)用試劑均在室溫平衡后使用。

操作步驟:

①取100μl稀釋標(biāo)本加入酶標(biāo)板中,同時(shí)做對(duì)照,第一孔加100μl稀釋液作空白,第二孔向后依次加含MBL不同濃度(0,1,2,5,10,25,50,100ng/ml)的標(biāo)準(zhǔn)液各100μl,標(biāo)準(zhǔn)孔均作復(fù)空;

②置37℃水浴1h;

③將板中的液體棄去,每孔加入150μl洗板液進(jìn)行清洗,室溫靜置3min,棄去洗板液,反復(fù)3遍;

④清洗后,每孔加入100μl酶標(biāo)記的MBL抗體,37℃1h,使酶標(biāo)抗體與標(biāo)本充分結(jié)合。

⑤清洗,操作同③;

⑥清洗后,每孔加入底物A、B各50μl,室溫避光15min。每孔加入終止液50μl,輕輕混勻20s;

⑦用酶標(biāo)儀比色測(cè)定波長(zhǎng)為450nm,參考波長(zhǎng)為620nm。在20min內(nèi)完成。

2結(jié)果

用SPSS130軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,冠心病組、健康對(duì)照組血漿MBL含量的比較,采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)。

100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L,標(biāo)準(zhǔn)差為3209;60例健康對(duì)照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L,標(biāo)準(zhǔn)差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對(duì)照組,經(jīng)t檢驗(yàn),t=4071,P<001,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表1。表1冠心病組與對(duì)照組MBL含量水平比較

3討論

人類(lèi)血清MBL濃度主要受結(jié)構(gòu)基因外顯子1密碼子點(diǎn)突變的影響和啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性的調(diào)控[8~11]。國(guó)外已有一些MBL基因與冠心病的相關(guān)性研究[4~6],但對(duì)血漿MBL濃度與冠心病的相關(guān)性研究很少,只有冰島的一份前瞻性研究報(bào)告[7]:高濃度的血漿MBL者,尤其是糖尿病病人、高血脂、血沉升高人群患心肌梗死的概率較低,提示MBL可能與清除動(dòng)脈粥樣硬化因素有關(guān)。雷克雅未克Landspitali大學(xué)的瓦爾迪馬森(HelgiValdimarsson)和同事分析了當(dāng)?shù)氐难芯抠Y料,共納入了1967年以后的近2萬(wàn)參試者。在對(duì)其中987名70歲參試者的橫斷面研究中,作者發(fā)現(xiàn),MBL水平高(>1000mg/L)與水平低相比,心肌梗塞風(fēng)險(xiǎn)下降36%(P<0001)。為證實(shí)此結(jié)論,研究者對(duì)另一個(gè)有1309名中年人的人群進(jìn)行了前瞻性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MBL水平高和心肌梗塞風(fēng)險(xiǎn)減弱有關(guān)聯(lián)的跡象,但不如前一橫斷面分析中的那樣強(qiáng)烈,對(duì)總?cè)巳?、吸煙者或高血壓病人也沒(méi)達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但這次分析證實(shí),高水平MBL對(duì)糖尿病人(P=002)或高膽固醇血癥病人(P=0004)與心肌梗塞風(fēng)險(xiǎn)大為減小有關(guān)。鑒于上述在糖尿病人中的結(jié)論“測(cè)量MBL可用于心性風(fēng)險(xiǎn)的輔助評(píng)估,也可能幫助評(píng)估預(yù)防治療的需要”,本研究發(fā)現(xiàn),100例冠心病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L;60例健康對(duì)照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L。經(jīng)t檢驗(yàn),t=4071,P<001,二者均值比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明血漿MBL可能參與冠心病的發(fā)生、發(fā)展,但具體作用及機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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