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【論文關(guān)鍵詞】組織病理學(xué)技術(shù)運動人體科學(xué)

【論文摘要】近年來分子生物學(xué)技術(shù)以及其它高、新技術(shù)在病理領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，同樣作為體育界的基礎(chǔ)研究學(xué)科運動人體科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)不能滿足簡單的宏觀的研究，越來越多的醫(yī)學(xué)檢驗以及病理學(xué)實驗技術(shù)在運動人體科學(xué)廣泛應(yīng)用，尤其是組織病理學(xué)技術(shù)中定位技術(shù)，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學(xué)常用的定位技術(shù)的方法進行綜述。

1免疫組織化學(xué)實驗技術(shù)

隨著免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的廣泛應(yīng)用，病理學(xué)研究產(chǎn)生了劃時代的飛躍。免疫組織化學(xué)是病理學(xué)實驗中常用的方法，是在蛋白質(zhì)水平用各種特異性抗體檢測細胞內(nèi)各種抗原物質(zhì)。根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技術(shù)可分為免疫熒光細胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫金-銀細胞化學(xué)技術(shù)、親和免疫細胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)等。

1.1免疫組織化學(xué)實驗步驟免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來的一門新技術(shù)。其原理是利用免疫學(xué)的核心——抗原體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記抗體追蹤抗原，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對其顏色進行觀察，以達到檢測抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術(shù)的優(yōu)點免疫組化技術(shù)的優(yōu)點：①特異性強，免疫組化中抗體與組織細胞中的抗原的結(jié)合是特異的。如白細胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素—生物素（ABC）法和鏈酶素—過氧化物酶連接（SP）法的出現(xiàn)，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達到了上千、上萬，甚至上億倍，使免疫組化技術(shù)更加可靠。③定位準(zhǔn)確，由于抗原抗體的結(jié)合是特異的，因而免疫組化技術(shù)可在組織和細胞內(nèi)準(zhǔn)確定位，對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察，將形態(tài)與功能相結(jié)合，對疾病進行深入的研究。

2原位雜交實驗技術(shù)

原位雜交是將組織化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合來檢測合定位核酸的技術(shù)。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來檢測細胞內(nèi)是否存在欲檢測物質(zhì)的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個層次的檢驗方法。根據(jù)所選探針和待測靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術(shù)的應(yīng)用原位雜交由于不需要從待測組織中提取核酸，可完好的保存組織、細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)與基因功能活動的變化相結(jié)合進行多層面的研究。主要應(yīng)用：①細胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的監(jiān)測；④基因在染色體上的定位；⑤檢測染色體的變化；⑥間期細胞遺傳學(xué)的研究。

2.2原位雜交技術(shù)與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術(shù)相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測對象是抗原，機制是抗原-抗體的特異性結(jié)合，是蛋白質(zhì)表達水平的檢測；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補配對的原則與待測靶序列結(jié)合，是DNA或mRNA水平的檢測。從實驗方法來看，免疫組化染色操作相對簡單，成本相對較低，受外界因素的影響相對??；原位雜交技術(shù)無論從實驗設(shè)計上，還是從實際操作上均較免疫組化染色復(fù)雜，成本的高低與試劑的種類和來源密切相關(guān)。一般而言，直接選用商品化的標(biāo)記探測和檢測試劑盒的實驗成本較高；熒光標(biāo)記探針較非熒光標(biāo)記探針的成本高，對樣本及實驗條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標(biāo)技術(shù)雙標(biāo)技術(shù)是在同一張組織切片上標(biāo)記兩種不同的抗體或同時應(yīng)用兩種不同的檢測手段，如免疫組化和原位雜交技術(shù)，在不同層次來檢測同一細胞上某些物質(zhì)的表達是否有相關(guān)性的一種實驗方法。與傳統(tǒng)的單項檢測相比，雙標(biāo)記具有無可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時間或空間的樣本誤差。實驗方法上先進行原位雜交會減少免疫組化過程中對待測DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進行原位雜交后進行免疫組化標(biāo)記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問題就是：①所用的實驗設(shè)備必須經(jīng)DEPC水浸泡或200℃烤箱過夜，操作時須帶口罩及手套；②當(dāng)雜交步驟完成后，切片必須認真浸泡及長時間洗滌至少超過30min。③作免疫組化的各步驟時間均須適當(dāng)延長，以增加抗原抗體間的結(jié)合，楊青春等人研究發(fā)現(xiàn)每個步驟均延長2～3倍時間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復(fù)染，以免遮蓋核信號。

參考文獻

[1]紀(jì)小龍，施作霖.診斷免疫組織化學(xué)[M].北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，1997.5.

[2]許良中.實用腫瘤病理方法學(xué)[M].上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997:222-223

[3]王伯紜，李玉松，黃高升，等.病理學(xué)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000:587-589.