導(dǎo)語(yǔ)：柴胡有效成分提取分析論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1儀器與試藥

1.1儀器

島津LC-20A高效液相分析儀（SPD-20A紫外檢測(cè)器）；752紫外分光光度計(jì)（上海精密儀器科技有限公司）；RE52-86A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；METTLERAE240電子分析天平（瑞士）。

1.2試藥柴胡藥材購(gòu)于河南省藥材公司，經(jīng)本院陳隨清教授鑒定為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷a對(duì)照品自制，經(jīng)峰面積歸一化法測(cè)定含量為：99.91%；乙腈為色譜純；水為雙重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2方法

2.1單因素實(shí)驗(yàn)

分別以藥材浸漬溫度、浸漬時(shí)間、料液體積比、蒸餾液收集量等為因素，在不同水平下進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，篩選出影響柴胡揮發(fā)油提取的主要因素和水平，同樣分別以乙醇濃度、pH值、柴胡皂苷提取時(shí)間、料液體積比等為因素，在不同水平下進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，篩選出影響柴胡皂苷提取的主要因素和水平。從而為正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供依據(jù)。

2.2揮發(fā)油的提取和測(cè)定方法隨機(jī)稱取50g柴胡干燥粗粉，置于500ml圓底燒瓶中，采用水蒸氣蒸餾法在不同條件下提取柴胡揮發(fā)油，收集蒸餾液，加3%丙二醇搖勻，精密量取上述蒸餾液2ml兩份，一份置5ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為樣品液，另一份置蒸發(fā)皿中，置水浴上蒸干，殘?jiān)谜麴s水溶解，轉(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為空白。用752紫外分光光度計(jì)在277nm波長(zhǎng)處測(cè)定蒸餾液中揮發(fā)油的吸收度。

2.3柴胡皂苷的提取取提取揮發(fā)油后的藥渣，濾干，置于500ml圓底燒瓶中，在不同條件下回流提取柴胡皂苷，過(guò)濾得濾液，減壓低溫濃縮成每毫升含0.5g柴胡的濃縮液，備用。

2.4柴胡皂苷a含量測(cè)定

2.4.1色譜條件大連伊利特C18(4.6mm×250mm,5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水37∶63；流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)208nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量20μl。

2.4.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a對(duì)照品5.09mg，加甲醇溶解并定容至10ml，搖勻，配成0.509mg/ml對(duì)照品溶液，冷藏備用。

2.4.3供試品溶液的制備取上述濃縮液10ml減壓蒸干，加20ml甲醇溶解殘?jiān)^(guò)濾得濾液。再取2ml濾液至10ml容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，冷藏備用。

2.4.4線性范圍考察精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液進(jìn)樣量X（μl）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸（n=5），得線性回歸方程為Y=209413.7X－162379.4，線性范圍為0.9720～9.635μg，相關(guān)系數(shù)為r=0.9997，線性關(guān)系良好。

2.4.5精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品20μl，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次測(cè)定，記錄峰面積，RSD為1.5%（n=5），表明精密度良好。

2.4.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將供試品溶液在室溫下貯存，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下，分別于0，2，4，6，8h進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，RSD為2.0%，表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一批樣品5份，按供試品溶液處理方法制備樣品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定5次，記錄峰面積，RSD為2.1%（n=5）。

2.4.8樣品測(cè)定精密吸取20μl樣品溶液，在“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算各樣品中柴胡皂苷a的含量。

2.5正交實(shí)驗(yàn)以柴胡蒸餾液中揮發(fā)油的吸收度和柴胡皂苷a的含量為檢測(cè)指標(biāo)，參照單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別以藥材浸漬溫度、揮發(fā)油收集量、柴胡皂苷提取時(shí)間、柴胡皂苷提取溶劑料液比等主要因素及不同水平進(jìn)行L9(34)正交設(shè)計(jì)，篩選最佳工藝。正交實(shí)驗(yàn)因素和水平見(jiàn)表1。表1正交實(shí)驗(yàn)因素及水平（略）

3結(jié)果

3.1浸漬溫度對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響分別在30，40，60，80℃溫度下浸漬6h，料液比1∶6，提取1次，考察浸漬溫度對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響。測(cè)得吸收度依次為：0.303，0.984，0.758，0.587。由測(cè)定結(jié)果可知，在40℃下浸漬吸收度達(dá)到最大。且變化顯著，所以浸漬溫度應(yīng)選在40℃左右。

3.2浸漬時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響在40℃下，分別浸漬0，2，4，6，8h，料液比1∶6，提取1次，考察浸漬時(shí)間對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響。測(cè)得吸收度依次為：0.470，0.559，0.650，0.940，0.722。由測(cè)定結(jié)果可知，浸漬6h吸收度最大，浸漬4h和8h吸收度相當(dāng)。

3.3料液比對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響料液比分別為1∶5，1∶6，1∶8，1∶10，提取1次，考察料液比對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響，測(cè)得吸收度依次為：0.316，0.443，0.337，0.258。由測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)，料液比1∶6吸收度最大。且變化顯著。

3.4揮發(fā)油收集量對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響分別收集100，200，300ml蒸餾液，考察揮發(fā)油收集量對(duì)揮發(fā)油提取效果的影響，測(cè)得吸收度依次為：0.454，0.507，0.596。由測(cè)定結(jié)果可知。隨著收集量的增多，吸收度逐漸增大，但增加趨勢(shì)不顯著。

3.5乙醇濃度對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響分別以95%，75%，60%，45%乙醇，料液比為：1∶6，提取柴胡皂苷?？疾觳煌掖紳舛葘?duì)柴胡皂苷提取效果的影響，柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.15%，0.12%，0.12%。由測(cè)定結(jié)果可知，柴胡皂苷提取率隨乙醇濃度的降低而降低。在95%乙醇濃度時(shí)最大。且變化較顯著。因此選用95%乙醇提取。

3.6pH值對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響分別用0，5%，10%，15%的氨水95%乙醇液提取皂苷?？疾靝H值對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響，柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.25%，0.24%，0.24%。由測(cè)定結(jié)果可知，堿性乙醇提取效果比較好，含5%～10%氨水95%乙醇條件下提取液中柴胡皂苷a變化不顯著，因此選用含5%氨水。

3.7提取時(shí)間對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響用95%乙醇分別在0.5，1，2，3h提取皂苷?？疾焯崛r(shí)間對(duì)皂苷提取效果的影響。柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.25%，0.20%，0.20%。由測(cè)定結(jié)果可知，提取1h時(shí)提取率最大。提取時(shí)間再長(zhǎng)提取率就逐漸下降。

3.8料液比對(duì)柴胡皂苷提取效果的影響在10，8，6，5，3倍不同料液比條件下回流提取柴胡皂苷?？疾炝弦罕葘?duì)柴胡皂苷提取效果的影響。柴胡皂苷a含量依次為：0.15%，0.15%，0.20%，0.21%，0.14%。由測(cè)定結(jié)果可知，料液比為在5～6倍時(shí)提取率最大。

3.9正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析因柴胡中的揮發(fā)油和柴胡皂苷a均為有效成分，權(quán)重應(yīng)相等。則規(guī)定吸收度中最大值0.945及柴胡皂苷a含量中最大值0.33%為100，其余值對(duì)應(yīng)比較，兩項(xiàng)加和后平均得綜合評(píng)分值。結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。表2正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（略）表3誤差分析（略）

由表2和表3可知，柴胡揮發(fā)油收集量的極差最大，其次是料液比和柴胡皂苷提取時(shí)間，故對(duì)于柴胡提取效果影響的大小順序?yàn)锽>D>C>A，由于A和C影響不顯著，故綜合考慮，選擇最佳提取方案為A1B1C1D3，即40℃浸漬，收集100ml揮發(fā)油，8倍量含5%氨水的95%乙醇提取1h。

3.10最佳方案的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)取50g柴胡粗粉置500ml圓底燒瓶中，在最佳提取條件下提取。重復(fù)兩次。結(jié)果見(jiàn)表4。表4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

由表4可見(jiàn)，采用優(yōu)化最佳工藝提取有效成分柴胡揮發(fā)油和皂苷，其揮發(fā)油吸收度和柴胡皂苷a的含量都較高，且工藝條件穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。

4討論

柴胡揮發(fā)油和柴胡皂苷為柴胡的主要有效成分，兩者的提取是較為矛盾的。據(jù)文獻(xiàn)資料，柴胡皂苷在6h內(nèi)穩(wěn)定，而要完全提取揮發(fā)油則要較長(zhǎng)時(shí)間。這將導(dǎo)致柴胡皂苷的分解、降解等一系列不穩(wěn)定的反應(yīng)，使柴胡皂苷的含量降低。因此要同時(shí)兼顧揮發(fā)油和柴胡皂苷的提取，可考慮采用水蒸氣蒸餾法提取柴胡揮發(fā)油，采用堿性醇提工藝代替?zhèn)鹘y(tǒng)的水提工藝提取柴胡皂苷。且在提取過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，柴胡皂苷a受熱容易分解，隨著加熱時(shí)間增長(zhǎng)，含量逐漸減少，因此在各加熱環(huán)節(jié)，如提取，濃縮，干燥過(guò)程中應(yīng)盡量采用低溫，以減少柴胡皂苷a的損失。

中藥成分復(fù)雜,應(yīng)綜合考慮各有效成分的性質(zhì)及其在制備過(guò)程中的變化,以保證制劑的質(zhì)量和療效。據(jù)文獻(xiàn)資料，柴胡中含柴胡皂苷a大約在0.2%～0.4%，從本實(shí)驗(yàn)最佳工藝提取液中測(cè)得柴胡中柴胡皂苷a的含量為0.32%，因此本工藝提取效果較好。至于揮發(fā)油的含量，各種文獻(xiàn)所得結(jié)果不盡相同，甚至相差10倍以上，由于藥材的原因，如藥材部位、采收時(shí)間、產(chǎn)地等的影響難以衡量，因此本實(shí)驗(yàn)在不影響揮發(fā)油提取的前提下還兼顧了柴胡皂苷a的提取，從而為柴胡的提取提供可靠的依據(jù)和參照。

【參考文獻(xiàn)】

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005：562.

［2］楊云.天然藥物化學(xué)成分提取分離手冊(cè)（修訂版）［M］.北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2002:612.

【摘要】目的確定柴胡有效成分提取的最佳工藝。方法以柴胡中揮發(fā)油吸收度和柴胡皂苷a的含量為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)篩選主要因素和水平，再以正交實(shí)驗(yàn)篩選柴胡有效成分提取最佳工藝。結(jié)果最佳工藝參數(shù)為40℃溫浸，收集相當(dāng)于藥材2倍量蒸餾液，繼用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1h提取柴胡皂苷，可使揮發(fā)油吸收度達(dá)0.941，柴胡皂苷a的含量達(dá)0.32%。結(jié)論該工藝為柴胡有效成分的提取提供了可靠依據(jù)，且工藝條件穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好。

【關(guān)鍵詞】提取工藝柴胡皂苷a揮發(fā)油正交實(shí)驗(yàn)