導(dǎo)語：分析光果蕕多酚物質(zhì)抗氧化藥效特性一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的建立光果蕕不同部位中多酚的含量測(cè)定方法，研究其對(duì)羥自由基的清除作用。方法采用索氏提取法以95%乙醇為溶劑提取光果蕕不同部位的多酚物質(zhì)，用紫外分光光度法測(cè)定各部位多酚含量及對(duì)羥自由基（OH?）的清除作用，以IC50值為參考指標(biāo)評(píng)價(jià)了多酚物質(zhì)的抗氧化作用。結(jié)果光果蕕花、葉、莖多酚含量分別為：1.44%，2.08%，0.49%。在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)(0.05～0.2mg/ml)，光果蕕不同部位多酚對(duì)羥自由基(OH?)均有不同程度的清除作用，在濃度為0.2mg/ml時(shí)，光果蕕葉多酚的清除率達(dá)93.8%，與陽性對(duì)照VitC的清除率98.0%相當(dāng)，其IC50值為0.07mg/ml，小于VitC的IC50值0.08mg/ml。結(jié)論光果蕕葉多酚抗氧化活性最強(qiáng)，是一種天然有效的自由基清除劑。

【關(guān)鍵詞】光果蕕多酚；抗氧化；清除自由基；半數(shù)抑制率濃度

多酚類化合物是高等植物中普遍存在的次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有廣泛的生物活性，多酚具有抗腫瘤、抗病毒、抗衰老等方面的生理活性。多酚的這些生理活性與其具有的清除自由基和抗氧化性能密切相關(guān)。研究表明，多酚的抗氧化能力很強(qiáng)，它在阻止血脂升高的同時(shí)，還可以增加高密度脂蛋白的含量。因此，多酚可用在保健食品中，起到強(qiáng)身健體的功效，也可用于食品中，以延長(zhǎng)食品的貨架期。

光果蕕CaryopteristanguticaMaxim.為馬鞭草科蕕屬植物，在秦巴山區(qū)資源豐富，可用于治療因酗酒過量所致的酒瘡和濕疹等。本實(shí)驗(yàn)對(duì)光果蕕多酚進(jìn)行了測(cè)定，并對(duì)其清除自由基活性進(jìn)行研究，為其資源合理的開發(fā)利用及質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

一、器材

1.1材料

光果蕕于200710初采自陜西省太白縣，經(jīng)陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院田先華教授鑒定為馬鞭草科蕕屬植物光果蕕CaryopteristanguticaMaxim.。

1.2試劑

沒食子酸，陜西省藥檢所提供；VitC，福林酚，Sigma公司產(chǎn)品；硫酸亞鐵，雙氧水，水楊酸，95%乙醇，均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3儀器

FZ102微型植物粉碎機(jī)，黃驊市中興有限責(zé)任公司產(chǎn)品；索氏提取器；HH8B數(shù)顯恒溫水浴鍋，國(guó)華電器有限公司產(chǎn)品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀-RII，瑞士步琪有限公司產(chǎn)品；SHB?并笱?環(huán)水式真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司產(chǎn)品；101型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；SL202N型藥物電子天平，上海明橋精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；UV1600紫外-可見分光光度計(jì)，北京北分天普儀器技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

二、方法

2.1光果蕕不同部位多酚的提取精密稱取一定量的光果蕕花、葉、莖粉末用石油醚作為溶劑于索氏抽提器中回流8h除去脂類，然后再用95%乙醇回流提取3次，合并提取液，減壓濃縮后并定容至250ml容量瓶中備用。

2.2沒食子酸對(duì)照品的配制精密稱取沒食子酸對(duì)照品10.0mg，用95%的乙醇溶解后定容至100ml的容量瓶中，得終濃度為100μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取濃度為100μg/ml沒食子酸對(duì)照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml于10ml的容量瓶中，并分別補(bǔ)充適當(dāng)95%乙醇至1.0ml。再分別加入0.5mlFRC溶液（0.25mlFRC溶液+0.25ml的蒸餾水），3min后，再分別加入1.5ml的Na2CO3(0.2g/ml)溶液，然后各補(bǔ)充7.0ml蒸餾水，振蕩混勻后靜置2h，以95%乙醇作為空白，調(diào)零，于760nm處測(cè)定其吸光值。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=21.829X+0.0469，R2=0.9987。其中Y為吸光度，X為沒食子酸對(duì)照品溶液濃度(mg/ml)。結(jié)果表明，沒食子酸在0.001～0.006mg/ml的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4方法學(xué)考察精密吸取100μg/ml對(duì)照品溶液，其他實(shí)驗(yàn)步驟同“2.3”項(xiàng)下，同一樣品做6個(gè)重復(fù)，得RSD=0.9673%，所得數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性較好；同一樣品溶液反復(fù)測(cè)6次吸光值，得RSD=0.3962%，表明儀器精密度良好；在8h內(nèi)對(duì)同一樣品溶液每隔30min測(cè)1次吸光值，RSD=1.7756%，表明該實(shí)驗(yàn)體系在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5樣品溶液的制備將“2.1”項(xiàng)下所得光果蕕各部位乙醇提取液濃縮至浸膏狀，50℃干燥至恒重。精密稱取干燥后的花、葉和莖的乙醇提取物各25mg于10ml容量瓶中，用95%乙醇溶解并定容，得終濃度為2.5mg/ml的樣品溶液。

2.6待測(cè)樣品溶液多酚含量測(cè)定采用Folin酚法，精密吸取待測(cè)樣品溶液各1ml，按照“2.3”項(xiàng)方法對(duì)樣品進(jìn)行含量測(cè)定，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。在標(biāo)準(zhǔn)曲線中查找質(zhì)量濃度，計(jì)算光果蕕多酚含量。

2.7光果蕕不同部位多酚對(duì)羥自由基（OH?）的清除作用取7支具塞試管，分別向各試管中加入2.0mmol/LFeSO43.0ml，1.0mmol/LH2O23.0ml，振蕩，搖勻。再分別加入6.0mmol/L水楊酸3.0ml，搖勻，于37℃水浴加熱15min。加熱完畢后，以蒸餾水調(diào)零，應(yīng)用紫外分光光度計(jì)于510nm處測(cè)定吸光度Ai，然后分別向7支試管中加入樣品溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8ml，用蒸餾水補(bǔ)充各試管溶液至1.0ml，繼續(xù)水浴15min，待加熱完畢再次測(cè)定其吸光值A(chǔ)j，其樣品溶液自身顏色的吸光值為Ablank。抑制率按如下公式計(jì)算：抑制率（%）=(Ai-Aj+Ablank)/Ai×100%

2.8半數(shù)抑制率的計(jì)算IC50為半數(shù)抑制率濃度，也就是指自由基清除率為50%時(shí)的自由基清除劑的濃度，根據(jù)不同濃度抗氧化劑的清除率作曲線求出。IC50值是評(píng)價(jià)自由基清除劑效果的常用指標(biāo)，其值越小，表示達(dá)到50%自由基清除率時(shí)，所用的自由基清除劑的濃度劑量越小，其自由基清除效果也就越好。

三、結(jié)果

3.1OH?體系的生成根據(jù)Fenton反應(yīng)體系模型，二價(jià)鐵離子在過氧化氫存在的條件下，能夠迅速產(chǎn)生OH?，反應(yīng)生成的OH?存活時(shí)間短，若在該反應(yīng)體系中加入水楊酸，它將能有效地被水楊酸捕捉并同時(shí)生成有色物質(zhì)，該有色物質(zhì)在510nm處有一強(qiáng)吸收峰，但若在該體系中加入具有清除OH?的樣品溶液，則會(huì)與水楊酸競(jìng)爭(zhēng)性的與OH?結(jié)合，而使水楊酸與OH?作用下生成的紫色物質(zhì)減少，最終導(dǎo)致反應(yīng)體系的顏色變淺，吸光度減小。

3.2沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

3.3光果蕕不同部位多酚的含量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，光果蕕葉中多酚含量最高，花次之，莖中含量最低。各個(gè)部位的含量見表1。表1光果蕕不同部位多酚的含量（略）

3.4光果蕕不同部位多酚對(duì)OH?自由基的清除率分別在反應(yīng)體系中加入濃度為2.5mg/ml的樣品多酚提取液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8ml，測(cè)定不同體積樣品溶液在該體系下對(duì)OH?自由基的清除活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，光果蕕花、葉和莖多酚提取物對(duì)OH?自由基均有不同程度的清除作用，其中清除作用最強(qiáng)的是葉，花次之，莖最差，這和它們提取物中多酚含量百分比是一致的，其中光果蕕葉多酚提取物在加入體積0.8ml時(shí)，其清除羥自由基的活性與Vitc不相上下，達(dá)到93.8%以上，由此說明，高濃度的光果蕕葉多酚具有很強(qiáng)的抗氧化活性。其實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖2。

3.5不同部位光果蕕多酚對(duì)OH?自由基清除作用的IC50值不同部位光果蕕多酚對(duì)OH自由基清除作用的IC50。從表2中可以看出葉多酚提取物的IC50小于花、莖多酚的IC50值，具有較好的抗氧化活性，但與Vitc的IC50比較，還存在很大的差距，有待于提取并純化光果蕕多酚，進(jìn)一步分離出有效的單體成分。

四、討論

植物多酚因具有很強(qiáng)的抗氧化作用而備受人們的重視。植物多酚的抗氧化能力使它能夠有效地清除人體內(nèi)的過剩自由基，減緩人體組織器官的衰老。此外，植物多酚還具有明顯的抑菌、抗癌和抑制膽固醇上升等功效。wWw.gWyoO

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)樣品多酚測(cè)定的穩(wěn)定性較好，含量以光果蕕葉多酚含量較高，達(dá)2.08%.采用體外產(chǎn)生活性自由基系統(tǒng)，通過對(duì)自由基的清除作用實(shí)驗(yàn)證實(shí)，光果蕕多酚在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)對(duì)羥自由基均有一定的清除作用，尤以光果蕕葉多酚的清除作用最強(qiáng)，達(dá)到93.8%，與Vitc的清除作用相當(dāng)。由此表明光果蕕葉多酚是一種較好的天然抗氧化物質(zhì)，有較好的開發(fā)和應(yīng)用前景。

【參考文獻(xiàn)】

［1］宋立江，狄瑩.植物多酚的研究與利用的意義及發(fā)展趨勢(shì)［J］.化學(xué)進(jìn)展，2004，5(2):162.

［2］李雪瑩，王文杰.植物單寧的生理作用及經(jīng)濟(jì)價(jià)值［J］.內(nèi)蒙古林業(yè)科技，2004，4(4):22.

［3］西北植物研究所.秦嶺植物志［M］.北京:科學(xué)出版社，1983.

［4］鐘國(guó)躍，秦松云，鐘延渝，等.羌族民間藥用蕕屬植物的生藥學(xué)鑒定［J］.中國(guó)中藥雜志，1993，18(7):392.

［5］WZheng，S.Y.Wang.Antioxidantactivityandphenoliccompoundsinselectedherbs［J］.JAgricFoodChem.2001，49(11):5165.

［6］曹煒，陳衛(wèi)軍，陳紀(jì)蓉，等.不同種類蜂蜜總酚酸含量測(cè)定和抗氧化作用的研究［J］.食品科學(xué)，2006，26(1):48.

［7］吳德玲，金傳山，劉金旗，等.益智仁中總黃酮含量的測(cè)定［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24(5):38.

［8］于敏，彌宏，焦連慶.蜂膠總黃酮中阿魏酸與總酚酸的含量測(cè)定［J］.中藥材，2005，28(12):1116.

［9］石碧，狄瑩.植物多酚［M］.北京:科學(xué)出版社，2000:19.

［10］邱金東，湯昆.DPPH和ABTS法測(cè)定核桃仁的體外抗氧化活性［J］.中成藥，2008，8(30):1215.

［11］丁利君，周圳輝，林燕如.芒萁中總黃酮物質(zhì)的提取及抗氧化研究［J］.食品科學(xué)，2005，26(8)：77.

［12］Z.Z.Xiang，Z.X.Ning.ScavengingandantioxidantpropertiesofcompoundderivedfromchlorogenicacidinSouth-Chinahoneysuckle［J］.LWT-FoodscienceandTechnology，2008，41(7):1189.

［13］劉運(yùn)榮，胡健華.植物多酚的研究進(jìn)展［J］.武漢工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，12:63.

［14］朱桂勤，李建科.茶多酚的功能研究進(jìn)展［J］.食品研究與開發(fā)，2005，26(1):33.