關(guān)于PCR技術(shù)與細(xì)菌學(xué)的關(guān)聯(lián)透析

時(shí)間:2022-04-10 04:20:00

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關(guān)于PCR技術(shù)與細(xì)菌學(xué)的關(guān)聯(lián)透析

摘要:在臨床微生物檢驗(yàn)中,醫(yī)學(xué)論文常規(guī)分離方法是最基礎(chǔ)的,也是最廣泛的,并不是所有的病原菌的檢測(cè)都能用pcr技術(shù)代替,因此,應(yīng)用PCR技術(shù)時(shí),必須有所選擇。

關(guān)鍵詞:PCR技術(shù)感染衣原體

一、PCR檢測(cè)結(jié)核分支桿菌

結(jié)核桿菌不產(chǎn)生內(nèi)外毒素,其毒性物質(zhì)主要為索狀因子和硫脂,人類(lèi)對(duì)其有較高的易感性,最易受損害的器官是肺,內(nèi)消化道和接處感染者很少,絕大多數(shù)是由呼吸道人侵導(dǎo)致感染和發(fā)病。結(jié)核和其他分支桿菌感染疾病的診斷時(shí)間長(zhǎng),且非常復(fù)雜。臨床醫(yī)生根據(jù)臨床表現(xiàn)、X線(xiàn)檢查、直接鏡檢、皮膚實(shí)驗(yàn)和抗結(jié)核療效進(jìn)行初步診斷。涂片鏡檢雖然簡(jiǎn)單,經(jīng)濟(jì)和應(yīng)用廣泛,但陽(yáng)性率低,而且只能提示有分支桿菌,無(wú)法鑒別是結(jié)核分支桿菌還是其他分支桿。因此,確診病原只能依賴(lài)分支桿菌的培養(yǎng)和菌型鑒定分支桿菌的培養(yǎng),不僅陽(yáng)性率低,而且花費(fèi)的時(shí)間也長(zhǎng),而且經(jīng)常會(huì)因?yàn)楸晃廴径?。PCR技術(shù)為解決這一問(wèn)題開(kāi)創(chuàng)了新的前景。微量DNA擴(kuò)增1護(hù)~106倍績(jī)以上,可直接檢測(cè)臨床標(biāo)本中的病原菌。標(biāo)本的留取及送檢:痰、肺及氣管灌洗液、胸腹水、腦脊液、尿液、血液留取后送檢。按試劑盒說(shuō)明步驟處理標(biāo)本。PCR擴(kuò)增和檢測(cè)。結(jié)果判斷:痰標(biāo)本以外的體液標(biāo)本,若陽(yáng)性,可作為結(jié)核病診斷依據(jù),若痰標(biāo)本陽(yáng)性結(jié)果還應(yīng)結(jié)合X線(xiàn)檢查及臨床癥狀等,作出診斷。

二、PCR檢測(cè)衣原體

沙眼衣原體是常見(jiàn)的引起人類(lèi)沙眼、結(jié)膜炎和性傳播疾病的病原體。包括尿道炎、宮頸炎、輸卵管炎、流產(chǎn)、性病性淋巴肉芽腫、直腸炎、肺炎、新生兒結(jié)膜炎等。近年來(lái)報(bào)道,1月一4月嬰兒由其引起肺炎的比例較高,患兒主要表現(xiàn)為痙攣性咳嗽,同時(shí)伴有臨床癥狀。因?yàn)橐略w的細(xì)胞內(nèi)寄生性,臨床診斷必須通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng),其方法費(fèi)時(shí),而且難度也高,如果用免疫法測(cè)定,其結(jié)果的可靠性又低。這時(shí),PCR的診斷就非常關(guān)鍵,應(yīng)用PCR體外擴(kuò)增DNA有效檢測(cè)特異性序列的方法,適合沙眼衣原體的檢測(cè),其檢測(cè)出的陽(yáng)性率比細(xì)胞培養(yǎng)及其它方法都高.標(biāo)本采集:男性取尿道拭子或前列腺液立即送檢,女性取陰道拭子送檢。標(biāo)本處理及擴(kuò)增方法,按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

三、PCR檢測(cè)支原體

1、解尿支原體

解脈支原體是非淋菌性尿道炎中重要的病原菌,可引起尿道炎、產(chǎn)褥熱、宮頸炎、盆腔炎、不育癥、羊膜絨膜炎等。臨床診斷使用PCR方法比較方便快捷。標(biāo)本的采集:支原體實(shí)是包內(nèi)寄生,因此在取材時(shí)要注意,對(duì)男性患者要求3小時(shí)內(nèi)不排尿用較細(xì)的滅菌拭子插人尿道,用力刮尿道壁,盡量取上皮細(xì)胞,以免因取材不當(dāng)造成假陰性。按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行處理。陽(yáng)性結(jié)果可診斷支原體感染。因大部分非淋菌性尿道炎的病原菌,主要是解脈支原體,人型支原體也是性傳播疾病的病原菌。如試劑盒只是檢測(cè)解脈支原體的,陰性結(jié)果也不能排除其它支原體感染。

2、肺炎支原體

肺炎支原體以青少年發(fā)病為多見(jiàn),臨床中約有80%慢性氣管炎患者合并肺炎支原體感染。臨床表現(xiàn)為非典型肺炎,以發(fā)熱、頭痛、咽喉痛、肌肉酸痛為主。支原體肺炎占肺炎的20%,在人群密集處可達(dá)50%。感染過(guò)程中可從胸水、血液、腦脊液等分離到病原菌。如作培養(yǎng),菌落5天~14天后才出現(xiàn),也可用血清方法檢測(cè),其它方法的敏感性不高,PCR法擴(kuò)增特異基因序列快捷敏感。標(biāo)本采集:痰、痰咽拭子、肺及支氣管盜洗液等標(biāo)本送檢。標(biāo)本的處理及擴(kuò)增按試劑盒說(shuō)明操作。陽(yáng)性結(jié)果可作為診斷依據(jù)。

四、PCR檢測(cè)嗜肺軍團(tuán)

菌嗜肺軍團(tuán)菌是一種具有高度爆發(fā)性流行性呼吸道疾病,通過(guò)空氣傳播進(jìn)人肺臟。臨床表現(xiàn)多種多樣,高發(fā)于夏秋季節(jié)。肺炎是軍團(tuán)軍感染的最常見(jiàn)疾病,起病突然,伴高熱不適,干咳無(wú)痰。有痰后,伴有炎癥,革蘭氏染色不能說(shuō)明是什么菌感染。肺部以外的癥狀通常是意識(shí)模糊及腹瀉。軍團(tuán)菌易感人群是免疫力低下的人。易感因素有吸煙、慢性心血管癥、腎衰竭、免疫性疾病或治療引起的,因器官移植,使用了大劑量類(lèi)固醇治療的患者。標(biāo)本采集:痰、氣管分泌物、胸水和血液。按說(shuō)明操作處理標(biāo)本。陽(yáng)性結(jié)果可作為診斷依據(jù)。