導(dǎo)語(yǔ)：骨髓干細(xì)胞修復(fù)研究論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀(guān)點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢(xún)客服老師，歡迎參考。

【摘要】探尋體外誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞的最佳細(xì)胞因子，尋求體內(nèi)修復(fù)家兔軟骨缺損的最為有效方案。［方法］rhFGF1、rhTGF-β1、rhIGF-I單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)培養(yǎng)，應(yīng)用常規(guī)染色、MTT、免疫組織化學(xué)染色的方法篩選誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成軟骨細(xì)胞的最佳細(xì)胞因子，并將其與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合于纖維蛋白凝膠制成凝膠復(fù)合物，直接種植到兔膝關(guān)節(jié)實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)軟骨缺損處，并與對(duì)照組相比較，觀(guān)察軟骨修復(fù)效果。［結(jié)果］常規(guī)形態(tài)學(xué)觀(guān)察，rhTGF-β1和rhIGF-I聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)的細(xì)胞在形態(tài)上類(lèi)似于軟骨細(xì)胞，免疫組化染色提示誘導(dǎo)細(xì)胞具有軟骨細(xì)胞表型。凝膠復(fù)合物直接種植在體內(nèi)能誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化，修復(fù)缺損的軟骨，缺少細(xì)胞因子的對(duì)照組軟骨缺損修復(fù)效果差。［結(jié)論］rhTGF-β1和rhIGF-I聯(lián)合應(yīng)用可作為誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化的最佳組合，骨髓基質(zhì)干細(xì)胞凝膠復(fù)合物能修復(fù)軟骨缺損。

【關(guān)鍵詞】細(xì)胞因子骨髓基質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞軟骨缺損

Abstract：［Objective］Toretrievalabestcellfactorwhichcaninducebonemarrowstromalcells(bMSCs)intochondrocyteinvitroandtoexploreaneffectiveplantorepairrabbit''''schondrocytedefect.［Method］IsolatedbMSCswereculturedinvitro.rhFibroblastGrowthFactor1(rhFGF-1)、rhTransformingGrowthFactor-β1(rhTGF-β1)、rhInsulinlikeGrowthFactor-Ⅰ(rhTGF-Ⅰ)wereutilizated.TheproliferationofcellswasdetectedbyMTTassay,andthemacroscopichistology,HEstainingandimmunohistochemicalexaminationswereperformedtoseekthebestcellfactor.Invivo,toinvestigatetherepairofthearticularcartilage,bMSCscombinedwithfibringlueandrhTGF-β1、rhIGF-Iwascomparedwithcontrolgroup.［Result］ThecellsinducedbyrhTGF-β1andrhIGF-Iweresimilartochondrocytesinmorphology,andimmunohistochemicalexaminationsshowedthecellspossessedphenotypeofchondrocytes.RhTGF-β1andrhIGF-Icoulddifferentiatebonemarrowstromalcellsintocartilagecellsinvivo,andrepairthearticularcartilagedefect.Thecontrolgroupcouldnotrepairthearticularcartilagedefectefficiently.［Conclusion］rhTGF-β1andrhIGF-IarebestgroupwhichstimulatebMSCstodifferenateintocartilagecells.BMSCscombinedwithfibringlueandrhTGF-β1、rhIGF-Icanrepairthearticularcartilagedefect.

Keywords：cellfactor;bonemarrowstromalcells;chondrocyte;cartilagedefect

作者簡(jiǎn)介：童培建(1961-)，男，杭州人，教授，主任醫(yī)師，在讀博士研究生，研究方向：關(guān)節(jié)外科，(電話(huà))0571-87070956骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）中含有少量的多功能基質(zhì)干細(xì)胞，能向成骨系細(xì)胞、成軟骨系細(xì)胞分化［1］，為骨、軟骨組織的損傷提供了潛在的修復(fù)可能。臨床軟骨缺損自行修復(fù)的效果較差，可能跟軟骨損傷局部BMSCs的含量少有關(guān)。因此作者通過(guò)對(duì)BMSCs在體外擴(kuò)增培養(yǎng)、應(yīng)用不同的細(xì)胞因子進(jìn)行誘導(dǎo)，從中尋找體外促進(jìn)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞增殖分化的最佳條件，并將細(xì)胞因子與骨髓基質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合于纖維蛋白凝膠制成凝膠復(fù)合物，植入缺損處，探討體內(nèi)修復(fù)家兔軟骨缺損的效果。

1材料與方法

1.1骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的取材與培養(yǎng)

取新生紅皮胎兔2只（24h內(nèi)），置入濃度為75％的酒精中浸泡消毒5min，在超凈工作臺(tái)中，無(wú)菌分離四肢長(zhǎng)骨骨干，剔除軟組織，在10％的DMEM培養(yǎng)液中剖開(kāi)骨干，反復(fù)吹打髓腔。將細(xì)胞懸液移入離心管中，加入Hank''''s液至10ml，平衡，1500r／min離心10min，棄上清，加入10％DMEM，反復(fù)抽吸吹打均勻，計(jì)數(shù)，按1×107接種于25ml培養(yǎng)瓶中，37℃5％飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。5d后首次全量換液，以后每3d換液1次，待細(xì)胞融合至80％時(shí)，0.25％胰蛋白酶常規(guī)消化，按1:3比例傳代培養(yǎng)。逐日倒置顯微鏡觀(guān)察培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。

1.2體外實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分組如下：rhFGF-1組（簡(jiǎn)稱(chēng)F組）；rhIGF-Ⅰ組（簡(jiǎn)稱(chēng)I組）；rhTGF-β1組（簡(jiǎn)稱(chēng)T組）；rhFGF-1rhIGF-I組（簡(jiǎn)稱(chēng)FI組）；rhFGF-1rhTGF-β1組（簡(jiǎn)稱(chēng)FT組）；rhIGF-IrhTGF-β1組（簡(jiǎn)稱(chēng)IT組）；rhFGF-1rhIGF-IrhTGF-β1組（簡(jiǎn)稱(chēng)FIT組）；對(duì)照組（不加任何試劑）。其中rhFGF-1濃度為10μg/L;rhIGF-I濃度為10μg/L;rhTGF-β1I濃度為5μg/L。

1.3MTT比色法測(cè)定

取第2代骨髓基質(zhì)干細(xì)胞以1×104/ml接種到96孔培養(yǎng)板上，共4塊，常規(guī)培養(yǎng)24h。待細(xì)胞完全貼壁后，棄上清液，將每塊孔板隨機(jī)分組，每組8孔，按實(shí)驗(yàn)分組添加相應(yīng)的細(xì)胞因子，分別于第1、3、6、9d各取孔板1塊，進(jìn)行MTT檢測(cè)：即每孔加50mg/ml的MTT液20μl,常規(guī)培養(yǎng)4h，棄廢液，0.1%PBS液清洗1次，加入二甲亞砜，每孔150μl，靜置20min后，用酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)為490nm的吸光度值。

1.4體外細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察

將細(xì)胞進(jìn)行HE、Ⅱ膠原免疫組化測(cè)定（ABC法），倒置顯微鏡下觀(guān)察。

1.5纖維蛋白凝膠復(fù)合體的制備

傳代培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)0.1%胰蛋白酶＋0.02鞹A消化后，1000r/min離心10min濃集，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。制成單細(xì)胞懸液，與纖維蛋白原溶液混勻。使纖維蛋白原和骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的終濃度分別為2.5g/L和5×106/ml，每毫升再加入rhTGF-β15ng/5μl和rhIGF-I50ng/50μl。然后加入凝血酶20U/ml。制成凝膠備用（2h內(nèi)使用）。

1.6體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分組

32只家兔，雌雄不限，隨機(jī)分為4組。無(wú)菌條件下后肢右股骨髁滑車(chē)關(guān)節(jié)面鉆孔，直徑3.5mm、深3.0mm，達(dá)軟骨下骨。干細(xì)胞復(fù)合體組：缺損中直接種植纖維蛋白凝膠復(fù)合體；單純凝膠復(fù)合體組：缺損植入未加細(xì)胞因子的凝膠復(fù)合體；骨髓基質(zhì)干細(xì)胞注射組：缺損單純注射濃度為5×106/ml骨髓基質(zhì)干細(xì)胞懸液0.5ml；空白組：缺損不作處理。不固定術(shù)肢，自由活動(dòng)。分別于4、8、12周處死取材。標(biāo)本10％福爾馬林固定。行HE、Masson三色、甲苯胺藍(lán)染色檢查。第12周標(biāo)本行透射電鏡檢查。

1.7體內(nèi)組織形態(tài)學(xué)評(píng)分

參照O''''Driscoll，KeeleyandSalter組織形態(tài)學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組修復(fù)組織形態(tài)學(xué)進(jìn)行半定量評(píng)分（表2）。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示，顯著性檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有顯著性。使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理。

2結(jié)果

2.1體外細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察

貼壁細(xì)胞呈梭形、紡錘形、多角形等，有不規(guī)則的生長(zhǎng)突生出，細(xì)胞基質(zhì)折光性強(qiáng)；4～5d后細(xì)胞形成集落狀，形態(tài)比較單一，基本上呈梭形或多角形；7～8d后形成單層。

首次傳代的細(xì)胞呈圓形，24h后恢復(fù)梭形，折光性好，細(xì)胞呈均勻生長(zhǎng)，形態(tài)更加單一，基本呈梭形。8d后可鋪滿(mǎn)瓶底，形成單層結(jié)構(gòu)，排列呈有規(guī)律的方向性（圖1）。經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的細(xì)胞，對(duì)照組、T組生長(zhǎng)速度有所減慢，10d左右形成單層結(jié)構(gòu)；IT組形態(tài)由梭形變?yōu)橐陨蓉愋位蚨嘟切螢橹?，?xì)胞核深染（圖2）；F組生長(zhǎng)加快，在5d形成單層，形態(tài)以長(zhǎng)梭形為主（圖3）。免疫組化染色顯示：細(xì)胞基質(zhì)呈棕黃色，染色較均勻，證明Ⅱ膠原存在［2］，部分細(xì)胞不著色(圖4)。細(xì)胞經(jīng)蘇木素復(fù)染后可見(jiàn)細(xì)胞核深染，免疫組化染色后的細(xì)胞形態(tài)在鏡下成圓形、橢圓形或多角形，不同于前2代的細(xì)胞形態(tài)(圖5)。免疫組化染色（隨機(jī)鏡野）陽(yáng)性率面積接近50%（圖4、6）。圖1p1代4×10圖2HE（IT組）10×40圖3HE（F組）10×20圖4免疫組化（IT組）10×20圖5免疫組化（IT組）10×40圖6免疫組化（IT組）10×20

2.2誘導(dǎo)細(xì)胞增殖測(cè)定(MTT)

第1、3dMSCs細(xì)胞處于增殖靜止期；細(xì)胞在第3d開(kāi)始進(jìn)入對(duì)數(shù)增殖期，細(xì)胞增殖迅速，以F組增殖最為顯著，第6d達(dá)到高峰；第9d多數(shù)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)入增殖平臺(tái)期，增殖速度相對(duì)減緩，而IT組仍保持增殖的趨勢(shì)（見(jiàn)表1）。MTT測(cè)定3d時(shí)各組細(xì)胞均有不同程度的增殖；6d時(shí)F組、I組、FI組、FT組細(xì)胞增殖較快，與對(duì)照組相比，P<0.01，其它組細(xì)胞增殖速度不明顯；9d時(shí)，F(xiàn)組、FT組、FIT組與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；FI組P<0.05。表1生長(zhǎng)因子在不同時(shí)間對(duì)MSCs的增殖活性的影響注：*與對(duì)照組比較P＜0.05；**與對(duì)照組比較P<0.01；

2.3修復(fù)軟骨的大體觀(guān)察

術(shù)后4周，干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本可見(jiàn)缺損處由白色、半透明類(lèi)軟骨樣組織所填充，與正常軟骨組織界限清楚，表面不光滑。術(shù)后8周，缺損處修復(fù)組織變成乳白色，半透明光滑組織，與周?chē)浌墙M織邊界開(kāi)始變模糊。術(shù)后12周，缺損修復(fù)組織與周?chē)＼浌墙M織已基本難區(qū)分，表面平坦（圖7）。單純凝膠復(fù)合體組12周缺損呈乳白色，表面平坦，邊界模糊。骨髓基質(zhì)干細(xì)胞注射組12周缺損處凹陷，肉芽組織生長(zhǎng)（圖8）?？瞻捉M12周缺損處肉芽組織填充表面仍稍凹陷，與周?chē)＼浌墙M織界限仍清楚。

2.4修復(fù)軟骨HE染色

第12周干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組的修復(fù)軟骨與正常軟骨整合良好，各層結(jié)構(gòu)清晰，新生軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多，排列已經(jīng)類(lèi)似正常軟骨，潮線(xiàn)明顯，表面未見(jiàn)裂縫（圖9）?？瞻捉M修復(fù)組織內(nèi)見(jiàn)少量的細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)異常，纖維組織填充。單純復(fù)合體組見(jiàn)細(xì)胞數(shù)量增多，形態(tài)正常，與周?chē)M織整合良好。

2.5修復(fù)軟骨Masson三色

干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組12周，軟骨細(xì)胞數(shù)量多，排列較前規(guī)則，軟骨表面光滑，與周?chē)M織整合良好，可見(jiàn)亮綠色膠原纖維，修復(fù)的軟骨與軟骨下骨質(zhì)緊密結(jié)合。

2.6修復(fù)軟骨甲苯胺藍(lán)染色

干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組12周時(shí)，甲苯胺藍(lán)染色與正常軟骨接近，修復(fù)的組織呈現(xiàn)出均勻的異染性著色，軟骨深層染色濃，細(xì)胞形態(tài)大。單純凝膠復(fù)合體組，基質(zhì)染色淺，細(xì)胞陷凹少。骨髓基質(zhì)干細(xì)胞注射組，細(xì)胞較少，基質(zhì)呈淺藍(lán)色（圖10）。空白組，細(xì)胞少，基質(zhì)染色顏色淺藍(lán)色。

2.7修復(fù)軟骨電鏡檢查

干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組軟骨細(xì)胞具有典型的褶皺狀小突起，細(xì)胞周?chē)€可見(jiàn)到許多長(zhǎng)纖毛，并延伸到細(xì)胞外基質(zhì)中。高倍電鏡顯示干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組的修復(fù)軟骨細(xì)胞細(xì)胞核增大，核內(nèi)常染色體增多。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列整齊、緊密，膜表面附有大量的核糖體顆粒。胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量增加。軟骨細(xì)胞周?chē)耐饣|(zhì)中可見(jiàn)膠原纖維成束狀緊密排列，可見(jiàn)到周期性橫紋（圖11）。單純凝膠復(fù)合體組修復(fù)的軟骨細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，但細(xì)胞表面未見(jiàn)纖毛。高倍鏡下軟骨細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量少，排列較稀疏，高爾基體數(shù)量也減少。細(xì)胞核較干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組明顯小。細(xì)胞周?chē)z原纖維排列紊亂，稀疏。骨髓基質(zhì)干細(xì)胞注射組電鏡下觀(guān)察基本類(lèi)似于空白組。大多為凋亡軟骨細(xì)胞，細(xì)胞水腫脹大，細(xì)胞核固縮，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)見(jiàn)不到細(xì)胞器（圖12）。偶爾可見(jiàn)未壞死的軟骨細(xì)胞，但細(xì)胞形態(tài)小，成梭形。細(xì)胞周?chē)w維束排列稀疏。

2.8修復(fù)軟骨的組織形態(tài)學(xué)評(píng)分及統(tǒng)計(jì)分析(表2)表2修復(fù)后軟骨組織形態(tài)學(xué)分值注：*與干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組比較P＜0.05，△與空白組比較P＞0.05，▲與空白組比較P＜0.05圖7術(shù)后12周，干細(xì)胞復(fù)合體組缺損修復(fù)組織大體照片圖8術(shù)后12周，單純骨髓基質(zhì)干細(xì)胞組缺損修復(fù)組織大體照片圖9第12周干細(xì)胞復(fù)合體實(shí)驗(yàn)組的修復(fù)軟骨與正常軟骨整合良好，新生軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多，排列已經(jīng)類(lèi)似正常軟骨。HE100×圖10第12周單純骨髓基質(zhì)干細(xì)胞組的修復(fù)軟骨細(xì)胞較少，基質(zhì)呈淺藍(lán)色。甲苯胺藍(lán)100×圖11干細(xì)胞復(fù)合實(shí)驗(yàn)組12周，軟骨細(xì)胞周?chē)耐饣|(zhì)中可見(jiàn)膠原纖維成束狀緊密排列。12500×圖12空白組12周，大多為凋亡軟骨細(xì)胞，細(xì)胞水腫脹大，細(xì)胞核固縮，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器很少。1650×

3討論

許多證據(jù)表明［3］，MSCs可以在不同理化環(huán)境的細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下，定向的向成骨細(xì)胞或成軟骨細(xì)胞系方向分化，并最終形成骨或軟骨組織。在細(xì)胞生存微環(huán)境中，生長(zhǎng)因子對(duì)細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育和成熟過(guò)程起重要的調(diào)控作用。

bFGF對(duì)MSCs的作用還不是很明確，但主要認(rèn)為促增殖作用。另外，bFGF能促進(jìn)軟骨細(xì)胞合成Ⅱ型膠原，對(duì)維持軟骨細(xì)胞正常表型的表達(dá)具有重要的作用。IGF1能刺激細(xì)胞分裂增殖，而且增強(qiáng)細(xì)胞蛋白多糖(PG)及Ⅱ型膠原的合成［4］。TGFβ是一種多功能性的細(xì)胞因子,可以顯著提高軟骨細(xì)胞表型的表達(dá),促進(jìn)軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和蛋白多糖的合成與分泌。TGF-β誘導(dǎo)MSCs后經(jīng)連續(xù)培養(yǎng)，可以在體外形成軟骨結(jié)節(jié)，經(jīng)證明具有軟骨的組織結(jié)構(gòu)［5］。

本實(shí)驗(yàn)中作者發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子單獨(dú)應(yīng)用時(shí)，bFGF-1的促增殖作用最顯著，倍增時(shí)間最短；其次分別是IGF1和TGFβ，這與以往的實(shí)驗(yàn)研究相符［6］。然而，當(dāng)聯(lián)合應(yīng)用細(xì)胞因子時(shí)，發(fā)現(xiàn)bFGF1與其它因子組合的增殖作用部分受到抑制，不如單獨(dú)應(yīng)用bFGF-1作用顯著。同時(shí)作者發(fā)現(xiàn)，IGF1和TGFβ聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，細(xì)胞的對(duì)數(shù)增殖期最長(zhǎng)，誘導(dǎo)細(xì)胞呈持續(xù)的增殖狀態(tài)，這可能是IGF1和TGFβ聯(lián)合應(yīng)用，使各自的半衰期延長(zhǎng)，能夠更持久的調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)行為，使之保持生物學(xué)活性。IGF1和TGFβ聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，部分集落的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞呈大而圓形或多角形，通常認(rèn)為，圓形、多角形的細(xì)胞體外能夠保持合成軟骨特異性Ⅱ型膠原及蛋白多糖的功能。免疫組化染色陽(yáng)性面積較其它組大；而對(duì)照組與其它實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞集落多數(shù)呈長(zhǎng)梭形，以往認(rèn)為這是軟骨細(xì)胞去分化的表現(xiàn)（dedifferentiation）。Ⅱ型膠原蛋白是軟骨細(xì)胞所特有的膠原類(lèi)型，是軟骨細(xì)胞重要的表型蛋白，免疫組化結(jié)果揭示MSCs經(jīng)IGF1和TGFβ聯(lián)合誘導(dǎo)可以向軟骨細(xì)胞方向增殖分化。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，IGF1和TGFβ聯(lián)合應(yīng)用是誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞方向分化的最佳組合，能促進(jìn)Ⅱ型膠原合成和表達(dá)。在體內(nèi)作者采用TGFβ及IGFⅠ作為骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的誘導(dǎo)因子，以纖維蛋白凝膠作為前者的載體。纖維蛋白凝膠可通過(guò)釋放β轉(zhuǎn)化因子和血小板衍生生長(zhǎng)因子等來(lái)促進(jìn)細(xì)胞黏附、增殖并分泌基質(zhì)，起到骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的支架作用，能很好地包埋骨髓基質(zhì)干細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。此外，IGFⅠ在體內(nèi)可以通過(guò)與軟骨細(xì)胞膜上的受體結(jié)合以旁分泌和自分泌的方式起作用。因此IGFⅠ可以不進(jìn)入血液，而在局部與細(xì)胞發(fā)生作用。

實(shí)驗(yàn)表明在體內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用IGF1和TGFβ，能誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞的分化。在12周時(shí)修復(fù)組織為透明軟骨，病理切片提示修復(fù)組織與正常軟骨組織結(jié)構(gòu)類(lèi)似，并且與周?chē)M織整合良好。電鏡觀(guān)察也發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合應(yīng)用TGFβ及IGF1修復(fù)組織的軟骨細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞活躍，基質(zhì)內(nèi)纖維組織結(jié)構(gòu)符合軟骨特性。軟骨修復(fù)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，有多種細(xì)胞因子參與。缺少細(xì)胞因子的單純凝膠組和骨髓基質(zhì)干細(xì)胞注射組均不能達(dá)到較好的軟骨修復(fù)效果。因此，TGFβ及IGF1聯(lián)合可作為組織工程學(xué)修復(fù)軟骨的首選細(xì)胞因子。

【參考文獻(xiàn)】

［1］BiancoP,RiminucciM,GronthosS，etal．Bonemarrowstromalstemcellsnaturebiologyandpotentialapplication［J］.StemCell,2001,19(3):180-192.

［2］段小紅，毛勇，王惠蕓，等.髁突骨上組織改建中Ⅰ、Ⅱ型膠原的免疫組化研究［J］.華西口腔醫(yī)學(xué)雜志,2000，18（2）：81.

［3］丁堅(jiān)，曾炳芳，張先龍，等.骨膜覆蓋對(duì)骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植修復(fù)軟骨缺損的影響［J］.中國(guó)矯形外科雜志,2004,14(5):360-364.

［4］ZhangJ,LiY,ChenJ,etal.Expressionofinsulinlikegrowthfactor1andreceptorinischemicratstreatedwithhumanmarrowstromalcells［J］.BrainRes,2004,1030(1):19-27.

［5］陳富林，毛天球，丁桂聰，等.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞團(tuán)體外形成軟骨的觀(guān)察［J］.華西口腔醫(yī)學(xué)雜志,2003,21(2):92-94.

［6］焦巖濤，王大章，韓文利，等.bFGF、IGFI及TGFβ1對(duì)人髁突軟骨細(xì)胞增殖的影響［J］.中華口腔醫(yī)學(xué)雜志,2000,35(5):246-349.