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【關(guān)鍵詞】胃癌；,,GSK

摘要：目的：探討糖原合成酶激酶3β(Glycogensynthasekinase3β，GSK3β)與胃癌細(xì)胞中PCNA表達(dá)之間的關(guān)系及其臨床意義。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測75例人胃癌組織和10例正常胃粘膜組織中GSK3β和PCNA的蛋白表達(dá)。結(jié)果：GSK3β蛋白在胃癌中的陽性率為48.00%。GSK3β的蛋白表達(dá)與胃癌患者的分化程度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)（P＜0.05）。在75例人胃癌組織中，COX2、EGFR蛋白表達(dá)之間呈顯著負(fù)相關(guān)（P=0.000,r=0.422）。結(jié)論：GSK3β的低表達(dá)促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的增殖，有一定的預(yù)后意義。

關(guān)鍵詞：胃癌；GSK3β；PCNA；免疫組織化學(xué)

糖原合成酶激酶3β(Glycogensynthasekinase3β，GSK3β)作為一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，其生物學(xué)作用已遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了最初認(rèn)為的糖代謝調(diào)節(jié)酶的功能。新近研究發(fā)現(xiàn)，GSK3β能磷酸化多種底物，包括代謝與信號蛋白、細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白和轉(zhuǎn)錄因子等，因而在細(xì)胞的生長、發(fā)育、腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮著重要的作用［1,2］。近幾年來的研究發(fā)現(xiàn)GSK3β的活性能抑制某些腫瘤細(xì)胞的增殖和生存［3］，關(guān)于GSK3β參與胃癌細(xì)胞增殖的確切機(jī)制目前尚不清楚。因此，本研究探討了GSK3β與胃癌細(xì)胞中PCNA表達(dá)之間的關(guān)系及其臨床意義。

1材料與方法

11標(biāo)本來源

隨機(jī)收集本院2003年9月～2005年10月手術(shù)切除后的胃癌標(biāo)本75例，其中男性48例，女性27例；年齡35～73歲，平均年齡56歲。臨床TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期33例，Ⅲ期28例，Ⅳ期4例。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織49例，不伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌組織26例。癌細(xì)胞分化程度：高分化21例，中分化31例，低分化23例。正常胃組織10例，為非腫瘤患者手術(shù)標(biāo)本。胃癌手術(shù)切除標(biāo)本取材后經(jīng)4%中性緩沖福爾馬林固定。以4μm厚連續(xù)切片3張，1張進(jìn)行蘇木素伊紅染色，由兩名高級病理醫(yī)師復(fù)查切片并重新診斷，另2張進(jìn)行GSK3β、PCNA的蛋白檢測。

12試劑

兔抗人GSK3β多克隆抗體（SC9166）、鼠抗人PCNA單克隆抗體（ZM0213）、通用型SP試劑盒（SP9000）和DAB底物試劑盒（ZLI9018）均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

13免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判斷

采用免疫組織化學(xué)SP法。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，并鏡檢分析結(jié)果?？瞻讓φ沼肞BS取代一抗，其余步驟不變。GSK3β陽性信號主要定位在細(xì)胞胞質(zhì)，而PCNA則定位在細(xì)胞胞核。每例標(biāo)本在400倍高倍顯微鏡下選擇染色最強(qiáng)的4個視野，計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)。參照文獻(xiàn)方法來分析GSK3β、PCNA的表達(dá)水平，即“－”為不表達(dá)或<30%細(xì)胞表達(dá)；“+”為視野中陽性細(xì)胞數(shù)在30%～50%之間；“++”為陽性細(xì)胞數(shù)51%～70%；“+++”為陽性細(xì)胞數(shù)＞70%。

14統(tǒng)計處理

根據(jù)SPSS11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理。用χ2檢驗和Fisher精確概率法比較GSK3β與胃癌患者臨床病理特征以及PCNA表達(dá)的關(guān)系，P<0.05時被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

21GSK3β蛋白在不同胃組織中的表達(dá)

GSK3β蛋白在正常胃組織中呈陽性表達(dá)，在腫瘤組織中表達(dá)明顯減弱，其陽性率分別為：100.00%（10/10）、48.00%（36/75），兩者之間的差異有顯著性（P=0.002）。

22GSK3β蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征及PCNA表達(dá)的關(guān)系

表1GSK3β蛋白表達(dá)與胃癌臨床病理特征及PCNA表達(dá)的關(guān)系（略）

結(jié)果見表1所示，GSK3β的蛋白表達(dá)與胃癌的分化程度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)（P＜0.05）。而在75例人胃癌患者中，PCNA蛋白陽性表達(dá)的56例中，GSK3β有36例呈陰性；PCNA蛋白陰性表達(dá)的19例中，GSK3β卻16例呈陽性。兩者呈顯著負(fù)相關(guān)（P=0.000,r=0.422）。

3討論

糖原合成酶激酶3(GSK3)是一個多功能的絲氨酸/蘇氨酸類激酶，在真核生物中普遍存在。在哺乳動物中包括兩個亞型，即GSK3α和GSK3β，分子量分別為51kD和47kD。GSK3最初認(rèn)為該酶的功能僅僅是磷酸化肝糖原合成酶（glycogensynthase,GS）并使之失活，后來研究表明它有多種生物學(xué)功能如參與了胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡和胰島素反應(yīng)等諸多方面［4,5］。GSK3與許多疾病包括腫瘤的發(fā)生有關(guān)，可以作為一個潛在的藥物靶點［6］。但不同細(xì)胞和實驗體系所得出的實驗結(jié)果并不一致，顯示多種因子參與了GSK3β所調(diào)節(jié)的增殖信號傳遞路徑。

本研究顯示，GSK3β蛋白在正常胃組織中呈陽性表達(dá)，在腫瘤組織中表達(dá)明顯減弱，其陽性率分別為：100.00%（10/10）、48.00%（36/75），兩者之間的差異有顯著性（P=0.002），表明GSK3β的低表達(dá)可能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。Farago等［7］研究表明，在乳腺上皮中GSK3β活性的拮抗作用是有致癌性的，GSK3β的突變或藥理學(xué)上的下調(diào)能夠促進(jìn)乳腺腫瘤的發(fā)生。同時在本研究中，GSK3β的蛋白表達(dá)與胃癌的分化程度、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)（P＜0.05），提示GSK3β可能與胃癌的預(yù)后有密切的關(guān)系，值得進(jìn)一步研究。PCNA已經(jīng)公認(rèn)可以作為反映惡性腫瘤細(xì)胞增殖能力的標(biāo)志物。在本研究的75例人胃癌患者中，GSK3β與PCNA蛋白表達(dá)之間呈顯著負(fù)相關(guān)（P=0.000,r=0.422），進(jìn)一步表明GSK3β的表達(dá)降低能顯著促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。

參考文獻(xiàn)

1EtienneMannevilleS，HallA.Cdc42regulatesGSK3betaandadenomatouspolyposiscolitocontrolcellpolarity．Nature,2003,421:753~756．

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3MazorM,KawanoY,ZhuH,etal.Inhibitionofglycogensynthasekinase3repressesandrogenreceptoractivityandprostatecancercellgrowth.Oncogene,2004,23:7882~7892.

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5JopeRS,JohnsonGV.Theglamourandgloomofglycogensynthasekinase3.TrendsBiochemSci,2004,29:95~102.

6OugolkovAV,BilladeauDD.TargetingGSK3:apromisingapproachforcancertherapy?FutureOncol,2006,2:91~100.

7FaragoM,DominguezI,LandesmanBollagE,etal.Kinaseinactiveglycogensynthasekinase3betapromotesWntsignalingandmammarytumorigenesis.CancerRes,2005,65:5792~5801.