論文關(guān)鍵詞：卵黃抗體；仔豬腹瀉；研究進(jìn)展

論文摘要：介紹了卵黃體抗研究的歷程和較其他抗體的優(yōu)越性，闡述了卵黃抗體在治療仔豬腹瀉上的研究與應(yīng)用。

1卵黃抗體研究歷程

卵黃抗體的研究始于19世紀(jì)末至20世紀(jì)初。1889年，Klemperer發(fā)現(xiàn)了卵黃中富含抗體。1934年，Jukes的試驗(yàn)證明，母雞血清中的抗體可以轉(zhuǎn)移到卵黃中，從而為雛雞提供被動(dòng)免疫保護(hù)。Patterson等（1962）試驗(yàn)證實(shí)，相對(duì)于別的血漿蛋白，IgG被選擇性地轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡中。1969年，Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY。Roth等（1981）和Locken等（1983）提出并證實(shí)IgY轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡的過(guò)程是受體依賴性的，認(rèn)為卵巢的IgY受體使得血液中所有的IgY亞群被選擇性轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡中。存在于禽卵黃中的免疫球蛋白主要是IgY，IgM、IgA和IgD含量極少。

雞IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG，但在結(jié)構(gòu)上有所不同。相對(duì)于哺乳動(dòng)物IgG，雞IgY也是由2條輕鏈和2條重鏈組成，但I(xiàn)gY重鏈沒(méi)有鉸鏈區(qū)，除可變區(qū)外，有4個(gè)恒定區(qū)。Warr等（1995）利用序列比較表明，雞IgY重鏈可變區(qū)Cv3、Cv4相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG重鏈可變區(qū)Cy2、Cy3，而雞IgY重鏈可變區(qū)Cv2在哺乳動(dòng)物IgG重鏈中被鉸鏈區(qū)取代。序列比較分析同樣發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于其他免疫球蛋白IgG、IgM和IgA，雞IgY與哺乳動(dòng)物IgE在系統(tǒng)發(fā)生學(xué)上更接近一些。雞IgY可分為IgY1、IgY2和IgY33個(gè)亞類，但卵黃中只有IgY1和IgY22種。

2卵黃抗體的優(yōu)越性

關(guān)鍵詞：?jiǎn)捂溈贵w

單鏈抗體除本身的治療作用外，還可作為載體與細(xì)胞因子等結(jié)合，構(gòu)建成雙功能抗體用于腫瘤的導(dǎo)像治療。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［1~3］各衍生因子兩個(gè)完整基因融合成單一蛋白，經(jīng)抗腫瘤活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，融合蛋白具有雙重活性，但融合蛋白的親和性及抗腫瘤活性分別較衍生因子的功能及活性有所變化，可能由于融合蛋白結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致功能及活性的變化。利用生物信息學(xué)網(wǎng)絡(luò)資源分析融合蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì)，為進(jìn)一步探討單鏈雙功能抗體基因融合蛋白提供依據(jù)。

1雙功能抗體的研究進(jìn)展

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，腫瘤的藥敏基因治療成為各國(guó)學(xué)者研究的熱點(diǎn)［3~5］。將目的基因?qū)氚屑?xì)胞是基因治療過(guò)程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，因?yàn)槟康幕驅(qū)氚屑?xì)胞效率的高低將直接影響基因治療的效果甚至成敗。由逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移所面臨的最大問(wèn)題是病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較低，原因之一是由于包裝后難以得到穩(wěn)定產(chǎn)生較高滴度感染性逆轉(zhuǎn)錄病毒的包裝細(xì)胞系。單鏈抗體（ScFv）是由Fv抗體衍生而來(lái)，將抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過(guò)一段連接肽連接而成，ScFv具有天然抗體的親和力，而分子只有完整抗體的六分之一。具有分子小、穿透力強(qiáng)、容易進(jìn)入實(shí)體瘤周圍的血液循環(huán)等特點(diǎn)，體內(nèi)應(yīng)用具有較大的分布容積和較高的組織分布比例，ScFv是構(gòu)建雙功能抗體，雙特異性抗體等多種新功能抗體分子的理想元件。一個(gè)蛋白或蛋白片段可以融合到ScFv片段上以配備附加的性質(zhì)，如免疫毒素的產(chǎn)生，是通過(guò)將一個(gè)腫瘤特異的ScFv或Fab融合到一個(gè)內(nèi)源化能殺死靶細(xì)胞的毒素上。許多細(xì)胞特異抗體可將試劑傳遞到腫瘤部位發(fā)揮其細(xì)胞毒元件的作用。腫瘤特異性抗體片段已經(jīng)與細(xì)胞因子融合［4~8］。在這種情況下，稱免疫細(xì)胞因子的分子注射到患者體內(nèi)，在腫瘤細(xì)胞表面積聚，可以激活腫瘤附近的T淋巴細(xì)胞。這些融合蛋白內(nèi)在的腫瘤結(jié)合活性允許使用低濃度，沒(méi)有通常與系統(tǒng)細(xì)胞因子注射相關(guān)的副作用。

細(xì)胞因子融合蛋白均具有衍生因子的雙重活性，其中有一些的活性較各自野生型低，或者與野生型因子的相加一致，或者其活性高于衍生因子的相加活性，人工構(gòu)建的新蛋白可能具有與衍生因子無(wú)關(guān)的新活性［9~11］。事實(shí)證明：具有不同功能域的復(fù)合蛋白質(zhì)以及連接肽的設(shè)計(jì)是今后尋找新的治療因子的有效途徑和研究方向。生物信息學(xué)可以促進(jìn)藥物的發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)過(guò)程，即充分利用生物信息學(xué)的生物學(xué)和遺傳學(xué)信息來(lái)尋找和開(kāi)發(fā)以基因?yàn)榛A(chǔ)的藥物。

2雙功能抗體的表達(dá)及其生物學(xué)性質(zhì)的預(yù)測(cè)

【摘要】目的探討酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體對(duì)艾滋病（AIDS）的診斷價(jià)值。方法選擇2019年1月—12月于深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院治療的AIDS高危人群或疑似HIV感染患者1820例，采集清晨空腹靜脈血，采用ELISA、膠體金法檢查HIV抗體，并以蛋白印跡診斷HIV抗體結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算膠體金法、ELISA的敏感度、特異度及準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，以及與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性。結(jié)果1820例AIDS高危人群或疑似HIV感染患者經(jīng)蛋白印跡證實(shí)陽(yáng)性、陰性各有21例、1799例；膠體金法診斷HIV抗體陽(yáng)性、陰性各有372例、1448例，其中漏診7例，誤診358例；ELISA診斷HIV抗體陽(yáng)性、陰性各有56例、1764例，其中漏診1例，誤診36例。以蛋白印跡診斷結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，ELISA診斷HIV抗體敏感度（95.24%）、特異度（98.00%）及準(zhǔn)確率（97.97%）、陰性預(yù)測(cè)值（99.94%）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（35.71%）均高于膠體金法（66.67%，80.10%，79.95%，99.52%，3.76%），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；膠體金法診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性差（Kappa=0.051，P=0.000）；ELISA診斷HIV抗體結(jié)果與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較為理想（Kappa=0.511，P<0.001）。結(jié)論ELISA用于HIV抗體篩查中敏感度、特異度及準(zhǔn)確率、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均較高，且與蛋白印跡診斷結(jié)果的一致性較佳，能夠提高AIDS檢出率，可作為篩查HIV抗體較為準(zhǔn)確的方法于臨床推廣。

【關(guān)鍵詞】艾滋病;人類免疫缺陷病毒;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);膠體金法;蛋白印跡;診斷效能;一致性

艾滋?。ˋIDS）作為一種免疫性疾病，具有較強(qiáng)的傳播性，多由于人類免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）經(jīng)血液途徑、性接觸途徑及母嬰途徑等感染所致，若未能及時(shí)診斷并治療會(huì)破壞人體免疫系統(tǒng)，造成患者反復(fù)感染，威脅生命安全。隨著我國(guó)AIDS從局部暴發(fā)到廣泛流行，其防治策略也逐漸從道德宣傳和出入境防范轉(zhuǎn)變?yōu)橹鲃?dòng)對(duì)公眾進(jìn)行AIDS知識(shí)的宣傳教育，各級(jí)地方政府、人民醫(yī)院、學(xué)校都參與到AIDS防治的宣傳教育中。加強(qiáng)HIV抗體檢測(cè)，有利于及時(shí)發(fā)現(xiàn)HIV病毒并對(duì)其傳播進(jìn)行阻斷[1，2]。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）、膠體金法為篩查HIV抗體的重要方法，但目前何種方法檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確尚無(wú)確切結(jié)論[3，4]。本研究探討ELISA測(cè)定HIV抗體對(duì)AIDS的診斷價(jià)值，并與膠體金法診斷HIV抗體結(jié)果進(jìn)行比較，從而實(shí)現(xiàn)AIDS早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2019年1月—12月于深圳市龍崗區(qū)第三人民醫(yī)院治療的AIDS高危人群或疑似HIV感染患者1820例。其中男943例、女877例；年齡28~59歲，平均年齡（42.19±3.26）歲；體質(zhì)量指數(shù)（bodymassindex，BMI）18.2~29.7kg/m2，平均（23.49±1.56）kg/m2；受教育程度：小學(xué)及以下、初中、高中、高中以上各有459例、318例、586例、457例；婚姻狀況：未婚、再婚、離異/喪偶各有906例、893例、21例；職業(yè)：無(wú)工作、有工作各有146例、1674例；性取向：男男性行為、異性性行為各有820例、1000例。

關(guān)鍵詞：抗體

天皰瘡是累及皮膚黏膜的一種自身免疫性大皰性疾病。目前已證實(shí)天皰瘡是以患者體內(nèi)出現(xiàn)針對(duì)自身表皮角質(zhì)形成細(xì)胞上的橋粒芯糖蛋白（dcsnoglein,Dsg)的特異性抗體IgG，能與角質(zhì)形成細(xì)胞結(jié)合產(chǎn)生棘層松解，導(dǎo)致臨床上所見(jiàn)的松弛性水皰和大皰，其中Dsg1、Dsg3及其抗體在天皰瘡中發(fā)揮極其重要的作用。本文就抗原抗體及其臨床意義作一綜述。

1抗原抗體

1.1抗原現(xiàn)已明確天皰瘡抗原Dsg屬于橋粒的跨膜成分,屬粘附分子中的鈣粘素超家族的成員,其基因位于18q12.1上。Dsg分為Dsg1、Dsg2、Dsg3三類，其中Dsg2表達(dá)于所有的橋粒組織中，Dsg1、Dsg3主要限于復(fù)層鱗狀上皮。Dsg1分子量約160KD，主要分布于表皮上層的角質(zhì)細(xì)胞膜上，以顆粒層和顆粒下層優(yōu)勢(shì)表達(dá)［1］，為落葉性天皰瘡（PF）的靶抗原；Dsg3的分子量約為130KD，主要分布于表皮基底層，在基底層上層的角質(zhì)形成細(xì)胞表面，是尋常性天皰瘡（PV）的靶抗原。楊春俊等［2］在天皰瘡抗原的定位研究中，用金標(biāo)記包埋后采用免疫熒光技術(shù)，發(fā)現(xiàn)PF和PV的靶抗原在角質(zhì)形成細(xì)胞間的部位相同，均位于橋粒復(fù)合體上。Dsg1及Dsg3分子同其他鈣粘素分子一樣具有5個(gè)串聯(lián)重復(fù)、大小大致相等的胞外結(jié)構(gòu)域（extracellulardomain,EC)，其中ECⅠ對(duì)應(yīng)胞外氨基端殘基，EC5位于羥基端。Dsg1及Dsg3的不同主要在于Dsg1的1～4胞外結(jié)構(gòu)域具有同源性，Dsg3的5個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域均具有同源性。

天皰瘡抗原的5個(gè)胞外結(jié)構(gòu)域中，EC0、EC2、EC4之間具有相對(duì)較大的同源性，能被天皰瘡患者的血漿特異性識(shí)別，因此，這些表位被稱為“免疫優(yōu)勢(shì)表位”或“致病性表位”，特異性的識(shí)別該表位的抗體被稱為“致病性抗體”，其中EC1-2及EC3-4具有抗原特異性，與天皰瘡抗體具有高度的親和力，從而為天皰瘡的血清學(xué)診斷與鑒別提供了新的途徑［3］。

1.2抗體天皰瘡抗體（PAb)是天皰瘡發(fā)病的關(guān)鍵因素。1964年Beumer等證實(shí)在天皰瘡病人的血清中存在抗鱗狀上皮的細(xì)胞間抗體，并且發(fā)現(xiàn)在天皰瘡皮損的邊緣有免疫球蛋白和補(bǔ)體沉積。最近，Amagai［4］用ELISA方法，通過(guò)重組Dsg1、Dsg3，發(fā)現(xiàn)天皰瘡的臨床表現(xiàn)是由患者體內(nèi)抗橋粒芯蛋白自身抗體的類型所決定。且國(guó)內(nèi)外多數(shù)研究認(rèn)為尋常性天皰瘡中天皰瘡抗體IgG4是其發(fā)病中的重要致病性抗體亞類。國(guó)內(nèi)李逾等［5］為研究天皰瘡抗體（PAb）各亞類在致病中的作用，在培養(yǎng)的組織中加入純化的天皰瘡抗體IgG1～I(xiàn)gG4，免疫熒光檢查發(fā)現(xiàn)IgG4的熒光最強(qiáng)，其次為IgG3、IgG1、IgG2，說(shuō)明IgG4與抗原有較強(qiáng)的親和力。而當(dāng)各亞型濃度相同時(shí)，致培養(yǎng)表皮細(xì)胞棘層松解程度相同。另外，在培養(yǎng)的表皮細(xì)胞中加入天皰瘡抗體繼續(xù)培養(yǎng)24h，細(xì)胞的整體外觀無(wú)明顯變化，48～72h，細(xì)胞間隙漸增寬，細(xì)胞出現(xiàn)松解和小水皰。由此奠定了天皰瘡抗體在天皰瘡發(fā)病中的重要地位。

摘要目的：為了制備nNOS特異性抗體。方法：用PCR的方法克隆出nNOS708～881aa片段的編碼基因并將之插入pET28a原核表達(dá)載體。結(jié)果：成功地在大腸桿菌中獲得高效表達(dá)。經(jīng)HisTag-Sepharose和電泳回收法得到純蛋白，將此蛋白免疫兔，制備出nNOS特異性抗體，抗體效價(jià)可達(dá)1∶8000。利用該抗體成功地檢測(cè)了正常肌肉和DMD肌肉中nNOS的含量變化，證實(shí)DMD肌肉中nNOS的含量明顯低于正常肌肉。結(jié)論：制備的抗體具有較高的特異性，對(duì)nNOS的免疫檢測(cè)具有重要應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞nNOS特異性抗體重組表達(dá)肌肉

RecombinantexpressionofnNOSfragmentinE.coliandpreparationofspecificantibodyagainstnNOS

CHENQiang,ZHUMin-Sheng,SHENYueetal.

NanjingMilitaryInstituteofMedicalScience,Nanjing210002

AbstractObjective：TopreparethespecificantibodyagainstnNOS.Methods：Clonedagenefragmentcoding708to881aaofnNOSwithPCRandinsertedthefragmentintoapET28aexpressionvector.Results:RecombinantproteinwasexpressedeffectivelyinE.coliandpurifiedwithHisTag-Sepharoseandelectrophoresis.Usingthepureproteinasantigen,immunizedrabbitsandobtainedhighspecificandhightiter(1∶8000)antibodyagainstnNOS.WesternblotassayshowedthatnNOSexpressedinnormalskeletalmuscleismuchhigherthanthatinDMDskeletalmuscle.Conclusion:Theanti-nNOSantibodywithagoodspecificitywaspreparedandtheantibodywasusefulforimmunologicaldetecteionofnNOS

摘要：目的觀察冬蟲夏草對(duì)小鼠抗體形成細(xì)胞的作用。方法用100%濃度冬蟲夏草浸出液定期給小鼠灌胃，然后進(jìn)行小鼠抗體產(chǎn)生能力檢測(cè)、特異玫瑰花環(huán)結(jié)形成細(xì)胞檢測(cè)（SRFC）、血清IgG檢測(cè)。結(jié)果用藥組以上3項(xiàng)免疫學(xué)指標(biāo)均增高。結(jié)論冬蟲夏草有明顯促進(jìn)抗體形成細(xì)胞的作用。

關(guān)鍵詞：冬蟲夏草；免疫功能；小鼠

冬蟲夏草，始載于《本草綱目拾遺》。因其冬季為蟲，夏季為草，故名。為麥角菌科真菌冬蟲夏草Cordycepssinensis(Berk.)Sacc，寄生蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復(fù)合體。主產(chǎn)于四川阿壩藏族自治州松潘、理縣、茂汶羌族自治縣、甘孜藏族自治州、德格、道孚、青海玉樹(shù)、果洛藏族自治州及同德、同仁，云南中甸、德欽、麗江納西族自治縣等地，均為野生。主要功效：益腎補(bǔ)肺，止血化痰，止嗽定喘。本實(shí)驗(yàn)主要研究冬蟲夏草對(duì)抗體形成細(xì)胞作用，旨在為冬蟲夏草的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

一、器材與方法

1.1儀器和藥物

低溫冷凍離心機(jī)（Beckman,美國(guó)）；美國(guó)Multiskan產(chǎn)全自動(dòng)酶標(biāo)儀；恒溫水浴箱（上海）；電泳儀（上海）；100目不銹鋼網(wǎng)。冬蟲夏草（購(gòu)于附屬醫(yī)院中藥房），取100g加水1000ml，文火煎煮2h，去渣濃縮為100ml（濃度為100%）備用。

【摘要】目的探討血清結(jié)核抗體測(cè)定對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的診斷實(shí)用價(jià)值。方法對(duì)我院2010年3月-9月入院的98例入院考慮肺部感染及結(jié)核病傾向的患者進(jìn)行血清結(jié)核抗體測(cè)定。結(jié)果98例入院患者結(jié)核抗體陽(yáng)性為70例，占71.4%。結(jié)論血清結(jié)核抗體測(cè)定對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的臨床診斷具有較高的實(shí)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】肺結(jié)核結(jié)核抗體測(cè)定診斷

一、資料與方法

1.1一般資料：本組病例98例，患者中男性39例，女性59例.年齡在1歲—80歲間。論文百事通其中：1-10歲5例；10-20歲15例；20-40歲32例；40歲以上46例.1-30歲者多為急性起病，30歲后多為慢性起病。

1.2方法

對(duì)入院初診考慮有結(jié)核病傾向的患者，入院后即進(jìn)行結(jié)核抗體測(cè)定，對(duì)結(jié)核中毒癥狀明顯但初次測(cè)定結(jié)核抗體陰性部分患者，于2周和4周后再次測(cè)定結(jié)核抗體。該組患者入院初診考慮：肺部感染18例、支氣管擴(kuò)張癥13例、浸潤(rùn)性肺結(jié)核20例、結(jié)核性胸膜炎33例、結(jié)核性腦膜炎10例、脊柱結(jié)核3例等。

【關(guān)鍵詞】前列腺腫瘤；抗原,CD3；抗體親和力；四聚體

BiologicalactivityoftetramerofbispecificsinglechainantibodyagainsthumanprostatespecificantigenandCD3molecule

【Abstract】AIM:Tostudythebiologicalactivityoftetramerofbispecificsinglechainantibodyagainsthumanprostatespecificantigen(PSA)andCD3molecule.METHODS:Flowcytometry(FCM)wasusedtodetectthebindingactivityofbispecificsinglechainantibodytoCD3positivecelllineJurkatandprostatecarcinomacelllineLNCaP.Theefficacyoftheantibodiyinmediatingtumorcelllysisinvitrowasdeterminedbyusingthe51Crreleasetest.Forinvivoevaluationoftheantibodysactivity,anudemousemodelwasused.ThemicewereinoculatedwithLNCaPprostatecancercells.RESULTS:ItwasdemonstratedthatthetetramerofbispecificsinglechainantibodycouldbindtotheJurkatandLNCaPcellswithhighspecificity.Thepercentsofthecellsbondbytheantibodywere70.4%and81%,respectively.Invitro,withactivatedCTLsaseffectorcells,aspecificlysisofLNCaPcellsmediatedbytheantibodywasconfirmedby51Crreleaseassay.ThespecificlysisrateofLNCaPcellswaspositivelycorrelatedtotBsAbconcentrationoreffector/targetcellratio.Thehighestspecificlysisrateswere(80.3±5.2)%and(78.6±5.5)%infixedantibodyconcentrationgroupandfixedeffector/targetcellratiogroup,respectively.Invivo,theantibodycouldsuppressthetumorgrowthinnudemicesignificantlyascomparedtothegrouptreatedonlywithCTLsandtheuntreatedcontrolgroup(P<0.0001).CONCLUSION:ThetetramerofbispecificsinglechainantibodyagainsthumanprostatespecificantigenandCD3moleculehasagoodbiologicalactivityinbindingantigens,mediatinglysisofLNCaPcellsandinhibitingtumorgrowth.

【Keywords】prostaticneoplasms;antigens,CD3;antibodyaffinity;tetramer

【摘要】目的：研究抗前列腺特異抗原(PSA)/抗CD3雙特異性單鏈抗體四聚體的生物活性.方法：利用流式細(xì)胞儀和51Cr釋放試驗(yàn)評(píng)價(jià)雙特異性單鏈抗體四聚體的抗原親和活性和體外介導(dǎo)殺傷靶細(xì)胞的效果.利用裸鼠前列腺癌模型分析其在體內(nèi)介導(dǎo)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷的能力.結(jié)果：抗PSA/抗CD3雙特異性單鏈抗體四聚體可以特異性結(jié)合表達(dá)前列腺癌細(xì)胞和CD3陽(yáng)性的淋巴瘤細(xì)胞，陽(yáng)性結(jié)合率分別為70.4%和81%.在體外，有細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞存在時(shí)該四聚體可引起前列腺癌細(xì)胞的裂解，在抗體濃度固定組和效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比例固定組，靶細(xì)胞裂解率分別隨著效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞比例和抗體濃度的增加而增加，最高裂解率分別可以達(dá)到(80.3±5.2)%和(78.6±5.5)%.與對(duì)照組比較，接種前列腺癌細(xì)胞的裸鼠在體內(nèi)注射激活的細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞的同時(shí)接受該四聚體的治療后，腫瘤生長(zhǎng)明顯受到抑制(P<0.0001).結(jié)論：抗PSA/抗CD3雙特異性單鏈抗體四聚體具有良好的生物學(xué)活性，具有體外殺傷腫瘤細(xì)胞和體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用.

【關(guān)鍵詞】前列腺腫瘤；抗原，CD3；抗體親和力；四聚體

【關(guān)鍵詞】信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3；抗體；乳腺腫瘤；組織學(xué)分級(jí)

PreparationofpolyclonalantibodyagainstStat3anditsapplicationinthediagnosisofbreastcancer

【Abstract】AIM:TopreparerabbitantibodyagainstStat3andanalyzeitsapplicationinthediagnosisofbreastcancer.METHODS:ThemalerabbitswereimmunizedwithrecombinantmouseStat3proteintoprepareantibodyagainstStat3.ThepurityandspecificityoftheantibodywereanalyzedbyWesternBlot.TheexpressionofStat3proteininthe65casesofbreastcancerand30casesofnormalbreasttissuewasdetectedbyimmunohistochemicalstaining.RESULTS:ThetiterofantiStat3antibodyinserumwas>1∶256000(A450=0.40)atthe6thweekaftertheimmunization.BothSDSPAGEandWesternBlotanalysisshowedthattherewasanobviousproteinbandwithMr92000,TheintracytoplasmicexpressionlevelsofStat3proteininthedifferenthistologicalgradingsof65casesofbreastcancershowedsignificantdifference(P<0.05),sodidtheintranuclearexpressionlevels(P<0.05).CONCLUSION:PolyclonalantibodyagainstStat3withhightiterandspecificitycanbepreparedsuccessfully,anditcanbeusedtodetecttheexpressionofStat3proteininbreastcancertissue.

【Keywords】Stat3;antibodies;breastneoplasms;histologicalgrading

【摘要】目的：制備兔抗信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（Stat3）抗體，分析其在乳腺癌診斷中的價(jià)值.方法：應(yīng)用人工重組小鼠Stat3蛋白，免疫雄性家兔制備抗Stat3抗體；用免疫印跡法分析檢測(cè)抗Stat3抗體的純度和特異性；應(yīng)用免疫組化染色法檢測(cè)65例乳腺癌和30例正常乳腺組織中Stat3蛋白的表達(dá).結(jié)果：用Stat3蛋白免疫家兔被免疫6wk后，其血清中抗Stat3抗體效價(jià)>1∶256,000（A450nm=0.40）；SDSPAGE和免疫印跡分析均在分子質(zhì)量（Mr）92000處有明顯的帶；65例乳腺癌組織的細(xì)胞漿和細(xì)胞核中，Stat3蛋白表達(dá)量在不同的組織學(xué)分級(jí)之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05).結(jié)論：高效價(jià)和特異性強(qiáng)的抗Stat3抗體被成功制備.該抗體可用于乳腺癌組織細(xì)胞Stat3蛋白表達(dá)的檢測(cè).

【關(guān)鍵詞】信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3；抗體；乳腺腫瘤；組織學(xué)分級(jí)

【論文關(guān)鍵詞】手術(shù)前；傳染性指標(biāo)；檢測(cè)臨床意義

【論文摘要】目的探討患者手術(shù)前傳染性指標(biāo)檢測(cè)的臨床意義。方法對(duì)我院1998年10月至2007年11月經(jīng)初步資料回顧與統(tǒng)計(jì)，對(duì)受血患者手術(shù)前作HBsAg、抗-HCV抗體、抗HIV抗體、梅毒螺旋體抗體4項(xiàng)傳染性指標(biāo)的檢測(cè)共4692人次。結(jié)果其中男2964人次，女1728人次，年齡最大82歲，最小2歲，平均41歲，術(shù)前發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性92人次，抗-HCV抗體陽(yáng)性3人次，抗HIV抗體陽(yáng)性4人次，梅毒螺旋體抗體陽(yáng)性0人次。結(jié)論手術(shù)前傳染性指標(biāo)檢測(cè)有效地防范和杜絕了輸血糾紛的發(fā)生，為醫(yī)療安全、醫(yī)護(hù)健康、患者早日康復(fù)做出重大的貢獻(xiàn)。

抗-HIV抗體檢測(cè)是采用雙抗原夾心兩步法檢測(cè)人血清或血漿樣本中的(HIV1/2)型抗體。抗-HCV抗體的檢測(cè)所用包被抗原為合成多肽抗原和基因工程抗原(包括HCV病毒結(jié)構(gòu)區(qū)核心抗原和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原)。HBsAg采用夾擊心法原理檢測(cè)人血清原理檢測(cè)人血清或血漿中的乙肝表面抗原。梅毒螺旋體抗體的檢測(cè)一步雙抗原夾心法原理(ELISA)檢測(cè)人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗體。

根據(jù)衛(wèi)生部《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》相關(guān)規(guī)定的要求，結(jié)合當(dāng)前醫(yī)療管理標(biāo)準(zhǔn)，我院自1998年10月至2007年11月對(duì)臨床手術(shù)科室明確提出，凡行手術(shù)患者，在手術(shù)前應(yīng)作乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，人類免疫缺陷病毒抗體(抗-HIV抗體)，梅毒螺旋體抗體，丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV抗體)4項(xiàng)傳染性指標(biāo)的檢測(cè)，而有關(guān)供血者更是在輸血前必須做以上4項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)，目的是保證患者用血安全和醫(yī)務(wù)工作者的身體健康。

1、資料與方法

我院1998年10月至2007年11月經(jīng)初步資料回顧與統(tǒng)計(jì)，對(duì)受血患者手術(shù)前做HBsAg、抗-HCV抗體、抗HIV抗體、梅毒螺旋體抗體4項(xiàng)傳染性指標(biāo)的檢測(cè)共4692人次，其中男2964人次，女1728人次，年齡最大82歲，最小2歲，平均41歲，手術(shù)前發(fā)現(xiàn)HBsAg陽(yáng)性92人次，抗-HCV抗體陽(yáng)性3人次，抗HIV抗體陽(yáng)性4人次，梅毒螺旋體抗體陽(yáng)性0人次。