卵黃抗體進(jìn)展分析論文
時(shí)間:2022-06-19 12:07:00
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論文關(guān)鍵詞:卵黃抗體;仔豬腹瀉;研究進(jìn)展
論文摘要:介紹了卵黃體抗研究的歷程和較其他抗體的優(yōu)越性,闡述了卵黃抗體在治療仔豬腹瀉上的研究與應(yīng)用。
1卵黃抗體研究歷程
卵黃抗體的研究始于19世紀(jì)末至20世紀(jì)初。1889年,Klemperer發(fā)現(xiàn)了卵黃中富含抗體。1934年,Jukes的試驗(yàn)證明,母雞血清中的抗體可以轉(zhuǎn)移到卵黃中,從而為雛雞提供被動(dòng)免疫保護(hù)。Patterson等(1962)試驗(yàn)證實(shí),相對(duì)于別的血漿蛋白,IgG被選擇性地轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡中。1969年,Leslie和Clem將這種抗體命名為IgY。Roth等(1981)和Locken等(1983)提出并證實(shí)IgY轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡的過程是受體依賴性的,認(rèn)為卵巢的IgY受體使得血液中所有的IgY亞群被選擇性轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡中。存在于禽卵黃中的免疫球蛋白主要是IgY,IgM、IgA和IgD含量極少。
雞IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG,但在結(jié)構(gòu)上有所不同。相對(duì)于哺乳動(dòng)物IgG,雞IgY也是由2條輕鏈和2條重鏈組成,但I(xiàn)gY重鏈沒有鉸鏈區(qū),除可變區(qū)外,有4個(gè)恒定區(qū)。Warr等(1995)利用序列比較表明,雞IgY重鏈可變區(qū)Cv3、Cv4相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG重鏈可變區(qū)Cy2、Cy3,而雞IgY重鏈可變區(qū)Cv2在哺乳動(dòng)物IgG重鏈中被鉸鏈區(qū)取代。序列比較分析同樣發(fā)現(xiàn),相對(duì)于其他免疫球蛋白IgG、IgM和IgA,雞IgY與哺乳動(dòng)物IgE在系統(tǒng)發(fā)生學(xué)上更接近一些。雞IgY可分為IgY1、IgY2和IgY33個(gè)亞類,但卵黃中只有IgY1和IgY22種。
2卵黃抗體的優(yōu)越性
(1)由于鳥類與哺乳類動(dòng)物種系發(fā)生學(xué)的差距,鳥類更適于生產(chǎn)抗哺乳動(dòng)物抗原的特異性抗體。卵黃抗體不會(huì)激發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng),不與抗哺乳動(dòng)物抗原的抗體發(fā)生反應(yīng),不與哺乳動(dòng)物和細(xì)菌的Fc受體結(jié)合,這在免疫診斷中具有重要意義(Lindmark等,1983;Guss等,1986;Boscato等,1988;Kapyaho等,1989;Larsson等,1990;Lindahl等,1992)。
(2)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋白,在貯存、生產(chǎn)、加工、攝食及消化過程中保證其穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。多項(xiàng)試驗(yàn)表明,雞IgY具有較好的穩(wěn)定性,耐酸、耐堿、耐熱(Shimizu等,1992,1993;王炯等,1997;龍中兒等,1997;郭立君等,2001)。李春暉等(2002)研究了胃蛋白酶對(duì)抗狂犬病毒IgY活性的影響,結(jié)果表明:IgY經(jīng)胃蛋白酶酶解24h后仍保持中和抗原的作用,其酶解片段也具有抗體活性。Hatta等(1993)研究了胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶對(duì)抗人輪狀病毒IgY活性的影響,結(jié)果表明:在pH2.0條件下,抗人輪狀病毒IgY在胃蛋白酶處理1h后活性幾乎全部喪失;但在pH4.0條件下的活性為91%,10h后仍有63%的活性;而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶對(duì)抗人輪狀病毒IgY活性的影響不大。李學(xué)伍等(2000)試驗(yàn)表明,胃液對(duì)干粉抗體效價(jià)影響不大。特別對(duì)幼齡動(dòng)物而言,其胃內(nèi)pH值不是很低的情況下,口服卵黃抗體不會(huì)遭到太大的破壞。Hatta等(1994)用體內(nèi)試驗(yàn)研究了鰻魚胃腸環(huán)境對(duì)卵黃抗體的影響,結(jié)果表明:口服抗體7h后在鰻魚腸內(nèi)容物中仍可檢測得到高水平的抗體活性。此外,卵黃抗體還具有良好的加工和貯存性能。李學(xué)伍等(2000)將抗仔豬大腸桿菌卵黃抗體制成噴霧干燥粉,除了黏附在管壁上的抗體滴度稍有下降外,正常噴出的干粉抗體滴度與卵黃液一致。體外試驗(yàn)表明,經(jīng)噴霧干燥的含抗K88黏附素抗體的雞卵黃粉能有效阻礙ETECK88與豬小腸黏膜的黏附(Jin等,1998)。卵黃抗體較易保存,4℃條件下存放5年或室溫條件下存放6個(gè)月對(duì)抗體活性無明顯影響(Larsson等,1993)。王炯等(1997)報(bào)道,抗脊髓灰質(zhì)炎病毒IgY在25℃室溫條件下保存半年,活性無明顯變化。
(3)產(chǎn)量高,成本低,便于規(guī)?;a(chǎn)。卵黃中抗體濃度能長期維持在相當(dāng)于甚至超過血清抗體濃度的水平上(BarJoseph,1980;Larsson等,1993;Hatta等,1993)。1只產(chǎn)蛋雞(以平均每周產(chǎn)蛋5~6枚,平均每枚雞蛋蛋黃大約15mL計(jì)算)所產(chǎn)蛋生產(chǎn)的抗體量相當(dāng)于90~100mL血清或180~200mL血液中抗體的量,例如1只兔子1個(gè)月可提取IgG約200mg,而1個(gè)月1只蛋雞可從蛋中提取IgG2000mg以上。此外,在實(shí)際生產(chǎn)中,動(dòng)物的采血不僅對(duì)動(dòng)物本身是極大的應(yīng)激,而且費(fèi)時(shí)、費(fèi)工,大規(guī)模生產(chǎn)是不切實(shí)際的,而利用蛋雞生產(chǎn)抗體要方便的多。
3卵黃抗體的應(yīng)用
在現(xiàn)代規(guī)模化養(yǎng)豬生產(chǎn)中,特別是大規(guī)模、高密度飼養(yǎng)方式下,仔豬腹瀉是困擾養(yǎng)豬業(yè)的主要難題之一,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。其中產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)是導(dǎo)致規(guī)?;i場仔豬腹瀉的最主要的致病性大腸桿菌。ETEC感染性腹瀉主要發(fā)生于集約化養(yǎng)豬場及種豬場,個(gè)體飼養(yǎng)的豬雖然也有發(fā)生,但較少見。無明顯季節(jié)性,低溫潮濕和寒冷季節(jié)多發(fā)。
生產(chǎn)上多采用ETEC的多價(jià)疫苗免疫母豬,提高初乳中的抗體水平,以防治哺乳仔豬ETEC感染性腹瀉;但母乳中的抗體保護(hù)作用是有限和暫時(shí)的,在斷奶后短期內(nèi)將消失,而高免血清價(jià)格昂貴。因此,應(yīng)用抗ETEC卵黃抗體治療和預(yù)防新生和斷奶仔豬腹瀉的研究在國內(nèi)外一直備受矚目。
在卵黃抗體的研究中,國內(nèi)外所用方法不盡一致,國內(nèi)多采用大腸桿菌菌苗免疫母雞,國外則采用大腸桿菌黏附素免疫。由于抗黏附素卵黃抗體在特異性、效果等方面優(yōu)于抗菌體卵黃抗體(肖馳等,1998;Marquardt等,1999)。近年來,應(yīng)用抗黏附素抗原特異性卵黃抗體預(yù)防和治療仔豬腹瀉已經(jīng)取得了較大進(jìn)展(Yokoyama等,1992;Erhard等,1996;Imberechts,1997;Marquardt等,1999)。Yokoyama等(1992)首次進(jìn)行用卵黃抗體控制仔豬大腸桿菌病,他們將提純的ETECK88、K99和987P黏附素制成黏附素蛋白疫苗,胸部肌肉注射免疫產(chǎn)蛋母雞,抗體水平達(dá)到高效價(jià)后,收集雞蛋,分離和噴霧干燥卵黃抗體,對(duì)感染不同ETEC菌株的初生未食乳仔豬進(jìn)行卵黃抗體治療,結(jié)果顯示,所有仔豬接受不同菌株感染后12h內(nèi)均發(fā)生腹瀉;用效價(jià)為625和2500的抗體治療仔豬全部存活,而對(duì)照組仔豬死亡率超過80%。Erhard等(1996)、Zuniga等(1997)、Imberechts等(1997)和Marquardt等(1999)都進(jìn)行了相關(guān)的研究,均得到了類似的結(jié)論。肖馳等(1998)分別制備了抗K88、K99、987p和F41菌毛抗原和菌體抗原卵黃抗體,結(jié)果表明,用菌毛蛋白疫苗得到的抗體甘露糖血凝抑制(MRHI)效價(jià)要高于菌體疫苗,前者防治仔豬腹瀉效果也明顯好于后者。Marquardt等(1999)報(bào)道,用菌毛蛋白疫苗免疫的抗體滴度為140000,而全菌體疫苗抗體滴度僅12000。
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