【關(guān)鍵詞】氟西汀;細(xì)胞培養(yǎng);海馬神經(jīng)元;大鼠

氟西汀是5-羥色胺（5-HT）再攝取抑制劑之一，是應(yīng)用較廣的抗抑郁藥。氟西汀除有抗抑郁作用外，尚可治療其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。有研究表明，氟西汀對海馬的神經(jīng)保護(hù)作用是其發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)的機(jī)制之一［1］。關(guān)于氟西汀對體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長的影響未見報道，本研究初步探討了氟西汀對原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長的影響。

1材料與方法

1.1新生大鼠海馬神經(jīng)元的分離和培養(yǎng)

技術(shù)方法在參考文獻(xiàn)［2］基礎(chǔ)上加以改進(jìn)。取出生24h內(nèi)的新生SD大鼠（東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供），無菌分離出雙側(cè)海馬，用顯微剪剪碎，D-Hank''''s液清洗2或3次，將剪碎的海馬組織轉(zhuǎn)移至離心管中，加入等量0.25%的胰酶（美國Sigma公司），37℃消化30min，中間振搖1或2次，加入10%的DMEM/F12（美國Gibco公司）5ml，輕輕吹打15次，然后1000r·min-1離心5min，制成單細(xì)胞懸液，置于CO2培養(yǎng)箱（德國Heraeus公司產(chǎn)品）中，差速貼壁30min，去除成纖維細(xì)胞，吸取未貼壁的細(xì)胞，并用200目的不銹鋼濾網(wǎng)過濾，收集過濾后的單細(xì)胞懸液于培養(yǎng)皿中，然后至離心管中，取一滴單細(xì)胞懸液進(jìn)行計數(shù)，并用DMEM/F12將細(xì)胞密度調(diào)到1×106ml-1，然后接種于200μg·ml-1多聚賴氨酸（美國Sigma公司）包被的6孔培養(yǎng)板中，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，4h后換為無血清培養(yǎng)基，即含2%B27的Neurobasl培養(yǎng)基（美國Gibco公司），以后每3天半量換液1次。使用培養(yǎng)6d的神經(jīng)元進(jìn)行染色鑒定。

1.2大鼠海馬神經(jīng)元的鑒定

【摘要】目的運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)觀察益智健腦顆粒對SAMP8小鼠海馬蛋白質(zhì)表達(dá)的影響，從而探討益智健腦顆粒治療阿爾茨海默病(AD)的部分作用機(jī)制。方法將6月齡SAMP820只隨機(jī)分為治療組(n=10)和對照組(n=10)，治療組以益智健腦顆粒濃縮液灌胃，對照組以等劑量雙蒸水灌胃。8w后，應(yīng)用雙向凝膠電泳(2DE)技術(shù)分別分離治療組和對照組SAMP8海馬區(qū)組織總蛋白，經(jīng)膠體考馬斯亮藍(lán)染色，利用ImageScanner圖像掃描儀及ImageMaster雙向凝膠電泳軟件對圖像進(jìn)行掃描分析，將有意義的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDITOFMS)分析得到肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF)，經(jīng)MSDB和NCBI數(shù)據(jù)庫查詢，鑒定差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。結(jié)果鑒定出治療組13個差異表達(dá)大于2倍的蛋白質(zhì)，其中有8個上調(diào)，5個下調(diào)。結(jié)論益智健腦顆?？烧{(diào)節(jié)SAMP8小鼠海馬組織的多種蛋白質(zhì)表達(dá),提示該藥具有多靶點(diǎn)治療的作用。

【關(guān)鍵詞】益智健腦顆粒；SAMP8小鼠；海馬；雙向凝膠電泳；質(zhì)譜分析

益智健腦顆粒是董克禮教授多年臨床實(shí)踐治療阿爾茨海默病(AD)的中藥處方，臨床上用于治療AD之腎虛血瘀型,取得滿意療效〔1〕，動物實(shí)驗(yàn)研究能改善SAMP8小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力〔2〕。本研究則在臨床觀察及前期動物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定益智健腦顆粒干預(yù)前后P8品系快速老化小鼠(SAMP8)海馬組織的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，試圖從蛋白質(zhì)組水平探討中藥益智健腦顆粒治療AD的作用機(jī)制，為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1動物及分組選用6月齡20只雄性SAMP8小鼠，隨機(jī)分為治療組和對照組,每組各10只，由天津中醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院動物部提供。

1.2藥物、試劑與儀器益智健腦顆粒由淫羊藿、鎖陽、川斷、田七等組成，其水提濃縮液，相當(dāng)于1ml含3g生藥，由湖南德康制藥有限公司加工制成。雙向凝膠電泳試劑：2DQuantKit蛋白定量試劑盒，尿素，硫脲，NP40，TritonX100，二硫蘇糖醇，碘乙酰胺，固相pH梯度干膠條（pH3～10，24cm），IPG緩沖液（pH3～10），兩性電解質(zhì)（pH3～10），覆蓋液，雙向凝膠電泳標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，考馬斯亮藍(lán)G250,溴酚藍(lán)均為瑞典AmershamBiosciences公司產(chǎn)品；瓊脂糖，過硫酸氨,丙烯酰胺，甲叉雙丙烯酰胺，甘氨酸，三羥甲基氨基甲烷，CHAPS和十二烷基硫酸鈉，碳酸氫銨，三氟乙酸、乙腈和基質(zhì)α氰基4羥基肉桂酸均為美國SigmaAldrich公司產(chǎn)品。胰蛋白酶，美國Promega公司產(chǎn)品。PDQuest雙向凝膠圖譜分析軟件是美國BioRad公司產(chǎn)品，MascotMS/MS數(shù)據(jù)庫查詢軟件是英國Matrixscience公司產(chǎn)品，IPGphor等電聚焦儀，Imagescanner掃描儀均為瑞典AmershamBiosciences公司產(chǎn)品，DataExplorer質(zhì)譜分析軟件，VoyagerDESTR4307MALDITOFMS質(zhì)譜儀是美國AppliedBiosystem公司產(chǎn)品。

摘要：目的觀察鉛、硒對原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長及存活的影響，研究硒對鉛的神經(jīng)細(xì)胞生長抑制的拮抗作用。方法建立新生Wistar大鼠海馬神經(jīng)元原代無血清培養(yǎng)技術(shù)，通過PbCl2,Na2SeO3單獨(dú)及聯(lián)合作用，觀察神經(jīng)細(xì)胞的生長和存活情況。結(jié)果10-5mol/L鉛明顯抑制了原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元突起生長，引起神經(jīng)元存活率下降；單獨(dú)硒(2×10-6mol/L)有明顯促進(jìn)海馬神經(jīng)元突起生長的作用，尤其在神經(jīng)元突起生長早期；但對海馬神經(jīng)元存活率的影響不明顯。鉛和硒共同孵育時，培養(yǎng)早期硒能拮抗鉛對神經(jīng)元突起延伸的抑制，但隨著培養(yǎng)時間延長，這種拮抗作用消失；從神經(jīng)元存活率來看，在實(shí)驗(yàn)劑量下，未見硒能拮抗鉛對神經(jīng)元存活的抑制作用。結(jié)論鉛具有抑制神經(jīng)元生長和存活的毒性，本實(shí)驗(yàn)劑量下的硒在細(xì)胞培養(yǎng)早期有促進(jìn)神經(jīng)元突起生長和拮抗鉛對神經(jīng)元生長和存活的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】鉛；硒；海馬；神經(jīng)元；神經(jīng)突起

鉛具有顯著的神經(jīng)發(fā)育毒性。毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)和人群流行病學(xué)調(diào)查表明，鉛能對神經(jīng)系統(tǒng)造成不可逆性損害，嚴(yán)重?fù)p壞海馬神經(jīng)元，影響學(xué)習(xí)、記憶及行為發(fā)育〔1，2〕。硒有防止鉛吸收和加速其排泄的作用，因此，硒有可能成為有效防治鉛神經(jīng)毒性的重要資源〔3〕。為了解硒拮抗鉛神經(jīng)毒性的效果和研究其拮抗作用機(jī)制，同時也為更多有效地利用硒，本試驗(yàn)對體外原代培養(yǎng)的Wistar乳鼠海馬神經(jīng)元進(jìn)行低劑量PbCl2和Na2SeO3染毒，觀察低水平鉛、硒單獨(dú)和聯(lián)合作用對神經(jīng)細(xì)胞生長和存活的影響。

1材料與方法

11材料

111試劑解剖液、種植培養(yǎng)液、無血清培養(yǎng)液［由98%Neurobasal培養(yǎng)基和2%B27(美國Gibco公司)無血清培養(yǎng)基添加劑和1%的青霉素、鏈霉素和005mol/L的谷氨酰胺(美國Sigma公司)組成］；胰酶、DNaseⅠ、左旋多聚賴氨酸和臺盼蘭(美國Sigma公司)；PbCl2(上海試四赫維化工有限公司)；Na2SeO3(天津化學(xué)試劑研究所)。神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)抗體和神經(jīng)絲蛋白(NF)抗體(北京中山生物技術(shù)有限公司)。

【關(guān)鍵詞】氟西汀;細(xì)胞培養(yǎng);海馬神經(jīng)元;大鼠

氟西汀是5-羥色胺（5-HT）再攝取抑制劑之一，是應(yīng)用較廣的抗抑郁藥。氟西汀除有抗抑郁作用外，尚可治療其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。有研究表明，氟西汀對海馬的神經(jīng)保護(hù)作用是其發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)的機(jī)制之一［1］。關(guān)于氟西汀對體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長的影響未見報道，本研究初步探討了氟西汀對原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長的影響。

1材料與方法

1.1新生大鼠海馬神經(jīng)元的分離和培養(yǎng)

技術(shù)方法在參考文獻(xiàn)［2］基礎(chǔ)上加以改進(jìn)。取出生24h內(nèi)的新生SD大鼠（東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供），無菌分離出雙側(cè)海馬，用顯微剪剪碎，D-Hank''''s液清洗2或3次，將剪碎的海馬組織轉(zhuǎn)移至離心管中，加入等量0.25%的胰酶（美國Sigma公司），37℃消化30min，中間振搖1或2次，加入10%的DMEM/F12（美國Gibco公司）5ml，輕輕吹打15次，然后1000r·min-1離心5min，制成單細(xì)胞懸液，置于CO2培養(yǎng)箱（德國Heraeus公司產(chǎn)品）中，差速貼壁30min，去除成纖維細(xì)胞，吸取未貼壁的細(xì)胞，并用200目的不銹鋼濾網(wǎng)過濾，收集過濾后的單細(xì)胞懸液于培養(yǎng)皿中，然后至離心管中，取一滴單細(xì)胞懸液進(jìn)行計數(shù)，并用DMEM/F12將細(xì)胞密度調(diào)到1×106ml-1，然后接種于200μg·ml-1多聚賴氨酸（美國Sigma公司）包被的6孔培養(yǎng)板中，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，4h后換為無血清培養(yǎng)基，即含2%B27的Neurobasl培養(yǎng)基（美國Gibco公司），以后每3天半量換液1次。使用培養(yǎng)6d的神經(jīng)元進(jìn)行染色鑒定。

1.2大鼠海馬神經(jīng)元的鑒定

摘要：海馬體照相館能在較短時間內(nèi)在業(yè)界競爭者中脫穎而出并迅速擴(kuò)張和獲得成功，靠的是營銷創(chuàng)新。其成功秘訣是：抓住傳統(tǒng)影樓進(jìn)入疲態(tài)期的契機(jī)，精準(zhǔn)細(xì)分市場；鎖定目標(biāo)市場進(jìn)行“精致證件照”的精準(zhǔn)定位；通過成功質(zhì)量管理有效提升顧客滿意度；采取加盟形式加快擴(kuò)張，短期內(nèi)提高市場占有率。

關(guān)鍵詞：人像攝影；海馬體照相館；市場細(xì)分；情感營銷

一、海馬體照相館的發(fā)展概況

近年來，隨著國民經(jīng)濟(jì)的進(jìn)一步發(fā)展，我國人像攝影行業(yè)不斷發(fā)展壯大。2016年，全行業(yè)總收入3168．7億元，同比增長17．1％。行業(yè)經(jīng)營單位41．6萬家，同比增長3％。從業(yè)人員602萬人，同比增長0．9％，新增就業(yè)5．2萬人。人像攝影業(yè)營業(yè)額占全年國內(nèi)生產(chǎn)總值74．4萬億元的0．4％，新增就業(yè)人數(shù)占全國城鎮(zhèn)新增就業(yè)人口1314萬人的0．4％＇據(jù)不完全估計，2017年人像攝影業(yè)行業(yè)收入增加576．7億元，達(dá)3745．4億元，同比增長18．2％；行業(yè)經(jīng)營單位43．6萬家，同比增長5％；從業(yè)人員609．22萬人，同比增長1．2％，新增就業(yè)7．22萬人＇由此可見，人像攝影行業(yè)已經(jīng)成為促進(jìn)我國經(jīng)濟(jì)增長、提升就業(yè)率、提高人民物質(zhì)生活和精神生活品質(zhì)的重要行業(yè)。在人像攝影行業(yè)為國家“穩(wěn)增長、惠民生、保就業(yè)、促和諧”大發(fā)展的同時，行業(yè)內(nèi)的一匹黑馬以其強(qiáng)勁的發(fā)展勢頭引人關(guān)注：2011年11月10日，海馬體照相館母公司——杭州縵圖攝影有限公司成立，主營攝影業(yè)務(wù)，致力于為顧客提供極致的拍攝體驗(yàn)與優(yōu)質(zhì)的攝影服務(wù)。目前，旗下已有包括“HIMO海馬體照相館”“HIMOKIDS海馬體照相館兒童”“縵圖攝影”“WINDC－CI”“HIMOBUSINESS”、HIMOMASTER、縵圖云端、縵圖萊思學(xué)院8大品牌。自創(chuàng)業(yè)以來，海馬體照相館覆蓋了52座城市，落地門店157家，坐擁350多萬顧客。海馬體照相館如何能在較短時間內(nèi)在業(yè)界競爭者中脫穎而出，并迅速擴(kuò)張獲得成功，其經(jīng)驗(yàn)值得業(yè)界分析思考并借鑒。

二、海馬體照相館的成功秘訣剖析

（一）抓住傳統(tǒng)影樓進(jìn)入疲態(tài)期的契機(jī)，精準(zhǔn)細(xì)分市場。在市場競爭愈加激烈的環(huán)境下，沿襲臺灣模式的傳統(tǒng)影樓和當(dāng)前部分所謂改進(jìn)版的新型影樓，行業(yè)模式無大的創(chuàng)新，拍攝技術(shù)水平低、服務(wù)同質(zhì)化，市場競爭又趨于白熱化，導(dǎo)致惡性競爭升級，低水平價格競爭加劇，價格戰(zhàn)成為唯一的競爭工具，各服務(wù)環(huán)節(jié)二次消費(fèi)成為潛規(guī)則，行業(yè)誠信度和口碑欠佳。影樓經(jīng)營開始陷入“低價搶客—流水線式拍照—客戶投訴率高—口碑差—增加流量成本低價搶客—企業(yè)凈利潤降低—生存困難”的惡性經(jīng)營模式，不少影樓都面臨被淘汰的危機(jī)。影樓進(jìn)入疲態(tài)期為新型人像攝影模式提供了契機(jī)，海馬體照相館緊抓契機(jī)，深入調(diào)查市場，對人像攝影市場進(jìn)行精準(zhǔn)細(xì)分。（二）鎖定目標(biāo)市場進(jìn)行“精致證件照”的精準(zhǔn)定位。海馬體照相館對年輕消費(fèi)群體調(diào)查發(fā)現(xiàn)，像證件照、結(jié)婚登記照這些意義非凡的“小照片”，傳統(tǒng)影樓低品質(zhì)的流水線式制作，讓很多消費(fèi)者得不到滿意的成品。而像職場形象照這樣的“大照片”，影樓卻又把簡單的事情復(fù)雜化了，明明每次只需要兩張照片，但按照傳統(tǒng)影樓的規(guī)矩，消費(fèi)者必須專門到影樓拍許多底片，不僅花了一大筆錢，費(fèi)時費(fèi)力不說，效果也不好。基于市場調(diào)查結(jié)果，海馬體照相館將目標(biāo)市場精準(zhǔn)鎖定“精致證件照”的細(xì)分市場，主營證件照、形象照、文藝照、全家福等。從證件照出發(fā)，成功孵化出了“全年主打”和“限時記憶”兩條產(chǎn)品線。全年主打包括證件照、簽證照、結(jié)婚登記證、職業(yè)形象照等多種形象展示型的照片；限時記憶則包括圣誕照、新年照等系列。無論是全年主打還是限時記憶，海馬體照相館要做的都是“成為你記憶中轉(zhuǎn)站，留下片刻的你”。為此，海馬體照相館采用“把原來的小照片做重，把原來的大照片做輕”的方式，將小照片通過化妝、更衣、拍攝、后期處理等各種各樣服務(wù)的升級，使品質(zhì)更精致、服務(wù)更到位、照片更具觀賞性和保存價值。大照片則在海馬體門店通過比較簡潔的方式，用兩三個小時拍攝完成，大大降低了原來影樓的高門檻，同時還提高了拍攝的品質(zhì)。由此，海馬體照相館成功抓住了傳統(tǒng)影樓的疲態(tài)期，從證件照細(xì)分市場出發(fā)，將細(xì)分市場做精做專，成為行業(yè)翹楚。（三）通過成功質(zhì)量管理有效提升顧客滿意度?，F(xiàn)代管理學(xué)之父彼得？德魯克曾說過：“企業(yè)目標(biāo)唯一有效的定義是創(chuàng)造顧客。”在市場競爭激烈的今天，企業(yè)間的競爭本質(zhì)上是對顧客資源的爭奪。而質(zhì)量是開發(fā)顧客、維護(hù)顧客、提高顧客忠誠度的最有效保證。海馬體照相館能在短期內(nèi)獲得行業(yè)標(biāo)桿的地位與其嚴(yán)格的質(zhì)量管理密不可分。海馬體照相館從優(yōu)化服務(wù)流程設(shè)計開始，環(huán)環(huán)相扣，層層把關(guān)，成功地完成質(zhì)量管理。其服務(wù)流程是：微信客戶端預(yù)約—微信客戶端買單—約定時間到店—現(xiàn)場化妝造型—專業(yè)拍攝樣片—本人選片—上傳公司云端專業(yè)修圖師精修—根據(jù)顧客意見門店第二輪精修—顧客最終滿意成片—顧客在微信端下載成片并評價服務(wù)—引導(dǎo)顧客分享到社交平臺。從流程設(shè)計來看：一是微信平臺預(yù)約大大方便了顧客，使其可以更合理地安排時間，不用把大量時間花在等待上，大大降低了顧客的時間成本，提升了顧客的感知價值。二是在化妝造型環(huán)節(jié)，向顧客提供知名品牌的化妝品、充足的卸妝濕巾及各種適宜款式的服裝，將細(xì)致的基礎(chǔ)服務(wù)做到最優(yōu)化，讓顧客體驗(yàn)到更高的服務(wù)價值，進(jìn)一步提升顧客的整體感知價值。三是照片必須經(jīng)過兩輪專業(yè)精修并最終以顧客滿意為標(biāo)準(zhǔn)，方能成片的品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，有效地保證了照片質(zhì)量和顧客滿意度。四是微信下載成片一改傳統(tǒng)店鋪用U盤拷底片這一極不方便又容易丟失的做法，顧客隨時可以下載成片，方便快捷且永久保存，大大提升了顧客感知產(chǎn)品的可靠性，進(jìn)一步提升了顧客的感知價值。五是提供美甲、咖啡等服務(wù)，使得顧客在等待過程中降低了精神成本、體力成本，同時提高了感知服務(wù)的多樣性，再次提升了顧客的感知價值。六是在整個服務(wù)流程中，從前期預(yù)約到化妝拍攝、修片和評價體系，每一個流程都有不同的專業(yè)人員負(fù)責(zé)，員工權(quán)責(zé)明確，各司其職，以高標(biāo)準(zhǔn)的專業(yè)化素養(yǎng)保證每一環(huán)節(jié)達(dá)到預(yù)期效果。不僅讓顧客360度體驗(yàn)了“最美證件照”整個過程，也展現(xiàn)了企業(yè)的服務(wù)態(tài)度、完善了員工服務(wù)情況的監(jiān)督，獲得了顧客的好評。據(jù)調(diào)查，92．6％的顧客認(rèn)為照片質(zhì)量是“最美證件照”主題工作室的關(guān)鍵因素。增值類服務(wù)的多樣性、預(yù)約的便捷程度、工作人員服務(wù)態(tài)度，都是影響顧客滿意度的因素，占的比重依次為53．4％、48．2％、47．6％。從中可以發(fā)現(xiàn)對于顧客而言，“最美證件照”攝影工作室應(yīng)該具備的要素除了擁有較高的攝影水準(zhǔn)外，還需要具備預(yù)約便捷、服務(wù)優(yōu)質(zhì)等特質(zhì)。與傳統(tǒng)照相館相比，海馬體照相館顧客滿意度相對較高，達(dá)83．6％，且有65％的顧客在體驗(yàn)過后愿意將海馬體照相館推薦給他人＇（四）加盟形式加快擴(kuò)張，短期內(nèi)提高市場占有率。海馬體照相館主營證件照、簽證照、全家福、寵物照、輕婚紗、結(jié)婚照等。這幾種產(chǎn)品的拍攝手法、燈光、以及pose都可以標(biāo)準(zhǔn)化。與婚紗攝影相比，對攝影師的技術(shù)要求相對簡單，可通過快速的培訓(xùn)進(jìn)行復(fù)制，并保證各個店鋪照片效果統(tǒng)一。符合海馬體照相館加盟條件，投資20萬？50萬元后即可加盟。海馬體照相館總部會提供包括互聯(lián)網(wǎng)支持、全方位的培訓(xùn)、管理，以總部代運(yùn)營的模式使雙方成為利益共同體。營銷與產(chǎn)品創(chuàng)新由總部專業(yè)團(tuán)隊(duì)負(fù)責(zé)整體規(guī)劃，并提供專業(yè)選址團(tuán)隊(duì)幫助進(jìn)駐當(dāng)?shù)睾玫纳虉觯€有精準(zhǔn)的財務(wù)數(shù)據(jù)分析支持。自海馬體照相館哈爾濱店開業(yè)起，便開啟了全國連鎖經(jīng)營模式。在全國不斷擴(kuò)張發(fā)展，遍布一二線城市，并不斷提升技術(shù)與服務(wù)。加盟形式不僅整合優(yōu)化了資源，建立了一套快速復(fù)制拓展盈利的模式，也加快了海馬體照相館在國內(nèi)人像攝影市場的擴(kuò)張步伐，為海馬體成為全國知名攝影品牌起了關(guān)鍵作用。

【摘要】目的觀察HPK1對SD大鼠全腦缺血/再灌注后海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的作用。方法采用四動脈結(jié)扎法建立大鼠全腦缺血模型,缺血15min后分別灌注30min、3h、6h、24h、3天和5天。大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血/再灌注組、缺血/再灌注給藥組和缺血/再灌注溶劑對照組。缺血/再灌注給藥組再分為2組，分別腦室注射100g/L的HPK1AS-ODNs、HPK1MS-ODNs，每24h注射1次，連續(xù)3天，在最后一次注射24h后行四動脈結(jié)扎全腦缺血。使用免疫沉淀和焦油紫染色法等技術(shù)檢測相關(guān)信號蛋白的表達(dá)、活化水平及神經(jīng)元細(xì)胞的死亡。結(jié)果在大鼠海馬神經(jīng)元中有HPK1的表達(dá)，腦室注射AS-ODNs大鼠海馬CA1區(qū)存活錐體細(xì)胞明顯增多。結(jié)論HPK1反義寡核苷酸對缺血/再灌注引起的海馬神經(jīng)元凋亡具有保護(hù)作用。

【關(guān)鍵詞】造血祖細(xì)胞激酶1;反義寡核苷酸;海馬；凋亡；大鼠

TheroleofHPK1inischemicbraininjury

LITing,ZHANGGuangyi*

(ResearchCenterforBiochemistryandMolecularBiology,JiangsuKeyLaboratoryofBrainDisease

Bioinformation,XuzhouMedicalCollege,Xuzhou,Jiangsu221002,China)

【摘要】目的：探討基底外側(cè)杏仁核（BLA）離體腦片場電位的記錄及其應(yīng)用.方法：制備杏仁核腦片，在腦片上記錄場電位,觀察其藥理學(xué)特性并引導(dǎo)杏仁核的長時程增強(qiáng)（LTP）.結(jié)果：在腦片保持良好活性及記錄系統(tǒng)噪音幅度小于0.01mV的前提下，應(yīng)用國產(chǎn)微電極放大器及記錄系統(tǒng)即可記錄到穩(wěn)定可靠的杏仁核場電位,大小約為海馬CA1場電位的1/10；在灌流液中加入α氨基羥甲基惡唑丙酸（AMPAR）受體拮抗劑氰基2硝基喹啉2，3二酮（CNQX）10μmol/L和N甲基D天冬氨酸（NMDAR）受體阻斷劑D，L2氨基5磷酸基戊酸(APV)100μmol/L后，場電位幾乎完全被阻斷.應(yīng)用兩串高頻刺激（間隔10min）刺激外囊，在BLA可引導(dǎo)LTP.結(jié)論：杏仁核腦片可記錄到穩(wěn)定可靠的場電位，適用于研究杏仁核的突觸可塑性等功能及探討杏仁核在神經(jīng)疾病中的作用及其機(jī)制.

【關(guān)鍵詞】杏仁核；場電位；長時程增強(qiáng)

0引言

杏仁核與學(xué)習(xí)記憶、情緒、情感密切相關(guān)［1］，而且參與精神分裂癥、抑郁、癲癇和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程［2-3］.然而杏仁核深藏于大腦深部，被復(fù)雜精細(xì)的神經(jīng)結(jié)構(gòu)包繞［4］，很難直接探測到杏仁核神經(jīng)元的活動.腦片是研究杏仁核功能比較理想的標(biāo)本.腦片上記錄神經(jīng)細(xì)胞的活動方式主要有膜片鉗、傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)和場電位記錄，前兩者對儀器設(shè)備要求較高，而場電位記錄對設(shè)備要求相對簡單，并可以反映神經(jīng)細(xì)胞的功能狀態(tài)，易于推廣.我們采用國內(nèi)的設(shè)備系統(tǒng)，制備杏仁核腦片，在腦片上記錄場電位,觀察其藥理學(xué)特性并引導(dǎo)杏仁核的長時程增強(qiáng)（longtermpotentiation，LTP），以探討杏仁核場電位的記錄及其應(yīng)用.

1材料和方法

1.1材料健康SD大鼠24只，雄性，體質(zhì)量200～250g（福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心），所有動物均在12h光照/黑暗周期環(huán)境中飼養(yǎng)，自由攝食及飲水.D，L2氨基5磷酸基戊酸(APV),氰基2硝基喹啉2，3二酮(CNQX),谷氨酸(美國Sigma公司)；微電極放大器,RM6240數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)（成都儀器廠），其余化學(xué)產(chǎn)品均為國產(chǎn)分析純.

【摘要】目的研究銀杏葉提取物(EGb)對點(diǎn)燃模型幼鼠學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能，對大鼠海馬乙酰膽堿酯酶（AChE）、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）活性的影響。方法21、35日齡SD大鼠各40只，經(jīng)初篩后隨機(jī)分為生理鹽水對照組、點(diǎn)燃對照組及EGb大、中、小劑量治療組，采用戊四氮（PTZ）誘導(dǎo)幼鼠點(diǎn)燃模型，以Y型電迷宮及生化檢測方法，觀察用藥前后大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和海馬AChE、ChAT活性的變化。結(jié)果EGb呈劑量依賴性顯著改善實(shí)驗(yàn)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,并顯著抑制海馬AChE活性、增強(qiáng)ChAT的活性。結(jié)論EGb可以通過抑制功能腦區(qū)AChE活性、增加ChAT的活性,增強(qiáng)中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的功能，改善發(fā)育期癲疒間大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。

【關(guān)鍵詞】銀杏葉提取物；學(xué)習(xí)記憶；乙酰膽堿酯酶；膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶；點(diǎn)燃模型；大鼠

EffectofextractsofGinkgobilobaleafonthelearning-memoryabilityandtheactivity

ofAChEandChATinthehippocampusinratswithkindling-inducedepilepsy

DUANFangrong,YUANBaoqiang*

(DepartmentofPediatrics,TheAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou,Jiangsu221002,China)

關(guān)鍵詞：老年人前額葉(PF)記憶障礙

額葉是大腦發(fā)育中最高級的部分，它包括初級運(yùn)動區(qū)、前運(yùn)動區(qū)和前額葉(prefrontalcorte,PF)，其中PF與認(rèn)知功能關(guān)系密切。前額葉又分為眶部、背部、內(nèi)側(cè)部和外側(cè)部，其中眶部和內(nèi)側(cè)部、背部和外側(cè)部的結(jié)構(gòu)和功能較為接近。

PF與大腦其它區(qū)域有著密切關(guān)系。PF和所有的感覺區(qū)都有往返的纖維聯(lián)系，其眶后部和腹內(nèi)側(cè)部有投射到海馬旁回和海馬前下腳的纖維，組成了內(nèi)側(cè)顳葉-間腦系統(tǒng)的一部分；PF與紋狀體、杏仁核、顳葉、枕葉和頂葉等腦區(qū)的聯(lián)系也很密切〔1，2〕，因此，PF與多種感覺信息的加工、記憶、思維及情緒等腦的高級功能有關(guān)。從細(xì)胞水平來看，PF神經(jīng)元具有多感覺性質(zhì)，它們參與多種信息的加工；同時，PF神經(jīng)元具有柱狀組織，表現(xiàn)為功能異質(zhì)性，如一些PF神經(jīng)元在延緩反應(yīng)的延緩期放電明顯增加，而另一些神經(jīng)元對行為的其它特性更為敏感〔3〕。PF神經(jīng)元的這些結(jié)構(gòu)和功能上的特點(diǎn)是其在記憶中起重要作用的神經(jīng)基礎(chǔ)。

行為研究也證實(shí)PF與記憶功能有密切關(guān)系，包括工作記憶、源記憶、順序組織、前攝抑制釋放(PI)能力、抑制無關(guān)信息的干擾、元記憶、組織和計劃有意識的活動、問題解決等〔1，2〕。West〔4〕認(rèn)為PF的功能包括：(1)工作記憶；(2)期待性記憶，依據(jù)工作記憶對相應(yīng)的內(nèi)外線索反應(yīng)；(3)控制干擾，抑制與任務(wù)無關(guān)的表征；(4)抑制優(yōu)勢反應(yīng)，使行為不受先前反應(yīng)或主要的環(huán)境刺激影響。功能(1)，(2)，(4)由背外側(cè)前額葉(dPFC)支持，功能(3)主要由PF眶部或內(nèi)側(cè)部完成。West的這一觀點(diǎn)可以說明一些與前額葉有關(guān)的行為特點(diǎn)，如選擇與任務(wù)相關(guān)的信息，將語義和時空信息結(jié)合成穩(wěn)定的記憶痕跡，計劃、組織復(fù)雜行為等，因而具有一定的參考價值。

1與額葉有關(guān)的老年記憶功能障礙

記憶障礙是正常老年人的常見主訴，老年人的再認(rèn)和回憶等測驗(yàn)成績均較年輕人低。但不同形式的記憶下降并不一致，老年人的外顯記憶下降大于內(nèi)隱記憶；在外顯記憶中，再認(rèn)成績又好于自由回憶。老年記憶障礙與前額葉受損、內(nèi)側(cè)顳葉受損的表現(xiàn)有許多相似之處，其中，越來越多的證據(jù)表明，老年記憶力下降與額葉功能有密切關(guān)系〔5～7〕，PF參與的記憶功能比其它腦區(qū)，如內(nèi)側(cè)顳葉系統(tǒng)支持的記憶功能更早下降。一項(xiàng)研究證明，在12項(xiàng)測定PF功能的測驗(yàn)中，平均年齡為56.62歲的被試有10項(xiàng)比27.71歲的成績差〔4〕。

【摘要】目的觀察鋁負(fù)荷大鼠腦組織單胺氧化酶B(MAOB)的活性與表達(dá)改變，并探討尼莫地平對該動物模型的影響。方法采用三氯化鋁（AlCl3）(400mg/kg)灌胃大鼠，1次/d，5d/w，持續(xù)3個月，建立鋁負(fù)荷致大鼠慢性腦損傷的動物模型，尼莫地平(80mg/kg)在每次鋁給予4h后灌胃，觀察行為學(xué)、生化酶學(xué)、MAOBmRNA及蛋白表達(dá)水平等指標(biāo)的變化。結(jié)果鋁負(fù)荷能明顯導(dǎo)致大鼠被動回避性學(xué)習(xí)記憶能力和空間識別能力障礙，使其腦組織乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(ChAT)活性顯著降低(P＜0.01)，而膽堿酯酶(AchE)活性顯著升高(P＜0.01)，超氧化物歧化酶（SOD）活性顯著降低(P＜0.01)，而丙二醛（MDA）含量顯著升高(P＜0.01)，MAOB活性與MAOBmRNA及蛋白表達(dá)水平顯著增加(P＜0.01)；NMDP能明顯改善鋁負(fù)荷大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力障礙，明顯阻遏鋁負(fù)荷大鼠海馬組織ChAT與SOD活性的降低，AchE活性與MDA含量的增高，MAOB活性及其mRNA與蛋白表達(dá)的增加。結(jié)論鋁負(fù)荷致大鼠腦損傷涉及腦組織的MAOB活性與表達(dá)改變；NMDP可能降低鋁負(fù)荷大鼠腦組織MAOB表達(dá)和活性，并增加SOD活性，減少自由基而保護(hù)大鼠慢性腦損傷。

【關(guān)鍵詞】尼莫地平；鋁負(fù)荷大鼠；單胺氧化酶B

由于阿爾茨海默病（AD）發(fā)病機(jī)制未明，目前尚缺乏理想的治療手段。尼莫地平是雙氫吡啶類鈣通道拮抗劑，脂溶性高，易通過血腦屏障，其擴(kuò)張腦血管，改善腦血供應(yīng)等作用已得到肯定并應(yīng)用于臨床，而其對老年癡呆認(rèn)知記憶障礙的改善作用〔1〕，機(jī)制至今仍不很清楚。有研究報道單胺氧化酶B（MAOB）的活性改變與神經(jīng)元損傷和神經(jīng)元退變可能有密切關(guān)系〔2，3〕。為探討尼莫地平在改善老年癡呆等導(dǎo)致的認(rèn)知記憶障礙中的作用，本研究擬采用鋁負(fù)荷大鼠腦損傷模型，觀察腦損傷學(xué)習(xí)記憶障礙與腦組織MAOB改變的關(guān)系及尼莫地平對鋁損傷大鼠腦組織MAOB表達(dá)的影響，為神經(jīng)元退行性疾病的發(fā)病機(jī)制研究奠定實(shí)驗(yàn)與理論基礎(chǔ)，為防治藥物的開發(fā)探尋新方法與新途徑。

1材料與方法

1.1動物與分組清潔級3月齡Wistar大鼠100只，雄性，180～220g，由重慶醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供〔動物生產(chǎn)許可證號:SCXK(渝)2005002〕。按體重隨機(jī)分成3組，每組10只，即空白對照(溶劑為0.5%羧甲基纖維素鈉)組，鋁模型(AlCl3400mg/kg)組與尼莫地平組(80mg/kg)，灌胃容積1ml/100g體重。在實(shí)驗(yàn)過程中，鋁模型組死亡2只鼠。

1.2方法