目的觀察鈣網(wǎng)蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。方法采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和原位ELISA技術(shù)對(duì)體外培養(yǎng)的瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行CRT分布定位及表達(dá)水平探究。結(jié)果瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞在處于增殖生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，胞漿及核內(nèi)均有不同程度的CRT表達(dá)，其中瘢痕成纖維細(xì)胞表達(dá)CRT水平(A摘要:1.97±0.15,ELISA492nm)明顯高于正常皮膚成纖維細(xì)胞水平(A摘要:1.43±0.12),差異有非常顯著意義(P＜0.01)；而在已融合的瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)則均無(wú)CRT表達(dá)。結(jié)論瘢痕成纖維細(xì)胞內(nèi)CRT的豐富表達(dá)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞遷移、信號(hào)傳遞及鈣存儲(chǔ)等方面均有著積極功能。

Studyontheexpressionofcalreticulininhypertrophicscar-derivedfibroblasts

【AbstractObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelandintracellulardistributionofcalreticulin(CRT)inhypertrophicscar-derivedfibroblasts(HSF)andnormalskin-derivedfibroblasts(NSF).MethodsUsinganti-CRTantibody,CRTwasdetectedinHSFandNSFbyimmunocytochemistryandELISAtechnique.ResultsCRTwaspresentinthecytoplasmandnucleiinproliferatingHSForNSFinculture,butHSFpossessedsignificantlyhigherexpressionlevelofCRTthanNSF(P＜0.01).Whenthesecells(HSFandNSF)werefused,neitherintracellularnorintranuclearstainingforCRTwasobserved.ConclusionInHSFandNSF,thedistributionofCRTiswidespread.BecauseofitsabundantexpressioninHSF,wepostulatethatCRTasamultifunctionalproteinplaysanimportantroleinCa2+sequestering,integrin-mediatedsignallingandcelladhesion.

【KeywordsHypertrophicscarFibroblastCalreticulinExpression

增生性瘢痕(Hypertrophicscar,HS)作為創(chuàng)傷及外科手術(shù)后常見(jiàn)且十分棘手的皮膚組織疾病，瘢痕組織內(nèi)成纖維細(xì)胞異?；罨图?xì)胞外間質(zhì)過(guò)度沉積既是HS的重要組織學(xué)特征，也是HS發(fā)生、發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)。鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin,CRT)最早是作為一種存在于非肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的主要鈣結(jié)合蛋白得以熟悉的［1］，近幾年的探究發(fā)現(xiàn)摘要：除具有鈣離子儲(chǔ)藏功能外，CRT在參和并調(diào)節(jié)眾多細(xì)胞生物學(xué)活性功能上有著積極影響［2-5］，同時(shí)它還作為自身抗原在某些免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中有著極其重要的價(jià)值［6］。我們通過(guò)CRT抗體并利用原位ELISA及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)瘢痕成纖維細(xì)胞體外表達(dá)CRT水平，輔以正常皮膚成纖維細(xì)胞作對(duì)照，探索CRT在瘢痕成纖維細(xì)胞發(fā)揮異常生物學(xué)活性功能中的功能。

1材料和方法

目的觀察鈣網(wǎng)蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。方法采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和原位ELISA技術(shù)對(duì)體外培養(yǎng)的瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行CRT分布定位及表達(dá)水平研究。結(jié)果瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞在處于增殖生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，胞漿及核內(nèi)均有不同程度的CRT表達(dá)，其中瘢痕成纖維細(xì)胞表達(dá)CRT水平(A:1.97±0.15,ELISA492nm)明顯高于正常皮膚成纖維細(xì)胞水平(A:1.43±0.12),差異有非常顯著意義(P＜0.01)；而在已融合的瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)則均無(wú)CRT表達(dá)。結(jié)論瘢痕成纖維細(xì)胞內(nèi)CRT的豐富表達(dá)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞遷移、信號(hào)傳遞及鈣存儲(chǔ)等方面均有著積極作用。

Studyontheexpressionofcalreticulininhypertrophicscar-derivedfibroblasts

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelandintracellulardistributionofcalreticulin(CRT)inhypertrophicscar-derivedfibroblasts(HSF)andnormalskin-derivedfibroblasts(NSF).MethodsUsinganti-CRTantibody,CRTwasdetectedinHSFandNSFbyimmunocytochemistryandELISAtechnique.ResultsCRTwaspresentinthecytoplasmandnucleiinproliferatingHSForNSFinculture,butHSFpossessedsignificantlyhigherexpressionlevelofCRTthanNSF(P＜0.01).Whenthesecells(HSFandNSF)werefused,neitherintracellularnorintranuclearstainingforCRTwasobserved.ConclusionInHSFandNSF,thedistributionofCRTiswidespread.BecauseofitsabundantexpressioninHSF,wepostulatethatCRTasamultifunctionalproteinplaysanimportantroleinCa2+sequestering,integrin-mediatedsignallingandcelladhesion.

【Keywords】HypertrophicscarFibroblastCalreticulinExpression

增生性瘢痕(Hypertrophicscar,HS)作為創(chuàng)傷及外科手術(shù)后常見(jiàn)且十分棘手的皮膚組織疾病，瘢痕組織內(nèi)成纖維細(xì)胞異常活化和細(xì)胞外間質(zhì)過(guò)度沉積既是HS的重要組織學(xué)特征，也是HS發(fā)生、發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)。鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin,CRT)最早是作為一種存在于非肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的主要鈣結(jié)合蛋白得以認(rèn)識(shí)的［1］，近幾年的研究發(fā)現(xiàn)：除具有鈣離子儲(chǔ)藏作用外，CRT在參與并調(diào)節(jié)眾多細(xì)胞生物學(xué)活性功能上有著積極影響［2-5］，同時(shí)它還作為自身抗原在某些免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中有著極其重要的價(jià)值［6］。我們通過(guò)CRT抗體并利用原位ELISA及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)瘢痕成纖維細(xì)胞體外表達(dá)CRT水平，輔以正常皮膚成纖維細(xì)胞作對(duì)照，探討CRT在瘢痕成纖維細(xì)胞發(fā)揮異常生物學(xué)活性功能中的作用。

1材料與方法

【論文關(guān)鍵詞】細(xì)胞凋亡；信號(hào)傳導(dǎo)

【論文摘要】凋亡是細(xì)胞的主動(dòng)死亡過(guò)程，此過(guò)程涉及一系列基因的激活表達(dá)和調(diào)控。在細(xì)胞的正常發(fā)育過(guò)程中，約有半數(shù)細(xì)胞通過(guò)凋亡途徑被清除。由于細(xì)胞凋亡在胚胎發(fā)育、新舊細(xì)胞更替、免疫反應(yīng)終止、腫瘤發(fā)生和自發(fā)抑制，以及許多免疫性、神經(jīng)退行性疾病和衰老等方面均發(fā)揮重要作用，闡明細(xì)胞凋亡的發(fā)生及其調(diào)控機(jī)制將對(duì)相關(guān)疾病的治療展示光明的前景。本文就細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑研究及其最新進(jìn)展作一綜述。

細(xì)胞凋亡主要通過(guò)受體介導(dǎo)的信號(hào)途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡因子或刺激因素通過(guò)第二信使系統(tǒng)傳遞信號(hào)，信號(hào)傳遞途徑?jīng)Q定了細(xì)胞的命運(yùn)。本文嘗試從細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)途徑角度來(lái)對(duì)其機(jī)制做一概述。

1死亡受體信號(hào)通路

死亡受體配體主要通過(guò)以半胱氨酸蛋白酶下幾個(gè)方面啟動(dòng)信號(hào)傳導(dǎo)：受體齊聚、特殊銜接蛋白募集和caspase級(jí)聯(lián)活化。

以Fas/FasL為例：Fas是一種跨膜蛋白，屬腫瘤壞死因子受體超家族成員，它與FasL結(jié)合可以啟動(dòng)凋亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)引起細(xì)胞凋亡。其活化包括以下步驟：首先配體誘導(dǎo)受體三聚體化，然后在細(xì)胞膜上形成凋亡誘導(dǎo)復(fù)合物，這個(gè)復(fù)合物中包括帶有死亡結(jié)構(gòu)域的Fas相關(guān)蛋白FADD[2]。Fas又稱(chēng)CD95，是由325個(gè)氨基酸組成的受體分子，F(xiàn)as一旦和配體FasL結(jié)合，可通過(guò)Fas分子啟動(dòng)致死性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，最終引起細(xì)胞一系列特征性變化，使細(xì)胞死亡。Fas作為一種普遍表達(dá)的受體分子，可出現(xiàn)于多種細(xì)胞表面，但FasL的表達(dá)卻有其特點(diǎn)，通常只出現(xiàn)于活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞，因而已被活化的殺傷性免疫細(xì)胞往往能夠最有效地以凋亡途徑置靶細(xì)胞于死地。Fas分子胞內(nèi)段帶有特殊的死亡結(jié)構(gòu)域。三聚化的Fas和FasL結(jié)合后，使三個(gè)Fas分子的死亡結(jié)構(gòu)域相聚成簇，吸引了胞漿中另一種帶有相同死亡結(jié)構(gòu)域的蛋白FADD[3]。FADD是死亡信號(hào)轉(zhuǎn)錄中的一個(gè)連接蛋白，它由兩部分組成：C端（DD結(jié)構(gòu)域）和N端（DED）部分。DD結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)和Fas分子胞內(nèi)段上的DD結(jié)構(gòu)域結(jié)合，該蛋白再以DED連接另一個(gè)帶有DED的后續(xù)成分，由此引起N段DED隨即與無(wú)活性的半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）酶原發(fā)生同嗜性交聯(lián)，聚合多個(gè)caspase-8的分子，caspase-8分子遂由單鏈酶原轉(zhuǎn)成有活性的雙鏈蛋白，進(jìn)而引起隨后的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，活化caspase-8通過(guò)兩個(gè)平行級(jí)聯(lián)刺激細(xì)胞凋亡：直接切割和活化caspase-3；切割Bid（Bcl-2家族蛋白），截型Bid（tBid）移位至線粒體，誘導(dǎo)細(xì)胞色素C釋放，從而活化caspase-9和caspase-3，作為酶原而被激活，引起下面的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，細(xì)胞發(fā)生凋亡[4]。TNF誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑與此類(lèi)似[5]。TNF和DR-3L能夠傳導(dǎo)促凋亡和抗凋亡信號(hào)。TNFR和DR3通過(guò)接頭蛋白TRADD和活化caspase-8加速細(xì)胞凋亡。另一方面，活化NF-κB和誘導(dǎo)存活基因（IAP）的一種接頭蛋白復(fù)合物（包括RIP）可抑制細(xì)胞凋亡。通過(guò)Apo2L誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡需要caspase活性，但是否需要接頭蛋白參與尚不清楚。

大家好！

在坐有很多對(duì)我們公司都不是很了解，那由我來(lái)介紹下我們公司，成立于年，其前身為美容化妝品經(jīng)銷(xiāo)有限公司，也是地區(qū)最早的專(zhuān)業(yè)美容用品經(jīng)銷(xiāo)之一。經(jīng)過(guò)了十多年的風(fēng)雨歷程，現(xiàn)已成為一個(gè)以專(zhuān)業(yè)美容產(chǎn)品為核心，以營(yíng)銷(xiāo)教育為依托，一品牌加盟店為網(wǎng)絡(luò)。擁有3家分公司，商學(xué)院教育，業(yè)務(wù)遍及東北三省的終合性美容集團(tuán)公司。

大家對(duì)我們公司有點(diǎn)了解之后呢，我給大家?guī)?lái)了（ISOI）的產(chǎn)品，在這之前呢我給大家講個(gè)小故事。這個(gè)故事的名字叫“扁鵲的醫(yī)術(shù)”

魏文王問(wèn)名醫(yī)扁鵲：你們家兄弟三人，都精通于醫(yī)術(shù)，到底哪一位最好呢？

扁鵲回答：長(zhǎng)兄最好，中兄次之，我最差！

文王疑惑，又問(wèn)：那為什么你最出名呢？

中風(fēng)，亦稱(chēng)腦血管意外。是嚴(yán)重危害患者生命與健康的中老年常見(jiàn)病。中風(fēng)亦可分為出血性中風(fēng)(腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血)和缺血性中風(fēng)(腦血栓形成、腦梗塞)。中風(fēng)患者即使有幸存活，仍有約1／3的人會(huì)留下半身不遂、說(shuō)話(huà)吐詞不清、癡呆等后遺癥。目前已知高血壓病、糖尿病、高脂血癥及肥胖癥是引起中風(fēng)的高危因素。有學(xué)者指出，高血壓病是導(dǎo)致腦出血的禍根，冠心病、糖尿病患者動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂脫落是誘發(fā)腦梗塞的主要原因。

世界衛(wèi)生組織(WHO)建議，通過(guò)增加復(fù)雜碳水化合物和天然糖類(lèi)的攝入量，控制白糖、動(dòng)物脂肪、食鹽及膽固醇的攝入量等飲食措施，可用來(lái)預(yù)防腦血管意外。具體而言，宜從以下諸方面做起：

多吃?xún)?yōu)質(zhì)蛋白和高鉀、高鎂、高鈣食物

很多研究資料表明，飲食中蛋白質(zhì)和鉀元素?cái)z入不足，或蛋白質(zhì)的質(zhì)量欠佳，會(huì)使動(dòng)脈血管脆性增加，容易引起腦內(nèi)小動(dòng)脈破裂出血。含甲硫氨酸、賴(lài)氨酸、脯氨酸、?；撬岬聂~(yú)類(lèi)、禽類(lèi)等優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)食物，除能維持正常血管彈性及改善腦血流外，還能促進(jìn)鈉鹽的排泄，起到降血壓作用。高鉀食物的攝入也可促進(jìn)鈉鹽的排泄，調(diào)節(jié)改善細(xì)胞內(nèi)鈉與鉀的比值，對(duì)降低血壓、維護(hù)心臟功能及預(yù)防中風(fēng)至關(guān)重要。高鉀食物有食用蕈類(lèi)(香菇、蘑菇、平菇、銀耳等)、蓮子、豆類(lèi)、紫菜、海帶、馬鈴薯、貝類(lèi)、葵花子以及香蕉、橙子、柚子、甜瓜等。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，天然食物中所含的鎂具有抗凝、降低血脂、擴(kuò)張血管、保鉀等預(yù)防腦血管病的獨(dú)特效應(yīng)。故平時(shí)應(yīng)注意多吃一些富含鎂的食物，諸如甜菜、豌豆、苜蓿、蛤類(lèi)、乳制品、堅(jiān)果等。中老年人往往會(huì)因缺鈣而引起骨骼中的鈣質(zhì)向軟組織和血液中“遷移”，致使過(guò)多的鈣沉積于動(dòng)脈壁上，則易引起血-管彈性纖維變性、斷裂，誘發(fā)腦血管疾患。所以，酌情多食富鈣食物如奶類(lèi)、豆類(lèi)、魚(yú)類(lèi)、蝦皮、芝麻、海帶等，對(duì)于預(yù)防中風(fēng)也大有裨益。

多食富含維生素C、E的食物

新近研究發(fā)現(xiàn)，腦梗塞患者體內(nèi)抗氧化維生素C、E水平明顯低下，這勸；是腦梗塞形成與發(fā)展的重要原因。因?yàn)榈退降木S生素C、E狀態(tài)難以有效地清除細(xì)胞膜和基因的“殺手”--過(guò)氧化自由基，易使中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞膜脂質(zhì)發(fā)生氧化、變性損傷。為預(yù)防腦血管疾病的發(fā)生，日常生活中應(yīng)多攝食富含維生素C、E的食物，如菜椒、青蒜、薺菜、芫荽、芹菜、韭菜、鮮棗、檸檬、獼猴桃、刺梨、柑桔、胡桃、橄欖油等。

目的觀察鈣網(wǎng)蛋白(CRT)在瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。方法采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和原位ELISA技術(shù)對(duì)體外培養(yǎng)的瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞進(jìn)行CRT分布定位及表達(dá)水平研究。結(jié)果瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞在處于增殖生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí)，胞漿及核內(nèi)均有不同程度的CRT表達(dá)，其中瘢痕成纖維細(xì)胞表達(dá)CRT水平(A:1.97±0.15,ELISA492nm)明顯高于正常皮膚成纖維細(xì)胞水平(A:1.43±0.12),差異有非常顯著意義(P＜0.01)；而在已融合的瘢痕和正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)則均無(wú)CRT表達(dá)。結(jié)論瘢痕成纖維細(xì)胞內(nèi)CRT的豐富表達(dá)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞遷移、信號(hào)傳遞及鈣存儲(chǔ)等方面均有著積極作用。Studyontheexpressionofcalreticulininhypertrophicscar-derivedfibroblasts【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionlevelandintracellulardistributionofcalreticulin(CRT)inhypertrophicscar-derivedfibroblasts(HSF)andnormalskin-derivedfibroblasts(NSF).MethodsUsinganti-CRTantibody,CRTwasdetectedinHSFandNSFbyimmunocytochemistryandELISAtechnique.ResultsCRTwaspresentinthecytoplasmandnucleiinproliferatingHSForNSFinculture,butHSFpossessedsignificantlyhigherexpressionlevelofCRTthanNSF(P＜0.01).Whenthesecells(HSFandNSF)werefused,neitherintracellularnorintranuclearstainingforCRTwasobserved.ConclusionInHSFandNSF,thedistributionofCRTiswidespread.BecauseofitsabundantexpressioninHSF,wepostulatethatCRTasamultifunctionalproteinplaysanimportantroleinCa2sequestering,integrin-mediatedsignallingandcelladhesion.【Keywords】HypertrophicscarFibroblastCalreticulinExpression增生性瘢痕(Hypertrophicscar,HS)作為創(chuàng)傷及外科手術(shù)后常見(jiàn)且十分棘手的皮膚組織疾病，瘢痕組織內(nèi)成纖維細(xì)胞異?；罨图?xì)胞外間質(zhì)過(guò)度沉積既是HS的重要組織學(xué)特征，也是HS發(fā)生、發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)。鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin,CRT)最早是作為一種存在于非肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的主要鈣結(jié)合蛋白得以認(rèn)識(shí)的［1］，近幾年的研究發(fā)現(xiàn)：除具有鈣離子儲(chǔ)藏作用外，CRT在參與并調(diào)節(jié)眾多細(xì)胞生物學(xué)活性功能上有著積極影響［2-5］，同時(shí)它還作為自身抗原在某些免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中有著極其重要的價(jià)值［6］。我們通過(guò)CRT抗體并利用原位ELISA及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)瘢痕成纖維細(xì)胞體外表達(dá)CRT水平，輔以正常皮膚成纖維細(xì)胞作對(duì)照，探討CRT在瘢痕成纖維細(xì)胞發(fā)揮異常生物學(xué)活性功能中的作用。1材料與方法1.1組織標(biāo)本增生性瘢痕及正常皮膚組織標(biāo)本均取自住院病人，年齡17～40歲。患者在取標(biāo)本前無(wú)長(zhǎng)時(shí)間外用各種防治增生性瘢痕藥物史，不伴腫瘤及其他嚴(yán)重疾患；瘢痕組織生長(zhǎng)時(shí)間均在6～9個(gè)月之間。1.2主要試劑及物品準(zhǔn)備羊抗CRT抗體：Michalak博士惠贈(zèng)。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗羊IgG(Zymed公司)。DAB及OPD(Sigma公司)。細(xì)胞培養(yǎng)基：DMEM添加10%小牛血清(上海華美生物技術(shù)有限公司)。96孔塑料培養(yǎng)板及100mm培養(yǎng)皿(丹麥Nunc公司)。1.3成纖維細(xì)胞培養(yǎng)手術(shù)切取增生性瘢痕及正常皮膚組織，去皮下脂肪，0.01%新潔爾滅浸洗10min，PBS洗3次，用組織剪將組織剪成細(xì)小碎塊并接種于培養(yǎng)皿內(nèi)，加少量10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃5%CO2靜止培養(yǎng)，3天后補(bǔ)充少量培養(yǎng)劑，隔2天換液，見(jiàn)有細(xì)胞從組織塊爬出生長(zhǎng)后每天換液，傳代。1.4CRT免疫細(xì)胞化學(xué)染色體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞去培養(yǎng)基后，PBS輕洗，2%多聚甲醛固定10min，0.3%雙氧水反應(yīng)5min，PBS再洗；二抗血清37℃20min，抗CRT抗體37℃作用45min，HRP-兔抗羊IgG37℃反應(yīng)1h，DAB顯色；顯微鏡下觀察顯色信號(hào)。1.5CRT原位ELISA檢測(cè)［7］選擇第5代培養(yǎng)細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，用0.25%胰蛋白酶消化后收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至106/ml，每孔100μl接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)。培養(yǎng)16h后，去培養(yǎng)劑，PBS清洗；2%多聚甲醛固定10min，0.3%雙氧水反應(yīng)5min，PBS洗；與0.1%TritonX-1004℃作用3min后，進(jìn)一步分別與5%小牛血清(37℃、20min)、抗CRT抗體(37℃、1h)、5%小牛血清PBS稀釋的HRP-兔抗羊IgG(37℃、1h)反應(yīng)；PBS清洗后加入OPD底物液100μl，作用30min后用50μl1mol/L硫酸中止反應(yīng)。ELISAreader上讀取492nm的P值。2結(jié)果2.1成纖維細(xì)胞初代培養(yǎng)結(jié)果在體外相同培養(yǎng)條件下，細(xì)小的瘢痕及正常皮膚組織塊接種后2天見(jiàn)有部分貼壁，培養(yǎng)1周后有少量的成纖維細(xì)胞從組織塊邊緣爬出，2周后細(xì)胞在組織塊周?chē)蕰灎罘植?，此后?xì)胞開(kāi)始向外旺盛擴(kuò)散增殖。顯微鏡下觀察瘢痕及正常皮膚組織來(lái)源的成纖維細(xì)胞形態(tài)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞均呈細(xì)小梭形狀，二者未見(jiàn)明顯差異。2.2成纖維細(xì)胞CRT表達(dá)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果原代培養(yǎng)的瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞在未生長(zhǎng)融合前，細(xì)胞內(nèi)均有不同程度的CRT陽(yáng)性表達(dá)；一旦細(xì)胞生長(zhǎng)融合后，在融合區(qū)內(nèi)的成纖維細(xì)胞中均未見(jiàn)有明顯的CRT陽(yáng)性信號(hào)出現(xiàn)，但在融合區(qū)邊緣仍處于增殖、遷移擴(kuò)散的瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)，則仍有CRT的陽(yáng)性信號(hào)分布；就二種細(xì)胞內(nèi)CRT的表達(dá)信號(hào)強(qiáng)弱來(lái)看，瘢痕成纖維細(xì)胞內(nèi)的CRT陽(yáng)性信號(hào)相對(duì)較強(qiáng)，而正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)CRT陽(yáng)性信號(hào)相對(duì)較弱；另外，當(dāng)瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞以較高密度傳代培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)CRT表達(dá)在接種后16h較為明顯，而在培養(yǎng)24h細(xì)胞接近融合時(shí)信號(hào)較弱。轉(zhuǎn)此外，CRT在瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)區(qū)域無(wú)明顯差異，往往在細(xì)胞漿、核膜及核內(nèi)均有表達(dá)。2.3成纖維細(xì)胞CRT表達(dá)的ELISA檢測(cè)結(jié)果根據(jù)CRT免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果，我們對(duì)第5代瘢痕及正常皮膚成纖維細(xì)胞(接種后培養(yǎng)16h)進(jìn)行CRT表達(dá)的ELISA檢測(cè)，其中正常皮膚成纖維細(xì)胞組的CRT表達(dá)值為1.43±0.12(A)，瘢痕成纖維細(xì)胞組為1.97±0.15(A)，二組間差異有非常著性意義(P＜0.01)。3討論增生性瘢痕是傷口上皮化愈合后組織內(nèi)成纖維細(xì)胞異常活化即繼續(xù)旺盛增殖并分泌大量膠原、纖維連接蛋白及蛋白多糖等細(xì)胞外間質(zhì)所造成的一種組織病理改變，有關(guān)瘢痕成纖維細(xì)胞為何異?；罨恢笔钦螣齻饪祁I(lǐng)域里重點(diǎn)探索的課題之一。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素-1和類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子-1等在增生性瘢痕組織內(nèi)的過(guò)度表達(dá)一直被認(rèn)為是引起成纖維細(xì)胞異?；罨豢珊鲆暤囊蛩?，但越來(lái)越多實(shí)驗(yàn)研究表明瘢痕成纖維細(xì)胞自身生物學(xué)特性改變是觸發(fā)其功能異常的關(guān)鍵［8］。我們通過(guò)對(duì)細(xì)胞內(nèi)CRT的表達(dá)檢測(cè)，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)CRT不但在瘢痕成纖維細(xì)胞內(nèi)分布廣泛，而且其表達(dá)量明顯高于正常皮膚成纖維細(xì)胞內(nèi)水平。CRT作為鈣離子主要結(jié)合蛋白，早期研究認(rèn)為CRT主要是通過(guò)影響細(xì)胞內(nèi)鈣離子的儲(chǔ)存與釋放而影響細(xì)胞的一些生物學(xué)活性效應(yīng)，但近幾年的研究結(jié)果表明CRT除上述作用外，它在細(xì)胞遷移擴(kuò)散及細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因表達(dá)等方面均有直接的介導(dǎo)和調(diào)節(jié)作用。1997年，Zhu等人［9］通過(guò)對(duì)B16細(xì)胞CRT表達(dá)的深入研究發(fā)現(xiàn)實(shí)細(xì)胞內(nèi)的CRT分子常常與整合素粘附分子的α鏈胞內(nèi)區(qū)結(jié)合并成為雙向傳導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)的復(fù)合體；Coppolino等人［5］利用CRT缺乏而整合素表達(dá)正常的胚胎干細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞體外遷移粘附研究，證實(shí)在正常培養(yǎng)條件下干細(xì)胞的遷移擴(kuò)散能力很弱，而經(jīng)轉(zhuǎn)染CRT基因后，細(xì)胞的遷移粘附作用顯著增強(qiáng)。因此，Coppolino認(rèn)為細(xì)胞內(nèi)CRT與整合素粘附分子直接參與細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)、粘附、遷移擴(kuò)散等生物學(xué)活性功能。Tsai等［10］曾利用體外結(jié)締組織收縮模型發(fā)現(xiàn)增生性瘢痕組織來(lái)源的成纖維細(xì)胞在體外有著比正常皮膚成纖維細(xì)胞更強(qiáng)的遷移擴(kuò)[1][2]散能力，并認(rèn)為其作用可能與細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白絲積聚有關(guān)。筆者在博士后研究工作階段卻發(fā)現(xiàn)在相同培養(yǎng)條件下增生性瘢痕組織來(lái)源的成纖維細(xì)胞除有著較強(qiáng)遷移擴(kuò)散能力外，還具有高表達(dá)β1、α1、α2、α3及α4整合素粘附分子的特性［11］，從而提示瘢痕成纖維細(xì)胞的強(qiáng)遷移擴(kuò)散能力與高表達(dá)整合素粘附分子有關(guān)；而從本實(shí)驗(yàn)對(duì)CRT在瘢痕成纖維細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況來(lái)看，細(xì)胞內(nèi)其CRT表達(dá)并不屬持續(xù)性表達(dá)，CRT的高表達(dá)期一般是在細(xì)胞的遷移擴(kuò)散階段，而當(dāng)細(xì)胞融合后細(xì)胞內(nèi)CRT表達(dá)甚少。但就與同一時(shí)期培養(yǎng)的正常皮膚成纖維細(xì)胞相比，瘢痕成纖維細(xì)胞內(nèi)的CRT表達(dá)則顯得更為豐富。因此，結(jié)合我們以往的研究工作結(jié)果，我們認(rèn)為：瘢痕成纖維細(xì)胞異常的遷移擴(kuò)散能力是細(xì)胞內(nèi)豐富的CRT、整合素粘附分子表達(dá)及肌動(dòng)蛋白絲積聚共同作用的結(jié)果，其中積聚的肌動(dòng)蛋白絲是其異常遷移擴(kuò)散的重要?jiǎng)恿?lái)源，而有效表達(dá)的CRT及整合素粘附分子則是細(xì)胞與細(xì)胞外間質(zhì)之間遷移動(dòng)力的傳遞媒介；另外，CRT的豐富表達(dá)對(duì)瘢痕成纖維細(xì)胞鈣離子的儲(chǔ)存、釋放及其信號(hào)傳導(dǎo)等也有著重要的意義。參考文獻(xiàn)1KrauseKH,MichalakM.Calreticulin.Cell,1997,88:439-443.2TectorM,ZhangQ,SalterRD.Beta2-microglobulinandcalnexincanindependentlypromotefoldinganddisulfidebondformationinclassIhistocompatiblityproteins.MolImmunol,1997,34:401-408.3LiuH,BowesRC,van-de-WaterB,etal.EndoplasmicreticulumchaperonesGRP78andcalreticulinpreventoxidativestress,Ca2disturbances,andcelldeathinrenalepithelialcells.JBiolChem,1997,272:21751-21759.4BurnsK,OpasM,MichalakM.Calreticulininhibitsglucocorticoid-butnotcAMP-sensitiveexpressionoftyrosineaminotransferasegeneincultruedMcA-RH7777hepatocytes.MolCellBiochem,1997,171:37-43.5CoppolinoMG,WoodsideMJ,DemaurexN,etal.Calreticulinisessentialforintegrin-mediatedcalciumsignallingandcelladhesion.Nature,1997,386:843-847.6EggletonP,ReidKB,KishoreU,etal.Clinicalrelevanceofcalreticulininsystemiclupuserythematosus.Lupus,1997,6:564-571.7WiniskA,FosterC.ICAM-1expressioninaspontaneouslytransformedhumankeratinocytecellline:Characterizationbyasimplecell-ELISAassay.JInvestDermal,1992,99:48-52.8TredgetEE,NedelecB,Scott-PG,etal.Hypertrophicscars,keloids,andcontractures.Thecellularandmolecularbasisfortherapy.SurgClinNorthAm,1997,77:701-30.9ZhuQ,ZelinkaP,WhiteT,etal.Calreticulin-integrinbidirectionalsignalingcomplex.BiochemBiophysResCommun,1997,232:354-358.10TsaiCY,HataK,ToriiS,etal.Contractionpotencyofhypertrophicscar-derivedfibroblastsinaconnectivetissuemodel:invitroanalysisofwoundcontraction.AnnPlastSurg,1995,35:638-646.11趙燁德，何清濂，紀(jì)徐淮，等.瘢痕成纖維細(xì)胞整合素表達(dá)實(shí)驗(yàn)研究.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，19：330-332

【摘要】目的研制理想的能較快修復(fù)大段骨缺損的人工骨材料。方法將重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）/透明質(zhì)酸鈉纖維蛋白復(fù)合凝膠（HAFG）緩釋體系和多孔雙相鈣磷陶瓷（BCP）結(jié)合研制成BCP/HAFG-rhBMP-2人工骨，并分別將BCP/HAFG-rhBMP-2和BCP/rhBMP-2及BCP/HAFG人工骨進(jìn)行兔橈骨大段骨缺損修復(fù)的對(duì)比研究。術(shù)后分別行大體、放射學(xué)、組織形態(tài)學(xué)及生物力學(xué)測(cè)試。結(jié)果試驗(yàn)中第12周與第2周相比較，3組堿性磷酸酶（AKP）值下降情況分別為BPC/HAFG-rhBMP-2組降低了65.13%，BPC/BMP-2組降低了71.03%，BPC/HAFG組降低了58.59%。組織學(xué)及掃描電鏡觀察顯示:12周時(shí)BPC/HAFG-rhBMP-2組材料已基本被成熟骨組織所代替，新骨結(jié)構(gòu)與宿主骨無(wú)差別，而B(niǎo)PC/HAFG和BPC/rhBMP-2組骨小梁結(jié)構(gòu)疏松細(xì)小，材料仍未完全被降解，材料與骨組織間形成較大間隙。術(shù)后12周時(shí)3組材料植入部位骨組織極限抗壓強(qiáng)度分別為:BCP/HAFG-rhBMP-2組（538±12.7）N、BCP/BMP-2組（368±24.0）N、BCP/HAFG組（256±8.4）N。BPC/HAFG-BMP-2復(fù)合型人工骨較BCP/BMP-2及BCP/HAFG人工骨具有更強(qiáng)、更持久的誘導(dǎo)成骨活性。結(jié)論BCP/HAFG-rhBMP-2人工骨能更快促進(jìn)長(zhǎng)骨大段骨缺損的修復(fù)，是一種較理想的人工骨材料。

【關(guān)鍵詞】骨和骨組織;骨移植;生物力學(xué)

為尋找理想的人工骨組織材料，本實(shí)驗(yàn)將多孔雙相鈣磷陶瓷（BCP）同重組骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）/透明質(zhì)酸鈉（HA）和纖維蛋白復(fù)合凝膠（HAFG）緩釋體系結(jié)合，制成BCP/HAFG-rhBMP-2人工骨材料，進(jìn)行修復(fù)長(zhǎng)骨大段骨缺損的實(shí)驗(yàn)。

1材料與方法

1.1人工骨材料的制備

（1）BCP由東南大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院生物材料研究組研制提供。該BCP材料呈白色多孔狀結(jié)構(gòu)，孔道彼此連通，孔徑約為300μm，孔隙率為80%。試驗(yàn)中將BCP制成長(zhǎng)10mm，直徑4mm圓柱體。

【論文關(guān)鍵詞】缺血再灌注；凋亡；丹參；中藥；綜述

【論文摘要】細(xì)胞過(guò)度凋亡參與了缺血再灌注損傷(Ischimiareperfusioninjury,IRI)的發(fā)生。我國(guó)傳統(tǒng)中藥丹參可在細(xì)胞、分子、基因水平調(diào)控IRI時(shí)細(xì)胞凋亡的發(fā)生，從而對(duì)IRI具有良好的防治作用。

在肝、腎、腦等器官缺血再灌注損傷(Ischimiareperfusioninjury,IRI)造成的細(xì)胞死亡形式中，凋亡也是一種常見(jiàn)而重要的形式[1-4]。組織細(xì)胞一旦壞死，目前人們尚無(wú)辦法干預(yù)；但細(xì)胞凋亡是受一系列程序控制的過(guò)程，人們有可能通過(guò)干預(yù)死亡程序加以挽救。丹參經(jīng)現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)證實(shí)，對(duì)IRI時(shí)細(xì)胞過(guò)度凋亡有抑制作用，本文就此方面的內(nèi)容予以綜述。

1丹參對(duì)IRI時(shí)細(xì)胞凋亡的抑制作用

Wu.W等[5]利用原位細(xì)胞凋亡標(biāo)記(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateduridinenucleotideendlabeling,TUNEL)實(shí)驗(yàn)觀察到：左大腦中動(dòng)脈結(jié)扎后24h大鼠大腦皮層、尾狀核、豆?fàn)詈巳毖獏^(qū)出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞，24~48h達(dá)到高峰；預(yù)先給予丹參則在相應(yīng)部位只見(jiàn)到少量凋亡細(xì)胞；且與對(duì)照組比較，24h時(shí)間段組織損傷明顯減輕。提示丹參可能通過(guò)減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡對(duì)腦IRI發(fā)揮保護(hù)作用。丹參是否對(duì)其他器官也有類(lèi)似作用目前尚未明了。

2丹參抑制IRI時(shí)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制

摘要:隨著全面推進(jìn)素質(zhì)教育和樹(shù)立健康第一思想,高校體育鍛煉已經(jīng)成為大學(xué)生活中必不可少的一部分。大學(xué)生作為優(yōu)秀的青年群體,其素質(zhì)水平高低將直接影響到國(guó)家發(fā)展,膳食營(yíng)養(yǎng)是高素質(zhì)人才的基礎(chǔ)。然而現(xiàn)在大學(xué)生缺乏科學(xué)系統(tǒng)的營(yíng)養(yǎng)知識(shí),營(yíng)養(yǎng)不良、營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩分化比較明顯,飲食隨意性較大。采用文獻(xiàn)資料法、問(wèn)卷調(diào)查法、數(shù)理統(tǒng)計(jì)法等研究方法對(duì)江蘇師范大學(xué)學(xué)生飲食習(xí)慣、體育鍛煉投入情況等問(wèn)題進(jìn)行調(diào)查與研究。采取有效措施提高大學(xué)生自身營(yíng)養(yǎng)意識(shí)。督促大學(xué)生自身養(yǎng)成良好飲食習(xí)慣,從而促進(jìn)體育鍛煉效果提高。

關(guān)鍵詞:江蘇師范大學(xué);學(xué)生;膳食營(yíng)養(yǎng);體育鍛煉

合理營(yíng)養(yǎng)加體育鍛煉獲得健康同時(shí),同樣也獲得健康身體素質(zhì)。該文旨在了解江蘇師范大學(xué)學(xué)生膳食營(yíng)養(yǎng)狀況,熟知大學(xué)生體育鍛煉內(nèi)容和形式,分析合理飲食習(xí)慣及膳食制度在運(yùn)動(dòng)能力和健康狀況上的重要作用,對(duì)營(yíng)養(yǎng)搭配和體育鍛煉中存在問(wèn)題提出解決方案,為更好地加強(qiáng)大學(xué)生自身營(yíng)養(yǎng)意識(shí)進(jìn)一步提高體育鍛煉的效果提出合理化建議。

1研究對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

文章以江蘇師范大學(xué)學(xué)生195名為研究對(duì)象,其中男生100名,占51.3%,女生95名,占48.7%。

選擇能早期診斷缺血性心肌損傷的生化標(biāo)志物是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的一項(xiàng)重要工作，這是因?yàn)椴簧傺芯慷贾赋鋈芩ㄖ委煹寞熜Ш瓦M(jìn)行治療時(shí)間的早晚密切相關(guān)。Rawles［1］曾估計(jì)每延遲治療1h有可能增加30d死亡率21‰。但另一方面溶栓治療有一定危險(xiǎn)性，可引起腦出血等嚴(yán)重合并癥，只憑經(jīng)驗(yàn)或臨床征狀就冒然進(jìn)行溶栓治療顯然也是不恰當(dāng)?shù)?。美?guó)心臟學(xué)會(huì)在其提出的"急性心肌梗死（AMI）患者治療導(dǎo)則"［2］中認(rèn)為只有當(dāng)急性心肌梗死患者心電圖出現(xiàn)ST段上升時(shí)，才考慮給以溶栓治療，這種提法似乎保守一些，有可能漏掉一些征狀不典型但卻應(yīng)該進(jìn)行溶栓治療的患者。所以如果檢驗(yàn)工作者能夠找出一些更有效的心肌損傷早期生化標(biāo)志物，無(wú)疑會(huì)給臨床以莫大的幫助。

在以往尋找心肌損傷生化標(biāo)志物的工作中，往往集中在尋找由于心肌壞死后，釋放出來(lái)的心臟特異的酶或蛋白質(zhì)。心肌胞質(zhì)中的小分子蛋白比結(jié)構(gòu)蛋白更容易進(jìn)入血循環(huán)。現(xiàn)已證實(shí)肌紅蛋白（相對(duì)分子質(zhì)量17000）以及CK-MB亞型,即MB1/MB2比值是目前公認(rèn)的2個(gè)早期生化標(biāo)志物。但是壞死病變不是患病后立刻出現(xiàn)的，在壞死出現(xiàn)前先經(jīng)過(guò)一個(gè)可逆的缺氧階段。所以如果只注意檢查壞死損傷所釋放的物質(zhì)，很難在發(fā)病后短時(shí)間內(nèi)查出心肌損傷病變。

近年來(lái)對(duì)于急性缺血性心臟病的病理生理有了更多的了解，不僅認(rèn)識(shí)到穩(wěn)定性心絞痛的發(fā)生和動(dòng)脈壁的粥樣斑塊形成有關(guān)，還認(rèn)識(shí)到斑塊破裂是病變發(fā)展的基本因素。Fuster等［3］認(rèn)為，冠狀動(dòng)脈心臟病的發(fā)展有2個(gè)階段，第一階段是動(dòng)脈粥樣斑塊的形成，此斑塊表面有一完整的纖維帽，上面覆蓋一層內(nèi)皮細(xì)胞，此時(shí)患者往往無(wú)征狀或在勞動(dòng)缺氧時(shí)出現(xiàn)心絞痛。第二階段則是由于斑塊破裂引起一系列病變：如內(nèi)皮細(xì)胞功能下降；脂質(zhì)進(jìn)入血管壁；出現(xiàn)炎癥病變，單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為活化的巨噬細(xì)胞；低密度脂蛋白被氧化形成氧化低密度脂蛋白；產(chǎn)生生長(zhǎng)因子，反過(guò)來(lái)?yè)p傷內(nèi)皮細(xì)胞，釋放多種血栓形成因子，如：vW因子、V因子等。所有這些因素，再加上血小板活化，極可能形成冠狀動(dòng)脈血栓。血栓的形成是多種作用如血液流體力學(xué)、血管壁各種因子成份、血小板活化、血凝和纖溶系統(tǒng)等相互影響、平衡的結(jié)果。

一旦血栓形成，冠狀動(dòng)脈血流受限可能引起心肌缺血，出現(xiàn)不穩(wěn)定心絞痛，病情進(jìn)一步發(fā)展或者直接出現(xiàn)急性心肌梗死。一般認(rèn)為Q波心梗往往與冠狀動(dòng)脈完全阻塞有關(guān)，無(wú)Q波心肌梗死的冠狀動(dòng)脈常出現(xiàn)血管不完全栓塞。

根據(jù)上述理論，Wu等［4］提出一些可能成為冠狀動(dòng)脈心臟病早期病變的標(biāo)志物。見(jiàn)表1。表1中大部分標(biāo)志物都出現(xiàn)在目前公認(rèn)的心肌壞死標(biāo)志物之前。表中標(biāo)志物有一部分可能成為冠心病的早期診斷指標(biāo)。但缺點(diǎn)也是明顯的，因?yàn)樗鼈兇蠖鄶?shù)只表示存在炎癥或血栓等病理變化，并不意味一定存在心肌壞死。同時(shí)這些指標(biāo)很難鑒別診斷不穩(wěn)定心絞痛和急性心肌梗死。但無(wú)論如何這些指標(biāo)變化對(duì)于冠心病的治療是很有價(jià)值的，臨床醫(yī)師可以針對(duì)患者的這些病變，采取及時(shí)的對(duì)癥治療，防止病變的進(jìn)一步發(fā)展。下面對(duì)表1列舉的標(biāo)志物作一介紹。

表1可能成為心肌損傷的早期標(biāo)志物