導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫(xiě)好一篇液相色譜儀，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

尹 亮 安徽省計(jì)量科學(xué)研究院 230051

【文章摘要】

我國(guó)在經(jīng)濟(jì)發(fā)展的時(shí)期，每一個(gè)行業(yè)也都在快速發(fā)展，特別是工業(yè)等快速的發(fā)展，促進(jìn)了經(jīng)濟(jì)的大發(fā)展。但是由于行業(yè)的快速發(fā)展，導(dǎo)致行業(yè)的內(nèi)部也是良莠不齊，因此需要對(duì)生產(chǎn)產(chǎn)品用水加以嚴(yán)格的質(zhì)量分析，這就應(yīng)用到了液相色譜法，來(lái)分析水的質(zhì)量，以便保證水被應(yīng)用到產(chǎn)品中是符合規(guī)定的，減少造成生命危害的幾率。

【關(guān)鍵詞】

液相色譜儀；結(jié)構(gòu)；維護(hù)

0 前言

隨著社會(huì)的進(jìn)步，每個(gè)行業(yè)產(chǎn)品的進(jìn)步，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)某些不法分子不用合格的水等，就需要用到液相色譜儀進(jìn)行一定的分析，看是否符合實(shí)際的用水標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量。但是由于液相色譜儀是一種高科技技術(shù)，對(duì)本身使用有著一定的要求。并且由于這種技術(shù)給了檢測(cè)水質(zhì)帶來(lái)了一定的方便，還使得檢測(cè)更加準(zhǔn)確，使得這種技術(shù)很受歡迎。但是由于技術(shù)的不斷發(fā)展，還會(huì)出現(xiàn)對(duì)水質(zhì)要求更加嚴(yán)格的產(chǎn)業(yè)，因此就需要技術(shù)不斷的更新發(fā)展，以便滿足產(chǎn)業(yè)要求。

1 液相色譜法的定義和作用

液相色譜法是一種快速有效的有機(jī)化合物分析技術(shù)，在分析測(cè)定有機(jī)化合物方面，以其快速、靈敏、選擇性好的特點(diǎn)， 倍受分析工作者青睞，是環(huán)境監(jiān)測(cè)、衛(wèi)生防疫、石油化工、食品生產(chǎn)等行業(yè)作為水質(zhì)分析的標(biāo)準(zhǔn)儀器。

2 保養(yǎng)液相色譜儀的重要意義

液相色譜儀是是一個(gè)高科技的，高精密度的儀器。它不僅能夠在一定時(shí)間內(nèi)， 能夠有效細(xì)致的分析出水質(zhì)如何，還能分析出水中的各種物質(zhì)的含量等。因此這種儀器就需要使用者更加重視保養(yǎng)。只有保養(yǎng)得當(dāng)，才能最大限度的延長(zhǎng)儀器的使用壽命。并且能夠保證儀器的精密度，準(zhǔn)確性。使得儀器在檢測(cè)過(guò)程中能夠更加準(zhǔn)確檢測(cè)出水中的物質(zhì)，分辨更加清晰。因此為了保證儀器分析的靈敏度和準(zhǔn)確性，都要保證對(duì)液相色譜儀進(jìn)行良好的保養(yǎng)。以便能夠在使用過(guò)程中更加放心其檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性。

液相色譜法是一種快速有效的有機(jī)化合物分析技術(shù)，在分析測(cè)定有機(jī)化合物方面，以其快速、靈敏、選擇性好的特點(diǎn)， 倍受分析工作者青睞，是環(huán)境監(jiān)測(cè)、衛(wèi)生防疫、石油化工、食品生產(chǎn)等行業(yè)作為水質(zhì)分析的標(biāo)準(zhǔn)儀器。

這樣的儀器在使用過(guò)程中也會(huì)因?yàn)槠渚苄愿拥娜菀资艿酵饨绛h(huán)境變化以及水質(zhì)等問(wèn)題的影響，甚至?xí)霈F(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的偏差。因此為了檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)有效，并且要延長(zhǎng)液相色譜儀的使用壽命以及保證儀器的良好運(yùn)轉(zhuǎn)，就需要對(duì)儀器進(jìn)行及時(shí)的維護(hù)和保養(yǎng)，這樣才能保證在所有的檢測(cè)過(guò)程當(dāng)中，檢驗(yàn)的更加的真實(shí)。

3 高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)和原理

高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，在技術(shù)上，流動(dòng)相改為高壓輸送；色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜；同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器，可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)。

由于液相色譜儀是一件精密的儀器， 在使用的過(guò)程中，主要應(yīng)用到了物理和化學(xué)的相關(guān)知識(shí)。在世界上所有的物體都有自己獨(dú)特的生物波和有機(jī)構(gòu)成，這樣在使用液相色譜儀的時(shí)候，就會(huì)根據(jù)每一種食物的特性，應(yīng)用相關(guān)的液體，把要檢測(cè)的液體進(jìn)行分離，并在液相色譜儀上進(jìn)行分解出來(lái)，這樣使得被檢測(cè)的液體能夠被有效的分析出來(lái)，從而使得液體的成分也都可以清晰的看見(jiàn)，并肯居所得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以便保證分析結(jié)果的有效性和真實(shí)性，從而達(dá)到檢測(cè)液體所需要的結(jié)果。

4 操作注意事項(xiàng)

對(duì)于這樣一種精密的儀器，不僅需要在操作之后進(jìn)行仔細(xì)的保養(yǎng)，更要在使用過(guò)程中對(duì)使用者的操作加以規(guī)范，以便保證儀器能夠在使用過(guò)程中不遭受破壞， 確保儀器在正常規(guī)范的使用方法下，得出最準(zhǔn)確的使用的數(shù)據(jù)。幫助使用者技術(shù)人員進(jìn)行分析。因此要想達(dá)到更好的使用效果，就需要對(duì)操作過(guò)程中的事項(xiàng)十分的注意，以減少出現(xiàn)錯(cuò)誤。

4.1 色譜柱的柱效和保護(hù)柱

拿到一根新柱時(shí)，一定要先看其使用說(shuō)明，然后測(cè)柱效，定期檢測(cè)柱效，保留在新色譜柱上得到的色譜圖，并記錄條件， 定期檢測(cè)儀器的譜帶展寬，若應(yīng)用于在線監(jiān)測(cè)，應(yīng)對(duì)色譜柱提供在線的物理保護(hù)和化學(xué)保護(hù)，例如采取安裝在線過(guò)濾器，自裝填料保護(hù)柱和預(yù)裝保護(hù)柱等。

在線過(guò)濾器的作用是防止顆粒在柱頭累計(jì)，優(yōu)點(diǎn)是基本不影響柱效，在需要高柱效的時(shí)候常用，常更換的消耗品是濾芯和墊圈。

保護(hù)柱的作用是防止柱子被化學(xué)污染，缺點(diǎn)是多數(shù)保護(hù)柱影響色譜柱的柱效，特別是在用微柱時(shí)，常用的是普通自裝填料的保護(hù)柱。

但是現(xiàn)在由于技術(shù)的進(jìn)步，也出現(xiàn)了一些更加進(jìn)步的保護(hù)住。不僅能夠滿足過(guò)去本來(lái)保護(hù)住應(yīng)有的特點(diǎn)，又增加了新的技術(shù)特點(diǎn)，使得保護(hù)住更加符合時(shí)代的要求。其特點(diǎn)是，高質(zhì)量、高效填料、增加分析柱效、對(duì)臟樣品載荷能力大，能延長(zhǎng)保護(hù)柱壽命，手可擰緊接頭，可換芯式設(shè)計(jì)， 能采用各種不同的填料，主要適用于非常臟非常復(fù)雜的樣品本底。

4.2 色譜柱的清洗

由于色譜柱是液相色譜儀這個(gè)精密儀器的重要一個(gè)組成部分，因此對(duì)于他的清洗要根據(jù)相關(guān)的規(guī)定進(jìn)行操作，并且有相關(guān)的清洗液體，只有嚴(yán)格按照規(guī)定進(jìn)行清洗，才能保證色譜柱的清洗特別的干凈，從而不影響下一次的使用，不影響下一次的檢測(cè)效果。

4.3 色譜柱的存放

色譜柱由于本身的特性決定了它存在的環(huán)境。為了減少空氣和周?chē)h(huán)境對(duì)他的污染，以及增加色譜柱的使用次數(shù)，在正確清洗之后，要把它放在規(guī)定的地方， 這里的空氣溫度濕度都是有嚴(yán)格規(guī)定的， 只有這樣才能保證色譜柱在下次使用的有效性和檢驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。

5 色譜柱的常見(jiàn)故障及排除

5.1 柱壓過(guò)高

可能是微粒堵塞，柱床膨脹，不可逆吸附，細(xì)菌生長(zhǎng)等造成的。也有可能是系統(tǒng)反壓?jiǎn)栴}，例如阻尼器堵塞，進(jìn)樣器堵塞，管路或連接口堵塞，在線過(guò)濾器不干凈，壓力傳感器不準(zhǔn)確等。

5.2 柱效低

可能是色譜柱被污染、過(guò)濾片部分堵塞、色譜柱內(nèi)的死體積造成，例如流動(dòng)相pH 值或者組成不合適造成固定相損失，流動(dòng)相急劇變化造成固定相物理?yè)p壞，機(jī)械振動(dòng)造成固定相產(chǎn)生裂縫，柱床收縮或干枯。

5.3 重復(fù)性差、不出峰、回收率低

在使用儀器進(jìn)行檢測(cè)的時(shí)候，是會(huì)受到色譜柱的效果影響的。在液相色譜儀中，要想保證得到的效果好，就需要保證色譜柱的使用效果好。但是現(xiàn)在的色譜柱更多會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性差、不出峰、回收率低的問(wèn)題，這樣就會(huì)導(dǎo)致在色譜柱上回收的信號(hào)時(shí)不準(zhǔn)確，有缺失的。并且得到的結(jié)果也會(huì)是偏差很大的，因此需要在色譜柱回收信息的過(guò)程加以重視并改進(jìn)色譜柱， 以便保證結(jié)果的可靠性。

6 結(jié)束語(yǔ)

對(duì)于液相色譜儀來(lái)說(shuō)，它在每一個(gè)行業(yè)都處于十分重要的位置，因?yàn)橥ㄟ^(guò)它可以檢測(cè)出水質(zhì)的好壞。但是這種高科技的儀器，通常也是一臺(tái)十分精密的儀器。如果不能保養(yǎng)好，就會(huì)給它在成一定的損害，就會(huì)影響它的使用壽命以及儀器的見(jiàn)擦結(jié)果。所以在使用過(guò)程中，要嚴(yán)格按照使用說(shuō)明來(lái)進(jìn)行，并且在每一次受用完成后，都要清潔保養(yǎng)。

【參考文獻(xiàn)】

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【關(guān)鍵詞】高效液相色譜 維護(hù) 保養(yǎng) 故障分析

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，它是以高壓下的液體為流動(dòng)相的色譜過(guò)程。它所用的固定相粒度小，有傳質(zhì)快、柱效高等特點(diǎn)。高效液相色譜法（HPLC）是60 年代后期發(fā)展起來(lái)的一種具有高靈敏度、高選擇性的高效快速分離分析技術(shù)。由于液相色譜具有高分辨率、高靈敏度、速度快、流出組分易被收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用到醫(yī)藥分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品分析等各種領(lǐng)域。

在使用液相色譜中，會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題，現(xiàn)將在使用過(guò)程中的維護(hù)及常見(jiàn)故障解決方法介紹如下：

1 維護(hù)與保養(yǎng)

1.1 環(huán)境條件

液相色譜儀應(yīng)放置在有足夠空間的、穩(wěn)固的、無(wú)振動(dòng)的水平臺(tái)面上，房間內(nèi)應(yīng)無(wú)灰塵、無(wú)輻射、無(wú)磁場(chǎng)、有排風(fēng)設(shè)施。實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)控制在10-30℃，濕度應(yīng)≤80%。

1.2 開(kāi)機(jī)

打開(kāi)系統(tǒng)和工作站，檢查所用流動(dòng)相和色譜柱是否正確，流動(dòng)相是否已經(jīng)過(guò)濾排氣，設(shè)置好保護(hù)壓力，對(duì)系統(tǒng)先進(jìn)行排氣操作，確保系統(tǒng)中無(wú)氣泡后再慢慢的將流速調(diào)大，以達(dá)到保護(hù)色譜柱的目的。待系統(tǒng)穩(wěn)定后，再進(jìn)行進(jìn)樣操作。

1.3 樣品準(zhǔn)備

由于很多樣品是復(fù)雜的混合物，易堵塞、污染系統(tǒng)和色譜柱，因此在進(jìn)入液相色譜儀之前應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。可通過(guò)離心、萃取、過(guò)濾等方法將樣品中難溶解的雜質(zhì)或干擾物質(zhì)除去。然后再用流動(dòng)相將樣品稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛冗M(jìn)樣。此外，可在色譜柱前加一預(yù)柱，進(jìn)一步保護(hù)色譜柱不被污染，延長(zhǎng)使用壽命。

1.4 關(guān)機(jī)

液相色譜儀使用完畢后，可先將檢測(cè)器關(guān)掉，以延長(zhǎng)燈壽命。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)先用5%的甲醇水溶液沖洗系統(tǒng)30分鐘，然后再用甲醇沖洗20分鐘后停流速、關(guān)機(jī)。

1.5 泵

泵的密封圈是泵最容易損壞的一個(gè)部件，密封圈的損壞會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)工作不正常?？梢愿鶕?jù)泵的使用頻率以及使用情況來(lái)更換泵的密封圈。密封圈的壽命主要跟密封圈的材質(zhì)，壓力大小以及緩沖液有密切關(guān)系。因此每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要把泵中的緩沖液洗干凈以防止鹽沉積，同時(shí)使用過(guò)濾濾芯，以防止因泵堵塞導(dǎo)致壓力過(guò)大而燒壞電機(jī)。

2 常見(jiàn)故障解決方法

2.1 系統(tǒng)壓力異常

2.1.1無(wú)壓力

開(kāi)泵后系統(tǒng)無(wú)壓力顯示?？赡艿脑蛴校罕妙^內(nèi)有空氣；溶劑瓶?jī)?nèi)無(wú)流動(dòng)相；單向閥堵塞；系統(tǒng)漏液；壓力傳感器損壞；柱塞桿折斷。

排除方法：將溶劑瓶?jī)?nèi)加滿流動(dòng)相，打開(kāi)排氣閥排氣，使系統(tǒng)管路中無(wú)氣泡存在；單向閥堵塞或污染后，可將其拆下置異丙醇中超聲清洗，然后再重新裝入；如有漏液，重新接管路排除；如果是壓力傳感器或柱塞桿折斷導(dǎo)致無(wú)壓力，則需更換新的配件。

2.1.2柱壓持續(xù)偏高或不斷上升

開(kāi)泵后柱壓持續(xù)偏高或不斷上升，可能的原因有：流動(dòng)相使用不當(dāng)；單向閥臟；保護(hù)柱或色譜柱篩板臟；線路過(guò)濾器堵塞。

排除方法：確保使用的流動(dòng)相正確；將單向閥拆下置異丙醇中超聲清洗；如果保護(hù)柱臟了，需更換新的，如果色譜柱篩板臟，需將色譜柱篩板取下用異丙醇清洗后重新裝入；線路過(guò)濾器導(dǎo)致壓力高需更換新的。

2.1.3壓力波動(dòng)

開(kāi)泵后壓力波動(dòng)較大，超出正常范圍，可能的原因有：泵頭內(nèi)有氣泡；單向閥臟或損壞；柱塞桿密封圈磨損嚴(yán)重。

排除方法：打開(kāi)排氣閥將氣泡排除；用異丙醇超聲清洗單向閥或更換新的；更換新的柱塞桿密封圈。

2.2 漂移問(wèn)題

漂移問(wèn)題主要包括基線漂移和保留時(shí)間漂移

2.2.1基線漂移

液相色譜儀剛啟動(dòng)時(shí)，基線容易發(fā)生漂移，平衡一段時(shí)間后漂移現(xiàn)象就會(huì)消失，如果使用緩沖溶液或緩沖鹽，或在低波長(zhǎng)下平衡時(shí)間相對(duì)增加，這都是正?，F(xiàn)象。若實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)基線漂移，則可能是由以下原因引起：

（1） 柱溫波動(dòng)

即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類(lèi)檢測(cè)器。

排除方法：控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測(cè)器之前使用熱交換器。

（2） 流動(dòng)相不均勻

流動(dòng)相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。

排除方法：使用HPLC 級(jí)的溶劑，高純度的鹽和添加劑，流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。

（3） 流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成變化

排除方法：檢查流動(dòng)相的組成；使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。

（4） 樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)

樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)（高K 值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線。

排除方法：使用保護(hù)柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。

（5）檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)在最大波長(zhǎng)處

排除方法：這時(shí)只需要將檢測(cè)器調(diào)至最大波長(zhǎng)處即可解決問(wèn)題。

2.2.2保留時(shí)間漂移

保留時(shí)間的改變是很多液相色譜使用者常碰到的問(wèn)題。其包括了保留時(shí)間增大和減小，它的產(chǎn)生與很多原因有關(guān)。保留時(shí)間的漂移往往由柱老化引起，而柱老化不可能引起保留時(shí)間的無(wú)規(guī)律波動(dòng)。事實(shí)上，保留時(shí)間漂移的多半原因是由于不同機(jī)理的色譜柱老化，如固定相流失（例如通過(guò)水解） ，色譜柱污染（由樣品或流動(dòng)相所致）等。保留時(shí)間漂移的幾種最常見(jiàn)的原因和解決方法如下：

（1）系統(tǒng)不平衡

應(yīng)使用充足的時(shí)間來(lái)平衡整個(gè)系統(tǒng)，特別在色譜柱第一次使用離子對(duì)試劑時(shí)，要有充足時(shí)間和流動(dòng)相體積來(lái)平衡色譜柱，每次開(kāi)機(jī)使用平衡時(shí)間至少0.5-1h，在改變流動(dòng)相是也需要0.5h來(lái)重新平衡柱子。

（2）溫度變化

溫度變化可引起保留時(shí)間漂移，這時(shí)應(yīng)設(shè)定一個(gè)穩(wěn)定的恒定溫度。當(dāng)室溫較所需溫度大時(shí)應(yīng)適當(dāng)提高柱溫。

（3）色譜柱被污染

由于色譜柱被污染導(dǎo)致保留時(shí)間漂移時(shí)，更換新的色譜柱子即可解決保留時(shí)間漂移的問(wèn)題。

（4）梯度滯后時(shí)間設(shè)置不正確

檢驗(yàn)泵和流路系統(tǒng)維護(hù)記錄，確定系統(tǒng)最后使用之前有無(wú)調(diào)整。如果有變化，重新計(jì)算新的梯度滯后體積。

（5）流動(dòng)相組成

流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等，應(yīng)防止流動(dòng)相由于蒸發(fā)、反應(yīng)等原因造成的變化。

3 峰形異常

3.1 前延峰和拖尾峰

導(dǎo)致前延峰和拖尾峰的原因有：保護(hù)柱或色譜柱篩板臟；色譜柱柱頭塌陷；柱外效應(yīng)；可能有干擾峰；樣品過(guò)載；溶解樣品的溶劑選擇不當(dāng)。

排除方法：如果保護(hù)柱臟了，需更換新的，如果色譜柱篩板臟，需將色譜柱篩板取下用異丙醇清洗后重新裝入；色譜柱柱頭塌陷應(yīng)更換新的色譜柱；應(yīng)確保各個(gè)接頭連接良好，無(wú)柱外效應(yīng)；確保無(wú)干擾峰；減少樣品的進(jìn)樣量或降低樣品濃度；盡量選用流動(dòng)相溶解樣品以排除溶劑效應(yīng)。

3.2 分叉峰

導(dǎo)致分叉峰的原因有：保護(hù)柱或色譜柱篩板臟；色譜柱柱頭塌陷；柱外效應(yīng)；可能有干擾峰；溶解樣品的溶劑選擇不當(dāng)。

排除方法：如果保護(hù)柱臟了，需更換新的，如果色譜柱篩板臟，需將色譜柱篩板取下用異丙醇清洗后重新裝入；色譜柱柱頭塌陷應(yīng)更換新的色譜柱；應(yīng)確保各個(gè)接頭連接良好，無(wú)柱外效應(yīng)；確保無(wú)干擾峰；盡量選用流動(dòng)相溶解樣品以排除溶劑效應(yīng)。

3.3 峰展寬

導(dǎo)致峰展寬的原因有：樣品過(guò)載；流動(dòng)相粘度高或流速低；柱外效應(yīng)。

排除方法：減少樣品的進(jìn)樣量或降低樣品濃度；增加柱溫箱溫度使流動(dòng)相粘度降低或增加流速；確保各個(gè)接頭連接良好，無(wú)柱外效應(yīng)。

3.4 鬼峰

出現(xiàn)鬼峰的原因有：進(jìn)樣閥中有殘留；樣品臟；柱子未平衡好；流動(dòng)相不潔凈。

排除方法：用合適的溶劑反復(fù)清洗進(jìn)樣閥，確保無(wú)殘留；將樣品進(jìn)行預(yù)處理，確保無(wú)干擾物質(zhì)；給柱子充分的平衡時(shí)間；確保配制流動(dòng)相的試劑（包括水）都是干凈無(wú)污染的。

用上述方法解決實(shí)際工作中遇到的問(wèn)題收效良好，做到了有的放矢，有問(wèn)題能夠得到及時(shí)解決，而且延長(zhǎng)了儀器的使用壽命，使儀器的性能得到了最大限度的發(fā)揮。保證了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，降低了檢測(cè)成本。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉春偉. 高效液相色譜儀使用中常見(jiàn)故障及對(duì)策[J].商品與質(zhì)量.2012，5：326

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【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法 食品 人工色素 技術(shù)研究

食品中的人工合成色素為化學(xué)合成方法所制備的，以苯、甲苯、萘等化工產(chǎn)品作為原料，經(jīng)一系列反應(yīng)合成制得。目前食品中合成色素濫用現(xiàn)象嚴(yán)重，食品合成色素檢測(cè)已經(jīng)成為食品檢查工作中一項(xiàng)重要內(nèi)容[1]。本次研究中建立了高效液相色譜法對(duì)食品中人工色素進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 材料與方法

（1）儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)中所需儀器為我實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有高效液相色譜儀，電子天平、旋渦混合儀、超聲波清洗機(jī)、恒溫水浴鍋、高速離心機(jī)、純水器。

實(shí)驗(yàn)試劑包括：甲醇、乙腈均為色譜純，乙酸銨、乙酸鉛為分析純，日落黃（0.500mg/mL）、檸檬黃（0.500mg/mL）、莧菜紅 （0.500mg/mL）、亮藍(lán)（0.500mg/mL）、胭脂紅（0.500mg/mL）、赤蘚紅（100mg/L）以及誘惑紅（100mg/L）標(biāo)準(zhǔn)品。

（2）樣品來(lái)源：本次實(shí)驗(yàn)中樣品來(lái)源于周邊超時(shí)、零售攤點(diǎn)以及菜市場(chǎng)食品。

（3）方法：（a）標(biāo)準(zhǔn)品配制：將上述7種標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)濃度為20%的甲醇進(jìn)行溶解制成質(zhì)量濃度為100mg/l的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在4℃條件下保存。將制備好的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液經(jīng)濃度為20%的甲醇稀釋成不同濃度（0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg/l）的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，先用現(xiàn)配。（b）色譜條件：實(shí)驗(yàn)中所需色譜柱為Venusil MP C18柱，柱溫設(shè)定為30℃，流動(dòng)相A相為甲醇乙腈，B相為濃度為0.02mol/l的乙酸銨溶液，流速為1.0ml/min，梯度洗脫：0-12.0 min時(shí)A相5%，12-30min時(shí)A相自5%-35%，30-35min時(shí)A相自35%-98%，35-35.1min是A相在98%-4%，35.1-55min時(shí)A相維持5%。進(jìn)樣量為10ul，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為：檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃為254nm，誘惑紅、赤蘚紅為500nm，亮藍(lán)為600nm。分別展開(kāi)線性關(guān)系考察、加樣回收實(shí)驗(yàn)、精密度實(shí)驗(yàn)。（c）樣品處理：所取樣品進(jìn)行處理后取上清液，在10ml的離心管中在10000r/min條件下離心操作5min，經(jīng)0.45微孔濾膜過(guò)濾后備用。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察結(jié)果

本次試驗(yàn)中7種人工合成色素0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0mg/l不同濃度溶液經(jīng)1.3.2色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，以峰面積為縱坐標(biāo)，以色素濃度為橫坐標(biāo)，的線性回歸方程，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，色素濃度在0.5-20.0mg/l時(shí)存在良好線性關(guān)系，r>0.9991，詳見(jiàn)表1。

2.2 加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果和精密度

本次實(shí)驗(yàn)中在樣品中分別添加各色素含量為3、15、40mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)品，以1.3.2所示色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，外標(biāo)法進(jìn)行定量，計(jì)算回收率和RSD值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，7中色素加樣回收率在78.6%-100.7%之間，RSD值在0.2%-4.3%之間，詳見(jiàn)表2。

3 討論

近幾年的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法在藥學(xué)、食品等諸多領(lǐng)域均發(fā)揮了重要作用，為含量測(cè)定、質(zhì)量控制等工作提供了可靠的參考依據(jù)[2]。本次實(shí)驗(yàn)中建立的高效液相色譜法在7種食品人工合成色素檢測(cè)中，色素濃度在0.5-20.0mg/l之間時(shí)存在良好線性關(guān)系，回收率在78.6%-100.7%之間，相對(duì)較高， RSD值在理想范圍內(nèi)，精密度良好，檢測(cè)效果理想，在大批量樣品中多種色素檢測(cè)中可發(fā)揮重要作用，值得對(duì)其給予重視并推廣，為今后的食品安全檢驗(yàn)工作提供參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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關(guān)鍵詞：高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法；不確定評(píng)定；測(cè)量方法

一、高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法

1.高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法的引進(jìn)條件

眾所周知，測(cè)量始終是分析某物質(zhì)不可避開(kāi)的方法，并且也是確定物質(zhì)各項(xiàng)指標(biāo)是否合格，以及各成分，還有個(gè)成分之間如何發(fā)生反應(yīng)以及之后的各項(xiàng)指標(biāo)的重要方法，但是單一的測(cè)量方法存在著很多的不足之處，而在測(cè)量之中任何一點(diǎn)小的紕漏都有可能造成最后的巨大損失，所以在現(xiàn)實(shí)的嚴(yán)峻條件之下，為了更好更全面地發(fā)揮測(cè)量的效果和應(yīng)有的準(zhǔn)確度，引進(jìn)了高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法。在此之前，國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）曾于1993了《測(cè)量不確定度表示指南》，這樣的標(biāo)準(zhǔn)曾是國(guó)際上用于測(cè)評(píng)物品的最低準(zhǔn)則，而高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法也是在嚴(yán)格依據(jù)指南上的說(shuō)明來(lái)進(jìn)行創(chuàng)造發(fā)明的方法，也正是因?yàn)檫@樣的標(biāo)準(zhǔn)使得高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法在起點(diǎn)之處的效果就高于普通的校準(zhǔn)方法。此外，國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局也曾于1999年批準(zhǔn)頒布過(guò)JJF1059-1999《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》。而這之中德CNAL/AC01∶2005《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則》（等同于ISO/IEC17025∶2005）中5.4.6對(duì)有關(guān)不確定測(cè)量的相關(guān)方法進(jìn)行了明確的規(guī)定，包括對(duì)實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)有的用于測(cè)量的設(shè)備配套設(shè)施，還有在測(cè)量之中應(yīng)該遵循的程序守則。也正是因?yàn)檫@種測(cè)量效果的有效性和權(quán)威性，在基本的測(cè)量方法被普及之后，各大報(bào)告中均要求在最后提交的時(shí)候附上關(guān)于高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法及不確定評(píng)定的評(píng)價(jià)結(jié)果，舉一個(gè)明顯的例子，在參加能力驗(yàn)證和比對(duì)中，就要求附上不確定評(píng)定的最后結(jié)果。

2.高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法的具體操作原理

高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法一般采用的方法，是根據(jù)液體的最小濃度來(lái)進(jìn)行差量檢測(cè)，而根據(jù)國(guó)家的的對(duì)于液體的最新研究顯示，液體中的濃度的測(cè)量時(shí)液體中最敏感的地方，其敏感度超過(guò)了所有的其他指標(biāo)，是能夠準(zhǔn)確得出測(cè)量結(jié)果的標(biāo)桿，也因此成為了測(cè)量的最重要的指標(biāo)之一。在測(cè)量中，利用高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法來(lái)進(jìn)行基本的測(cè)量，然后再通過(guò)對(duì)測(cè)量的結(jié)果進(jìn)行分析合成，就能得到初步的結(jié)果。試驗(yàn)條件之下對(duì)液體的最小濃度的檢測(cè)，在達(dá)到了一個(gè)極點(diǎn)之后，整體上就會(huì)成為一個(gè)飽和的狀態(tài)，在這種飽和狀態(tài)之下的液體很難檢測(cè)出所想要的數(shù)據(jù)和效果，所以在液體到達(dá)飽和狀態(tài)之前就必須要能夠測(cè)量出有效地的結(jié)果，這就對(duì)測(cè)量的時(shí)間效應(yīng)有了嚴(yán)格的要求，而高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器的優(yōu)勢(shì)之一就是其對(duì)時(shí)間的把握度能夠高于普通的儀器，這樣不僅能夠節(jié)省相應(yīng)的時(shí)間，也能夠在保證試驗(yàn)效果的同時(shí)，盡量避免對(duì)檢測(cè)物品的浪費(fèi)，（因?yàn)橐坏┪锲分劣诳諝庵?，則會(huì)很開(kāi)與空氣產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，在這樣的化學(xué)反應(yīng)之下，不僅是液體的純度會(huì)發(fā)生變化，需要檢測(cè)到的液體的相關(guān)數(shù)據(jù)也會(huì)因?yàn)榛瘜W(xué)反應(yīng)產(chǎn)生質(zhì)的變化，這樣便會(huì)導(dǎo)致最后的測(cè)量結(jié)果出現(xiàn)差錯(cuò)）

除此之外，最新發(fā)表的歐洲《質(zhì)量控制文件》中也提供了具體的供高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法如何操作和具體的流程做出了詳細(xì)的解釋和說(shuō)明。在參考控制文件之中，提出了通過(guò)高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法在進(jìn)行測(cè)量的時(shí)候，應(yīng)該對(duì)被檢測(cè)的液體的體積，殘?bào)w，密度等進(jìn)行具體的測(cè)量，而在測(cè)量之后還應(yīng)該進(jìn)行至少5次以上的重復(fù)測(cè)量，在這樣的測(cè)量結(jié)束之后，建立相關(guān)的體積誤差，殘液留樣的數(shù)據(jù)分析對(duì)比，并且通過(guò)重復(fù)性檢測(cè)建立復(fù)式校準(zhǔn)方法，最后保證經(jīng)評(píng)定之后的效果進(jìn)樣體積誤差的相對(duì)擴(kuò)展不確定度為1.8%。通過(guò)具體的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行限定，不僅能夠提高檢測(cè)的效率，還能減少成本的使用你，是一個(gè)利益雙得的兩全之法，同時(shí)這樣的檢測(cè)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定也是為之后的高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器的校準(zhǔn)進(jìn)行其他類(lèi)似的校準(zhǔn)時(shí)準(zhǔn)去的依據(jù)保證和方法經(jīng)驗(yàn)的提供。

二、高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法及不確定度評(píng)定的具體效果演示說(shuō)明

1.測(cè)量果凍中環(huán)己基氨基磺酸鈉中對(duì)高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法及不確定度評(píng)定的使用

環(huán)已基氨基磺酸鈉俗稱(chēng)甜蜜素，是一種人工合成的無(wú)營(yíng)養(yǎng)性食品甜味劑。因長(zhǎng)期存在甜蜜素是否具致癌性的爭(zhēng)議，英國(guó)、美國(guó)、歐盟、加拿大等國(guó)家和地區(qū)的食品中甜蜜素的添加均規(guī)定了允許的含量，日本則不允許使用。近年來(lái)，我國(guó)也將甜蜜素列入為限制使用的食品添加劑。它的基本性質(zhì)效果是能夠在水中微溶，但是在甲醇、乙醇、氯仿或二氯甲烷等強(qiáng)酸性物質(zhì)中幾乎不溶。適當(dāng)?shù)氖褂弥协h(huán)己基氨基磺酸鈉可以達(dá)到對(duì)產(chǎn)品增味的效果，但是一旦使用過(guò)量，就可能會(huì)造成嚴(yán)重的急性過(guò)敏反應(yīng)，或者是嚴(yán)重的腹瀉，更甚者甚至?xí){人的生命安全，雖然現(xiàn)代醫(yī)療技術(shù)已經(jīng)找到相應(yīng)的方法能夠及時(shí)處理這樣的情況，但是如果一旦事情發(fā)生的太過(guò)于迅速或者用量過(guò)大，就很難能夠避免意外情況的發(fā)生，因此，對(duì)環(huán)己基氨基磺酸鈉應(yīng)該在果凍中使用多少何其的具體效果和可能出現(xiàn)的情況進(jìn)行測(cè)量就有了戰(zhàn)略性的意義。

2.測(cè)定果凍中環(huán)己基氨基磺酸鈉中使用的具體參數(shù)

檢測(cè)中所需要的化學(xué)數(shù)據(jù)建立在基本的數(shù)學(xué)模型之上，而使用到的基本公式就是

CX = × ×100% （1）

式中：CX――供試品的含量；

AR――對(duì)照品的峰面積

AX――供試品的峰面積

WR――對(duì)照品濃度（g）

WX――供試品濃度（g）

這個(gè)基本的公式適用于計(jì)算產(chǎn)品中檢測(cè)出的結(jié)果時(shí)的對(duì)具體的產(chǎn)品數(shù)據(jù)進(jìn)行分析的時(shí)候使用，是在檢測(cè)之后需要用到的工具。

檢測(cè)之前需要用到的工具包括電子天平，特定的試管若干，同時(shí)還應(yīng)該注意的是對(duì)室內(nèi)溫度的控制，一般在二十五攝氏度左右，同時(shí)控制液體在液箱中的流速大概為1.0ml/min ，在做好了基本的設(shè)施準(zhǔn)備之后，應(yīng)該注意的就是在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中進(jìn)行數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確計(jì)量。在實(shí)驗(yàn)中會(huì)用到的數(shù)據(jù)一般有：波長(zhǎng)，樣品和對(duì)照樣品的量度，樣品和對(duì)照樣品的濃度，兩種樣品的平均峰面，對(duì)照樣品的實(shí)際濃度和在摻水之后的產(chǎn)品變量的濃度，供應(yīng)品的含量，其中對(duì)對(duì)照品純度的控制要在：99.5%以?xún)?nèi) ；對(duì)樣品中含水量的控制要在：4.9%以?xún)?nèi)。在計(jì)算之后，除了基本的檢查核算以確保測(cè)量的結(jié)果無(wú)誤，還應(yīng)該進(jìn)行合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的計(jì)算，一般來(lái)說(shuō)這樣的計(jì)算主要是為了計(jì)算重度，舉一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，在各項(xiàng)條件符合標(biāo)準(zhǔn)的狀況下，合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的計(jì)算結(jié)果應(yīng)該是類(lèi)似于下面的結(jié)果：

uc（Cx）=

= =0.021

uc（CX）=100.41%×0.021=2.1%

最后，在計(jì)算結(jié)果的基礎(chǔ)上擴(kuò)展不確定度計(jì)算，在進(jìn)行完最后一步之后，按照標(biāo)準(zhǔn)流程提交報(bào)告。

參考文獻(xiàn)：

[1]王冠杰，季士委，田利，曹守春，鄒健，楊洋.高效液相色譜儀自動(dòng)進(jìn)樣器校準(zhǔn)方法及不確定度評(píng)定[J].化學(xué)分析計(jì)量，2013，05：69-71.

篇5

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；對(duì)乙酰氨基酚注射液；有關(guān)物質(zhì)

文章編號(hào)：1009-5519（2008）17-2556-02 中圖分類(lèi)號(hào)：R9 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

對(duì)乙酰氨基酚注射液為一種常見(jiàn)的解熱鎮(zhèn)痛藥，對(duì)氨基酚為對(duì)乙酰氨基酚注射液生產(chǎn)過(guò)程中的中間體和儲(chǔ)存過(guò)程中的水解產(chǎn)物，雖也有解熱鎮(zhèn)痛作用，但其毒性較大，應(yīng)予以控制。現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制，為此，我們采用HPLC法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚注射液中有關(guān)物質(zhì)[1，2]，方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便，快速。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥：Waters 2695系列高效液相色譜儀，Waters 2996 DAD檢測(cè)器；色譜柱為Alltima C18柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）。對(duì)氨基酚對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)100802-200501）；對(duì)乙酰氨基酚注射液（蘇州-欣凱制藥有限公司，051116，040914，050627）；甲醇為色譜純；水為Millipore-Q超純水系統(tǒng)制得超純水；其余試劑均為分析純。

1.2 方法與結(jié)果

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：色譜柱為Alltima C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為0.05 mol/L醋酸銨溶液-甲醇（85∶15），柱溫：35 ℃，Waters 2996 DAD檢測(cè)器，流速1.0 ml/min，取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10 μl注入液相色譜儀。理論板數(shù)按對(duì)乙酰氨基酚峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，對(duì)乙酰氨基酚峰與對(duì)氨基酚峰的分離度應(yīng)符合要求。

1.2.2 測(cè)定方法：取本品，加流動(dòng)相制成每1 ml中含1.25 mg的溶液作為供試品溶液（臨用新制）；精密量取1 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；另精密稱(chēng)取對(duì)氨基酚對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 ml中含2.5 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照高效液相測(cè)定法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄ⅤD)測(cè)定，用十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；0.05 mol/L醋酸銨溶液-甲醇（85∶15）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm。理論板數(shù)按對(duì)乙酰氨基酚峰計(jì)算應(yīng)不低于2000，對(duì)乙酰氨基酚峰與對(duì)氨基酚峰的分離度應(yīng)符合要求。精密量取對(duì)照溶液10 μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為滿量程的10%；再準(zhǔn)確量取供試品溶液，對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算（按對(duì)乙酰氨基酚標(biāo)示量計(jì)算）。

1.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：本品經(jīng)破壞實(shí)驗(yàn)的樣品經(jīng)二級(jí)管陣列檢測(cè)器測(cè)定，通過(guò)等高圖分析，在245 nm處已知雜質(zhì)對(duì)氨基酚吸收值較大，其余雜質(zhì)也檢出較多，EP 5也采用245 nm測(cè)定，綜上所述本方法選擇245nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.2.4 專(zhuān)屬性考察：精密量取空白輔料溶液，空白溶劑，供試品溶液及對(duì)照溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖?？瞻纵o料溶液，空白溶劑均無(wú)干擾。

取本品1 ml，置100 ml量瓶加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，置強(qiáng)光（照射度為4500±500LX）下照射72小時(shí)，作為光解樣品；取本品1 ml，加入5 mol/L的鹽酸溶液5ml，電爐上緩緩加熱置沸多次，冷卻后用5 mol/L氫氧化鈉溶液中和后，轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為酸解樣品；取本品1 ml，加入5 mol/L的氫氧化鈉溶液5 ml，電爐上緩緩加熱置沸多次，冷卻后用5 mol/L鹽酸溶液中和后，轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為堿解樣品；取本品1 ml，加入過(guò)氧化氫溶液20 ml，在室溫放置8小時(shí)，轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為氧化降解樣品；取本品1 ml，100 ℃水浴加熱8小時(shí)，冷卻后轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶，加流動(dòng)相稀釋至刻度，作為熱解樣品。

按“1.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液并測(cè)定。該法能有效檢測(cè)出各破壞性試驗(yàn)產(chǎn)生的降解物，且降解產(chǎn)物峰均能與主成分峰達(dá)到基線分離，專(zhuān)屬性較好。

1.2.5 對(duì)氨基酚的線性范圍及檢測(cè)限：精密稱(chēng)取對(duì)氨基酚對(duì)照品11.99 mg 置50 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取上述溶液1 ml置100 ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取1 μl，2 μl，5 μl，10 μl，20 μl，40 μl，80 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖并進(jìn)行線形回歸處理。結(jié)果線性方程為y＝1112.5862x-1087.5862，相關(guān)系數(shù)r＝0.9999。結(jié)果表明對(duì)氨基酚在2.398～191.84 ng范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，最低檢測(cè)限1 ng（S/N=3）。

1.2.6 回收率試驗(yàn)：精密稱(chēng)取對(duì)氨基酚12.54 mg置50 ml量瓶中，加流動(dòng)相定容，精密量取樣品1 ml，置100 ml量瓶中，再分別加入上述對(duì)照品溶液0.8 ml，1.0 ml，1.2 ml加流動(dòng)相定容，分別進(jìn)樣10 μl，每個(gè)濃度各3次。平均回收率為99.8%，RSD=0.91%。

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)：按“1.2.2”項(xiàng)方法平行制備對(duì)氨基酚對(duì)照品溶液及供試品溶液6份，分別進(jìn)樣10 μl，以對(duì)氨基酚峰面積進(jìn)行精密度考察，結(jié)果對(duì)氨基酚對(duì)照品溶液的RSD=0.48%，供試品溶液中對(duì)氨基酚峰的RSD=0.52%。

1.2.8 精密度考察：取供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，分別記錄對(duì)氨基酚峰面積，結(jié)果RSD=0.39%，表明儀器精密度良好。

1.2.9 樣品的測(cè)定：按“1.2.2”項(xiàng)方法，對(duì)3批樣品進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查，對(duì)氨基酚的量分別為0.10％，0.11％，0.18％；面積歸一化法計(jì)算其他雜質(zhì)總量分別為0.02％，0.02％，0.03％。

2 討論

對(duì)氨基酚為對(duì)乙酰氨基酚的降解產(chǎn)物，有一定不良反應(yīng)，在制劑的影響因素試驗(yàn)，穩(wěn)定性考察及質(zhì)量研究中，應(yīng)將其作為特殊雜質(zhì)進(jìn)行檢查。實(shí)驗(yàn)對(duì)對(duì)乙酰氨基酚注射液中有關(guān)物質(zhì)檢查的條件進(jìn)行了選擇和方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明文中方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，操作簡(jiǎn)便，能有效檢出對(duì)乙酰氨基酚注射液中的相關(guān)雜質(zhì)，為對(duì)乙酰氨基酚注射液的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 中華人民共和國(guó)國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2005年版二部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.172.

篇6

關(guān)鍵詞：梔子根；齊墩果酸3-乙酸酯；含量測(cè)定；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.11.020

中圖分類(lèi)號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2012）11-0051-03

梔子根為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥根及根莖，主產(chǎn)于湖南、浙江、四川、江西、重慶、湖北等省。梔子根具有清熱解毒、涼血之功效[1]。民間主要用于黃疸性肝炎、腎炎水腫、感冒高熱、出血吐血等病癥的治療，在《福建民間草藥》中稱(chēng)作為梔子花根[2]。梔子根是治療丙型肝炎的中藥新藥――松梔丸方中的君藥，主含齊墩果酸3-乙酸酯。因齊墩果酸3-乙酸酯無(wú)對(duì)照品，不能直接測(cè)定其含量，為控制梔子根的內(nèi)在質(zhì)量，本試驗(yàn)建立將梔子根中齊墩果酸3-乙酸酯水解為齊墩果酸后，再用高效液相色譜儀測(cè)定齊墩果酸

基金項(xiàng)目：國(guó)家重大科技專(zhuān)項(xiàng)（2005AA2Z3E40）；長(zhǎng)沙市科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目（K0803003-31）

通訊作者：李紅，Tel：13973193967，E-mail：

含量的方法，為尋求梔子根最佳藥材資源奠定基礎(chǔ)，為確保松梔丸質(zhì)量提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

LC-10AT型高效液相色譜儀（包括島津LC-10AT vp泵， SPD-10A vp紫外檢測(cè)器，LC-工作站），DK-98-Ⅱ型電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司），WGLL-125BE型電熱鼓風(fēng)干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司），TU1810型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），AB135-S型電子天平（0.01 mg，METTLER TOLEDO），KL-UP-Ⅲ-20型艾柯超純水機(jī)（成都唐氏康寧科技發(fā)展有限公司）。

齊墩果酸對(duì)照品（供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110709-200505）；甲醇（色譜純，湖南匯虹試劑有限公司，批號(hào)20100727），其他試劑均為分析純，水為自制超純水。

梔子根來(lái)自湖南醴陵，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物資源教研室周日寶教授鑒定為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

固定相為WondaSilTM C18鍵合硅膠柱（4.6 mm×250 mm，

5 ?m），流動(dòng)相為甲醇-0.4%冰乙酸（81∶19），流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品12.62 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液，濃度為0.504 8 mg/mL。

2.3 供試品溶液制備方法的優(yōu)選

2.3.1 不同提取溶媒的比較 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1 g 4份（每2份作為一個(gè)平行樣），精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，一份精密加入乙醇50 mL，另一份精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，分別用乙醇和甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL，加鹽酸2 mL，分別加熱回流水解1 h，水解液加水20 mL，置80 ℃水浴揮去乙醇（甲醇），至約20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，分別轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。

精密吸取上述樣品溶液20 ?L，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定齊墩果酸峰面積，平行3次。結(jié)果，乙醇為溶媒時(shí)的平均含量為0.075 4%，甲醇為溶媒時(shí)的平均含量為0.150 6%。甲醇優(yōu)于乙醇，故選用甲醇提取樣品中齊墩果酸3-乙酸酯。

2.3.2 不同酸水解的比較 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1 g 4份（每2份作為一個(gè)平行樣），精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL，一份濾液加鹽酸2 mL，另一份加硫酸2.6 mL，分別加熱回流水解1 h，水解液加水20 mL，置80 ℃水浴揮去甲醇至約20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，分別轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。

精密吸取上述樣品溶液20 ?L，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定齊墩果酸峰面積，平行3次。結(jié)果，鹽酸、硫酸水解所得齊墩果酸平均含量分別為0.144 5%、0.000 1%，硫酸水解在齊墩果酸相應(yīng)位置幾乎沒(méi)有峰，鹽酸水解的含量為0.144 5%。鹽酸明顯優(yōu)于硫酸，故選用鹽酸水解樣品中齊墩果酸3-乙酸酯。

2.3.3 不同提取時(shí)間的比較 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1 g 8份（每2份作為一個(gè)平行樣），精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，分別加熱回流2、4、6、8 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL，加鹽酸2 mL，加熱回流水解1 h，水解液加水20 mL，置80 ℃水浴揮去甲醇至約20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，分別轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。

精密吸取上述樣品溶液20 ?L，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定齊墩果酸峰面積，平行3次。結(jié)果提取2、4、6、8 h的齊墩果酸平均含量分別為0.139 2%、0.181 2%、0.181 0%、0.165 7%。綜合結(jié)果考慮提取時(shí)間為4 h最佳，隨著時(shí)間的增加，含量沒(méi)有明顯升高，反而降低。

2.3.4 不同酸用量的比較 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1 g 6份（每2份作為一個(gè)平行樣），精密稱(chēng)定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，加熱回流2 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL，分別加鹽酸1.0、2.0、3.0 mL，同上水解、萃取、定容、測(cè)定。結(jié)果齊墩果酸的平均含量分別為0.138 1%、0.138 4%、0.138 2%。酸用量對(duì)試驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著影響，綜合考慮，鹽酸用量以2 mL為佳。

2.3.5 不同水解時(shí)間的比較 方法同“2.3.4”取本品粉末約1 g 6份（每2份作為一個(gè)平行樣），分別水解2、3、4 h，再同上萃取、定容、測(cè)定。結(jié)果齊墩果酸的平均含量分別為0.153 2%、0.156 8%、0.156 6%?？梢?jiàn)水解時(shí)間不是影響齊墩果酸含量的主要因素，水解時(shí)間延長(zhǎng)，含量不會(huì)明顯增加。故水解時(shí)間可選為2 h。

2.3.6 小結(jié) 從以上供試液制備方法的單因素考察中可以看出，提取溶媒、酸種類(lèi)和提取時(shí)間是影響含量的主要因素，酸濃度和水解時(shí)間都不能明顯的影響梔子根中檢測(cè)到的齊墩果酸含量。為節(jié)省整個(gè)供試液的制備過(guò)程，考慮將提取和水解過(guò)程合并。制備過(guò)程如下：取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入（4100）的鹽酸甲醇溶液50 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流4 h，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用（4100）的鹽酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液25 mL，加水20 mL，置80 ℃水浴揮去甲醇至約20 mL，用二氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并二氯甲烷液，置75 ℃水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取濃度為0.504 8 mg/mL的齊墩果酸對(duì)照品溶液1.0、2.5、5.0、7.5、10 mL，分別置10 mL容量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密吸取上述供試品溶液各20 ?L進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以齊墩果酸進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)其進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=10 262 465.24X-50 224.9， r=0.999 8，表明齊墩果酸在1.009 6～10.096 ?g （折算為齊墩果酸3-乙酸酯在1.102 5～11.025 ?g）范圍內(nèi)質(zhì)量與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取齊墩果酸對(duì)照品溶液20 ?L，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，以齊墩果酸峰面積平均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算RSD=1.15%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取樣品供試液20 ?L，按上述方法于0、2、4、6、8、12、24 h測(cè)定，以齊墩果酸峰面積平均值與標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算RSD=0.77%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密吸取梔子根樣品6份，按供試品溶液的制備方法制備樣品供試液，精密吸取樣品供試液20 ?L，按上述色譜條件測(cè)定，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，平均含量為0.071%，RSD=0.82%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量（0.71 mg/g）梔子根約1.0 g，精密稱(chēng)定，加入濃度為0.68 mg/mL齊墩果酸溶液（相當(dāng)于齊墩果酸3-乙酸酯0.743 mg/mL）1.0 mL，相當(dāng)于梔子根中齊墩果酸含量（1∶1），平行共6份。按“2.3.6”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液20 ?L，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算含量與回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 3批醴陵梔子根中齊墩果酸3-乙酸酯含量測(cè)定

取3批梔子根，按“2.3.6”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，將供試品溶液和對(duì)照品溶液用0.45 ?m微孔濾膜濾過(guò)后，精密吸取20 ?L，分別注入高效液相色譜儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別測(cè)定齊墩果酸峰面積，色譜圖見(jiàn)圖1。按外標(biāo)法計(jì)算齊墩果酸的百分含量（按干燥品計(jì)），再乘以系數(shù)1.092 027 8，結(jié)果表明，醴陵梔子根中齊墩果酸3-乙酸酯平均含量為0.106%， RSD=3.72%。見(jiàn)表2。

注：A.對(duì)照品；B.供試品

3 討論

因梔子根中含有的齊墩果酸與熊果酸為同分異構(gòu)體，二者極性相近，分離難度較大。筆者曾經(jīng)試驗(yàn)過(guò)用甲醇-乙腈-0.4%冰乙酸溶液（72∶13∶15）[1]、甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（90∶10∶0.03∶0.06）[3]、甲醇-水（90∶10）[4]、甲醇-水-冰乙酸（89∶11∶0.2）[5]、乙腈-甲醇-0.3%磷酸（60∶30∶10）[6]等流動(dòng)相，結(jié)果其分離效果均不佳。而選擇甲醇-0.4%冰乙酸（81∶19）為流動(dòng)相時(shí)，齊墩果酸與熊果酸能夠分離完全，可以滿足測(cè)定要求。

筆者對(duì)萃取溶劑曾比較過(guò)二氯甲烷和三氯甲烷，發(fā)現(xiàn)二者的含量沒(méi)有明顯差異。從經(jīng)濟(jì)性和溶劑毒性等方面綜合考慮，最后選定用二氯甲烷作為萃取溶劑。

梔子根依法提取、不水解，測(cè)定，色譜圖中未見(jiàn)齊墩果酸峰，而加齊墩果酸對(duì)照品后的樣品，在43.307 min可見(jiàn)齊墩果酸峰，因此，梔子根在該取樣量、定容量、進(jìn)樣量及儀器靈敏度的條件下，未檢測(cè)出齊墩果酸。齊墩果酸3-乙酸酯又稱(chēng)齊墩果酸醋酸酯[7] ，但稱(chēng)齊墩果酸醋酸酯（與C3羥基形成的酯）易與齊墩果酸乙酯（與C17羧基形成的酯）名稱(chēng)混淆，所以，本文叫更確切的名字――齊墩果酸3-乙酸酯。

在該色譜條件下，齊墩果酸的出峰時(shí)間大約在40 min，所有峰都檢出需要大約65 min，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，為節(jié)約分析時(shí)間，更優(yōu)的色譜條件還有待摸索。

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篇7

脫氫乙酸(dha，dehydroacetic)，別名 二乙?；阴Ｒ宜幔虘B(tài)呈白色或淡黃色結(jié)晶粉末，無(wú)嗅、無(wú)味、熔點(diǎn)108～110℃，沸點(diǎn)270℃，是一種低毒高效防腐、防霉劑。在酸、堿條件下均有一定的抗菌作用，尤其對(duì)霉菌的抑制作用最強(qiáng)。我國(guó)自20世紀(jì)70年代中期開(kāi)始用于食品防腐劑至今，曾用于果汁、醬菜、腐乳、人造奶油、乳酸菌飲料、果醬等食品的防腐劑[1]。雖然它的抗菌作用是有效的，但是它的毒性較大的缺點(diǎn)卻限制了脫氫乙酸的廣泛應(yīng)用。脫氫乙酸能迅速被人體所吸收，進(jìn)人人體后即分散于血漿和許多器官中，有抑制體內(nèi)多種氧化酶的作用。目前，脫氫乙酸的安全性受到質(zhì)疑，國(guó)際上已明確禁止使用，我國(guó)在一定范圍內(nèi)允許其使用，但最大允許使用量為0.3g/kg[2]。目前檢測(cè)脫氫乙酸的國(guó)標(biāo)方法為氣相色譜法[3]，前期樣品處理過(guò)程涉及到有機(jī)溶劑萃取、濃縮等步驟，操作起來(lái)比較麻煩，而且脫氫乙酸還容易造成色譜峰出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，使得難以獲得準(zhǔn)確的定性和定量的結(jié)果[4]。應(yīng)用高效液相色譜測(cè)定食品中脫氫乙酸的方法已見(jiàn)報(bào)道，比如采用超聲萃取、氫氧化鈉溶液浸泡等方法萃取月餅中的脫氫乙酸后再注射到色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定[5]。這些研究為應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定果汁、罐頭、瓶裝腐乳等液態(tài)食品中的脫氫乙酸做了探索性的工作。本研究在國(guó)標(biāo)gb/t 5009.1212003的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)目前市場(chǎng)上廣泛銷(xiāo)售的多種液態(tài)食品中的脫氫乙酸以高效液相色譜的方法進(jìn)行分析，取得了比較滿意的結(jié)果，克服了氣相色譜法前處理復(fù)雜以及污染性大的缺點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)樣品、主要儀器與試劑

參加測(cè)定的樣品主要包括目前市場(chǎng)上銷(xiāo)售的果汁、腐乳、罐頭以及酸奶。hp1100型高效液相色譜儀、紫外分光光度計(jì)(上海光譜儀器公司);快速混勻器。甲醇(hplc級(jí)，dikma公司);甲醇(分析純，國(guó)藥);碳酸氫鈉(優(yōu)級(jí)純，國(guó)藥);脫氫乙酸(國(guó)家標(biāo)物中心);脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱(chēng)取脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品100 mg，用甲醇定溶至100ml。再用甲醇稀釋成1、5、10、15、20、30 mg/l的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾。測(cè)定用水為二次蒸餾水。

1.2 樣品處理

果汁和酸奶混勻后直接稱(chēng)取，腐乳和罐頭樣品需要先將固體物粉碎后再混勻。預(yù)先混勻的樣品稱(chēng)取大約5.0g，加入到25.0ml容量瓶中，再加入10ml 2%的碳酸氫鈉溶液，用雙蒸水稀釋至刻度，搖勻。靜置10min后將上清液過(guò)0.45μm濾膜，以10μl進(jìn)樣器加入到液相色譜儀測(cè)定。

1.3 色譜條件

色譜柱c18(5um,250×4.60mm);柱溫25℃;流動(dòng)相選用甲醇0.02mol/l乙酸銨(5:95);流速1.0ml/min;進(jìn)樣量10ul;檢測(cè)波長(zhǎng)310nm;按照這種條件進(jìn)行分析，以保留時(shí)間定性，以峰面積定量，測(cè)定樣品中脫氫乙酸的濃度。

1.4 結(jié)果計(jì)算

待測(cè)樣品中脫氫乙酸的含量(g/kg)=c×v×10-3/m

式中，c:樣品中脫氫乙酸的濃度(mg/l);v: 樣品體積(ml);m:樣品質(zhì)量(g)

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

用紫外分光光度計(jì)對(duì)脫氫乙酸進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描檢測(cè)到兩個(gè)吸收峰，在310nm處有最大吸收，在230nm處有次強(qiáng)吸收。在310nm處的干擾比在230nm處要小，背景吸收少，因此選擇310nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。標(biāo)準(zhǔn)品及待檢樣品中的脫氫乙酸的檢出峰色譜圖見(jiàn)圖1，脫氫乙酸的保留時(shí)間在8.5min左右。

2.2 流動(dòng)相的選擇

液相色譜柱c18分析中常用的流動(dòng)相有甲醇磷酸鹽緩沖溶液系統(tǒng)、甲醇硫酸溶液系統(tǒng)以及甲醇乙酸鹽溶液系統(tǒng)。參考以前的研究結(jié)果，從流動(dòng)相的本底吸收、靈敏度的影響和色譜柱的壽命等方面來(lái)考慮，本研究選擇了甲醇-0.02mol/l乙酸銨(5:95)。在流動(dòng)相中加入甲醇，可以提高出峰的對(duì)稱(chēng)性，隨著甲醇量的增加，出峰時(shí)間明顯加快，為了避開(kāi)樣品中其它成分的干擾，將甲醇的比例調(diào)整到5%時(shí)，脫氫乙酸的出峰時(shí)間較為理想，且不受雜質(zhì)的干擾。

2.3 測(cè)量精密度和回收率

取同一罐頭樣品10份，每5份添加同一個(gè)濃度的脫氫乙酸標(biāo)樣，分別進(jìn)行hplc分析。從表1的結(jié)果可以看出這種方法有較好的重復(fù)性和較高的回收率，可以用來(lái)進(jìn)行定量分析。

2.4 線性實(shí)驗(yàn)和靈敏度分析

取同一果汁樣品10份，每份約5.0g，置于25ml容量瓶中，分別加入脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)液(5mg/l)1ml、2ml、3ml、4ml和5ml，樣品按照標(biāo)準(zhǔn)步驟處理后取10ul進(jìn)入色譜柱測(cè)定，以出峰面積對(duì)脫氫乙酸濃度進(jìn)行回歸分析，結(jié)果表明脫氫乙酸濃度與色譜峰面積有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為0.9993。以信噪比(s/n)為3測(cè)得各成分的最低檢出限為0.25mg/kg。

2.5 樣品的測(cè)定

取目前國(guó)內(nèi)銷(xiāo)售的液態(tài)食品4種，每種選取3種不同的品牌按照前面介紹的方法進(jìn)行hplc分析，結(jié)果見(jiàn)表2?？梢钥闯?，一般酸奶中并沒(méi)有添加脫氫乙酸，因?yàn)樗崮痰谋Ｙ|(zhì)期通常只有半個(gè)月到1個(gè)月。果汁中也基本不含脫氫乙酸，而在選取的腐乳和罐頭中則添加了少量的脫氫乙酸，但是都遠(yuǎn)低于最大添加量。總之，該法簡(jiǎn)便快速，可以在相應(yīng)類(lèi)型的食品檢驗(yàn)中推廣使用。表2 常見(jiàn)的4種液態(tài)食品中脫氫乙酸的含量測(cè)定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

 

1 駱萌. 脫氫乙酸及相關(guān)化合物生產(chǎn)技術(shù). 化工中間體，2004，1(7)：31～33.

2 明立艷，張忠義. 高效液相色譜法測(cè)定食品中脫氫乙酸含量.食品研究與開(kāi)發(fā)，2009，3(30):106～108.

3 衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所. gb/t 1494194 食品中脫氫乙酸的含量測(cè)定. 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，1994.

4 張輝珍，馬愛(ài)國(guó)，梁惠，等. 高效液相色譜法測(cè)定食品中脫氫乙酸的方法研究. 衛(wèi)生研究，2007，6(36):748～750.

篇8

摘要：目的：建立補(bǔ)腎酒中補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相法，選用Zorbax SB－C18分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇－0.01%磷酸(40∶60)；檢測(cè)波長(zhǎng)246 nm；柱溫40℃。結(jié)果：補(bǔ)骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范圍內(nèi)線性良好，r＝0.999 9；異補(bǔ)骨脂素均在0.046 6～0.232 8 μg范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，r＝0.999 9；補(bǔ)骨脂素加樣回收率平均為98.44%，RSD為1.19%(n＝5)；異補(bǔ)骨脂素平均回收率為99.70%，RSD為1.99%。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便，快速，可用于補(bǔ)腎酒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：補(bǔ)骨脂素； 異補(bǔ)骨脂素； 補(bǔ)腎酒； 高效液相色譜法

Determination of Psoralen and Isopsoralen in Bushen Wine by High Performance Liquid Chromatography

Abstract:Objective:To establish a method for the determination of psoralen and isopsoralen in Bushen Wine by high performance liquid chromatography (HPLC). Methods:The Zorbax SB－C18 was used as the stationary phase. The mobile phase consisted of methanol－0.01% phosphatic acid (40∶60) and detective wave was 246 nm.Results:The calibration curves of psoralen and isopsoralen were linear respectively at the range of 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9)， 0.046 6～0.232 8 μg(r＝0.999 9).Conclusion:This method is reliable and accurate， the method can be applied to separate and determine the Bushen Wine.

Key words:Psoralen； Isopsoralen; Bushen Wine; HPLC

補(bǔ)腎酒為新研制的內(nèi)服純中藥制劑，由補(bǔ)骨脂，黃芪等二十幾味中藥組成，主要用于腎虛氣虧引起的性功能障礙。補(bǔ)骨脂是處方中君藥，其有效組分補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素為主要有效組分，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究制訂中，采用高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)腎酒中補(bǔ)骨脂的有效成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量，結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，為補(bǔ)腎酒的質(zhì)量控制提供了可靠的方法。

1 儀器與試劑

儀器 HP1050高效液相色譜儀。

試劑 甲醇色譜純；磷酸 優(yōu)級(jí)純；對(duì)照品:補(bǔ)骨脂素；批號(hào)0739－9907，異補(bǔ)骨脂素；批號(hào)0738－9907；供含量測(cè)定用，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜分析條件色譜柱：Zorbax SBC18(250 mm×4.60 mm，5 μm)；流動(dòng)相甲醇0.01%磷酸(40∶60)；柱溫為40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)246 nm；流速1.0 ml/min。

2.2 供試品溶液的制備精密量取裝量項(xiàng)下的本品10 ml，濃縮至約4 ml，加水10 ml，混勻，用乙醚振搖提取4次(20，15，15，15 ml)，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，并定量轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，通過(guò)已處理好的中性氧化鋁柱(100～200目，2 g，內(nèi)徑1.0 cm)上，收集藥液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加甲醇溶解，制成每毫升中含補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素各10 μg的溶液，即得。

2.4 空白實(shí)驗(yàn)按處方中藥味的比例，自配不含補(bǔ)骨脂的群藥，按其工藝制成空白制劑，再按供試品溶液制備方法制備并測(cè)定，結(jié)果空白溶液與補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素對(duì)照相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，認(rèn)為無(wú)干擾(見(jiàn)圖1)。

2.5 線性關(guān)系考察分別精密量取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品的甲醇溶液(0.117 1 mg/ml)、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品的甲醇溶液(0.116 4 mg/ml)各1，2，3，4，5 ml，分別置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明補(bǔ)骨脂素在0.046 9～0.233 1 μg范圍內(nèi)線性良好，其回歸方程為Y＝74 768.04X100.40，r＝0.999 9，異補(bǔ)骨脂素在0.046 6～0.232 8 μg范圍內(nèi)線性良好，其回歸方程為Y＝74 939.86X＋243.40，r＝0.999 9。

轉(zhuǎn)貼于

2.6 樣品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密量取同一供試品溶液(批號(hào)040106)，進(jìn)樣10 μl，分別于配制后0，2，4，8，17，26 h，依法測(cè)定，結(jié)果表明，在26 h內(nèi)基本穩(wěn)定，補(bǔ)骨脂素RSD為1.16%，異補(bǔ)骨脂素RSD為1.70%。

a對(duì)照品 b樣品 c色譜圖

1.補(bǔ)骨脂素 2.異補(bǔ)骨脂素

圖1 色譜圖（略）

2.7 精密度實(shí)驗(yàn)精密量取同一供試品溶液(批號(hào)040106)，進(jìn)樣10 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，求得相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.42%，異補(bǔ)骨脂素相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.39%。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按正文方法，對(duì)同一批號(hào)(批號(hào)為040106)樣品5份進(jìn)行測(cè)定，求得補(bǔ)骨脂素平均含量0.013 6 mg/ml，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.98%；異補(bǔ)骨脂素平均含量0.014 1 mg/ml，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為1.63%。

2.9 回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，精密量取已知含量的同一批號(hào)樣品(批號(hào)040106，含量補(bǔ)骨脂素為0.013 6 mg/ml，異補(bǔ)骨脂素為0.014 1 mg/ml)5 ml，精密加入補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品適量，按正文供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1～3。

表1 補(bǔ)骨脂素回收率（略）

表2 補(bǔ)骨脂素回收率（略）

2.10 樣品測(cè)定按正文方法，測(cè)定十批樣品，結(jié)果見(jiàn)下表。

表3 樣品中補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素含量測(cè)定結(jié)果（略）

3 討論

3.1 流動(dòng)相的確定曾采用甲醇水(80∶20)，(70∶30)，(60∶40)，補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素峰為一個(gè)峰，無(wú)法分離，采用甲醇－水(40∶60)，可將二峰分離，但有拖尾現(xiàn)象，加入少量磷酸，以甲醇0.01%磷酸(40∶60)為流動(dòng)相，分離效果好，且無(wú)拖尾現(xiàn)象。

3.2 本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定補(bǔ)腎酒中補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的含量，其提取方法簡(jiǎn)單，分析快速，精密度高，重現(xiàn)性好，且空白無(wú)干擾。

參考文獻(xiàn)

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：411411.

篇9

[關(guān)鍵詞] 依達(dá)拉奉；HPLC；含量測(cè)定；有關(guān)物質(zhì)

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2013）07（c）-0061-04

依達(dá)拉奉（edaravone，3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮）為強(qiáng)效自由基清除劑，于2001年在日本上市，臨床上主要用于治療急性缺血性腦卒中[1]。作為第1個(gè)新型氧自由基清除劑，具有清除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化及減輕缺血腦細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的氧化和再灌注損傷的作用，并可阻止腦水腫和腦梗死進(jìn)展，改善因急性腦梗死所致的神經(jīng)癥狀、日常生活活動(dòng)能力和功能障礙[2]。近年來(lái)，有關(guān)依達(dá)拉奉治療肌萎縮側(cè)索硬化癥、帕金森病等的臨床研究正在進(jìn)行中，抗癲癇和抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在臨床實(shí)踐中被發(fā)現(xiàn)，其對(duì)人類(lèi)多種疾病的有效性說(shuō)明此藥具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景[3]。本研究根據(jù)依達(dá)拉奉的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和化學(xué)性質(zhì)，參考相關(guān)文獻(xiàn)[4-7]，建立了高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）測(cè)定依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉及有關(guān)物質(zhì)的含量，本方法能將供試品中主峰與有關(guān)物質(zhì)峰完全分離，且能有效檢出依達(dá)拉奉注射液中所含雜質(zhì)，具有專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度高、選擇性好、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，可有效地應(yīng)用于依達(dá)拉奉注射液的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-15C高效液相色譜儀，SPD-15C紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器（日本島津公司），CTO-15C色譜柱柱溫箱（日本島津公司），Lcsolution 15C 工作站（日本島津公司），SIL-10AF自動(dòng)進(jìn)樣器（日本島津公司）；UV-2450紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）、AUW120D 島津分析天平。

1.2 試藥

甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。依達(dá)拉奉對(duì)照品（批號(hào)：100620-200401；含量100%，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；依達(dá)拉奉注射液（福壽堂制藥有限公司；規(guī)格：20 ml∶30 mg；批號(hào)：110911、110913、110915）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Cromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫銨溶液（50∶50）[用20%磷酸調(diào)節(jié)pH值至（3.5±0.1）]；流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：239 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μl[8-9]。

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

取依達(dá)拉奉對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每毫升中約含30 μg的溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備

精密量取依達(dá)拉奉注射液（批號(hào)：110911）2.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

2.1.3 空白輔料溶液的制備

按處方制備不含依達(dá)拉奉的溶液。取空白輔料溶液2.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。

2.1.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

在上述色譜條件下，分別精密吸取空白輔料溶液、依達(dá)拉奉對(duì)照品溶液及依達(dá)拉奉供試品溶液各20 μl進(jìn)樣。理論板數(shù)以依達(dá)拉奉峰計(jì)算應(yīng)不低于1000。結(jié)果提示，理論板數(shù)以依達(dá)拉奉峰計(jì)為2500，空白輔料對(duì)測(cè)定無(wú)干擾（圖1）。

2.2 破壞性試驗(yàn)

在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，對(duì)本品進(jìn)行酸、堿、熱、光、氧強(qiáng)制降解試驗(yàn)。

2.2.1 樣品的制備

2.2.1.1 破壞前樣品的制備 精密量取110911批次的依達(dá)拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.1.2 酸破壞樣品的制備 精密量取依達(dá)拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶?jī)?nèi)，加入0.1 mol/L的鹽酸溶液2 ml，室溫下靜置4 h后，加0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液適量中和，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.1.3 堿破壞樣品的制備 精密量取110911批次的依達(dá)拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶?jī)?nèi)，加入0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液2 ml，室溫下靜置4 h后，加適量0.1 mol/L的鹽酸溶液中和，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.1.4 熱高溫破壞樣品的制備 精密量取110911批次的依達(dá)拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶?jī)?nèi)，150℃高溫加熱1 h后取出，放至室溫，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.1.5 光照破壞樣品的制備 精密量取110911批次的依達(dá)拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶?jī)?nèi)，用流動(dòng)相稀釋至刻度，在強(qiáng)光（4500±500） Lx下放置4 h后，搖勻，濾過(guò)，即得。

2.2.1.6 氧化破壞樣品的制備 精密量取110911批次的依達(dá)拉奉注射液2.0 ml，置10 ml量瓶?jī)?nèi)，加入10%的過(guò)氧化氫2 ml，室溫放置2 h，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

精密量取上述樣品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.2.2 破壞性試驗(yàn)的結(jié)果

本品在酸、堿、熱條件下較穩(wěn)定，但是在氧化和光條件下有明顯的降解產(chǎn)物生成。本品溶液在酸、堿、氧化、光照及高溫條件下進(jìn)行破壞所產(chǎn)生雜質(zhì)在本色譜條件下均能與依達(dá)拉奉良好分離，因此可以采用上述色譜條件測(cè)定本品的有關(guān)物質(zhì)（圖2）。

2.3 線性關(guān)系考察

取依達(dá)拉奉對(duì)照品，精密稱(chēng)定，置容量瓶中，加流動(dòng)相溶解使成約0.3 mg/ml溶液，作為貯備溶液。分別精密量取上述貯備溶液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml置入50 ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度。精密量取上述溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖及峰面積。以溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程Y = 151 629X+839 53（r = 0.9997）。結(jié)果提示，依達(dá)拉奉溶液在6.024～54.216 μg/ml范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.4 檢出限

取依達(dá)拉奉對(duì)照品溶液（0.3 mg/ml），用流動(dòng)相進(jìn)行逐級(jí)稀釋?zhuān)础?.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μl，以信噪比為3∶1的進(jìn)樣濃度為最低檢出限，依達(dá)拉奉溶液的最低檢出限為12.1 ng/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取110911批次的依達(dá)拉奉注射液2.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密量取上述樣品溶液各20 μl，連續(xù)測(cè)定6次，記錄各次測(cè)定的主成分峰面積，按峰面積計(jì)算，RSD值為0.64%，表明本方法進(jìn)樣精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.5”項(xiàng)下供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8、12 h內(nèi)進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖及峰面積，結(jié)果提示，供試品的峰面積穩(wěn)定性良好，按峰面積計(jì)算，RSD值為0.81%，表明本品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取110911批次的依達(dá)拉奉注射液，按“2.1”項(xiàng)下供試品及對(duì)照品溶液制備方法，配制6份供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算供試品的含量，結(jié)果提示，6份樣品溶液的平均標(biāo)示含量為100.2%，RSD值為0.90%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取9份已知含量的依達(dá)拉奉注射液（批號(hào)：110911；依達(dá)拉奉含量為1.503 mg/ml），每份為1.0 ml，置入100 ml量瓶中，分別精密加入依達(dá)拉奉對(duì)照品溶液（1.01 mg/ml）1.0、1.5、2.0 ml，按供試品溶液制備方法制備成高、中、低3個(gè)濃度的溶液，各3份，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果提示，平均回收率為100.34%（n = 9），RSD值為0.55%，表明本方法準(zhǔn)確度良好（表1）。

表1 加樣回收率試驗(yàn)（n = 9）

2.9 供試品含量及有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

2.9.1 供試品含量的測(cè)定

取3批依達(dá)拉奉注射液（批號(hào)：110911、110913、110915），按“2.1.1”及“2.1.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中依達(dá)拉奉的含量。結(jié)果提示，3批依達(dá)拉奉注射液所含依達(dá)拉奉的含量分別為1.503 mg/ml（占標(biāo)示量的100.2%）、1.505 mg/ml（占標(biāo)示量的100.3%）、1.500 mg/ml（占標(biāo)示量的100.0%）。

2.9.2 有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定

取3批依達(dá)拉奉注射液（批號(hào)：110911、110913、110915），分別精密量取樣品2.0 ml（約相當(dāng)于依達(dá)拉奉3 mg），置10 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。按“2.1”項(xiàng)下條件，取對(duì)照溶液20 μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為滿量程的10%～30%；再精密量取對(duì)照品溶液及供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時(shí)間的3倍，按不加校正因子主成分自身對(duì)照法計(jì)算供試品溶液中有關(guān)物質(zhì)的含量。結(jié)果提示，3批依達(dá)拉奉注射液的有關(guān)物質(zhì)含量分別為0.17%、0.18%、0.18%。

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取依達(dá)拉奉對(duì)照品溶液（約30 μg/ml）及空白輔料溶液（按處方比例配制），在200～500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)依法進(jìn)行紫外掃描，結(jié)果表明依達(dá)拉奉在239 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，而輔料在239 nm處無(wú)吸收，因而選擇239 nm作為依達(dá)拉奉的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇

本研究考察了甲醇-乙酸銨、甲醇-磷酸二氫銨兩種流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果提示，依達(dá)拉奉在兩種流動(dòng)相系統(tǒng)下峰形均良好，但是后者效果更佳，且出峰時(shí)間適宜。進(jìn)一步考察甲醇和磷酸二氫銨溶液的比例，研究表明，采用甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫銨溶液（50∶50）[用20%磷酸調(diào)節(jié)pH值至（3.5±0.1）]為流動(dòng)相，能夠有效地檢測(cè)出依達(dá)拉奉注射液中所含的有關(guān)物質(zhì)。

3.3 流動(dòng)相pH的選擇

流動(dòng)相的pH值對(duì)依達(dá)拉奉峰的出峰時(shí)間和峰形影響不大，但是影響依達(dá)拉奉與其降解雜質(zhì)的分離效果，本研究將流動(dòng)相的pH值調(diào)節(jié)至（3.5±0.1），依達(dá)拉奉與其降解雜質(zhì)能夠較好地分離。

本研究在相關(guān)文獻(xiàn)[4-7]和制劑工藝研究的基礎(chǔ)上，對(duì)依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉和有關(guān)物質(zhì)的含量進(jìn)行了質(zhì)量研究工作，采用HPLC進(jìn)行了空白輔料干擾試驗(yàn)、破壞性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)等方法學(xué)驗(yàn)證工作，證明本研究建立的有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測(cè)定的方法適用于依達(dá)拉奉注射液的質(zhì)量監(jiān)控。

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篇10

[關(guān)鍵詞] α-細(xì)辛醚；β-細(xì)辛醚；高效液相色譜法；含量測(cè)定

[中圖分類(lèi)號(hào)] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2015）07（c）-0004-04

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of α-asarone and β-asarone in Tongsaiyinao Oral liquid， and protect the production of quality. Methods The determination was performed by HPLC method， the chromatographic colum was Lichrospher-C18 column （250 mm×4.6 mm，5 μm）， the mobile phase was methanol-0.05% H3PO4 （54∶46）， the flow rate was 1.0 mL/min and the temperature of column was 30℃ with the detection wavelength of 257 nm. Results The linear correlation of α-asarone was 1.248-6.240 μg/mL， Y = 85 526X-1.0581， r = 0.9999， and the average recovery was 99.07%， RSD was 2.15% （n = 6）. The linear correlation of β-asarone was 2.632-13.159 μg/mL， Y = 41 727X-0.0433， r = 0.9999， and the average recovery was 101.94%， RSD was 2.83% （n = 6）. Conclusion The HPLC method is accurate and feasible. It can be used very convenient in quality control.

[Key words] α-asarone； β-asarone； HPLC method； Content determination

通塞益腦口服液是南京總醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我院”）的院內(nèi)制劑，能夠活血通絡(luò)，豁痰開(kāi)竅，是由石菖蒲、地龍、川芎、延胡索、澤瀉和雞血藤共6味藥材組成的復(fù)方制劑，用于治療腦梗死所致的偏癱無(wú)力、口眼歪斜、記憶力減退等[1]，經(jīng)我院多年臨床研究，顯示其療效突出。該方中川芎為君藥，行氣活血；臣藥石菖蒲能夠化濕和胃、開(kāi)竅豁痰、醒神益智[2]，與川芎配伍，增強(qiáng)了其行氣開(kāi)郁的作用。石菖蒲中有效成分揮發(fā)油的地位頗為重要，通過(guò)對(duì)該藥的揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS分析，鑒定出其中39個(gè)成分，約占揮發(fā)油總量的90%以上，主要包括α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚、甲基異丁香酚等[3-5]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，α-細(xì)辛醚能顯著改善模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，亦能改善大鼠缺血再灌注所致的腦水腫，提高小鼠血腦通透性和耐缺氧能力；α-細(xì)辛醚能抑制乙酰膽堿酯酶，提高乙酰膽堿神經(jīng)遞質(zhì)的水平，提示其可能具有治療老年癡呆和益智作用的機(jī)制[6-9]。本研究重點(diǎn)對(duì)α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚進(jìn)行質(zhì)量控制，以期達(dá)到良好的結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100 型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司），KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），AE240電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），F(xiàn)A1604S分析天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑與試藥

α-細(xì)辛醚對(duì)照品（100298-201203），β-細(xì)辛醚對(duì)照品（Dr. Ehrenstorfer GmbH，純度70.9%，C10301000），通塞益腦口服液[規(guī)格：10 mL/瓶，醫(yī)院制劑文號(hào)：南制字（2011）F01015]，石菖蒲（1 g/瓶，中國(guó)食品藥品檢定研究院，121098-201105），磷酸（分析純，南京化學(xué)試劑有限公司），甲醇（色譜純，美國(guó)TIEDA），水為自制純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Lichrospher-C18（4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05%磷酸溶液（54∶46）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：257 nm；柱溫：30℃。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

2.2.1.1 α-細(xì)辛醚對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 稱(chēng)取α-細(xì)辛醚對(duì)照品12.48 mg，精密稱(chēng)定，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成124.8 μg/mL的α-細(xì)辛醚對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.1.2 β-細(xì)辛醚對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 稱(chēng)取β-細(xì)辛醚對(duì)照品4.64 mg，精密稱(chēng)定，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成65.795 μg/mL的β-細(xì)辛醚對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取通塞益腦口服液5支，置于燒杯中，混勻，精密吸取5 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液

按處方量稱(chēng)取不含石菖蒲的其他藥味，按生產(chǎn)工藝制備，得陰性樣品，并依“2.2.2”項(xiàng)中供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20 μL注入色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚的保留時(shí)間分別約為30、39 min，陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

2.3.1 α-細(xì)辛醚線標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精密吸取α-細(xì)辛醚對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于100 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得濃度分別為1.248、2.496、3.744、4.992、6.240 μg/mL的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定其峰面積。以各對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y = 85 526X-1.0581，r = 0.9999（n = 5）。表明α-細(xì)辛醚在1.248～6.240 μg/mL內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 β-細(xì)辛醚標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別精密吸取β-細(xì)辛醚儲(chǔ)備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，得濃度分別為2.632、5.264、7.896、10.528、13.159 μg/mL的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定其峰面積。以各對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y = 41 727X-0.0433，r = 0.9999（n = 5）。表明β-細(xì)辛醚的濃度在2.632～13.159 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

取“2.3”項(xiàng)中的α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚對(duì)照品溶液各1份（3.744、7.896 μg/mL），重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，測(cè)得α-細(xì)辛醚RSD為0.26%，β-細(xì)辛醚峰面積的RSD為0.26%。結(jié)果表明該方法的精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批（批號(hào)：130726）樣品5份，按“2.2.2”項(xiàng)中方法制備供試液，依法測(cè)定，結(jié)果α-細(xì)辛醚平均含量為3.28 μg/mL，β-細(xì)辛醚平均含量為15.82 μg/mL，α-細(xì)辛醚RSD為0.67%，β-細(xì)辛醚RSD為2.37%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批（批號(hào)：130726）供試品溶液，分別于0、1、2、4、8 h時(shí)進(jìn)樣20 μL，測(cè)得α-細(xì)辛醚、β-細(xì)辛醚峰面積的RSD分別為0.32%（n = 5）、0.31%（n = 5）。表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

2.7.1 α-細(xì)辛醚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

精密吸取已知含量（批號(hào)：130726，α-細(xì)辛醚含量為3.28 μg/mL）的樣品6份，每份2.5 mL，置于10 mL量瓶中，分別精密加入α-細(xì)辛醚儲(chǔ)備液0.1 mL，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.07%，RSD 為2.15%。見(jiàn)表1。

2.7.2 β-細(xì)辛醚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

精密吸取已知含量（批號(hào)：130726，β-細(xì)辛醚含量為15.82 μg/mL）的樣品6份，每份2.5 mL，置于10 mL量瓶中，分別精密加入β-細(xì)辛醚儲(chǔ)備液0.5 mL，按上述供試品溶液制備方法和色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為101.94%，RSD為2.83%。見(jiàn)表2。

2.8 含量測(cè)定

取通塞益腦口服液3個(gè)批次，按“2.2”項(xiàng)中方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算含量，具體結(jié)果見(jiàn)表3。綜合3批樣品測(cè)定結(jié)果，確定本品每瓶含揮發(fā)油以α-細(xì)辛醚和β-細(xì)辛醚總量計(jì)不得少于100 μg（10 mL/瓶）。

2.9 薄層色譜鑒別

2.9.1色譜條件

以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（12∶1）為展開(kāi)劑；以5%磷鉬酸乙醇溶液為顯色劑；105℃加熱約5 min至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.9.2 溶液的制備

取本品50 mL，用石油醚（60～90℃）振搖提取3次，每次20 mL，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取石菖蒲對(duì)照藥材1 g，研碎，加石油醚（60～90℃）50 mL室溫超聲20 min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。按處方及制法，制成缺石菖蒲陰性對(duì)照樣品，取相當(dāng)于供試品的量，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.9.3 陰性干擾試驗(yàn)

3個(gè)批次供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而石菖蒲陰性對(duì)照色譜相應(yīng)位置無(wú)此斑點(diǎn)，證明陰性對(duì)照溶液對(duì)鑒別無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖2。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，嘗試乙腈-0.05%磷酸溶液（40∶60）、乙腈-1%醋酸溶液（50∶50）等流動(dòng)相分離細(xì)辛醚[10-12]，但因?yàn)橹兴帍?fù)方制劑的成分復(fù)雜，個(gè)體差異大，故最終采用甲醇-0.05%磷酸溶液（54∶46），既保證了完好的分離度，又不至于分析時(shí)間太長(zhǎng)。

3.2指標(biāo)成分的選擇

吳啟端等[13]經(jīng)研究35份石菖蒲揮發(fā)油樣品，結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有成分相對(duì)百分含量中β-細(xì)辛醚均值為64.425%，α-細(xì)辛醚均值為11.680%，二者占總量的81.777%，是石菖蒲揮發(fā)油發(fā)揮藥效的重要指標(biāo)成分。目前國(guó)內(nèi)無(wú)α-細(xì)辛醚（β-細(xì)辛醚）標(biāo)準(zhǔn)品，為國(guó)外購(gòu)進(jìn)[14-15]，純度較低，需低溫保存避光，給操作帶來(lái)一定難度。β-細(xì)辛醚對(duì)照品色譜圖顯示含β-細(xì)辛醚、α-細(xì)辛醚兩種成分，因此文中兩個(gè)對(duì)照品需分別進(jìn)樣以免干擾。

3.3穩(wěn)定性考察

經(jīng)過(guò)多批次的考察，本研究發(fā)現(xiàn)通塞益腦口服液中細(xì)辛醚的含量不一，可見(jiàn)石菖蒲藥材質(zhì)量差異較大[15]，故必須建立完整的半成品檢驗(yàn)制度，對(duì)揮發(fā)油進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測(cè)，使其保持在一個(gè)良好的水平。而初步的長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，由于揮發(fā)油的特殊性，其在制劑中的含量下降很快，分析可能是其易揮發(fā)或者多種成分互相轉(zhuǎn)化等緣故。我們將進(jìn)行進(jìn)一步的試驗(yàn)，找出具體原因。

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