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篇1

【關(guān)鍵詞】神經(jīng)病學(xué) 教學(xué)模式

【中圖分類號】G642.4;R-4 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-3089（2015）17-0088-01

醫(yī)學(xué)教育一直是我國教育研究的熱點。以傳統(tǒng)授課為基礎(chǔ)（LBL）的學(xué)習(xí)模式因缺少互動、無法有效激發(fā)學(xué)習(xí)熱情、與日益先進的教學(xué)手段不匹配等問題正逐漸被以問題為基礎(chǔ)（PBL）的學(xué)習(xí)模式所取代。PBL教學(xué)法是有美國的神經(jīng)病學(xué)教授Borrow首先提出并試行的一種新的教學(xué)模式[1]。這種教學(xué)方法采用基礎(chǔ)學(xué)科和臨床實踐相結(jié)合的教學(xué)方法，以問題為核心，以學(xué)生為中心，以“提出問題、建立假設(shè)、收集資料、論證假設(shè)、總結(jié)”五個階段代替“組織教學(xué)、復(fù)習(xí)、授新、鞏固、練習(xí)”等傳統(tǒng)教學(xué)法，突出培養(yǎng)學(xué)生解決問題的能力，將學(xué)習(xí)知識從圍繞問題的解決展開，在臨床醫(yī)學(xué)的學(xué)習(xí)過程中擁有不可比擬的優(yōu)點，是目前西方先進醫(yī)學(xué)教育國家和學(xué)校的主要教學(xué)模式。然而，在我國因缺乏經(jīng)驗、沒有成體系的教材、教學(xué)資源不足、缺乏有效的評價體系等問題制約了PBL教學(xué)模式的全面展開，只停留在小規(guī)模的試驗階段[2]。從目前研究情況看，單純PBL教學(xué)模式的效果在不同學(xué)習(xí)階段、授課人群及學(xué)科間的的效果不同，對復(fù)雜的臨床學(xué)科，如神經(jīng)內(nèi)科，需要因地制宜的選擇LBL、PBL或者兩者結(jié)合，否則容易出現(xiàn)重點偏移、難以達到知識的有效掌握、學(xué)生滿意度低等問題。

神經(jīng)病學(xué)是研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)、周圍神經(jīng)系統(tǒng)及骨骼肌疾病的病因、發(fā)病機制、病理、臨床表現(xiàn)、診斷、治療及預(yù)防的一門臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科。與其他臨床醫(yī)學(xué)學(xué)科相比，神經(jīng)病學(xué)更抽象、對基礎(chǔ)知識要求更高（尤其是神經(jīng)解剖學(xué)）、臨床表現(xiàn)更復(fù)雜，既是學(xué)生學(xué)習(xí)的難點也是教學(xué)的難點。神經(jīng)病學(xué)是神經(jīng)科學(xué)的一個重要組成部分，知識體系涉及神經(jīng)組織胚胎學(xué)、神經(jīng)解剖學(xué)、神經(jīng)電生理學(xué)、神經(jīng)病理學(xué)、神經(jīng)免疫學(xué)、神經(jīng)影像學(xué)、神經(jīng)心理學(xué)、神經(jīng)眼科學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)等多門科學(xué)，不同的疾病譜、疾病的不同環(huán)節(jié)對上述基礎(chǔ)科學(xué)知識的掌握要求不同， 將LBL、PBL選擇性的結(jié)合是提高教學(xué)效果的有效方法。下文結(jié)合LBL及PBL教學(xué)模式的特點，以神經(jīng)系統(tǒng)變性病帕金森病為例探討上述方法在神經(jīng)病學(xué)教學(xué)中的應(yīng)用，以期充分發(fā)揮多種教學(xué)方法的優(yōu)勢，幫助學(xué)生更好的理解和掌握。

帕金森病是中老年人常見的運動障礙性疾病，是臨床中老年人以無力為主訴就診的常見原因[3]。在發(fā)病機制、解剖結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)、臨床表現(xiàn)、診斷及鑒別診斷、治療等方面基本上能夠融匯貫通的一個典型疾病。損害的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)直接導(dǎo)致了臨床癥狀，而臨床癥狀和體征是診斷及鑒別診斷的關(guān)鍵，治療也是在解剖學(xué)基礎(chǔ)上衍生而來的，所以在帕金森病的教學(xué)中，解剖學(xué)是基礎(chǔ)也是關(guān)鍵。在發(fā)病機制和解剖學(xué)部分，應(yīng)該以LBL教學(xué)為主，在LBL教學(xué)中，以多媒體教學(xué)為主要呈現(xiàn)形式。讓學(xué)生們熟悉掌握基底節(jié)核團的組成以及相互之間的結(jié)構(gòu)學(xué)聯(lián)系通路與功能學(xué)聯(lián)系通路，在抽象的二維平面解剖基礎(chǔ)上，以三維動畫形式呈現(xiàn)尾狀核、豆?fàn)詈撕蜕n白球的位置、紋狀體多巴胺能與膽堿能系統(tǒng)的平衡，用生動的視頻展現(xiàn)功能失衡所引起的臨床表現(xiàn)，強化學(xué)生的視覺記憶，幫助復(fù)雜機制的理解，使錐體外系的概念在腦中抽象形成。正常的結(jié)構(gòu)和功能框架建起來后，就可以進入以典型病例為先導(dǎo)的PBL教學(xué)模式，進行診斷和鑒別診斷的教學(xué)。當(dāng)一名老年患者以肢體無力、震顫、行動緩慢等典型表現(xiàn)就診時，結(jié)合病史及臨床治療分析很容易想到這個病。但如果表現(xiàn)不典型或者在早期以單獨癥狀出現(xiàn)時，就要綜合分析，以問題為啟發(fā)，提示學(xué)生們主動思考損害可能的部位，也就是定位診斷，如肢體的無力是錐體系損害還是錐體外系損害？錐體系與錐體外系損害表現(xiàn)出來的無力怎樣區(qū)分？錐體外系損害引起的強直少動的功能學(xué)和解剖學(xué)基礎(chǔ)是什么？震顫是哪種震顫？意向性震顫和靜止性震顫各自的解剖學(xué)基礎(chǔ)是什么？帕金森病產(chǎn)生震顫的原理是什么？想要控制這種震顫可以想到的干預(yù)方式有什么......。這樣就可以在逐步推導(dǎo)原因和結(jié)果的過程中將疾病的全貌呈現(xiàn)出來，既有利于集中學(xué)生的注意力、提高對學(xué)習(xí)的熱情，也利于知識的理解和運用，易于疾病的掌握。在治療上，目前對帕金森病的治療主要還是以藥物治療為主，手術(shù)治療為輔，兩者的治療目標(biāo)都是盡量改善患者生存質(zhì)量。這部分可以采用LBL與PBL相結(jié)合的方式進行教學(xué)。如前所述，藥物治療也是基于解剖和功能異常提出和進行的，可以以問題為導(dǎo)向比如多巴胺能的減少可以怎樣改善？膽堿能的亢進怎樣抑制？根據(jù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)遞質(zhì)的合成與分解規(guī)律，藥物的治療可以有哪些靶點......，在大體上給出治療靶點和方向后，以LBL教學(xué)方式，板書出具體的治療方案，在過程中自然分類了目前治療的藥物及藥物作用的機制，避免了刻板記憶。通過對LBL、PBL及兩者的選擇性結(jié)合，實現(xiàn)了對帕金森病發(fā)病機制、解剖學(xué)基礎(chǔ)、臨床表現(xiàn)、診斷和鑒別診斷及治療的有效教學(xué)，重點突出、內(nèi)容生動、容易理解，將理論知識與臨床有效的結(jié)合在一起，實現(xiàn)了提高教學(xué)質(zhì)量和授課效果的目的。

通過舉例教學(xué)，我們認識到不同教學(xué)方式各自的特點，即使是同一疾病的教學(xué)也應(yīng)該有主有次，綜合利用。神經(jīng)系統(tǒng)疾病譜龐雜，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，同一疾病可以出現(xiàn)不同的臨床表現(xiàn)，相同的臨床表現(xiàn)可以是由不同的原因引起的，其自身的特點導(dǎo)致了神經(jīng)病學(xué)成為臨床教學(xué)的難點，對教學(xué)提出了更高的要求。授課者本身對疾病的把握程度決定了教學(xué)方式的選擇和教學(xué)課件的制作，紙上談兵者不能很好的利用兩者的優(yōu)勢造成適得其反的效果。因此，授課者應(yīng)當(dāng)在精心設(shè)計課程的基礎(chǔ)上，認真選取病例，針對性的設(shè)計問題，將LBL和PBL緊密結(jié)合，根據(jù)授課內(nèi)容靈活選擇合適的教學(xué)方法，實現(xiàn)教學(xué)工具為教學(xué)內(nèi)容服務(wù)，達到最佳效果，為繁復(fù)的神經(jīng)病學(xué)教學(xué)注入新的活力。

參考文獻：

[1]張東華，高岳，薄紅，董靖竹。PBL教學(xué)法在我國臨床教育中的應(yīng)用所存在的問題。中國高等醫(yī)學(xué)教育。2012年第1期，P99-100頁。

篇2

[關(guān)鍵詞] 糖尿病;慢性并發(fā)癥;經(jīng)方

[中圖分類號] R587.1 [文獻標(biāo)識碼]B[文章編號]1673-7210(2010)03(b)-159-01

糖尿病是一種葡萄糖代謝和內(nèi)分泌障礙引起的全身性代謝紊亂疾病。糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)病率高,有資料顯示糖尿病神經(jīng)病變約占1/2,腎病約占1/3[1],糖尿病并發(fā)癥是糖尿病致殘、致死的主要原因,是臨床上的治療難點,尋找治療糖尿病并發(fā)癥的有效藥物已成為醫(yī)學(xué)界研究的熱點。中醫(yī)藥中的經(jīng)方具有用藥精當(dāng)、配伍合理、組方嚴謹、化裁靈活、臨床療效可靠的特點,運用經(jīng)方治療糖尿病慢性并發(fā)癥,充分發(fā)揮中醫(yī)藥的治療優(yōu)勢和特色,具有一定的臨床意義。

1糖尿病腎病

糖尿病腎病是糖尿病常見而難治的微血管病變,在西方國家已經(jīng)成為終末期腎病的首位病因[2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為其發(fā)病與糖代謝紊亂、血流動力學(xué)異常、血管活性物質(zhì)、細胞因子活性異常等作用有關(guān),臨床上多表現(xiàn)為水腫、蛋白尿、高血壓、腎功能不全等。中醫(yī)學(xué)認為其屬于消渴、水腫、溺毒范疇,其病機多為濕熱瘀互結(jié),阻于脈絡(luò),漸成徵瘕積聚。當(dāng)歸芍藥散、下瘀血湯兩方為《金匱要略?婦人病》篇中治療腹痛和經(jīng)水不利的方劑,方中白芍、當(dāng)歸、川芎活血化瘀,大黃、桃仁、蟲清熱解毒通絡(luò),白術(shù)、茯苓、豬苓利水消腫,兩方相合,具有利濕化瘀、解毒通絡(luò)的作用,所治病證與本證病機相同,可運用于此以改善糖尿病腎病患者的局部血流狀態(tài),延緩腎功能惡化。

2糖尿病性周圍神經(jīng)病變

糖尿病性周圍神經(jīng)病變是糖尿病最常見的并發(fā)癥之一,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為其與糖醇紊亂、微循環(huán)障礙、營養(yǎng)缺乏、神經(jīng)細胞的代謝障礙有關(guān),臨床上表現(xiàn)為肢端無力、麻木、疼痛等,中醫(yī)學(xué)認為,糖尿病性周圍神經(jīng)病變屬于血痹范疇,病機多為營衛(wèi)氣血不足,代謝產(chǎn)物積聚,經(jīng)絡(luò)肌膚失于濡養(yǎng)所致。黃芪桂枝五物湯為《金匱要略?血痹虛勞病脈證治》中治療血痹的方劑,具有益氣和營、溫經(jīng)通痹之功效。實驗表明,該方對改善末梢循環(huán),糾正神經(jīng)組織缺血、低氧狀態(tài)具有一定的作用[3]。臨床上在此方基礎(chǔ)上辨證加入祛瘀通絡(luò)之藥,可取得較好的療效。

3糖尿病胃腸病變

糖尿病胃腸功能紊亂表現(xiàn)為消化器官的排空或分泌功能下降,多由于自主神經(jīng)病變、迷走神經(jīng)張力降低所致胃腸及食管動力異常[4],臨床上多表現(xiàn)為食欲減退、脹滿、惡心、呃逆、腹瀉、便秘等,屬于中醫(yī)學(xué)“痞滿”、“嘔吐”、“便秘”等范疇,病機多以中虛不運,氣機阻滯,升降失常所致。半夏瀉心湯為《金匱要略?嘔吐噦下利病脈證治》篇中治療寒熱互結(jié)痞證的方劑,具有寒熱并用、辛開苦降的特點,適用于嘔、痞、利胃腸功能紊亂的糖尿病患者。麻子仁丸為《金匱要略》中治療“脾約”的方劑,具有潤燥通便的作用,桃核承氣湯為《傷寒論》治療下焦蓄血證的主方,具有清燥熱、化瘀結(jié)之效。后兩方適用于陰虛燥熱瘀結(jié)的糖尿病便秘患者。

4糖尿病神經(jīng)原性膀胱

糖尿病神經(jīng)原性膀胱病變多為膀胱充盈感受損,殘余尿增多,容量增加,尿潴留或膀胱收縮功能失調(diào),表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿失禁等,屬于中醫(yī)學(xué)癃閉或遺溺范疇。臨床上表現(xiàn)為腹脹、小便量少、尿潴留,病機為腎臟虛弱,膀胱氣化功能不利,可選用《金匱要略?水氣病》篇中治療水飲內(nèi)停的苓桂術(shù)甘湯,枳術(shù)丸、桂枝去芍藥加麻黃附子細辛湯,三方合一具有宣肺、健脾、溫腎利水、助膀胱氣化之效。如表現(xiàn)為小便頻,甚至尿失禁,其病機多為腎虛失攝,開闔不利所致,可選用《金匱要略》消渴中治療“飲一斗,小便一斗”的腎氣丸溫腎固攝,化氣利水,使膀胱開闔有度,小便如常。

5糖尿病泌尿系統(tǒng)感染

糖尿病患者是泌尿系統(tǒng)感染的易感人群,特別是在老年女性患者中發(fā)病率、復(fù)發(fā)率高,屬于中醫(yī)學(xué)消渴淋證范疇,病機系氣陰兩虛,濕熱毒邪蘊于下焦所致膀胱氣化失司,水道不利而致。當(dāng)歸貝母苦參丸和三物黃芩湯為《金匱要略?婦人妊娠病》篇中治療小便難和婦人產(chǎn)后發(fā)熱的方劑,方中當(dāng)歸、生地、貝母滋陰潤燥,黃芩、苦參清熱利濕解毒,兩方合用具有滋陰清熱,利尿通淋的功效,可用于治療本病。

經(jīng)方配方嚴謹,藥專力宏,療效可靠,深受歷代醫(yī)家推崇,在臨床中辨證選方不必拘泥于消渴或某一疾病的范疇,根據(jù)辨證論治、異病同治的原則,只要病證相符即可應(yīng)用,充分發(fā)揮經(jīng)方獨特的治療作用。

[參考文獻]

[1]衛(wèi)生部疾病控制司,中華醫(yī)學(xué)會糖尿病分會.中國糖尿病防治指南[M].北京:北京大學(xué)出版社,2004:3-4.

[2]王海燕.腎臟病學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:1414.

[3]劉超,楊社香.加味黃芪桂枝無物湯治療糖尿病性周圍神經(jīng)炎30例[J].中醫(yī)研究,2008,21(11):34.

篇3

老年性癡呆(阿爾茨海默病，Alzheimer’sdisease,AD)主要包括65歲或以前老年前期起病的早發(fā)型(early-onset)和65歲以后老年期起病的晚發(fā)型(late-onset)。近年的研究證實這兩個類型的臨床表現(xiàn)和神經(jīng)病理學(xué)特征均無本質(zhì)區(qū)別，所以現(xiàn)在廣大研究者已逐漸接受統(tǒng)一稱為老年性癡呆或阿爾茨海默病。隨著人類平均預(yù)期壽命的增長，人口老齡化問題日益突出，包括AD在內(nèi)的癡呆已經(jīng)同心腦血管疾病成為世界范圍內(nèi)危害人類健康最嚴重的疾病。美國波士頓東區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查指出，癡呆病人占該地區(qū)85歲以上人群近50%［1］。由于AD等認知功能障礙類疾病患者常伴日常生活能力下降，表現(xiàn)為生活不能自理，由此帶來嚴重的社會衛(wèi)生問題和經(jīng)濟負擔(dān)。1989年美國國立健康研究院統(tǒng)計資料顯示，美國每年中風(fēng)的醫(yī)療費用為250億，但癡呆的費用卻高達800億［2］，可見癡呆所造成的經(jīng)濟負擔(dān)之重。我國老年期癡呆的患病率遠非人們所想象的低，上海的流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國55歲、65歲以上癡呆的患病率分別為2.57%(AD為1.5%，血管性癡呆為0.74%)和4.61%(AD為2.9%，血管性癡呆為1.26%)［3］。我們在對廣州市城區(qū)75歲以上老年人癡呆患病率的調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)75歲以上老年人癡呆的患病率為8.9%，其中AD為7.49%，血管性癡呆為1.16%(待發(fā)表)。預(yù)計我國現(xiàn)階段老年期癡呆的患者大約為300～400萬。

AD是一種原因未明以認知功能減退為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，德國醫(yī)生AloisAlzheimer于1906年首先報告。其主要的病理特征是腦內(nèi)出現(xiàn)大量老年斑(senileplaque,SP)、神經(jīng)纖維纏結(jié)(neurofibrillarytangles,NFT)、淀粉樣蛋白沉積以及神經(jīng)元空泡變性和大量喪失。由于AD病理變化的復(fù)雜性，盡管世界各國在尋找AD有效治療藥物的研究中投入了大量的人力和物力，但成果卻十分有限。相比之下，中醫(yī)藥在延緩衰老以及衰老相關(guān)疾病的防治方面有著豐富的理論和實踐經(jīng)驗，具有潛在的優(yōu)勢和廣闊的開發(fā)前景。面對人口老齡化的挑戰(zhàn)，未雨綢繆，加大力度，深入開展對AD防治的研究，挖掘中醫(yī)藥的優(yōu)勢，尋找確切有效的防治方法，改善和提高患者的生存質(zhì)量和對于社會的適應(yīng)能力，以最大程度減少癡呆類疾病所帶來的不良后果，都有十分重要的意義。我們在此僅就中醫(yī)藥防治AD研究中的幾個重要問題結(jié)合AD現(xiàn)代研究進展談?wù)勛约旱目捶ā?/p>

1臨床診斷的問題

在過去的許多有關(guān)中醫(yī)藥防治AD的研究中，臨床診斷方面的問題較多。AD的臨床診斷主要依賴病史、臨床表現(xiàn)和神經(jīng)心理測試以及實驗室的檢查，同時排除可能引起癡呆的其他腦部和全身性疾病。而確定性的診斷只有組織病理學(xué)才能作出。

摘要：老年性癡呆(阿爾茨海默病，Alzheimer’sdisease,AD)是一種原因未明、以認知功能減退為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，已成為世界范圍內(nèi)危害人類健康最嚴重的疾病之一。中醫(yī)藥防治AD的研究是近年的研究熱點。為深入開展AD防治的研究，尋找有效的防治方法，改善和提高患者的生存質(zhì)量，結(jié)合AD現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進展，就中醫(yī)藥防治AD研究中的幾個重要問題進行了較為系統(tǒng)的闡述。強調(diào)在中醫(yī)藥防治AD的研究中應(yīng)注重科學(xué)地選擇和應(yīng)用權(quán)威的AD臨床診斷標(biāo)準；選擇多因素復(fù)合動物模型；注意AD的腎虛本質(zhì)特征和病因病機特點；注意觀察指標(biāo)特異性、敏感性和穩(wěn)定性的綜合考慮，強調(diào)功能整合水平觀察指標(biāo)的評價；充分認識中藥復(fù)方的多途徑、多靶點作用優(yōu)勢，開展嚴格的隨機盲法對照臨床試驗。

篇4

[關(guān)鍵詞] 血管性癡呆；診斷標(biāo)準；治療；研究進展

[中圖分類號] R743 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2012）11（a）-0018-03

血管性癡呆是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成記憶、認知和行為等腦區(qū)低灌注的腦血管疾病所致的嚴重認知功能障礙綜合征[1]。關(guān)于血管性癡呆的診斷，應(yīng)用比較廣泛的是美國國立神經(jīng)疾病與卒中研究所和瑞士神經(jīng)科學(xué)研究國際協(xié)會（NINDS-AIREN）的診斷標(biāo)準。血管性癡呆病因較明確，若能早期診斷，預(yù)后相對較好。治療主要包括針對原發(fā)性的腦血管疾病和促進腦功能恢復(fù)兩方面[2]。

1 血管性癡呆的診斷

目前VaD的診斷標(biāo)準很多，以下是使用較廣的4種診斷標(biāo)準。美國精神疾病統(tǒng)計和診斷手冊第4版（DSM-IV）、WHO疾病分類第10修訂版（ICE-10）、美國加州AD診斷和治療中心（ADDTC）標(biāo)準及美國國立神經(jīng)疾病與卒中研究所和瑞士神經(jīng)科學(xué)研究國際協(xié)會（NINDS-AIREN）。這些診斷標(biāo)準的共同特點都包括3個步驟：（1）先確定有無癡呆；（2）再確定腦血管病尤其是卒中是否存在；（3）最后確定癡呆是否與腦血管病相關(guān)。

1.1 2002年中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會血管性癡呆診斷標(biāo)準

1.1.1 臨床很可能血管性癡呆 （1）癡呆符合DSM-IV-R的診斷標(biāo)準；（2）腦血管疾病的診斷：臨床和影像學(xué)表現(xiàn)支持；（3）癡呆與腦血管病密切相關(guān)，癡呆發(fā)生于卒中后3個月內(nèi)，并持續(xù)6個月以上，或認知功能障礙突然加重，或波動、或呈階梯樣逐漸進展；（4）支持血管性癡呆診斷：①認識功能損害的不均勻性（斑塊狀損害）；②人格相對完整；③病程波動，有多次腦卒中史；④可呈現(xiàn)步態(tài)障礙、假性球麻痹等體征；⑤存在腦血管病的危險因素。

1.1.2 可能為血管性癡呆 （1）符合上述癡呆的診斷；（2）有腦血管病和局灶性神經(jīng)系統(tǒng)體征；（3）癡呆和腦血管病可能有關(guān)，但在時間或影像學(xué)方面證據(jù)不足。

1.1.3 確診血管性癡呆 臨床診斷為很可能或可能的血管性癡呆，并由尸檢或活檢證實不含超過年齡相關(guān)的神經(jīng)元纖維纏結(jié)和老年斑數(shù)以及其他變性疾病組織學(xué)特征。

1.1.4 排除性診斷（排除其他原因所致的癡呆） （1）意識障礙；（2）其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病所致的癡呆；（3）全身性疾病引起的癡呆；（4）精神疾?。ㄒ钟舭Y等）[3]。

1.2 ICD-10 1992的VaD診斷標(biāo)準

（1）存在多個認加功能障礙，表現(xiàn)為記憶障礙和一個或多個其他認知障礙（包括語言、應(yīng)用、感知、視空間功能或執(zhí)行功能異常）；（2）以上損害明顯影響社會和職業(yè)功能，并與以往水平相比有顯著減退；（3）有與癡呆發(fā)生相關(guān)的卒中癥狀、體征和影像學(xué)證據(jù)。

1.3 VaD的NINDS-AIREN診斷標(biāo)準

1.3.1 可能的VaD的診斷標(biāo)準 （1）癡呆。（2）腦血管病。（3）上述兩者之間有相關(guān)性。①癡呆在卒中后3個月內(nèi)發(fā)?。虎谡J知功能突然惡化或認知障礙呈波動式階梯樣進展。

1.3.2 支持可能的VaD診斷的臨床特征 （1）早期出現(xiàn)步態(tài)異常；（2）沒有誘因的搖晃和跌倒史；（3）不能用泌尿系統(tǒng)疾病解釋的早期尿頻、尿急和其他泌尿系統(tǒng)癥狀；（4）假性球麻痹；（5）人格和情感改變。

1.3.3 不確定或不可能的VaD的診斷特征 （1）早期出現(xiàn)記憶損害和記憶力進展性下降，但沒有相應(yīng)的腦影像學(xué)局灶性病灶；（2）除認知障礙外缺乏其他局灶性神經(jīng)體質(zhì)；（3）腦影像學(xué)上缺乏腦血管病的表現(xiàn)。

1.4 AD-DTC診斷標(biāo)準

（1）已稱為癡呆的癡呆程度仍然需要臨床判斷，但不應(yīng)限于單一狹隘的智能范疇內(nèi)。（2）排除由意識障礙引起的智力衰退。（3）2次或2次以上缺血性卒中的證據(jù)，或發(fā)生單次卒中。（4）小腦以外的至少1個梗死的證據(jù)，癡呆與CVD必須有合理的關(guān)聯(lián)。（5）明確證實的時間聯(lián)系[4-5]。

2 治療

血管性癡呆的治療原則包括防治卒中、改善認知功能及控制行為和精神癥狀[3]，治療藥物包括腦循環(huán)改善劑、腦代謝復(fù)活劑（腦功能代謝藥）、腦保護劑、膽堿酯酶抑制劑、雌激素、非甾體消炎藥、伴隨癥狀的治療和康復(fù)治療（如咨詢指導(dǎo)、記憶訓(xùn)練、認知訓(xùn)練和社會生活功能訓(xùn)練）。

2.1 AchE抑制劑

有很多強有力的證據(jù)支持VaD患者膽堿能功能降低的假說?；谶@種觀點，通過增強膽堿能功能來改善AD患者癥狀的方法，應(yīng)該同樣適用于VaD患者。目前循證治療指南推薦，在明確診斷的基礎(chǔ)上，應(yīng)考慮給予所有輕、中度AD患者AchE抑制劑治療。AchE抑制劑能夠限制患者的認知功能下降速度、推遲精神行為癥狀的出現(xiàn)時間、延緩功能衰退的發(fā)展。臨床常用的AchE抑制劑有以下幾種：

2.1.1 多奈哌齊（安理申） 多奈哌齊于1996年11月經(jīng)FDA批準上市，1996年Feighner教授在第20屆國際神經(jīng)精神病藥理學(xué)大會上報告了多奈哌齊的臨床雙盲安慰劑對照試驗結(jié)果。450例輕中度AD患者接受5 mg/d、10 mg/d或安慰劑治療共24周。用ADAS、CIBIC以及基于采訪臨床醫(yī)生印象的病情變化等檢測標(biāo)準進行療效判斷。與安慰劑組相比，5 mg/d組和10 mg/d組的認識功能顯著改善。另外，在VaD患者中進行的一項大樣本研究表明，多奈哌齊（5 mg/d或10 mg/d）治療組能顯著地改善VaD患者的認知功能，以10 mg/d療效較好。提示多奈哌齊對于治療VaD和AD同樣有重要作用。

2.1.2 加蘭他敏 一項為期24周的多中心多國研究，將VaD患者隨機接受治療，加蘭他敏組共294例，安慰劑組共163例完成了研究。治療組接受加蘭他敏4 mg/d，然后逐漸增量，至6周時達24 mg/d。研究結(jié)束時，與安慰劑組相比，藥物治療組ADASCOG（治療差異=2.7，P = 0.000 6）總體認知明顯改善，而安慰組加重。

2.1.3 卡巴拉?。ò鼓?、利斯的明） 最近的一項卡巴拉汀開放性研究[6-7]共包括16例皮質(zhì)下VaD患者，結(jié)果顯示療效長達22個月，患者隨機分為卡巴拉汀3 mg/d組、6 mg/d組和阿司匹林100 mg/d組。22個月時卡巴拉汀組神經(jīng)精神病學(xué)調(diào)查評分與基線時比較明顯改善，而阿司匹林組惡化（P < 0.001）?？ò屠〗M執(zhí)行功能、行為癥狀和護理人員相對壓力評分均較阿司匹林組明顯改善。

2.1.4 他克林（派可致） 他克林為一新型可逆性中樞膽堿酯酶抑制劑，用于VaD及輕、中度AD患者，對其認知、記憶功能有改善作用。

2.1.5 石杉堿甲 石杉堿甲具有促進記憶再現(xiàn)和增強記憶保持的作用，對癡呆患者記憶障礙有改善作用，適用于各種類型的癡呆。

2.2 興奮性氨基酸受體拮抗劑

美金剛可保護神經(jīng)元免遭腦缺血引起的興奮毒性損害。法國一項為期28周的多中心隨機對照試驗將321例VaD患者隨機分為兩組，分別接受美金剛10 mg/d或安慰劑治療。結(jié)果提示美金剛能改善輕度至中度VaD 患者的認知障礙。288例適合進行意向處理分析，美金剛組平均ADASCOG評分和MMSE 顯著改善，而安慰組惡化（P = 0.003）。

2.3 腦血循環(huán)促進劑

2.3.1 海得琴（二氫麥角堿，喜德鎮(zhèn)） 海得琴可直接作用于DA和5-HT受體，并能阻斷α受體，降低腦血管阻力，增加腦血流量和腦對氧的利用率，1981年被美國食品和藥品管理局正式評為腦細胞代謝改善藥。

2.3.2 尼麥角林 通過增強腦細胞能量的新陳代謝，增加氧和葡萄糖的利用，改善智能障礙；增加蛋白質(zhì)合成，改善學(xué)習(xí)和記憶能力。

2.3.3 都可喜（Duxil） 都可喜能有效提高腦動脈血氧含量，改善腦組織對葡萄糖的攝取和利用，恢復(fù)有氧代謝，從而使腦功能得到改善和加強。國外報道治療228例VaD患者2個月后自覺癥狀消失，智能和社會能力明顯改善。

2.4 鈣通道拮抗劑

2.4.1 尼莫地平 尼莫地平治療癡呆的系統(tǒng)評價結(jié)果顯示，在治療AD、VaD和混合性癡呆時，尼莫地平對于改善患者的認知功能障礙癥狀和日?；顒幽芰τ忻黠@益處。

2.4.2 尼卡地平（硝苯芐胺啶） 尼卡地平可有效地擴張腦血管，增加腦血流量，本品還能增強紅細胞的變形能力，對VaD中度有效。

2.5 腦細胞代謝激活劑

包括吡拉西坦、奧拉西坦、茴拉西坦和萘非西坦等。吡拉西坦（腦復(fù)康）能改善腦內(nèi)代謝能量供應(yīng)狀況，促進乙酰膽堿合成，可改善學(xué)習(xí)、記憶和回憶能力，改善由缺氧所造成的逆行性遺忘，對VaD中度有效。茴拉西坦（阿尼西坦，三樂喜）對腦細胞代謝具有激活、保護神經(jīng)細胞作用，能刺激中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一些谷氨酸受體而產(chǎn)生促智作用。用于治療血管性癡呆、中老年記憶減退（健忘癥）。

2.6 血管擴張藥

2.6.1 煙酸 煙酸在體內(nèi)變?yōu)闊燉０?，具有降低腦和外周血管阻力、改善血液循環(huán)、促進代謝、改善腦功能的作用，對VaD有效。

2.6.2 己酮可可堿 己酮可可堿為黃嘌呤類衍生物，其代謝產(chǎn)物具有改善微循環(huán)、降低血黏度、增加周圍血管微循環(huán)和組織帶氧能力、改善紅細胞變形能力，從而改善腦血液循環(huán)，可改善VaD 的認知功能。

2.7 其他藥物

（1）抗血小板藥物如阿司匹林、氯吡格雷對MMSE 量表評估有輕度陽性結(jié)果[8]。（2）丙戊茶堿對VaD認知和總體功能有益。（3）銀杏制劑有效成分為黃酮和萜類，可提高腦缺氧的耐受性，清除自由基。用于治療VaD 能明顯改善癥狀。（4）泊替瑞林是一種合成的促甲狀腺素釋放激素類似物和中樞單胺能和膽堿能系統(tǒng)的調(diào)節(jié)劑，能夠改善VaD 患者的記憶、定向和運動機能障礙[9]。（5）胞二磷膽堿是一種潛在的乙酰膽堿前體，可改善可能的VaD患者的記憶、行為和總體臨床印象。（6）多巴胺能激動劑：任何缺血缺氧發(fā)作都可使多巴胺儲備耗竭，多巴胺能系統(tǒng)刺激可改善認知功能。吡貝地爾改善認知功能的作用已得到證實。（7） 神經(jīng)營養(yǎng)因子（神經(jīng)生長因子）能促進神經(jīng)元增殖和分化，調(diào)節(jié)中樞和外周神經(jīng)元存活和軸突生長，并對效應(yīng)神經(jīng)元的化學(xué)和機械損傷的修復(fù)起重要作用。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNE）mRNA表達的增加與空間記憶增強有關(guān)。BDNF可用于治療AD，有一定的改善作用。（8）雌激素：女性的AD患病率是男性的1.5～3.0倍。雌激素水平下降與AD相關(guān)。雌激素對絕經(jīng)后或卵巢切除術(shù)后婦女的智能有保護和改善作用。雌激素抗AD的作用機制可能與膽堿能系統(tǒng)有關(guān)。一項為期30周的多中心隨機雙盲安慰劑對照試驗對年齡>50歲的輕中度女性AD患者在采用他克林治療前先進行雌激素替代治療（ERT），結(jié)果加用ERT組療效更好。但是ERT 也有一定的風(fēng)險，如會導(dǎo)致腫瘤患病率增高。（9）抗氧化劑：維生素E能適度減緩VaD的發(fā)展進程，VaD患者服用極高劑量（1 000 mg/d）的維生素E，病情惡化的速度比通常延緩7個月。（10）司立吉林：是選擇性MAO-B抑制劑，具有神經(jīng)保護作用。長期服用可降低自由基和其他神經(jīng)毒素的濃度。長期服用該藥有可能防止或延遲神經(jīng)細胞變性。目前正在大規(guī)模臨床試驗中。（11）腦蛋白水解物：為動物蛋白經(jīng)酶降解而產(chǎn)生的特異性氨基酸和多肽的復(fù)合物，可透過血腦屏障，進入神經(jīng)細胞，促進蛋白質(zhì)合成，增加腦組織的抗缺氧能力，改善腦能量代謝，改善記憶。（12）中醫(yī)藥治療：對VaD有效的方劑包括當(dāng)歸芍藥散、黃連解毒湯、鉤藤散、歸脾湯、加味歸脾湯、開心散、調(diào)心方和補腎方等。單味藥及有效成分包括石杉堿甲、銀杏葉、兒茶酸、芹菜甲素、人參皂式、絞股藍皂甙、鹿茸和天麻等。

3 小結(jié)

VaD與AD有許多共同的危險因素，預(yù)防VaD的主要策略是干預(yù)腦血管病的危險因素，包括高血壓、糖尿病、高脂血癥和心房顫動，治療原發(fā)病，預(yù)防腦血管病的復(fù)發(fā)[10-11]。目前的治療措施主要以AchE抑制劑作為一線藥物，AChE抑制劑在緩解癡呆進展和行為障礙方面安全有效[12]。Ca+拮抗劑：尼莫地平和尼卡地平，中度有效。興奮性氨基酸拮抗劑：美金剛在VaD 治療中安全有效。益智藥：吡拉西坦和奈非西坦在VaD中安全有效，尼麥角林、己酮可可堿和銀杏葉制劑對VaD中度有效。血管擴張劑：除煙酸外無效?？寡“逯苿喊⑺酒チ趾吐冗粮窭诪檩p度陽性。

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篇5

【關(guān)鍵詞】 氟桂利嗪 難治性癲癇 糖蛋白 多藥耐藥蛋白

?眼Abstract?演 Objective To investigate the effects of flunarizine add-on therapy on refractory epilepsy. Methods Fifty two patients diagnosed as refractory epilepsy were randomly assigned to flunarizine add treatment group (n = 26) and placebo group (n = 26). During one month time， effects were compared between the two groups and each group before and after treatment. Results There was a significant difference in seizure frequency reduced by 50 percent between two groups (χ2= 5.20，P

[Key words] flunarizine;　refractory epilepsy;　P-glycoprotein;　multi-drug resistance protein

癲癇是由多種病因引起的慢性腦部疾患，其發(fā)病機制尚未獲得突破性進展，治療以藥物為主。經(jīng)過正確的診斷、分型以及恰當(dāng)使用抗癲癇藥物（AEDs），有70%～80%的患者發(fā)作可以得到控制，但仍然有30%左右的患者藥物療效欠佳，發(fā)作難以控制，成為難治性癲癇，目前癲癇領(lǐng)域該方面的研究是熱點[1]。因此，尋找更為有效的治療手段是改善這部分患者預(yù)后的重要方法。目前臨床評價氟桂利嗪是相對比較多的[2，3]，所以在這方面對難治性癲癇的添加治療，我們認為是一種有意義的嘗試，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料　從本院癲癇診療中心數(shù)據(jù)庫中隨機抽取難治性癲癇患者52例，其中全面強直陣攣發(fā)作24例，肌陣攣發(fā)作6例，復(fù)雜部分性發(fā)作7例，單純部分性發(fā)作5例，失神發(fā)作5例，Lennox-Gastaut綜合征2例，其他3例，大多數(shù)服用兩種及兩種以上藥物，為苯妥英鈉、丙戊酸鈉、卡馬西平、苯巴比妥、氯硝安定、托吡酯。所有受試者長期就診于我科，受試期間未有脫落，具體人口統(tǒng)計學(xué)資料詳見表1，兩組資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義。所有患者或家屬簽署知情同意書，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)。

1.2　入選標(biāo)準及排除標(biāo)準?、偃脒x標(biāo)準：吳遜等[4]認為難治性癲癇是指臨床經(jīng)過遷延，頻繁的癲癇發(fā)作至少每月4次以上，應(yīng)用適當(dāng)?shù)牡谝痪€抗癲癇藥物正規(guī)治療，血中的藥物濃度在有效范圍內(nèi)，無嚴重的藥物副反應(yīng)，至少觀察2年仍不能控制發(fā)作，影響日常生活，目前國內(nèi)對難治性癲癇的診斷以此為標(biāo)準。②排除標(biāo)準：因分型不正確、用藥不合理、劑量不足、時間不夠長或根本沒有正規(guī)治療而導(dǎo)致的癲癇反復(fù)發(fā)作者，以及有進行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病或占位性病變者。

1．3　方法　嚴格按照隨機、雙盲對照原則，按1︰1比例隨機分組進行指定治療，并記錄不良反應(yīng)。氟桂利嗪-西比靈（由西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，5mg∕片，生產(chǎn)批號071015773），劑量為每晚服用5mg，為添加治療，對照組使用安慰劑添加治療，一個月后進行回顧性分析。

1．4　評價指標(biāo)?、侬熜е笜?biāo)，治療觀察期一個月內(nèi)的發(fā)作頻率以及較基線期發(fā)作頻率減少50%以上的病例；②安全指標(biāo)，治療期內(nèi)行全面的體格檢查和神經(jīng)科專科檢查，并復(fù)查血常規(guī)、肝腎功能、心電圖；③腦電圖指標(biāo)，入組前及療程結(jié)束后分別檢查腦電圖，分高度異常﹑中度異常﹑輕度異常和正常腦電圖。

1．5　統(tǒng)計學(xué)方法　計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差表示，組間比較用四格表卡方檢驗，組內(nèi)比較用配對t檢驗。所有數(shù)據(jù)使用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計分析，設(shè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1　療效評價　一個月后受試療程結(jié)束后進行回顧性分析。①氟桂利嗪組發(fā)作頻率較基線期減少50%的有14例，占53.84%，而對照組為6例，占 23.07%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=5.20，P＜0.05）。②由表2可見，在第二周末、第四周末氟桂利嗪組較基線期發(fā)作頻率有不同程度改善，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=2.40、2.81，P均＜0.05），第二周末與第四周末比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.73， P＞0.05），而對照組均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2　腦電圖評價　治療組基線期腦電圖高度異常有7例（26.92%）、中度異常14例（53.84%）、輕度異常5例（19.24%），而治療后分別為6例（23.07%）、17例（65.38%）、3例(11.55%)。對照組高度異常4例（15.38%）、中度異常15例（57.69%）、輕度異常7例（26.93%），受試結(jié)束后分別為4例（15.38%）、17例(65.38%)、5例(19.24%)。兩組治療前后腦電圖總體均未有明顯變化。

2.3　不良反應(yīng)評估　受試期間常見的不良反應(yīng)為頭痛、惡心、嗜睡，反應(yīng)遲鈍等。另外血常規(guī)、肝腎功能、心電圖未有特殊臨床意義變化，體格檢查和神經(jīng)科檢查也未見明顯變化。

3　討論

難治性癲癇是臨床上比較棘手的問題，目前尚未有較好辦法。氟桂利嗪作為難治性癲癇的添加治療可能的作用機制如下：①拮抗多藥耐藥轉(zhuǎn)運體多藥耐藥蛋白（multi-drug resistance protein ，MDRP），P-糖蛋白（P-gp），提高腦內(nèi)AEDs的濃度，改善MDR基因的過度表達；②阻斷癲癇病灶處神經(jīng)元去極化時細胞內(nèi)鈣超載，防止癲癇病灶處神經(jīng)元的陣發(fā)性去極化改變、癇性放電和癲癇發(fā)作；③可減輕鈣超載引起的神經(jīng)元的變性壞死，擴張腦血管，改善腦組織循環(huán)，減輕癲癇發(fā)作時缺血缺氧及代謝產(chǎn)物對神經(jīng)元的損傷。

本組26例觀察組患者有不同程度改善，受試期間無明顯臨床意義不良事件，頭痛、嗜睡、反應(yīng)遲鈍等考慮與疾病本身或正用其它抗癲癇藥有關(guān)，與本試驗無關(guān)。本次研究表明，治療組在第二周就顯示出療效，而以后療效未顯示出差異（P＞0.05），提示氟桂利嗪對改善MDR基因表達可能有即時性效果，但程度有一定限制，這與馬愛梅等[5]的研究一致。印度學(xué)者Agarwal等[6]臨床研究發(fā)現(xiàn)17例難治性癲癇患者，使用氟桂利嗪添加治療有近40%患者緩解，而且還發(fā)現(xiàn)強直陣攣發(fā)作比復(fù)雜部分性發(fā)作療效要好，其中基礎(chǔ)用藥為魯米那和苯妥英鈉者療效好，這與本文研究基本一致。國內(nèi)何及等[7]報道：西比靈輔助治療難治性癲癇6個月，結(jié)果顯效30例（51.7%），有效18例（31%），改善4 例（6.9%），無效6 例（10.4%），總有效率89.65%，而且腦電圖也有明顯的改善，但本組腦電圖治療前后無明顯變化，可能與觀察時間偏短有關(guān)，也可能是癲癇發(fā)作變化與腦電圖的預(yù)后無明確關(guān)系。但王清峰等[8]報道西比靈輔助治療32例癲癇患者，歷時3個月，總有效率為75%，腦電圖也無明顯改變。

由于本次研究觀察時間略短以及樣本量有限，且為單地區(qū)研究，所以需進一步深入探索，如從基礎(chǔ)動物實驗、分子生物學(xué)、臨床多中心及大樣本等多角度加以探討。

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篇6

關(guān)鍵詞：PTSD大鼠模型；海馬神經(jīng)元；神經(jīng)元凋亡；TUNEL；病理改變 文獻標(biāo)識碼：A

中圖分類號：R749 文章編號：1009-2374（2017）06-0083-02 DOI：10.13535/ki.11-4406/n.2017.06.042

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙（Posttraumatic Stress Disorder，PTSD）是由異常心理創(chuàng)傷導(dǎo)致的延遲出現(xiàn)的持續(xù)性精神障礙，是一種對創(chuàng)傷因素的異常精神反應(yīng)，近年來其病率越來越高，給社會帶來了嚴重的經(jīng)濟負擔(dān)。研究表明，PTSD患者出F海馬萎縮、體積縮小現(xiàn)象，其機制尚未闡明。我們推測海馬神經(jīng)細胞凋亡可能是導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因之一，本研究給予大鼠SPS&S應(yīng)激建立PTSD模型，利用TUNEL方法檢測PTSD發(fā)病中海馬神經(jīng)元的凋亡情況，從而揭示創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙發(fā)病時海馬區(qū)結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生異常的原因，為研究創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)病機制提供有效的實驗依據(jù)。

1 動物

體重為23±20g的健康雄性Wistar大鼠20只，購于華北理工大學(xué)實驗動物中心，實驗動物合格證號：SCXK 京2009-0004。

2 主要試劑及儀器

TUNEL-POD細胞凋亡檢測試劑盒購于上海七海復(fù)泰生物科技有限公司，-20℃保存。DAB顯色液購于中杉金橋生物技術(shù)有限公司，4℃保存。組織包埋機、石蠟切片機、光學(xué)顯微鏡、防脫撥片、PBS緩沖液。

3 實驗方法

3.1 動物分組及模型建立

動物喂養(yǎng)于華北理工大學(xué)實驗動物中心，適應(yīng)性飼養(yǎng)兩周后（溫度22℃～25℃、噪聲≤60dB、自由飲水?dāng)z食，12h白晝12h黑夜自然光照條件），20只Wistar大鼠隨機分為四組，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組，每組5只，其中Ⅰ、Ⅱ組為對照組，Ⅲ、Ⅳ組為實驗組。實驗組采用改良的單一連續(xù)應(yīng)激方法建立PTSD大鼠模型（禁錮2h，強迫游泳15min，乙醚麻醉至大鼠昏迷，足底電擊5s）。對照組大鼠單純性飼養(yǎng)不做任何處理。

3.2 TUNEL方法檢測海馬神經(jīng)元凋亡

3.2.1 標(biāo)本預(yù)處理：造模成功后將所有大鼠腹腔注射10%的水合氯醛（0.3mL/100g）麻醉，暴露心臟，用4%多聚甲醛溶液（pH=7.4）250mL灌流固定，直到大鼠四肢僵硬。同時處死對照組和模型組大鼠，剝離腦組織后將腦組織置于10%的中爾馬林溶液中浸泡過夜。對照大鼠腦組織立體圖譜對大鼠海馬區(qū)進行取材，常規(guī)制作石蠟切片。

3.2.2 脫蠟至水：（1）室溫下將石蠟組織切片連續(xù)兩次放入不同的二甲苯中浸泡，每次5min，以脫蠟徹底；（2）依次浸泡于濃度為100%、90%、80%、70%的梯度酒精各1次，每次2min，逐漸增加水分；（3）用PBS浸洗組織切片3次，每次5min，用濾紙小心吸干玻片上多余液體；（4）用疏水筆在組織周圍圈出樣本分布的輪廓，便于以下過程中組織標(biāo)本的處理。

3.2.3 增加樣本的通透性：用PBS溶液配置終濃度為20ug/mL的蛋白酶K（不含DNase活性），每個樣品需要100uL蛋白酶K溶液。在室溫下，在每個樣本上滴加100uL配制好的蛋白酶K溶液，使蛋白酶K溶液將樣本完全覆蓋，孵育20min。PBS輕輕潤洗組織樣本3次，每次5min。然后去掉多余液體，并用濾紙小心吸干在玻片上樣品周圍的液體。將處理好的樣品放置在濕盒中以保持樣本的濕潤。

3.2.4 配置標(biāo)記反應(yīng)液。

3.2.5 標(biāo)記反應(yīng)：洗滌樣本1次，輕輕吸干樣本周圍的緩沖液，注意不要觸碰到樣本。在每個樣本上滴加50uL上述配置的標(biāo)記反應(yīng)混合物。將切片放置于濕盒中于37℃孵育60～90min。

3.2.6 顯色與結(jié)果判斷：用PBS溶液孵育2次，每次1min，用濾紙吸干栽玻片上樣品周圍多余液體。室溫下，用去離子水浸洗樣本2次，每次5min，滴干載玻片上多余的水并用吸水紙擦拭樣本周邊的區(qū)域。用POD稀釋液配制POD溶液（1∶25稀釋）在每個樣本上滴加50uL POD溶液，37℃放置30min。DAB顯色液A和B混合稀釋成1X工作液。PBS洗滌載玻片3次后，加入50～100uL DAB底物，室溫放置10min。PBS洗滌載玻片3次，除去多余底物后，蘇木素復(fù)染數(shù)s，自來水沖洗2min，鹽酸酒精分化2s，自來水沖洗2min，室溫下依次用50%、70%、85%、95%梯度酒精脫水2min。二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下分析樣本。

3.3 海馬神經(jīng)元凋亡率的計算

在400倍光學(xué)顯微鏡下隨機取海馬區(qū)5個不重疊視野，數(shù)出相應(yīng)視野內(nèi)神經(jīng)元細胞數(shù)和凋亡陽性細胞數(shù)。細胞凋亡率=凋亡陽性細胞數(shù)/神經(jīng)元細胞總數(shù)。

3.4 統(tǒng)計學(xué)處理

統(tǒng)計結(jié)果用均數(shù)士標(biāo)準差表示，用SPSS 13.0對兩組數(shù)據(jù)進行t檢驗，P

4 實驗結(jié)果

TUNEL陽性細胞核固縮顏色呈黃色或黃褐色，細胞體積縮小，有細胞凋亡的特征。對照組出現(xiàn)較少的神經(jīng)元凋亡細胞（Ⅰ組9.74+0.88、Ⅱ組9.66+1.23），實驗組出現(xiàn)較多的神經(jīng)元凋亡細胞（Ⅲ組20.1+1.04、Ⅳ組19.7+1.53）。PTSD實驗組大鼠TUNEL陽性細胞率明顯高于對照組，并具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

5 討論

實驗選用成年雄性Wistar大鼠是由于其屬于封閉群大鼠，具有無特定病原體、繁殖力強、性格溫順、對傳染病抵抗力強、頭部較寬闊等特點，有利于飼養(yǎng)、實驗操作及結(jié)果觀察，為PTSD的研究建立接近臨床患者情況的動物模型。本實驗在SPS之后隨即對大鼠進行足底電擊是改良后的單一連續(xù)應(yīng)激建模方法，足底電擊是將大鼠放在一個有電板的隔離空間內(nèi)，通過電板導(dǎo)電對大鼠產(chǎn)生電刺激，足底電擊可以產(chǎn)生較高強度的應(yīng)激反應(yīng)。TUNEL是檢測細胞凋亡的常用方法，常用的切片方法為石蠟切片，由于石蠟切片加熱操作等過程可導(dǎo)致細胞損傷，增加了細胞凋亡的假陽性，但本實驗應(yīng)用蛋白酶K溶液透明降低了組織樣本對TUNEL的敏感性，并且石蠟切片具有可切薄片、易于保存等優(yōu)點，因此成為實驗中應(yīng)用最普遍的方法之一。

胞凋亡又稱程序性細胞死亡，是一種不同于細胞病理性死亡的生理性變化過程。細胞在發(fā)生凋亡時，會在生理生化及細胞形態(tài)上發(fā)生一系列變化。隨著地震、洪水等自然災(zāi)害和車禍等人為災(zāi)害的增多，創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙越來越多的出現(xiàn)在人類的社會生活之中，但治療效果一直不容樂觀，因而對PTSD發(fā)病機制的研究已經(jīng)成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)界研究的熱點之一。有研究表明：PTSD可導(dǎo)致海馬區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生變化，但機制尚不清楚。多篇研究顯示：在PTSD中海馬體的損傷及形態(tài)結(jié)構(gòu)、細胞學(xué)變化與患者及動物模型的病理改變密切相關(guān)提示，在PTSD發(fā)病過程中，海馬部位神經(jīng)細胞存在凋亡的病理改變。但截止到目前，PTSD詳細發(fā)病機制仍未被確切闡明。本實驗通過TUNEL方法對PTSD大鼠海馬區(qū)細胞凋亡情況進行檢測，結(jié)果表明，PTSD大鼠海馬神經(jīng)元細胞凋亡率高于對照組，揭示了海馬區(qū)神經(jīng)元細胞凋亡可能與PTSD發(fā)病機制有密切關(guān)系，為PTSD發(fā)病過程中海馬區(qū)結(jié)構(gòu)及功能變化的機制研究提供實驗依據(jù)。

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篇7

摘要：目的：觀察炎癥因子中C反應(yīng)蛋白（Creactive protein，CRP）、白介素-6（Il-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）與代謝綜合征（metabolic syndrome，MS）、缺血性腦卒中的關(guān)系，在MS向缺血性腦卒中進展中，監(jiān)測炎性因子CRP、Il-6、TNF-α的變化，起到通過炎癥因子預(yù)測MS向缺血性腦卒中發(fā)展中的作用。

方法：通過測定MS組（100例）、MS合并缺血性腦卒中組（50例）、缺血性腦卒中組及正常組（50例）的CRP、Il-6、TNF-α的水平，統(tǒng)計學(xué)分析比較CRP、Il-6、TNF-α的水平的不同；通過2年觀察，MS組患者發(fā)展為缺血性腦卒中的和沒有發(fā)展為缺血性腦卒中的CRP、Il-6、TNF-α的水平不同，分析CRP、Il-6、TNF-α的水平與MS發(fā)生及MS發(fā)展為缺血性腦卒中的關(guān)系。

結(jié)果：缺血性腦卒中、代謝綜合征、正常者3組人群的CRP、IL-6、TNF-α水平均不同（P

結(jié)論：炎癥因子CRP、Il-6、TNF-α監(jiān)測能預(yù)測MS發(fā)展為缺血性腦卒中，為早期醫(yī)學(xué)干預(yù)和減少缺血性腦卒中的發(fā)生提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞：代謝綜合征 炎癥因子 缺血性腦卒中

Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2014.11.001

【中圖分類號】R4 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】1671-8801（2014）11-0001-01

近年來流行病學(xué)治療表明腦血管病是我國人口三大死亡原因之一，年發(fā)病率185～219/10萬人/年，患病率394～719/10萬、年死亡率116～142/10萬，據(jù)估計：我國每年新發(fā)腦卒中患者約200萬人，存活患者達600～700萬 [1]。存活患者中約75%殘廢，其中40%為重殘，給家庭和社會造成嚴重負擔(dān)。本研究通過研究代謝綜合征中炎癥因子與缺血性腦卒中發(fā)病的相關(guān)性，為醫(yī)學(xué)干預(yù)缺血性腦卒中提供可靠依據(jù)，能減少缺血性腦卒中的發(fā)生，有效減家庭和社會經(jīng)濟負擔(dān)。

1 對象和方法

1.1 對象。從我院2010年健康體檢中老年人群中篩選出有代謝綜合征組共100例，即具備以下4項中的3項或全部者：①BMI≥25kg/m2；②甘油三酯≥1.7mmol/L；和或HDL-C

1.2 方法：通過健康體檢，篩選檢測代謝綜合征和正常人群。在篩選時抽血時所有人均預(yù)留血樣用于測定的CRP、Il-6、TNF-α的水平；神經(jīng)內(nèi)科確診為缺血性腦卒中的病人，在住院抽血時預(yù)留血樣用于測定的CRP、Il-6、TNF-α的水平。比較代謝綜合征者、缺血性腦卒中者及正常者CRP、Il-6、TNF-α的水平。對代謝綜合征者隨訪觀察2年，統(tǒng)計學(xué)分析代謝綜合征患者中發(fā)展為缺血性腦卒中的和沒有發(fā)展為缺血性腦卒中的MS者的CRP、Il-6、TNF-α的水平不同。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS11.0軟件，計量資料用X±S表示，組間差異采取t檢驗，事件發(fā)生率采用兩個樣本率比較的u檢驗，以P

2 結(jié)果

2.1 缺血性腦卒中、代謝綜合征、正常者3組人群的CRP、IL-6、TNF-α水平均不同（P

表1 缺血性腦卒中、代謝綜合征、正常者3組人群的CRP、IL-6、TNF-α水平比較

與正常人群組對比P

2.2 對正常人群組及代謝綜合征組隨訪觀察2年，正常人群組僅有3例發(fā)生缺血性腦卒中，而代謝綜合征組共有14例發(fā)生缺血性腦卒中，但無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。（詳見表2）。

表2 缺血性腦卒中組和代謝綜合征組發(fā)生缺血性腦卒中情況

以上各組對比P>0.05，無統(tǒng)計學(xué)差異。

2.3 代謝綜合征組2年隨訪，入選時未發(fā)生缺血性腦卒中組和發(fā)生缺血性腦卒中組的CRP、IL-6、TNF-α水平對比有統(tǒng)計學(xué)差異（P

表3 代謝綜合征組發(fā)生缺血性腦卒中和未發(fā)生缺血性腦卒中的CRP、IL-6、TNF-α水平比較

與未發(fā)生缺血性腦卒中組對比P

3 討論

代謝綜合征（MS）是近年內(nèi)分泌領(lǐng)域研究的最大熱點，也是心腦血管領(lǐng)域研究的熱點之一。代謝綜合征是多危險因素綜合征，做為綜合征包括高甘油三酯血癥、低HDL血癥、糖耐量異常、高血壓等征侯的并存，因此MS中的每項因素都與動脈粥樣硬化密切相關(guān)，故其極易累及大腦引起缺血性腦卒中。缺血性腦卒中發(fā)病的早期病變和基本原因是腦動脈粥樣硬化導(dǎo)致脂質(zhì)斑塊的沉積和內(nèi)皮細胞（EC）損傷所致，而動脈粥樣硬化的實質(zhì)則是血管壁細胞遭受各種有害物質(zhì)刺激的慢性炎癥過程，在這一過程中腦血管內(nèi)皮細胞合成和釋放的細胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-13、IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）和白細胞激活過程都是增強的，與神經(jīng)系統(tǒng)的缺血損傷及修復(fù)機制有關(guān)，反映了疾病的進程 [3]。

有研究表明，動脈粥樣硬化過程中以CRP、Il-6、TNF-α等為代表的炎性因素隨疾病的進程異常升高 [4]。本研究結(jié)果提示研究炎癥因子CRP、Il-6、TNF-α在正常人群、代謝綜合征（MS）組、缺血性腦卒中組均有明顯差異（P

美國波士頓大學(xué)醫(yī)學(xué)院Najarian報告，代謝綜合征病人發(fā)生腦卒中的風(fēng)險幾乎是無代謝綜合征者的2倍，其中有代謝綜合征男性的腦卒中風(fēng)險增加78%，而女性則增加1倍以上 [5]。本研究顯示2年內(nèi)代謝綜合征組發(fā)生缺血性腦卒中（14例）較正常人群組發(fā)生缺血性腦卒中（3例）明顯增高，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異，其原因可能有兩方面：①樣本量未足夠多；②觀察時間過短。如果能進一步擴大樣本量（5000～10000例）和延長觀察時間（5～10年），應(yīng)該會有一個令人鼓舞結(jié)果。

本研究還表明在代謝綜合征人群中，不同水平的炎癥因子（CRP、Il-6、TNF-α）對病情的發(fā)展和預(yù)后有預(yù)警作用。炎癥因子水平越高，向缺血性腦卒中病情發(fā)展越快（P

綜合上述，雖然本研究存在樣本量不足、觀察時間過短和未能對代謝綜合征患者進行醫(yī)學(xué)干預(yù)對比等缺陷，但是仍能表明炎癥因子CRP、Il-6、TNF-α水平在正常人群、代謝綜合征（MS）、缺血性腦卒中病人中是不同的，呈正相關(guān)性；炎癥因子CRP、Il-6、TNF-α的水平高低與代謝綜合征（MS）發(fā)展為缺血性腦卒中有明確相關(guān)性和預(yù)警作用，為早期醫(yī)學(xué)干預(yù)缺血性腦卒中、減少缺血性腦卒中發(fā)生提供依據(jù)。

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篇8

隨著人口老齡化，我國帕金森病的患病率呈逐年上升趨勢。調(diào)查資料顯示，在我國65歲以上老年人群中，帕金森病的患病率為1.7％。照此估算，我國目前約有帕金森病患者200萬人，每年預(yù)計新增約10萬人。

過去，由于醫(yī)學(xué)知識相對匱乏，普通群眾對帕金森病知之甚少。許多老年人在出現(xiàn)肢體抖動、動作緩慢等帕金森病的典型癥狀時，常將其歸因于“年紀大”的緣故，沒有引起重視，也沒有及時去醫(yī)院就診，任由疾病發(fā)展。在醫(yī)院能見到的，大多是出現(xiàn)了非常嚴重的運動障礙，甚至生活已不能自理的帕金森病患者。如今，隨著科普宣傳的不斷深入，“帕金森病”在中國老百姓心目中的“知名度”越來越高，因手抖、動作慢來醫(yī)院咨詢自己是否患了帕金森病的人越來越多。特別是每年“世界帕金森病日”之后的幾個星期，上海各大醫(yī)院的神經(jīng)內(nèi)科門診總會迎來就診“小高峰”。不少就診者會對醫(yī)生說：“醫(yī)生，我發(fā)現(xiàn)自己的情況與報紙上描述的帕金森病的癥狀很像，您幫我看看，我是不是患了帕金森病?”這是一個好現(xiàn)象，說明大家對帕金森病越來越重視了，對自己的健康也越來越關(guān)注了，同時也從一個側(cè)面反映出我國民眾的科學(xué)素養(yǎng)有所提高。當(dāng)然，在一些經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)，人們對帕金森病的認識和重視程度，與大城市居民還存在一定差距。因此，帕金森病的健康宣教工作仍應(yīng)不斷加強和深入。

2　漏診誤診情況有所改善

過去，由于部分基層神經(jīng)科醫(yī)生及多數(shù)非神經(jīng)科醫(yī)生對帕金森病了解不多，一旦遇到臨床癥狀不典型的患者，很容易發(fā)生誤診或漏診。2005年，由北京協(xié)和醫(yī)院流行病學(xué)教研室主任張振馨教授牽頭，北京、上海、西安三地專家共同參與完成的一項流行病學(xué)調(diào)查顯示：北京，上海、西安三地帕金森病的平均診斷率僅為47.6％，平均治療率僅為45.1％。在偏遠地區(qū)及農(nóng)村，帕金森病的誤診率更高。臨床上，因脖子硬、手臂僵、動作慢、易跌倒等癥狀去醫(yī)院就診，結(jié)果被誤診為頸椎病、肩周炎，骨質(zhì)疏松，甚至腦血管病的帕金森病患者不在少數(shù)。我曾經(jīng)接診過一名帕金森病患者，他最初的癥狀是上臂有點僵硬、脖子有點不舒服。他以為自己患了頸椎病，便去骨科就診。骨科醫(yī)生讓他拍了張頸椎x線片，發(fā)現(xiàn)其頸椎有退行性改變，便診斷他患了頸椎病，按頸椎病給他治療，結(jié)果可想而知。還有一位70多歲的老太太，有反應(yīng)遲鈍、走路不穩(wěn)，容易摔跤等癥狀。在被確診為帕金森病前，她曾去多家醫(yī)院就診，醫(yī)生給出的診斷五花八門，如骨質(zhì)疏松癥、腔隙性腦梗死，骨關(guān)節(jié)病等，藥吃了不少，癥狀卻越來越嚴重。

近年來，為規(guī)范帕金森病的治療，提高帕金森病早期診斷的準確性，減少誤診及漏診，中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會帕金森病及運動障礙學(xué)組采取了一系列措施：2006年，學(xué)組制定了《中國帕金森病治療指南》(第一版)，并于2009年進行了修訂；2009年，學(xué)組啟動了一項名為“中國帕金森病治療指南萬里行”活動，在全國40個城市陸續(xù)開展面對神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)生及相關(guān)學(xué)科醫(yī)生的繼續(xù)教育活動，以提高臨床醫(yī)生(包括非神經(jīng)科醫(yī)生)對帕金森病的認識和鑒別診斷能力。與過去相比，臨床醫(yī)生對帕金森病的認知程度已經(jīng)有了很大提高，一旦遇到疑似帕金森病者，一般都會建議其去神經(jīng)內(nèi)科就診，誤診、漏診的情況已經(jīng)有所改善。

3　早期診斷方法研發(fā)加速

目前，由于帕金森病的病因尚未完全明確，現(xiàn)有的各種治療手段均僅能控制癥狀、延緩疾病進展，無法阻止病情進展，也無法治愈疾病。同時，由于人們對帕金森病的危險因素知之甚少，故迄今為止還沒有一種措施被證實可以有效預(yù)防帕金森病的發(fā)生。因此，對帕金森病患者而言，早期診斷、早期治療是延緩疾病進展、提高生活質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

過去，診斷帕金森病主要依靠臨床癥狀，特別是“運動癥狀”，如靜止性震顫、肌肉僵硬、動作遲緩等。然而，當(dāng)患者出現(xiàn)這些運動癥狀時，病變已不是早期階段。

近年來，各國科研人員都在大力研究帕金森病的早期診斷方法，如影像學(xué)檢查(如頭顱磁共振，PET、SPECT、超聲等)、帕金森病相關(guān)生物標(biāo)志物等，以便發(fā)現(xiàn)更早期的帕金森病患者，及早采取干預(yù)措施。

目前，影像學(xué)檢查(神經(jīng)功能顯像)已被部分大醫(yī)院用于帕金森病的診斷，其臨床價值已初步顯現(xiàn)。一般地說，若影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)腦部，特別是中腦部位有異常信號或異常代謝的表現(xiàn)，常提示帕金森病可能。同時，帕金森病相關(guān)生物標(biāo)志物的研究工作正在積極進行中。2011年，由首都醫(yī)科大學(xué)王曉民教授擔(dān)任首席科學(xué)家、我科參與的“973計劃”項目《帕金森病發(fā)病機制和干預(yù)策略的基礎(chǔ)研究》已正式立項。將在今后五年中更深入地研究帕金森病的發(fā)病機制，尋找生物標(biāo)志物和新的藥物作用靶點，推動帕金森病防治干預(yù)新措施的建立。

4　“非運動癥狀”備受關(guān)注

近年來，帕金森病的非運動癥狀備受醫(yī)學(xué)界關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，帕金森病患者不僅有靜止性震顫、肌強直，動作遲緩及姿勢平衡障礙等運動癥狀，還存在精神障礙、睡眠障礙、自主神經(jīng)功能紊亂等非運動性癥狀(NMS)，如便秘、抑郁、嗅覺減退，失眠等。2008年，中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會在全國14個城市、19所醫(yī)院進行的一項帕金森病患者生活質(zhì)量調(diào)查結(jié)果顯示，10.1％的患者伴有抑郁癥，45.5％的患者伴有抑郁情緒。帕金森病患者年齡越大，接受治療時間越長，其運動情況和情感狀況越差。帕金森病的非運動癥狀不僅會降低患者的生活質(zhì)量，還會加重帕金森病患者的運動癥狀。若能在控制帕金森病運動癥狀的同時，積極治療其伴隨的非運動癥狀。往往可以起到事半功倍的效果。

研究還發(fā)現(xiàn)，在帕金森病的運動癥狀出現(xiàn)之前，非運動癥狀就已存在，非運動癥狀對早期發(fā)現(xiàn)帕金森病有一定的指導(dǎo)意義。作為《帕金森病發(fā)病機制和干預(yù)策略的基礎(chǔ)研究》的子項目，我科已于近期啟動“帕金森病非運動癥狀發(fā)生機制和早期臨床預(yù)警指標(biāo)的研究”，計劃用5年時間，總結(jié)出各種非運動癥狀在60歲以上老年人中的分布頻率，以及這些非運動癥狀對預(yù)測帕金森病發(fā)生的敏感性和特異性，以期建立有助于帕金森病早期診斷的綜合指標(biāo)體系。簡而言之，就是觀察有睡眠障礙、抑郁、便秘、嗅覺減退等癥狀的老年人，將來發(fā)生帕金森病的風(fēng)險是多少；同時有上述兩個癥狀的，將來發(fā)生帕金森病的風(fēng)險又是多少；同時有三個癥狀的，將來發(fā)生帕金森病的風(fēng)險是不是更高等。當(dāng)然，大家也不必過分緊張，有便秘，嗅覺減退，睡眠障礙等問題并不意味著將來一定會發(fā)生帕金森病。

5　神經(jīng)保護性治療成熱點

近年來，被認為具有一定的延緩疾病進展、改善癥狀作用的神經(jīng)保護性藥物在帕金森病治療中的地位日益凸顯。原則上，一旦被確診為帕金森病，就應(yīng)及早接受保護性治療。目前臨床常用的保護性藥物是單胺氧化酶B型(MAO－B)抑制劑。有報道稱，應(yīng)用該類藥物可延緩疾病發(fā)展(約9個月)，推遲左旋多巴使用的時間。此外，多巴胺受體激動劑、大劑量輔酶Q10也可能有一定的神經(jīng)保護作用，但其療效需進一步證實。

6　癥狀性治療更注重“長遠利益”

當(dāng)被確診為帕金森病以后，患者應(yīng)立即接受正規(guī)治療，治療措施主要包括：康復(fù)治療(加強運動，如游泳、打太極拳等)、藥物治療(如神經(jīng)保護性藥物、癥狀控制性藥物)和心理治療等。由于目前所有治療帕金森病的手段均只能改善癥狀，不能阻止病情發(fā)展，更無法治愈疾病，故在治療方案的選擇上，應(yīng)更加注重“長遠利益”，在“以最小劑量達到滿意療效”的基礎(chǔ)上，強調(diào)個體化治療，即根據(jù)患者的病情特點、年齡、就業(yè)狀況、經(jīng)濟承受能力等因素，制定最佳治療方案，盡量避免或減少藥物副作用和并發(fā)癥的發(fā)生。

篇9

方法選擇41例腦梗死患者，在中藥補陽還五湯熏蒸治療前后分別采集血清進行雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，比較治療前后患者血清血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達水平，分析VEGF、BDNF表達水平之間的線性關(guān)系。

結(jié)果治療前后患者血清VEGF、BDNF表達水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。

結(jié)論中藥補陽還五湯熏蒸治療可顯著升高腦梗死患者血清VEGF、BDNF表達水平，提示其可能對腦梗死具有較好的治療作用。

【關(guān)鍵詞】中藥熏蒸；補陽還五湯；腦梗死

中圖分類號：R743.33文獻標(biāo)識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.02.007

【Abstract】ObjectiveTo explore the molecular mechanism of treatment effect of Buyang Huanwu Decoction on cerebral infarction.

Methods41 patients with cerebral infarction were selected，and double antibody sandwich enzymelinked immunosorbant assay（ELISA） was used to detect serums which were respectively collected before and after treatment.In addition，expression levels of vascular endothelial growth factor（VEGF） and brain derived neurotrophic factor（BDNF） were compared before and after treatment，and linear relationship between the expression levels of the VEGF and BDNF was analyzed.

ResultsBefore and after treatment，difference of the expression levels of VEGF and BDNF was statistically significant（P0.05）.

ConclusionTraditional Chinese medicine Buyang Huanwu Decoction can significantly increase the expression levels of serum VEGF and BDNF in patients with cerebral infarction，which suggests that it may have a better therapeutic effect on cerebral infarction.

【Key words】traditional Chinese medicine fumigation；Buyang Huanwu Decoction；cerebral infarction

X卒中主要分出血性和缺血性。我國現(xiàn)有腦卒中患者約700萬例，其中缺血性腦卒中（即腦梗死）占比最高，約為80%[1]，僅腦卒中治療費用即約400億元/年[2]。國內(nèi)外對腦梗死進行了大量的研究，但治療上仍未獲得重大突破，目前仍沒有確切的治療方法來減輕神經(jīng)損傷，多年來唯一被美國FDA 批準用于腦卒中的藥物只有組織纖溶酶原激活劑（tPA）[3]。從我國傳統(tǒng)中藥材或復(fù)方中篩選多靶點藥物是一個較好的研究方向，對于傳統(tǒng)醫(yī)藥資源保護和攻克腦卒中均具有重要意義[4]。在使用西藥的基礎(chǔ)上聯(lián)合口服或鼻飼中藥補陽還五湯，能顯著促進腦梗死患者的神經(jīng)功能恢復(fù)[5]。近年來，采用中藥熏蒸治療腦卒中取得了良好的效果，但研究主要是對其療效做局部機理的探討，認識停留在宏觀甚至僅僅限于推理。本研究使用中藥補陽還五湯熏蒸法對腦梗死患者進行治療研究，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測41例桂西地區(qū)缺血性腦卒中患者血液血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達水平，初步探討中藥熏蒸對腦卒中康復(fù)患者腦功能重組的影響情況及其康復(fù)機理。

1對象與方法

1.1研究對象

選擇2016年1月至10月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科與神經(jīng)內(nèi)科住院患者41例，均符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議制定的診斷標(biāo)準，并經(jīng)頭顱CT或MRI檢查確診為缺血性腦卒中（腦梗死）。其中男23例，女18例，平均年齡（67.56±7.68）歲。

1.2病例納入與排除標(biāo)準

納入標(biāo)準：（1）初次發(fā)病，年齡30～80歲，經(jīng)頭顱CT或MRI證實，一側(cè)偏癱，病程40分的病人；血壓

1.3方法

1.3.1樣本收集

治療前后24 h內(nèi)于受試者肘正中靜脈抽取3 ml空腹血置于促凝管中，促凝血分離血清后用于檢測VEGF和BDNF水平。

1.3.2熏蒸方法

采用大連鵬達醫(yī)療器械有限公司SZ88II型多功能熏蒸治療儀給予中藥熏蒸患側(cè)。水溫控制在40℃，每日熏蒸1次，每次30 min。10次為1個療程，共2個療程。

1.3.3中藥熏蒸藥方

采用腦中風(fēng)后遺癥治療方補陽還五湯，以黃芪益氣，當(dāng)歸養(yǎng)血，合赤芍、川芎、紅花、地龍活血化瘀通經(jīng)通絡(luò)。具體為：黃芪60 g，當(dāng)歸30 g，赤芍30 g， 紅花30 g，川芎30 g，地龍30 g，桃仁30 g。

1.3.4檢測方法

VEGF、BDNF的表達水平由ELISA法檢測，ELISA試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供，并嚴格按照說明書進行操作。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差（〖AKx-D〗±s）表示，治療前后變量的比較采用配對樣本t檢驗，相關(guān)性運用Pearson相關(guān)分析法，檢驗水準：α=0.05，雙側(cè)檢驗。

2結(jié)果

2.1血清VEGF、BDNF俗計返OD值

不同濃度梯度標(biāo)準品的OD值，如表1所示。

2.2治療前后VEGF、BDNF的表達水平

治療后VEGF、BDNF的表達含量均明顯高于治療前的表達含量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

2.3患者血清VEGF、BDNF表達水平的相關(guān)性

經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析，患者血清VEGF、BDNF表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（r=0.171，P=0.286>0.05），提示患者血清VEGF、BDNF表達水平相關(guān)不顯著。

3討論

腦梗死是常見的腦血管病變，因其具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率的“三高”特點，一直以來都是臨床治療與研究的難點與熱點[6]。國內(nèi)外進行了大量的基礎(chǔ)研究，發(fā)現(xiàn)血清VEGF、BDNF含量與大腦神經(jīng)功能恢復(fù)關(guān)系密切，Jiang等[7]對腦梗死大鼠進行重復(fù)耳迷走神經(jīng)刺激治療，檢測其BDNF和VEGF的表達水平，發(fā)現(xiàn)BDNF和VEGF含量顯著升高，認為腦梗死后可能通過上調(diào)大鼠腦的BDNF和VEGF含量以實現(xiàn)神經(jīng)保護作用。Atif等[8]研究黃體激素對小鼠腦梗死急性發(fā)作期BDNF、VEGF含量的影響，也發(fā)現(xiàn)黃體激素治療后通過升高小鼠BDNF、VEGF含量，對梗死的小鼠大腦具有治療作用。Alhusban等[9]研究發(fā)現(xiàn)坎地沙坦也是通過增加腦梗死大鼠血清VEGF、BDNF含量，從而促進大腦神經(jīng)功能的恢復(fù)。此外，多項人體研究也均發(fā)現(xiàn)[10～11]，在原治療基礎(chǔ)上加用補陽還五湯口服后可有效改善患者的神經(jīng)功能及預(yù)后，病例組治療效果顯著優(yōu)于對照組，但血清VEGF、BDNF含量改變情況有待進一步研究。

然而，當(dāng)前鮮見國內(nèi)外采用中藥補陽還五湯熏蒸治療腦卒中的相關(guān)研究。因此，本研究以41例腦梗死患者作為研究對象，采用中藥補陽還五湯熏蒸治療，治療前后采集患者血液樣本，采用ELISA技術(shù)對血清VEGF、BDNF表達水平進行檢測，初步探討中藥補陽還五湯熏蒸治療腦梗死的分子機制。我們發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者血清VEGF、BDNF表達水平在中藥補陽還五湯熏蒸治療后顯著升高，提示中藥補陽還五湯熏蒸法對腦梗死具有較好的治療作用。同時，我們還分析了患者血清VEGF、BDNF表達水平的相關(guān)性，結(jié)果顯示兩者相關(guān)無顯著性，可能因影響VEGF、BDNF表達水平的因素較多，機制較為復(fù)雜，也可能因樣本量較小，有待進一步深入研究。此外，在臨床操作過程中，因熏蒸療程較長，患者每次均需脫掉衣服，偶有受涼感冒，且熏蒸過程中偏癱患者偶有燙傷情況出現(xiàn)，考慮此可能為患者對中藥熏蒸療法的依從性偏低的主要原因。

綜上，中藥補陽還五湯熏蒸治療腦梗死，可明顯升高VEGF、BDNF表達水平，對腦梗死具有治療作用，但其具體機制有待進一步研究。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，相信中藥補陽還五湯熏蒸治療腦梗死的機理將會得到更深入的發(fā)現(xiàn)，綜合考慮腦梗死患者的各種危險因素[12]，并借助先進的技術(shù)對此進行深入研究，為臨床應(yīng)用中藥熏蒸治療腦卒中偏癱的機理提供循證依據(jù)，對推廣中醫(yī)藥治療腦卒中的康復(fù)技術(shù)具有重要意義。

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（收稿日期：2016-12-22 修回日期：2016-3-24）

基金項目：廣西醫(yī)藥衛(wèi)生自籌經(jīng)費計劃課題（Z2014513）；2014年廣西高校重點實驗室開放課題（右醫(yī)科字〔2014〕2號）

篇10

【關(guān)鍵詞】缺血性腦損傷；HSP72；AKT；Bad(Ser 136)

Study on the neuroprotection of HSP72 during brain injury induced by ischemia

ZHANG Fang,LIU Hong-zhi,ZHANG Zhao-cheng,et al.

Basic Medical Science,Xuzhou Medical College,Xuzhou City,Jiangsu 221004,China

【Abstract】 Objective To investigate the molecular mechanism of neuroprotection of HSP72 during Brain injury induced by ischemia.Methods SD rats were divided randomly into 5 groups:sham-operated;cerebral ischemia and reperfusion;cerebral ischemia and reperfusion+heat shock treatment;cerebral ischemia and reperfusion+antisense oligonucleotides and reperfusion+solvent.Brain injury in hippocampus of rats and change of phosphorylation of AKT and bad(ser 136)were detected by cresly violet-strained or immunoblot assay.Results Comparing with cerebral ischemia and reperfusion group, antisense oligonucleotides and solvent group,the brain injury and phosphorylation of AKT and bad(ser 136) of heat shock treatment team increased significantly.ConclusionHSP72 protected the neurons in hippocampus from ischemia by increasing phosphorylation of AKT and bad(ser 136).

【Key words】Ischemic brain injury; HSP72;AKT;Bad(Ser 128)

熱休克蛋白（HSPs）因具有細胞抗氧化保護作用而成為研究的熱點。高溫能誘導(dǎo)熱休克蛋白合成，HSP72是增強熱耐受力的誘導(dǎo)型 HSPs的一種,但是它對缺血性腦損傷后神經(jīng)元的保護機制尚不十分清楚。2008年1月至2008年9月，筆者通過觀察HSP72對大鼠全腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細胞凋亡及AKT和Bad(Ser 136)磷酸化的影響，以探討其對大鼠神經(jīng)元的保護作用及機制。

1 材料與方法

1．1 動物及分組 雄性健康SD大鼠40只，體質(zhì)量250～300 g，清潔級。將大鼠隨機均分為兩組，缺血15 min再灌5 d為甲組，再灌12 h為乙組。各組又分為假手術(shù)組、缺血再灌注對照組、熱休克處理組、HSP72反義寡核苷酸組，各5只。

1．2 方法

1．2．1 動物模型制備 用20%水合氯醛(300～350 mg/kg)腹腔注射麻醉動物后，分離雙側(cè)頸總動脈并電凝椎動脈[1-2]。手術(shù)第2天于動物清醒狀態(tài)下結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈，使全腦缺血15 min，然后不同的時間再灌注。缺血時保持其直腸溫度在36．5℃～37．5℃。以缺血動物體征表現(xiàn)判斷缺血模型的可靠性。假手術(shù)組的處理同實驗組，但不結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈。熱休克處理組于缺血前2 h置于42℃溫箱中熱休克預(yù)處理40 min，HSP72反義寡核苷酸組在熱休克預(yù)處理的同時腹腔注射HSP72反義寡核苷酸0．5 ml（5’-TGTTTTCTTGGCCAT-3’,濃度200 μmol/L）[3]。

1．2．2樣品制備和免疫印跡 甲組于再灌注第5天，以水合氯醛麻醉大鼠，然后以生理鹽水和4%多聚甲醛進行心室灌注[1]。取腦組織在4℃多聚甲醛中固定1 d以上后，于梯度乙醇溶液中脫水并在二甲苯中透明。包蠟后的腦組織進行切片(5 μm)，經(jīng)脫蠟、二甲苯，最后放于焦油紫溶液中染色。取海馬CA1區(qū)1 mm 內(nèi)的細胞數(shù)量作為計數(shù)標(biāo)準。乙組于再灌注12 h將大鼠快速斷頭取腦，分離雙側(cè)海馬，置液氮中凍存?zhèn)溆?。以下操作均在冰水浴中進行。從液氮中取出海馬，加1．7 ml勻漿緩沖液，用Teflon勻漿器高速勻漿（10 s×6次），800 g×10 min離心，棄上清液，加入0．6 ml buffer B振蕩搖勻，12 000 g×10 min離心，取上清，按改良Lowry法，以牛血清白蛋白為標(biāo)準蛋白測蛋白后分裝，置-80℃冰箱待用。按Sambrook等方法，等量蛋白樣品經(jīng)7．5% SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離后，以濕轉(zhuǎn)法電轉(zhuǎn)移至NC膜上。轉(zhuǎn)移后的NC膜經(jīng)3% BSA室溫封閉3 h后加入一抗AKT和Bad(Ser 136)，4℃過夜。用洗滌液洗膜3遍，加入二抗羊抗兔IgG-AP（Sigma公司），37℃反應(yīng)2 h，洗膜。以NBT/BCIP顯色，水洗終止反應(yīng)。結(jié)果用圖像處理儀（Gene Company）分析處理。

1．2．3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 10．0統(tǒng)計軟件，計量資料以均值±標(biāo)準差(x±s)表示，統(tǒng)計分析采用方差分析(ANOVA)。P≤0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

HSP72能減少海馬神經(jīng)元損傷及腦組織AKT和Bad(Ser 136)的磷酸化程度。見表1。

3 討論

研究證實:與假手術(shù)組比較，缺血再灌注組第5天海馬神經(jīng)元損傷嚴重；再灌注12 h腦組織中AKT和Bad(Ser 136)的磷酸化程度顯著增高(P

HSP是生物體細胞在一系列應(yīng)激因素作用下產(chǎn)生,是具有高度保守性的細胞保護性蛋白質(zhì),其中HSP70家族與細胞保護之間的關(guān)系最密切,它在機體細胞耐受、機體免疫調(diào)節(jié)、遺傳物質(zhì)保護、基因調(diào)控、細胞增殖分化、腫瘤發(fā)生發(fā)展等過程中起重要作用。HSP70家族主要有誘導(dǎo)型的HSP72和結(jié)構(gòu)型的HSP73兩個亞型,在應(yīng)激過程中主要為HSP72表達變化[4-5]。腦海馬CA1區(qū)是對缺血最為敏感而發(fā)生大量細胞凋亡的區(qū)域之一[2],本實驗通過焦油紫染色法檢測海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的凋亡情況證實了這一點。在本實驗結(jié)果顯示：熱休克處理組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡明顯少于缺血再灌注對照組、HSP72反義寡核苷酸組，說明HSP72對腦缺血再灌注引起的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡具有很好的保護作用。

激活后的Akt能使底物中的絲氨酸、蘇氨酸殘基磷酸化而起到抗凋亡和保護細胞的作用。目前認為，磷酸化后的Akt可通過作用于Bad、Caspase 9等底物或下游因子抑制細胞凋亡[6-8]。近年來研究表明, Akt活化后能經(jīng)多種途徑促進細胞存活,其重要機制之一就是通過磷酸化 Bcl-2家族成員Bad實現(xiàn)其促進生長的作用。Bad是否磷酸化關(guān)系到細胞的成活和死亡,是神經(jīng)存活因子控制神經(jīng)細胞凋亡的重要環(huán)節(jié)。Bad的功能受它的Ser-112和Ser-136位點磷酸化所調(diào)節(jié)。磷酸化的Bad能與伴侶蛋白(Chaperone)14-3-3蛋白相互作用,Bad-14-3-3結(jié)合物可釋放Bcl-2和/或 Bcl-xl,發(fā)揮抗細胞凋亡效應(yīng)。Akt是強有力的Bad（Ser-136）激酶,活化的 Akt可以使Bad的Ser-136位點磷酸化,有效阻斷 Bad誘導(dǎo)的細胞死亡[9,10]。本實驗研究發(fā)現(xiàn)，腦缺血再灌注后15 min時腦組織中Akt和Bad(Ser 136)的磷酸化程度相對假手術(shù)組明顯降低，30 min時開始升高，3 h時達到最高，而后逐漸降低，到12 h時回到與假手術(shù)組相近的水平，實驗證實這一回落導(dǎo)致了細胞嚴重損傷[2]。為進一步探索HSP72對缺血性腦損傷的保護作用是否與Akt信號通路有關(guān)，在實驗中筆者使用免疫印跡方法檢測各組大鼠腦海馬組織中Akt和Bad(Ser136)磷酸化水平。發(fā)現(xiàn)熱休克處理組的磷酸化水平明顯高于其他組，因而推測Akt信號通路可能介導(dǎo)HSP72對神經(jīng)元的保護作用。

本實驗結(jié)果證明:HSP72可以明顯上調(diào)Akt和Bad(Ser136)的磷酸化水平,減少神經(jīng)元凋亡,對腦缺血再灌注損傷起保護作用。關(guān)于HSP72的腦保護作用的其他可能機制筆者將做進一步的研究。

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