導語：他克莫司血藥濃度方法學評論一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

他克莫司(tacrolimus,FK506)是一種新型強效免疫抑制劑,是鏈霉菌屬中分離出來的發(fā)酵產(chǎn)物,常溫下呈白色結晶狀粉末,分子式為CH60N2HO,分子量為822.05[1]。由于對T細胞有選擇抑制作用,主要用于抗器官排斥性疾病肝、腎移植的急性排斥反應或是免疫性疾病類風濕性關節(jié)炎、紅斑狼瘡等疾病,藥物本身和其代謝產(chǎn)物都具有一定的毒性,所以進行血藥濃度監(jiān)測是其使用的一個必備前提。目前監(jiān)控其血藥濃度的方法有許多,但是高效液相色譜法尚未成體系。本文采用反相高效液相色譜法測定他克莫司血藥濃度[2],方法準確、可靠、簡單,適用于臨床上監(jiān)測他克莫司的血藥濃度的廣泛推廣。2011年2月～2011年6月,我們研究了使用反相高效液相色譜法測定他克莫司血藥濃度的可行性。

1材料與方法

1.1材料

儀器與藥品儀器:3200Qtrap型液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀;藥品:他克莫司膠囊(規(guī)格為1mg/粒,浙江海正藥業(yè)股份有限公司,批號:20100412);他克莫司對照品(上海同田生物技術有限公司批號:084120L);乙腈為色譜純,其它試劑為分析純。

1.2方法

1.2.1色譜條件:色譜柱:DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm×5μm);流動相:乙腈:0.2%磷酸:四氫呋喃(55:40:5);流速:1.2ml/min;柱溫:30℃;進樣量:20。

1.2.2樣品溶液的配制:精密稱取他克莫司10mg,全部轉移至100ml容量瓶中,加入乙腈至刻度搖勻,制成0.1mg/ml的溶液,放入冰箱保存。

1.2.3標準溶液的配制:精密稱取他克莫司對照品10mg,全部轉移至l00ml容量瓶中,加入乙腈至刻度,搖勻,即得濃度為0.1mg/ml的標準品對照液。分別取標準品2、4、6、8、10ml,用乙晴稀釋至20ml,做成標準曲線。

1.2.4全血樣品處理:取血清0.5ml,加入5ml乙醚,振蕩3min,3000r/min離心機處理10min,將上清液轉移至另一管中,留待進樣。

1.2.5配制好的液體每次進樣20μl,每一濃度進樣三次,如結果無太大偏差,取其平均值。以峰面積(A)對濃度(C)進行回歸,他克莫司的濃度在1.32~16.0μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好。

2結果

2.1回收率

取空白血漿1ml,加入他克莫司標準液,配成2.0、4.0、6.0三種梯度濃度的血漿樣品,按“1.2.4”項方法操作,測定樣品峰面積,根據(jù)標準曲線計算相對回收率。根據(jù)各濃度血漿樣品峰面積和相應濃度的標準液直接進樣,測得的峰面積比較,通過計算得到絕對回收率。結果見表1。從表1可以看出:2.0、4.0、6.0(μg/ml)三種梯度濃度的血漿樣品,相對回收率分別為104.1%、102.7%、102.8%;絕對回收率分別為93.8%、95.5%、93.0%。平均相對回收率為103.2%,平均絕對回收率為94.1%。研究結果顯示:反相高效液相色譜法能夠較好測定他克莫司血藥不同濃度的相對和絕對回收率。

2.2精密度

配制2.0、4.0、6.0三種濃度的血漿樣品,在同1d的不同時間和5d中每一天,按“1.2.4”項方法操作,測定樣品峰面積,得出日內(nèi)和日間精密度,見表2。從表2可以看出:.0、4.0、6.0(μg/ml)三種梯度濃度的血漿樣品,日內(nèi)精密度分別為104.1%、102.7%、102.8%;日間精密度分別為93.8%、95.5%、93.0%。平均日內(nèi)精密度為103.2%,平均日間精密度為94.1%。研究結果顯示:反相高效液相色譜法能夠較好測定他克莫司血藥不同濃度的日內(nèi)和日間精密度。

3討論

作為第二代免疫抑制藥的代表性藥物,他克莫司臨床大量應用于肝腎等器官移埴的抗排斥反應及免疫缺陷性疾病,具有藥效強、劑量低、提高器官存活率、急性排斥反應低等優(yōu)點。但是他克莫司治療范圍限制在一定的劑量,毒副作用較大,關鍵是毒副作用與血藥濃度呈量效正相關性,再加上其藥動學指標患者個體差異較大,無法用服藥量來判斷血藥濃度的范圍[3]。因此,臨床使用他克莫司治療病癥時,為提高免疫抑制效果的同時將不良反應的發(fā)生率降到最低,需要監(jiān)測藥物在休內(nèi)的血藥濃度,根據(jù)測量到的血藥濃度來確定給藥劑量和方案。檢測他克莫司血藥濃度時,通常采用全血來做為檢測標本,這是因為:①全血/血漿中他克莫司濃度的分布為20:1,全血中藥物濃度較高,更易達到檢測靈敏度要求;②血漿濃度穩(wěn)定性關,比全血濃度變異性大;③他克莫司血藥濃度監(jiān)測為全血谷值濃度,所以一般不用血漿。而且患者個體差異較大,血藥達峰時間并不一致,所以臨床檢測一般以全血為主[4,5]。

有研究表明,許多因素能影響他克莫司的血藥濃度[6～8],例如性別,女性的血藥濃度要高于男性,體重和身高也對他克莫司的血藥濃度有影響,給藥時間也對他克莫司的血藥濃度有很大影響,例如早晨服藥,血藥濃度明顯高于一天的其它時間段,而服用取它的藥物對他克莫司的血藥濃度也有影響,例如大環(huán)內(nèi)酯類藥物、氯霉素、林霉素、抗真菌類藥物、抗病毒藥、鈣拮抗劑等藥物的聯(lián)合用藥,均會影響到他克莫司的血藥濃度,所以臨床上對他克莫司血藥濃度的監(jiān)控非常重要[9]。

近年來他莫西司的血藥濃度的測定方法,主要有串聯(lián)質(zhì)(HPLC-MS/MS)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、酶免法(EIA)及微粒子酶免分析法(MEIA)[10]。本研究采用反相高效液相色譜法測定他克莫司血藥濃度,準確度高,易于操作,適于臨床推廣[11,12]。

我們的研究結果表明:反相高效液相色譜法能夠較好測定他克莫司血藥不同濃度的相對和絕對回收率,也能較好測定他克莫司血藥不同濃度的日內(nèi)和日間精密度。他克莫司血藥濃度在1.32～16.0mg/ml范圍內(nèi)線性關系良好,平均加樣回收率為103.2%。本研究探討了,他莫西司的臨床反相高相色譜檢測法,但是對于檢測他莫西司血藥濃度的質(zhì)控方法,并沒有做探討,質(zhì)控系統(tǒng)的建立對于評價方法的準確及考慮其它影響檢測的因素的控制十分重要?，F(xiàn)在質(zhì)控方法主要有兩種,一個是定期測定樣本,根據(jù)質(zhì)控結果是否符合要求來確定,質(zhì)控方法的正確性。另一種方法即是繪制質(zhì)控圖,即已測定結果為縱坐標,測定時間或者批次為橫坐標,繪制標準圖譜,限定有效范圍。本研究的下一步即為探討反相高相液相檢測法的質(zhì)控。