導(dǎo)語(yǔ)：兩性霉素B抑制白色念珠菌論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的綜合考察各種因素(不同的培養(yǎng)基、培養(yǎng)基的pH值、真菌接種濃度等)對(duì)AmB抑制白色念珠菌作用的影響,為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。方法液體稀釋法。結(jié)果在不同的培養(yǎng)基中,AmB對(duì)白色念珠菌的MIC值不同,隨著pH的增高及真菌接種菌液濃度增加,其MIC值增加。結(jié)論AmB對(duì)白色念珠菌的MIC值會(huì)受到多種因素的影響,所以,進(jìn)行藥物的抗菌活性研究時(shí)應(yīng)制定并嚴(yán)格執(zhí)行統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】兩性霉素B;白色念珠菌;抑制

【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofvariousfactors,suchasthetypeofmedium,Phofmedium,sizeofinoculumontheactivityofamphotericinB(AMB)againstCandidaalbicans,soastoprovideevidencesforrationaluseofthedrug.MethodsThebrothdilutiontestwasexamined.ResultsTheactivityofAmBagainstCandidaalbicanswasinfluencedbythetypeofmedium.Theminimuminhibitionconcentrations(MIC)increasedwiththeincreaseofpHandinoculumconcentration.ConclusionThestudyofantifungalactivitymustestablishandstrictlyimplementunifiedstandard.

【Keywords】amphotericinB;Candidaalbicans;inhibition

藥物的抗真菌活性受到多種因素的影響,例如,不同的培養(yǎng)基、培養(yǎng)基的pH值、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度、真菌接種濃度、真菌形態(tài)、血清、有氧與厭氧環(huán)境等。兩性霉素B是目前臨床上應(yīng)用的抗真菌藥物,本研究是綜合考察各種因素對(duì)其抑制白色念珠菌作用的影響,為臨床合理用藥及進(jìn)一步藥用價(jià)值的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1菌株白色念珠菌Cla,購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)真菌保藏中心。

1.2藥品兩性霉素B(amphotericinB,AmB),上海先鋒藥業(yè)公司,上海第二制藥廠生產(chǎn)。AmB溶于蒸餾水中制備成濃度為1280μg/ml的藥物原液,過(guò)濾除菌。臨用時(shí)用滅菌蒸餾水稀釋為128μg/ml最高濃度藥液。

1.3培養(yǎng)基改良沙氏液體培養(yǎng)基(1%蛋白脈,4%葡萄糖);YEPD培養(yǎng)基(2%蛋胨,2%葡萄糖,1%酵母浸粉)。

1.4其他HZQ-X100A型恒溫振蕩培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品);5000μl、1000μl加樣槍(法國(guó)GILSON產(chǎn)品);SN-CS-2D單人凈化工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠);改良沙堡氏液體培養(yǎng)基(北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司)。血球計(jì)數(shù)板、顯微鏡、濾器(水質(zhì)濾膜)等。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1不同的培養(yǎng)基對(duì)MIC值的影響取活化2次并處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的白色念珠菌,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)菌濃度使約為105cfu/ml,以液體稀釋法[1]測(cè)定改良沙氏液體培養(yǎng)基和YEPD培養(yǎng)基對(duì)最低抑菌濃度的影響:(1)2~10管加1ml培養(yǎng)基;(2)1管加1ml藥液(128μg/ml),2管加1ml藥液(128μg/ml),然后用槍尖吹打混勻,吸取1ml到第3管,依次倍比稀釋至第8管后棄去;(3)取上述濃度為105cfu/ml的0.1ml菌液按9→1的順序加入上述9管中,28℃培養(yǎng)24h,不攪動(dòng)情況下,以培養(yǎng)基清晰的試管為菌株100%受抑制,此管的藥物濃度即為最低抑菌濃度(MIC)。

2.2培養(yǎng)基pH值對(duì)MIC值的影響用0.1mol/L甘氨酸-鹽酸緩沖液(pH3~5)和磷酸鹽緩沖液(pH6~8)調(diào)整沙氏培養(yǎng)基的pH分別為3、5和8,然后按上述方法測(cè)定MIC值。

2.3接種真菌濃度對(duì)MIC值的影響將濃度為102cfu/ml,103cfu/ml,104cfu/ml,105cfu/ml,106cfu/ml的菌液接種于改良沙氏液體培養(yǎng)基,其余步驟與上法同,測(cè)定其MIC值。

3結(jié)果

3.1不同的培養(yǎng)基對(duì)MIC值的影響AmB在兩種培養(yǎng)基中的最低抑菌濃度不同,在改良沙氏液體培養(yǎng)基(pH5~6)中的MIC為8μg/ml,在YEPD液體培養(yǎng)基(pH5~6)中的MIC為16μg/ml。

3.2培養(yǎng)基pH對(duì)MIC值的影響結(jié)果發(fā)現(xiàn)在沙氏培養(yǎng)基中,pH為3時(shí)其MIC值為32μg/ml,pH為5時(shí)其MIC值為8μg/ml,pH為8時(shí)在最高藥物濃度的條件下白色念珠菌也能很好的生長(zhǎng)。

3.3接種真菌濃度對(duì)MIC值的影響結(jié)果見表1。表1接種真菌濃度對(duì)MIC值的影響結(jié)果

4討論

培養(yǎng)基的種類及其pH、接種真菌濃度對(duì)抗真菌藥物在試管內(nèi)的抗真菌活性影響很大[2]。如氟康唑在低pH時(shí)活性可降低1000倍。甚至同一種培養(yǎng)基,由于pH不同,其抗菌活性也不一樣[3]。因此,國(guó)外在研究抗生素和化學(xué)合成藥物的抗真菌活性時(shí),對(duì)使用的培養(yǎng)基種類及其pH非常重視,常選用不同的培養(yǎng)基和把同一種培養(yǎng)基調(diào)整成不同的pH進(jìn)行研究。國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)研究者只用沙氏培養(yǎng)基,對(duì)培養(yǎng)基的pH也沒有進(jìn)行調(diào)整,所以可能影響某些藥物的抗真菌效果。pH的不同可能是藥物在兩種不同培養(yǎng)基中的MIC不同的原因之一。在不同的實(shí)驗(yàn)中,實(shí)驗(yàn)條件不盡相同,需要接種與積累的菌量不同。所以需考察接種真菌菌液濃度對(duì)藥物敏感性的影響。如表1所見接種真菌量在102、103、104、105、106cfu/ml時(shí),PLAB對(duì)白色念珠菌的MIC分別為2、4、8、8、32μg/ml。隨著接種菌量的增加,最低抑菌濃度也增加,這可能與藥物需作用于真菌細(xì)胞的數(shù)量有關(guān),接種菌量的大小直接影響抗真菌藥物的抗菌效果。在一般情況下,在一定范圍內(nèi),接種的菌量越大,藥物的抗菌效果往往就越差。如很多研究者在做中藥抗絲狀真菌實(shí)驗(yàn)時(shí),直接從菌種中取一小塊菌塊接種到含藥培養(yǎng)基中。這樣,不同研究者取的菌塊大小差別較大,甚至同一研究者在同一批實(shí)驗(yàn)中,在不同的試管中接種的菌量也不一樣,這就會(huì)影響中藥抗真菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。這也可能是對(duì)同一種藥物,不同研究者所得的結(jié)果不一致的主要原因[4]。AmB具有較強(qiáng)的抗白色念珠菌的作用,其抗白色念珠菌的活性依賴于所選擇的實(shí)驗(yàn)條件,體外MIC決定于培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)基的pH值、接種菌量、血清的加入量、培養(yǎng)時(shí)間、氧氣的含量等。在改良沙氏培養(yǎng)基的MIC低于在YEPD培養(yǎng)基中的MIC;接種濃度增加,抑菌效果降低;抑菌活性有pH依賴性,在低pH時(shí),藥物的MIC較低,在高pH時(shí),藥物的MIC顯著升高。多年來(lái),抗真菌藥物敏感試驗(yàn)方法不統(tǒng)一,與體內(nèi)藥效不完全一致,以致發(fā)展緩慢。美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)的抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)專門委員會(huì)于1992年公布了世界第一個(gè)試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)M27-P(NCCLS),酵母菌液體培養(yǎng)基稀釋法抗真菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)的參考方法,用于規(guī)范藥物敏感性實(shí)驗(yàn)的方法,以使得所得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可信,更加有利于指導(dǎo)臨床用藥。

【參考文獻(xiàn)】

1劉運(yùn)德.微生物學(xué)檢驗(yàn).北京:人民衛(wèi)生出版社,2004,150-151.

2劉偉,李若瑜.抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)在真菌感染防治中的作用.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(4):349-351.

3關(guān)洪全.抗真菌中藥研究方法學(xué)的幾點(diǎn)思考.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,2000,6(6):404-406.

4KazuoIwata,YoshinoriYamamoto,HideyoYamaguchi,etal.InvitrostudiesofAculeacinA,anewantifungalantibiotic.JAntibiotics.1982,35(2):203-209.