導(dǎo)語：人乳鐵蛋白抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的探討人乳鐵蛋白(hLF)對體外培養(yǎng)細(xì)胞生長特性的影響。方法MTT法評定hLF對人鼻咽癌細(xì)胞、中國倉鼠卵巢細(xì)胞、人肝臟細(xì)胞的生長抑制作用。結(jié)果乳鐵蛋白對人鼻咽癌細(xì)胞系CNE的增殖有抑制作用并呈現(xiàn)劑量依賴性，對正常細(xì)胞無抑制作用。結(jié)論hLF可能是一種效果較好的新的抗腫瘤化學(xué)劑。

【關(guān)鍵詞】人乳鐵蛋白；癌細(xì)胞；細(xì)胞增殖

人乳鐵蛋白(HumanLactoferrin，hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白，乳汁中特別是初乳中含量最高，具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤等作用。國外有學(xué)者將其應(yīng)用于腫瘤患者的治療，但是對其作用機(jī)制的研究較少。目前國內(nèi)較少有關(guān)于hLF作用于細(xì)胞的報(bào)道，我們選用易早期轉(zhuǎn)移的鼻咽癌(NPC)細(xì)胞作為研究對象，以中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、人肝臟細(xì)胞(L02)作為正常細(xì)胞對照，觀察hLF在體外是否具有抑制癌細(xì)胞生長的作用，探討hLF抗腫瘤的作用機(jī)制，從而為腫瘤的治療提供研究基礎(chǔ)，為臨床實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。

一、材料與方法

1.1材料人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)、中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)、人肝臟細(xì)胞(L02)均購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞資源中心。重組hLF(Lot:L0520，溶于PBS中，儲存濃度5mg/ml，-20℃儲存?zhèn)溆?和噻唑藍(lán)(MTT，Lot:M2128)均購自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清購自HyClone公司。其他試劑均為分析純。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)各細(xì)胞系均應(yīng)用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，5%CO2，37℃培養(yǎng)。

1.2.2MTT法檢測細(xì)胞增殖設(shè)空白對照組和hLF干預(yù)組。待細(xì)胞生長至對數(shù)生長期，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，接種數(shù)為5×104/孔。每組細(xì)胞設(shè)5個平行孔，各組細(xì)胞分別加入不同濃度的hLF(0，1.25×10-3,2.5×10-3，5×10-3，10×10-3，20×10-3，40×10-3g/L)，每孔均為200μl。作用24h后，加入MTT(5g/L，每孔20μl)，繼續(xù)培養(yǎng)4h，測定A570nm吸光度。公務(wù)員之家

1.2.3細(xì)胞形態(tài)觀察細(xì)胞經(jīng)hLF處理后，傾去上層懸浮死細(xì)胞并用PBS洗兩遍，加入新鮮培養(yǎng)基。同樣處理對照孔細(xì)胞，將細(xì)胞置于倒置顯微鏡下，觀察細(xì)胞形態(tài)的變化。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x±s表示，組間比較用方差分析。

二、結(jié)果

2.1重組hLF對鼻咽癌細(xì)胞CNE、人肝臟細(xì)胞L02、中國倉鼠細(xì)胞CHO系的增殖能力的影響對CNE呈現(xiàn)劑量依賴性的抑制作用，而對正常細(xì)胞無抑制作用。人乳鐵蛋白對各細(xì)胞體外增殖的影響與空白對照比較:1)P<0.05

2.2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯微鏡鏡下可見，空白對照組癌細(xì)胞密集成片生長，如鋪路卵石狀，細(xì)胞膜圓潤，透明，顆粒較少，細(xì)胞間界限清楚，并可隱約見到細(xì)胞核。hLF處理組癌細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯的改變，隨hLF濃度增加，細(xì)胞從正常的增殖旺盛的貼壁生長，逐漸表現(xiàn)為生長緩慢，黏附力降低，細(xì)胞變圓，細(xì)胞胞質(zhì)粗糙，細(xì)胞內(nèi)顆粒逐漸增多，且透明度降低，立體感較差，細(xì)胞形態(tài)完整性受損，而正常細(xì)胞在細(xì)胞鏡檢圖hLF作用下無顯著變化。

三、討論

hLF多種生物學(xué)功能通過免疫系統(tǒng)的激活與調(diào)節(jié)得以實(shí)現(xiàn)。Bezaul研究發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白能抑制鼠實(shí)體瘤的生長和轉(zhuǎn)移。腫瘤內(nèi)注射LF，可以明顯的減小實(shí)體瘤的體積，且作用效果與LF干預(yù)天數(shù)相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白的抗頭頸部腫瘤作用是通過抑制腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)現(xiàn)的。Wolf等發(fā)現(xiàn)，人乳鐵蛋白通過阻斷頭頸部腫瘤細(xì)胞由G0到G1期的轉(zhuǎn)化來抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。人乳鐵蛋白對鼠的SCC細(xì)胞系生長的抑制作用，與劑量成正相關(guān)；而且人乳鐵蛋白抑制頭頸部細(xì)胞癌的作用是通過直接的細(xì)胞毒作用及系統(tǒng)性的免疫調(diào)節(jié)作用實(shí)現(xiàn)的。

Varadhachary等人做了大量的口服臨床試驗(yàn)，證實(shí)乳鐵蛋白無藥物相關(guān)的有害作用。鼻咽癌作為頭頸部腫瘤之一，其惡性程度較高，早期即可出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床上有轉(zhuǎn)移至骨盆、肺、肝等多器官的病例。選用鼻咽癌細(xì)胞作為研究對象，具有一定的代表意義。

本研究結(jié)果顯示，人乳鐵蛋白可以抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖，且呈劑量依賴性，對正常細(xì)胞的增殖無明顯抑制作用。這一結(jié)果，為開發(fā)乳鐵蛋白的抗癌功效提供了理論依據(jù)。

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