導(dǎo)語(yǔ)：剖析大蒜素可以抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的研究大蒜素對(duì)胃癌BGC823細(xì)胞增殖的影響。方法通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、瑞氏染色、MTT實(shí)驗(yàn)方法，觀察大蒜素對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。結(jié)果BGC823細(xì)胞在大蒜素的作用48h后，出現(xiàn)體積變小、核固縮等形態(tài)學(xué)改變。大蒜素對(duì)胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線有明顯的抑制作用，其抑制作用與大蒜素的濃度和時(shí)間呈正相關(guān)。結(jié)論大蒜素對(duì)體外培養(yǎng)的BGC823細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用。

【關(guān)鍵詞】大蒜素;胃癌;BGC823細(xì)胞

大蒜在我國(guó)民間藥用已有三千多年的歷史，在《本草綱目》和《驗(yàn)方新編》中就有關(guān)于大蒜藥用價(jià)值的記載[1]。大蒜素(又名大蒜注射液)是對(duì)大蒜進(jìn)行重整獲得的揮發(fā)油，有效成分為大蒜辣素。大蒜辣素不僅具有抗菌消炎的作用，而且可以抑制多種癌細(xì)胞的生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其凋亡。胃癌的發(fā)生和發(fā)展與細(xì)胞凋亡關(guān)系密切，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡已成為治療胃癌的新手段。大蒜素作為一種可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的天然藥物，有望為胃癌治療開(kāi)辟一條新途徑[2]。本研究將對(duì)大蒜素抑制胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)作用加以探討論文。

1材料與方法

1.1材料

大蒜素注射液(三硫二丙烯)購(gòu)自安徽華源醫(yī)藥有限公司，BGC823細(xì)胞為吉林醫(yī)藥學(xué)院檢驗(yàn)系細(xì)胞培養(yǎng)室凍存細(xì)胞株。

1.2細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)觀察

常規(guī)培養(yǎng)胃癌細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期[3]，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞均勻的分成7組(每組設(shè)有1個(gè)對(duì)照孔和5個(gè)實(shí)驗(yàn)復(fù)孔)，以每孔106個(gè)細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，分別向7組中加入大蒜素使終濃度分別為5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL，其中對(duì)照孔中只加入相同體積含10%小牛血清的1640完全培養(yǎng)液，分別于培養(yǎng)24h、48h、72h和96h時(shí)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并照相。

1.3瑞氏染色觀察

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,同樣將細(xì)胞均勻分成7組，分別接種于滅菌處理后放有蓋玻片的細(xì)胞培養(yǎng)皿中,加入大蒜素使終濃度分別為5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL，培養(yǎng)24h、48h、72h和96h。終止培養(yǎng)后取出蓋玻片，自然干燥，滴加瑞氏染液染色1min，再滴加等量的PBS(磷酸鹽緩沖液)，輕輕晃動(dòng)玻片，混勻，靜置5min;水洗、吸干、鏡檢觀察并照相。

1.4MTT法檢測(cè)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，以106個(gè)/mL細(xì)胞接種到96孔板，每孔體積200μL。按照藥物作用濃度設(shè)置7個(gè)實(shí)驗(yàn)組，使大蒜素終濃度為5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、40μg/mL。每個(gè)濃度組分別設(shè)置5個(gè)實(shí)驗(yàn)復(fù)孔，并設(shè)置1個(gè)調(diào)零孔。分別于培養(yǎng)24h、48h、72h加20μLMTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4h后加二甲基亞砜，微量振蕩器振蕩10min，在490nm酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè),記錄OD值，并求出生長(zhǎng)抑制率(IR),IR(%)=(1-用藥組平均OD值/對(duì)照組平均OD值)×100%,以時(shí)間為橫軸，IR為縱軸繪制細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制曲線,并計(jì)算出藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)[4]。

2結(jié)果

2.1大蒜素對(duì)BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響

倒置顯微鏡觀察經(jīng)不同濃度大蒜素作用后48h細(xì)胞的形態(tài)，與對(duì)照組對(duì)比，細(xì)胞間隙變大，細(xì)胞漿中出現(xiàn)顆粒樣變化，細(xì)胞形態(tài)改變，體積變小、變圓，有的呈懸浮狀態(tài)，見(jiàn)圖1。對(duì)照組15mg/L大蒜素組圖1BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)(40×)

2.2瑞氏染色

瑞氏染色法染色后，經(jīng)大蒜素作用48h的細(xì)胞出現(xiàn)退行性變，細(xì)胞體積變小、變圓，胞質(zhì)濃染、結(jié)構(gòu)模糊、邊緣不清晰、核固縮、深染等特征,見(jiàn)圖2。對(duì)照組15mg/L大蒜素組圖2BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)(40×)

2.3MTT檢測(cè)

MTT檢測(cè)結(jié)果顯示：大蒜素對(duì)胃癌細(xì)胞具有明顯的抑制增殖作用，并且隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制作用越強(qiáng)、抑制率越大，并求得藥物半數(shù)抑制濃度(IC50)為15mg/L。見(jiàn)圖3。圖3不同濃度大蒜素對(duì)BGC823細(xì)胞的抑制作用

3討論

胃癌是常見(jiàn)的消化道腫瘤，在我國(guó)發(fā)病率較高，臨床上主要采用外科切除、藥物化療和放射治療等方法治療胃癌，手術(shù)切除如不徹底,易復(fù)發(fā)，而藥物化療和放射治療手段除了殺傷腫瘤細(xì)胞以外，對(duì)宿主的免疫系統(tǒng)也造成了傷害，且治療效果不甚理想。而大蒜作為日常生活中常見(jiàn)的食物，不僅僅價(jià)格低廉，而且其主要成分大蒜素，含有一些特殊的具有生物活性的物質(zhì)，如含硫化合物(蒜氨酸、蒜油、蒜素、阿霍烯等)、微量元素(高含量的鍺、硒、磷、鎂等)、超氧化物歧化酶(SOD)等，使大蒜具有廣泛的藥效，尤其具有良好的抗菌消炎和抗腫瘤的作用[5]，先前已有資料證明大蒜素對(duì)肝、胃、結(jié)腸、宮頸、乳房等多種腫瘤均有抗癌活性,作用廣泛[6]。

本實(shí)驗(yàn)觀察到胃癌細(xì)胞經(jīng)不同濃度的大蒜素作用后，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯的改變，與對(duì)照組的細(xì)胞相比可見(jiàn)細(xì)胞體積明顯變小、變圓，胞漿中出現(xiàn)明顯顆粒樣和空泡樣改變，有的甚至懸浮，說(shuō)明不同濃度的大蒜素對(duì)胃癌細(xì)胞都具有殺傷作用[7]。另外，通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的繪制、MTT檢測(cè)，進(jìn)一步證明了大蒜素對(duì)胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，并且隨著大蒜素濃度的梯度增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其抑制作用也隨之增大。生長(zhǎng)曲線是觀測(cè)細(xì)胞在一代生存期內(nèi)增生過(guò)程的重要指標(biāo)，MTT比色實(shí)驗(yàn)是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法,通過(guò)這些實(shí)驗(yàn)方法都能進(jìn)一步證明不同濃度大蒜素對(duì)胃癌細(xì)胞增殖具有抑制作用，為進(jìn)一步研究大蒜素抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

本實(shí)驗(yàn)證明了大蒜素對(duì)胃癌細(xì)胞BGC823增殖具有抑制作用，隨著免疫組化技術(shù)、分子生物學(xué)等技術(shù)的發(fā)展，對(duì)各種藥物的藥理作用機(jī)制研究已經(jīng)廣泛而深入，所以應(yīng)進(jìn)一步明確大蒜素中各種成分的藥理作用，并且進(jìn)一步探討大蒜素抑制胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)機(jī)制，從而開(kāi)發(fā)出新的抗癌藥物，對(duì)腫瘤的治療產(chǎn)生深刻的影響。

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