導(dǎo)語：異十三基二胺體內(nèi)外抗腫瘤作用一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【關(guān)鍵詞】抗腫瘤藥;,腫瘤細(xì)胞,培養(yǎng)的;,腫瘤移植;,異十三基二胺

摘要:目的觀察異十三基二胺(D79)的體內(nèi)外抗腫瘤作用。方法應(yīng)用錐蟲藍(lán)排染法、MTT法檢測(cè)D79對(duì)多種體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用;Bliss法觀察D79急性毒性實(shí)驗(yàn);在可耐受劑量下觀察D79對(duì)小鼠移植性實(shí)體瘤U14、腹水瘤EAC、HAC的抑制率。結(jié)果D79顯著殺傷多種體外腫瘤細(xì)胞,藥物作用48h,IC501.24~3.36μg/mL;D79的LD50為36.49mg/kg(靜脈注射)。D79抑制小鼠移植性實(shí)體瘤U14體內(nèi)生長(zhǎng)、提高移植性腹水瘤EAC、HAC小鼠生存時(shí)間的作用呈劑量依賴性。結(jié)論D79有較強(qiáng)的體內(nèi)外抗腫瘤作用。

關(guān)鍵詞:抗腫瘤藥;腫瘤細(xì)胞,培養(yǎng)的;腫瘤移植;異十三基二胺

ABSTRACT:ObjectiveToobservetheantitumoreffectofallotritridecyldiamidogen(D79)invivoandinvitro.MethodsThecytotoxiceffectsofD79onvarioustumorcellslinesculturedinvitroweredeterminedbytrypanbluedyeexclusiontest,MTTmethod.AcutetoxicityofD79wasevaluatedbyBlissmethod:atatolerabledoselevel,D79wasadministratedtotreattransplantedsolidtumorU14andascetictumorsEACandHAC.Tumorweightinhibitionandlifeextensionwereobserved.ResultsD79inducedsignificantgrowtharrestinvariousmalignanttumorcelllinesculturedinvitro.IC50ofthesetumorcellsexposedtothedrugfor48hoursrangedfrom1.24~3.36μg/mL.LD50ofD79was36.49mg/kg(mice,iv).D79inhibitinvivogrowthofimplantedsolidtumorU14andprolongedlivetimeimplantedascetictumorsEACandHACofmiceinadosedependmentmanner.ConclusionD79hadobviousantitumoractivityinvivoandinvitro.

KEYWORDS:antineoplasticagents;tumorcells,cultured;neoplasmstransplantation;allotritridecyldiamidogen

2000年,Yang等證實(shí)末端支鏈飽和脂肪酸13甲基肉豆蔻酸(13MTD)體內(nèi)外抗腫瘤作用并發(fā)現(xiàn)其主要通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡發(fā)揮作用[1]。異十三基二胺(D79)是在13MTD基礎(chǔ)上合成的一種新型胺類化合物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)明顯區(qū)別于當(dāng)前常規(guī)抗腫瘤藥物。筆者研究其體內(nèi)外抗腫瘤作用,初步結(jié)果報(bào)告如下。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1藥品

2%D79溶液(福建省振華851生物制藥有限公司,批號(hào)040507);RPMI1640培養(yǎng)基干粉(美國(guó)Gibco公司);小牛血清(美國(guó)HyClone公司);胰蛋白酶(美國(guó)Difco公司);錐蟲藍(lán)及噻唑藍(lán)(MTT,美國(guó)Sigma公司);環(huán)磷酰胺(上海華聯(lián)制藥廠生產(chǎn),批號(hào)040202);氟尿嘧啶(250mg/10mL,天津金耀氨基酸有限公司,批號(hào)0501182);其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.2儀器

6孔及96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(美國(guó)Coster公司);生物安全柜(HFSafe1200型)及氣體培養(yǎng)箱(BB5060,上海力申科學(xué)儀器有限公司);全自動(dòng)酶標(biāo)儀(Mod550,美國(guó)BioRad公司);倒置顯微鏡及正置顯微鏡(日本Olympus公司);微量稱質(zhì)量?jī)x(BP221S,德國(guó)Sartorius公司);電子天平(TD6001B,余姚市金諾天平儀器有限公司);振蕩器(2002型,常州國(guó)華電器有限公司)。

1.1.3動(dòng)物及瘤株

昆明種小鼠,體質(zhì)量(20±2)g,雌雄不限,由福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(合格證號(hào):醫(yī)動(dòng)字2306號(hào))。每次實(shí)驗(yàn)使用同一性別小鼠。小鼠子宮頸癌實(shí)體型瘤株(U14)、小鼠艾氏腹水瘤(EAC)及肝癌腹水瘤(HAC)均引自福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)系。

1.1.4腫瘤細(xì)胞

人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(K562)、人早幼粒白血病細(xì)胞株(HL60)、小鼠黑色素瘤細(xì)胞株(B16)、人肝癌細(xì)胞株(HEPG2)、人胃腺癌細(xì)胞株(SGC7901)均引自福建醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)系。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)

K562、HL60、B16、HEPG2、SGC7901細(xì)胞株培養(yǎng)于含10%小牛血清、青霉素100IU/mL、鏈霉素100μg/mL的RPMI1640培養(yǎng)液中,每3天換液一次,每5天傳代一次。細(xì)胞均置于37℃、體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2,飽和濕度的氣體培養(yǎng)箱中。

1.2.2錐蟲藍(lán)排染法

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HL60、K562細(xì)胞,以全培養(yǎng)液稀釋成5×104mL1單細(xì)胞懸液,接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每個(gè)濃度復(fù)種4孔,每孔190μL,置于氣體培養(yǎng)箱培養(yǎng)。12h后D79組每孔加不同濃度D7910μL,對(duì)照組加等量溶劑。共培養(yǎng)48h后每孔加0.4%錐蟲藍(lán)100μL,染色5min。計(jì)數(shù)各組拒染活細(xì)胞數(shù),按下式計(jì)算抑制率：

抑制率%=(1藥物組活細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組活細(xì)胞數(shù))×100%

直線回歸法測(cè)該藥的半數(shù)抑制濃度(IC50)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次[2]。

1.2.3MTT法

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的B16、HEPG2、SGC7901細(xì)胞,0.25%胰酶PBS液消化后,全培養(yǎng)液稀釋成5×104mL1單細(xì)胞懸液,接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,每個(gè)濃度復(fù)種4孔,每孔190μL。置于氣體培養(yǎng)箱內(nèi),12h后D79組每孔加不同濃度D7910μL,對(duì)照組加等量溶劑,共培養(yǎng)48h。反應(yīng)結(jié)束前4h每孔加入MTT(1mg/mL)50μL。繼續(xù)培養(yǎng)4h,吸盡上清,每孔加入DMSO200μL充分溶解MTT還原產(chǎn)物。酶標(biāo)儀550nm檢測(cè)光密度(Dλ)并計(jì)算抑制率。直線回歸法計(jì)算IC50。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次[2]。

抑制率%=[1藥物組D(550nm)值/對(duì)照組D(550nm)值]×100%

1.2.4D79急性毒性實(shí)驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)[3]方法,小鼠靜脈注射(iv)不同劑量D79,連續(xù)觀察7d。

1.2.5小鼠移植性腫瘤接種及傳代

1.2.5.1U14實(shí)體瘤接種傳代[4]

取腫瘤生長(zhǎng)旺盛的小鼠,無菌操作摘取實(shí)體腫瘤,稱質(zhì)量,按1∶4比例加入無菌生理鹽水,磨成勻漿,取0.2mL接種于小鼠右腋部皮下。

1.2.5.2EAC、HAC腹水瘤接種傳代[4]

取腫瘤生長(zhǎng)旺盛的小鼠,無菌操作抽取腹水,稱體積后按1∶4比例加入無菌生理鹽水,取0.2mL接種于小鼠腹腔內(nèi)。

1.2.6D79對(duì)小鼠移植性腫瘤的抑制作用

根據(jù)急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇3個(gè)劑量(10.0,7.0,4.9mg・kg1・d1)連續(xù)腹腔注射(ip)。接種腫瘤后按體質(zhì)量隨機(jī)分組,設(shè)陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組及D79組。陽性對(duì)照組給予環(huán)磷酰胺或氟尿嘧啶[1，3],陰性對(duì)照組給予等量溶劑,D79組按給予劑量分為高、中、低劑量組;于接種當(dāng)日開始給藥(ip),連續(xù)10d。U14荷瘤小鼠于實(shí)驗(yàn)第12天取瘤稱質(zhì)量,計(jì)算瘤質(zhì)量抑制率。EAC、HAC荷瘤小鼠記錄實(shí)驗(yàn)小鼠生存時(shí)間,并計(jì)算生命延長(zhǎng)率。

瘤質(zhì)量抑制率%=(1藥物組平均瘤質(zhì)量/陰性對(duì)照組平均瘤質(zhì)量)×100%

生命延長(zhǎng)率%=(藥物組平均生存時(shí)間/陰性對(duì)照組平均生存時(shí)間1)×100%

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以x±s表示。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理,差異顯著性檢驗(yàn)采用方差分析。

2結(jié)果

2.1D79對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的體外細(xì)胞毒作用

D790.25~4.00μg/mL作用48h,對(duì)多種體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞均產(chǎn)生顯著殺傷作用,抑制率隨藥物劑量的增加而升高,IC501.24~3.36μg/mL(表1)。表1D79對(duì)腫瘤細(xì)胞的體外細(xì)胞毒作用（略）

2.2D79小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)

小鼠ivD79后未發(fā)現(xiàn)明顯異常。死亡小鼠解剖觀察主要臟器未發(fā)現(xiàn)明顯異常。D79急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2小鼠靜脈注射D79急性毒性實(shí)驗(yàn)（略）

2.3D79對(duì)小鼠移植性腫瘤U14的抑制作用

結(jié)果見表3。表3D79對(duì)小鼠移植性腫瘤U14的抑制作用（略）

2.4D79對(duì)小鼠移植性腫瘤EAC、HAC的抑制作用

結(jié)果見表4。表4D79對(duì)小鼠移植性腫瘤EAC、HAC的抑制作用（略）

3討論

惡性腫瘤是本世紀(jì)人類面臨最大威脅的疾病之一。目前臨床常用抗腫瘤藥物廣泛存在對(duì)腫瘤選擇差、毒副作用大以及易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn)，因此,尋找療效好、毒副作用小的新型抗腫瘤藥已成為人類戰(zhàn)勝惡性腫瘤的當(dāng)務(wù)之急。D79是在13MTD基礎(chǔ)上合成的一種新型胺類化合物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)明顯區(qū)別于當(dāng)前常規(guī)抗腫瘤藥物[5],因此可能不易與臨床常規(guī)抗腫瘤藥物發(fā)生交叉耐藥。

13MTD對(duì)多種體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞具有殺傷作用,抑制裸鼠原位移植人前列腺癌細(xì)胞株及肝癌細(xì)胞株腫瘤的生長(zhǎng),其體內(nèi)外抗腫瘤作用主要通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡發(fā)揮作用[1]。本實(shí)驗(yàn)中,D79對(duì)K562、HL60、B16等5種體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞均有顯著殺傷作用,并且作用呈劑量依賴性。對(duì)人早幼粒白血病細(xì)胞株HL60最敏感,對(duì)人肝癌細(xì)胞株HEPG2最不敏感,平均IC50在1.24~3.36μg/mL。D79小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Bliss法計(jì)算LD50=36.49mg/kg(iv),其LD95是32.34~41.18mg/kg(iv)。D79在可耐受劑量下,其對(duì)小鼠移植性宮頸癌U14實(shí)體瘤和肝癌HAC及EAC腹水瘤亦有明顯的劑量依賴性抑制作用。D79體內(nèi)外抗腫瘤作用明顯強(qiáng)于13MTD[1]。D79是在13MTD基礎(chǔ)上合成的一種新型胺類化合物,因此筆者推測(cè)D79可能亦通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。

D79有較強(qiáng)的體內(nèi)外抗腫瘤作用,有望成為一種廣譜、強(qiáng)效、毒性小的新型抗腫瘤藥物,筆者將進(jìn)一步研究其抗腫瘤作用機(jī)制。

參考文獻(xiàn)：

[1]YangZH,LiuSP,ChenXD,etal.Inductionofapoptoticcelldeathandinvivogrowthinhibitionofhumancancercellsbyasaturatedbranchedchainfattyacid13methyltetradecanoicacid[J].CancerRes,2000,60(3):505509.

[2]林心建,黃自強(qiáng),李常春.洋地黃毒甙體外抗人癌細(xì)胞株的作用[J].福建醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1996,30(1):1718.

[3]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1991:201206.

[4]吳國(guó)土,林建忠,王瑞幸,等.桂苓散的抗癌作用[J].福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2003,37(1):8991.

[5]潘啟超,胥彬.腫瘤藥理學(xué)與化學(xué)治療學(xué)[M].2版.鄭州:河南醫(yī)科大學(xué)出版社,2000:99325.