1材料與儀器

桑葉總生物堿提取物為市售產(chǎn)品(DNJ含量>50%)。桑葉、桑椹、桑白皮、桑枝藥材購于成都荷花池中藥材專業(yè)市場，經(jīng)鑒定為Morusalba的干燥葉、果、根皮和嫩枝。硅膠G（青島海浪化工廠）、732陽離子交換樹脂(上海匯珠樹脂有限公司)、中性氧化鋁(成都市科龍化工試劑廠)、活性炭(成都市科龍化工試劑廠)，其余各種試劑為化學(xué)純或分析純。TU-1800紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限公司)。

2方法與結(jié)果

2.1桑樹總生物堿分析方法的研究實驗中以桑葉總生物堿提取物為樣品進行了分析方法的研究；后經(jīng)證實，桑椹、桑白皮和桑枝的總生物堿實驗結(jié)果與之一致。

2.1.1檢識反應(yīng)與生物堿沉淀試劑的反應(yīng)：取桑葉總生物堿提取物適量，加蒸餾水溶解，以鹽酸調(diào)pH2～3，過濾，所得溶液為淺黃色，取5份，分別與碘化鉍鉀試劑、碘-碘化鉀試劑、硅鎢酸試劑、磷鉬酸試劑、苦味酸試劑反應(yīng)，結(jié)果見表2。表2桑葉生物堿的檢識反應(yīng)（略）

碘化鉍鉀、硅鎢酸、磷鉬酸與樣品呈陽性反應(yīng)，可用于定性鑒別。

【摘要】生物堿是許多中草藥及藥用植物的有效成分。如何從天然產(chǎn)物中提取與分離生物堿，吸引了人們的廣泛關(guān)注。傳統(tǒng)的提取方法是建立在生物堿的理化性質(zhì)基礎(chǔ)上，有溶劑提取法、直接提取法等。隨著超聲波、色譜技術(shù)、膜分離技術(shù)、超臨界萃取技術(shù)以及酶學(xué)技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展，其提取與分離方法也不斷地得以改進。隨著對生物堿藥用價值認識的提高，生物堿的提取與分離方法將更加高效、迅速、完善。文章綜述了近年來生物堿提取分離的新方法。

【關(guān)鍵詞】生物堿;分離;提取;純化

生物堿是植物中含氮的堿性有機化合物，大都有明顯的生理活性，所以常常是很多中草藥的有效成分。生物堿大多數(shù)來自植物界，以罌粟科、豆科、防己科、毛莨科等科的植物中分布較多。生物堿含量一般都較低，大多少于1%，長春花中的長春新堿含量只有百萬分之一［1］。而中草藥所含成分十分復(fù)雜，既有有效成分，又有無效成分和有毒成分。為了提高中草藥的治療效果，就要盡最大限度提取有效成分，去除無效成分及有毒成分。因此，如何從天然產(chǎn)物中提取與分離生物堿，吸引了人們的廣泛關(guān)注，其提取與分離方法也不斷地改進和發(fā)展。

1生物堿的提取方法

1.1傳統(tǒng)的提取法

生物堿大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有機溶劑，除季銨堿和一些分子量較低或含極性基團較多的生物堿外，一般均不溶或難溶于水，而生物堿與酸結(jié)合成鹽時則易溶于水和醇?；谶@種特性，可用不同的溶劑將生物堿從中藥中提取［2，3］。包括有溶劑提取法、直接提取法（水溶性生物堿、季銨堿）、離子交換樹脂法（如麥角新堿類、東莨菪堿、咖啡因等）和沉淀法。

［摘要］目的從平貝母植株中分離內(nèi)生真菌，從中篩選可以產(chǎn)生與貝母藥材相同或相似生物堿的菌株。方法以平貝母幼嫩植株為材料，用常規(guī)微生物學(xué)方法分離出其中的內(nèi)生真菌。以碘化鉍鉀試劑、碘-碘化鉀試劑和碘化汞鉀試劑分別對這些真菌的提取物進行生物堿定性檢測；再對陽性樣品進行TLC分析，并與藥材提取物進行比較。結(jié)果從平貝母幼苗中共分離出9種內(nèi)生真菌，其中一種（Fu7）在3種生物堿定性反應(yīng)中都呈陽性，其菌絲提取物經(jīng)薄層層析后，出現(xiàn)兩個與藥材樣品有相同Rf值的斑點。結(jié)論該內(nèi)生真菌菌株應(yīng)具有產(chǎn)生貝母生物堿的能力。

［關(guān)鍵詞］平貝母；內(nèi)生真菌；生物堿

平貝母（Fritillariaussuriensis）為常用中藥材，其中的貝母堿類化合物有清熱潤肺、止咳化痰等功效。由于對其需求量大，而且植株生長緩慢，野生資源人為破壞嚴重，自1987年起便被《中國珍稀瀕危保護植物名錄》列為漸危種［1］。植物內(nèi)生真菌是指生活在植物體內(nèi)或生活史的一定階段處于植物體內(nèi)的真菌，它們在植物體內(nèi)的存在具有一定的普遍性，其中一部分可能產(chǎn)生一些與其宿主相同或相似的生理活性成分，包括治療人類疾病的藥物［2，3］。因此，如果能從貝母中分離出可以產(chǎn)生貝母堿類生物堿的內(nèi)生真菌，就有可能采用工業(yè)發(fā)酵的方法生產(chǎn)其藥用成分，這樣不僅可以改善目前該藥材緊缺的狀況，還有利于保護這種珍貴的藥用植物資源。

1材料與方法

1.1實驗材料

平貝母引種自吉林市左家中國特產(chǎn)所，栽種于西北大學(xué)校園生物實驗地，春季取整株幼苗作為分離內(nèi)生真菌的實驗材料。平貝母藥材（干燥鱗莖）購自中藥店。

1器材

實驗藥物：小檗堿、藥根堿、黃連堿和巴馬亭（由實驗室從石柱黃連中提取分離制備，HPLC檢測純度均在97%以上）。實驗菌株：金黃色葡萄球菌(ATCC25923)，金黃色葡萄球菌耐藥菌（MR），膿腫分枝桿菌，傷寒桿菌，綠膿桿菌，志賀氏痢疾桿菌，克雷伯氏菌，腸炎沙門菌，巨大芽孢桿菌，枯草桿菌，大腸桿菌變形桿菌，白色葡萄球菌，假絲酵母，白色念珠菌，四聯(lián)球菌，魚害粘球菌和魚腸型點狀產(chǎn)氣單胞菌（實驗菌株由重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原微生物教研室和西南大學(xué)資源與環(huán)境科學(xué)學(xué)院微生物教研室提供）。

培養(yǎng)基：真菌采用改良沙保氏培養(yǎng)基（配方為：蛋白胨10g，葡萄糖20g，蒸餾水1000ml），魚病原菌（鮭腎桿菌，魚害粘球菌和魚腸型點狀產(chǎn)氣單胞菌）采用胰蛋白胨醋酸鈉培養(yǎng)基（配方：胰蛋白胨5.0g，醋酸鈉2.0g，酵母膏5.0g，牛肉膏0.2g，蒸餾水1000ml），其它細菌采用普通細菌培養(yǎng)基加減成分進行培養(yǎng)。配制時固體培養(yǎng)基加入1.5%的瓊脂，液體培養(yǎng)基不加。

實驗設(shè)備：96微孔板，酶標(biāo)儀，超凈工作臺，滅菌鍋，恒溫培養(yǎng)箱。

2方法

2.1微生物敏感性實驗將備選的菌種采用較高濃度的藥液進行藥物敏感實驗，初步確定3種生物堿對實驗菌的抑菌作用，為進一步研究藥物對敏感菌的抑菌能力提供依據(jù)。

［摘要］目的從平貝母植株中分離內(nèi)生真菌，從中篩選可以產(chǎn)生與貝母藥材相同或相似生物堿的菌株。方法以平貝母幼嫩植株為材料，用常規(guī)微生物學(xué)方法分離出其中的內(nèi)生真菌。以碘化鉍鉀試劑、碘-碘化鉀試劑和碘化汞鉀試劑分別對這些真菌的提取物進行生物堿定性檢測；再對陽性樣品進行TLC分析，并與藥材提取物進行比較。結(jié)果從平貝母幼苗中共分離出9種內(nèi)生真菌，其中一種（Fu7）在3種生物堿定性反應(yīng)中都呈陽性，其菌絲提取物經(jīng)薄層層析后，出現(xiàn)兩個與藥材樣品有相同Rf值的斑點。結(jié)論該內(nèi)生真菌菌株應(yīng)具有產(chǎn)生貝母生物堿的能力。

［關(guān)鍵詞］平貝母；內(nèi)生真菌；生物堿

平貝母（Fritillariaussuriensis）為常用中藥材，其中的貝母堿類化合物有清熱潤肺、止咳化痰等功效。由于對其需求量大，而且植株生長緩慢，野生資源人為破壞嚴重，自1987年起便被《中國珍稀瀕危保護植物名錄》列為漸危種［1］。植物內(nèi)生真菌是指生活在植物體內(nèi)或生活史的一定階段處于植物體內(nèi)的真菌，它們在植物體內(nèi)的存在具有一定的普遍性，其中一部分可能產(chǎn)生一些與其宿主相同或相似的生理活性成分，包括治療人類疾病的藥物［2，3］。因此，如果能從貝母中分離出可以產(chǎn)生貝母堿類生物堿的內(nèi)生真菌，就有可能采用工業(yè)發(fā)酵的方法生產(chǎn)其藥用成分，這樣不僅可以改善目前該藥材緊缺的狀況，還有利于保護這種珍貴的藥用植物資源。

1材料與方法

1.1實驗材料

平貝母引種自吉林市左家中國特產(chǎn)所，栽種于西北大學(xué)校園生物實驗地，春季取整株幼苗作為分離內(nèi)生真菌的實驗材料。平貝母藥材（干燥鱗莖）購自中藥店。

【摘要】【目的】探討金釵石斛(DendrobiumnobileLindl.)總生物堿和粗多糖對白內(nèi)障的抑制作用?！痉椒ā坎捎萌軇┓ǚ蛛x提取金釵石斛總生物堿和粗多糖;體外培養(yǎng)大鼠晶狀體,加入H2O2與總生物堿(或粗多糖)共培養(yǎng)24h;分別在培養(yǎng)后6、12、18、24h共4個時段于解剖顯微鏡下觀察并記錄晶狀體混濁度的改變;檢測晶狀體水溶性蛋白、谷胱甘肽(GSH)的含量及總超氧化物歧化酶(TSOD)和丙二醛(MDA)的活性?！窘Y(jié)果】金釵石斛總生物堿和粗多糖均能減輕晶狀體混濁度,并能顯著升高晶狀體水溶性蛋白、GSH含量及TSOD活性,降低MDA的活性(均P<0.05),其中石斛總生物堿高劑量組效果最佳。【結(jié)論】金釵石斛總生物堿和粗多糖在體外均有一定的抗白內(nèi)障作用,其機制與拮抗晶狀體的氧化損傷有關(guān),而總生物堿的效果優(yōu)于粗多糖。

【關(guān)鍵詞】金釵石斛/藥理學(xué)金釵石斛/化學(xué)白內(nèi)障/中藥療法晶狀體/病理學(xué)器官培養(yǎng)

白內(nèi)障(cataract)是一種常見的致盲眼病,它是多種因素共同作用的結(jié)果,氧化損傷是其發(fā)病機制之一[1]。當(dāng)前許多中藥研究都是從提高晶狀體抗氧化能力入手,利用抗氧化劑或抗氧化酶激活劑來消除或中和晶狀體中的氧化產(chǎn)物,阻止或逆轉(zhuǎn)晶狀體變渾濁,從而抑制或延緩白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展[2]。石斛是一種名貴中藥材,抗白內(nèi)障是其主治功效之一。已有研究證實,石斛水煎劑可通過改變晶狀體相關(guān)酶的活性而對D半乳糖性白內(nèi)障起到防治作用[3],石斛的乙酸乙酯提取物在體外還可抑制醛糖還原酶和過氧化脂質(zhì)(LPO)的產(chǎn)生[4],這些研究在一定程度上揭示了石斛抗白內(nèi)障的作用機理。然而,石斛化學(xué)成分復(fù)雜,其抗白內(nèi)障的具體有效成分是什么,至今仍未見報道。本實驗通過體外培養(yǎng)晶狀體,對金釵石斛(DendrobiumnobileLindl.)的粗提物總生物堿(totalalkaloids)和粗多糖(polysaccharides)抗白內(nèi)障作用進行了探討,現(xiàn)報道如下。

1材料和方法

1.1動物4~5周齡Wistar大鼠20只,體質(zhì)量80~120g,雌雄不限,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供,合格證號:粵臨證字2007A025。

1.2藥材和試劑金釵石斛由貴州赤水信天石斛有限公司提供,經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李薇教授鑒定。DMEM低糖培養(yǎng)基(杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);磷酸鹽緩沖液(PBS,福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司);體積分數(shù)30%過氧化氫(H2O2,浙江臨安化工二廠);吡諾克辛鈉滴眼液(武漢天天明藥業(yè)有限責(zé)任公司,批號:070102);Bradford蛋白質(zhì)定量試劑盒(上海申能博彩生物科技有限公司);谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)測定試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1草烏的化學(xué)成分［6～9］

草烏中主要成分是烏頭堿型生物堿，如烏頭堿(aconitine)中烏頭堿(新烏頭堿mesaconitine)、素馨烏頭堿(jesaconitine)、次烏頭堿(下烏頭堿hypaconitine)、去氧烏頭堿(deoxyaconitine)，除此之外，草烏中還含有北烏頭堿(beiwutine)、得姆啶(denudine)等。

1.1生物堿

王永高等對草烏中的生物堿進行了研究，其生物堿為烏頭堿(aconitine)、中烏頭堿(mesaconitine)、次烏頭堿(hypaconitine)、3-脫氧烏頭堿(3-deoxyaconitine)、北烏堿(beiwutine)。李正邦等對草烏中的生物堿進行了更深一步的研究得到新的生物堿：10-羥基烏頭堿(aconifine)、14-苯甲酰烏頭原堿(14-benzoylaconine)、14-苯甲酰中烏頭原堿(14-benzoylmesaconine)、尼奧寧(neoline)、15-α-羥基尼奧寧(15-α-hydroxyneoline)、查斯曼寧(chasmanine)、塔拉薩敏(talatizamine)、弗斯生(foresticine)、牛扁堿(lycoctonine)、氨茴酰牛扁堿(anthranoyllycoctonine)和一海替生重排產(chǎn)物。此外，ZinurovaE.G.等也對草烏的化學(xué)成分進行了研究，發(fā)現(xiàn)了新的生物堿acsonine。

1.2非生物堿

孫玉軍等對草烏中的多糖進行了研究。草烏中的糖類有：木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)。GC表明草烏多糖有鼠李糖(Rha)、木糖(Xyl)、甘露糖(Man)、阿拉伯糖(Ara)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)，它們的摩爾比為Rha-∶Xyl-∶Man-∶Ara-∶Glc-∶Gal=1∶1.7∶203∶1.7∶59.7∶3.5。其中甘露糖含量特別高，占總糖的78.27%；而Rha，Xyl，Ara含量比較少。

[摘要]目的：通過設(shè)置不同的炮制環(huán)節(jié)參數(shù)和設(shè)計加壓蒸制正交試驗獲得不同的附子黑順片，對生物堿含量和單酯型生物堿與雙酯型生物堿的比值比較，研究附子黑順片在不同工藝參數(shù)的加工過程中生物堿的變化趨勢，以期獲得既能保證用藥安全，又能充分保留藥效的加工工藝。

[關(guān)鍵詞]附子；黑順片；生物堿；工藝參數(shù)

附子為毛茛科植物烏頭AconitumcarmichaeliDebx.的子根加工品[1]，主要含烏頭類生物堿和一些多糖和脂類物質(zhì)。附子味辛，性大熱，有毒，有回陽救逆、助陽行水、逐風(fēng)寒濕邪的功效，被稱為“回陽救逆第一品”[2]。本研究以減毒增效的目的，設(shè)置不同附子黑順片加工工藝參數(shù)獲得不同的樣品，并進行生物堿的含量的檢測與分析，綜合分析得到最佳加工工藝。

1文獻綜述

1.1附子的簡介。附子，又名：烏頭或附片，別名：草烏鐵花、五毒，為毛茛科植物烏頭aconitumcarmichaeliDebx.的子根的加工品。收獲時間為每年6月下旬至8月上旬，剪除母根、須根，除去泥沙，被稱為“泥附子”[1]。根據(jù)不同的加工炮制工藝可分為：黑附子(黑順片)、白附片、淡附片、鹽附子、炮附片。傳統(tǒng)產(chǎn)地是四川的江油和陜西的城固等地。1.2研究意義。中醫(yī)里附子的使用有悠久的歷史，早在《詩經(jīng)》、《國語》、《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等醫(yī)書中就有介紹。有大量的表明附子具有強心、抗心律失常、抗癌、免疫抑制等多種藥理活性[3]。主要有效成分兼毒性成分為烏頭堿、次烏頭堿與新烏頭堿[4]，所以附子在中藥的臨床應(yīng)用上受到很大的限制。因此，中藥附子的炮制從古至今以減毒為第一目的。為了降低或減除烏頭堿，傳統(tǒng)工藝經(jīng)過多次的浸泡、蒸制環(huán)節(jié)，然而這就導(dǎo)致其他生物堿大量的流失[5-6]。首先傳統(tǒng)工藝耗時長，人力消耗大，傳統(tǒng)工藝對生物堿的流失較大，沒有標(biāo)準控制。加壓蒸制工藝的研究的優(yōu)點在于耗時短，人工消耗較少，也統(tǒng)一了標(biāo)準，也提高了附子的品質(zhì)；其次傳統(tǒng)加工工藝各個作坊加工標(biāo)準不一，都是憑借著經(jīng)驗摸索，因此各個產(chǎn)地的附子品質(zhì)差異較大，用藥劑量難以把控，因此統(tǒng)一規(guī)范的飲片炮制加工工藝尤為重要。本次研究通過實驗設(shè)計進行加壓蒸制工藝研究和黑順片炮制工藝的優(yōu)化，以期獲得既能保證用藥安全，又能充分保留藥效的加工工藝。1.3附子中化學(xué)成分。附子化學(xué)成分復(fù)雜，附子的化學(xué)成分復(fù)雜，主要分為生物堿類物質(zhì)、多糖、脂質(zhì)類物質(zhì)、氨基酸等。其中生物堿類物質(zhì)為其主要成分，包括脂溶性生物堿：雙酯型(烏頭堿類)、單酯型(苯甲酰烏頭堿類)、醇胺型(烏頭原堿類)；水溶性生物堿：江油烏頭堿、新江油烏頭堿、去甲豬毛菜堿等[7]。其中雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿為其主要成分，總百分含量約為0.4%~0.8%，易溶于親脂性有機溶劑，難溶于水，微溶于石油醚。1.4附子的主要功效。在應(yīng)用方面，附子不僅在中醫(yī)領(lǐng)域占有重要的地位，而且現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)中常用附子治療心臟方面的疾病，并且取得了相對顯著的效果[8]。而且有大量的研究表明，附子在抗腫瘤方面也有明顯地作用。1.4.1強心作用。有實驗表明附子中的生物堿和一些非生物堿類物質(zhì)都是附子的主要強心作用成分[4]，其中有效成分中分離得到的單體化合物去甲豬毛菜堿、去甲烏藥堿[9]、多巴胺等均是附子強心作用的主要成分[10]。丁濤[11]實驗結(jié)果表明附子中附子苷有改善大鼠心率衰竭的作用并明顯降低心率衰竭大鼠死亡率，從而達到達到治療效果。綜合證明附子中含有很多強心成分且強心作用十分明顯。1.4.2抗心律失常。徐碩、梁曉麗、李瓊，等人[12]研究證明附子的水煎液中去甲烏藥堿能使血管擴張，在防治異位搏定型心律失常有顯著功效。汪星、孫衛(wèi)、張鐵軍[13]用附子水提取物對心律失常小鼠進行實驗，實驗證明附子能夠增強心肌活力和心肌供氧能力，能夠平衡心肌氧的供需因而對小鼠的心律失常具有明顯的預(yù)防作用而且效果十分顯著。1.4.3增加血流量及血管擴張作用去甲烏藥堿靜脈注射液或附子注射液，在對麻醉犬進行靜脈注射后，表明其股動脈血流量以及腦血流量均有所增加，血管壓力也有所減小，輕度擴張冠狀血管[14]。1.4.4抗腫瘤作用。張曉迪，吳酉霆[15]的實驗結(jié)果表明附子的提取物能對腫瘤細胞有明顯的抑制作用，提取物的濃度以及藥物在體內(nèi)存在的時間對腫瘤細胞的生長影響較大，且體內(nèi)的腫瘤細胞有明顯的凋亡趨勢。董蘭鳳、張英俊、劉京生，等[16]人采用附子多糖和阿霉素的共同使用，能明顯的促進體內(nèi)腫瘤細胞的凋亡，附子多糖和阿霉素的共同使用能刺激特異性免疫并加強機體的免疫系統(tǒng)，且體內(nèi)的殺傷細胞活性顯著提高，達到抗腫瘤效果。

2附子黑順片的加工現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢

【摘要】通過歸納和總結(jié)多年來的研究結(jié)果及國內(nèi)外的文獻，從生藥研究、化學(xué)成分研究、藥理毒理研究、臨床應(yīng)用幾個方面對伏毛鐵棒錘的研究進展作一簡要綜述。認為伏毛鐵棒錘AconitumflavumHand.-Mazz.具有多種活性成分及較強的藥理活性，且有長期作為民間藥和民族藥使用的歷史。指出該藥用植物的各種研究及合理應(yīng)用均有待深入，為今后的相關(guān)研究提供了有用信息。

【關(guān)鍵詞】伏毛鐵棒錘化學(xué)成分藥理作用

伏毛鐵棒錘AconitumflavumHand.-Mazz.系毛莨科烏頭屬植物，其干燥塊根俗稱“鐵棒錘”。其主要有效成分為各類生物堿，民間及臨床的應(yīng)用均取其消炎、鎮(zhèn)痛及麻醉等功效。

1生藥研究

毛茛科烏頭屬藥物作用強烈，療效較為肯定，且品種眾多。史上歷代本草著作多有關(guān)于川烏、草烏等的記載。本屬植物伏毛鐵棒錘A.flavum見于《全國中草藥名鑒》《中華本草》，作為回藥“雪上一枝蒿”的部分植物來源［1］。部頒標(biāo)準將伏毛鐵棒錘A.flavum作為藏藥“榜那”的部分基源植物［2］。但四川大學(xué)華西藥學(xué)院等兩家單位對“榜那”幾類基源品種進行一系列理化鑒定后指出，榜那的生藥名似不應(yīng)為“鐵棒錘”，其植物來源不應(yīng)定為毛茛科植物伏毛鐵棒錘A.flavum和鐵棒錘A.pendulum，此應(yīng)再作探討［3］。據(jù)報道，地處西北腹地的甘肅省大部分地區(qū)［4,5］、青海省內(nèi)［6］、寧夏六盤山地區(qū)［7,8］、陜西省寶雞地區(qū)的隴縣附近、四川省成都以西主產(chǎn)伏毛鐵棒錘A.flavum，民間作“鐵棒錘（又稱鐵牛七、三轉(zhuǎn)半、一枝箭等）”入藥。同時，伏毛鐵棒錘A.flavum與鐵棒錘A.pendulum，同為云南產(chǎn)著名草藥雪上一枝蒿主要植物來源［9,10］。伏毛鐵棒錘A.flavum作為從民間藥和民族藥開發(fā)出的新藥材，極大地豐富了我國的中藥材品種，也成為中藥材資源開發(fā)利用的一個方向［11］。

陜西省中醫(yī)藥研究院對鐵棒錘藥材（伏毛鐵棒錘A.flavum來源）質(zhì)量標(biāo)準進行了研究。該研究包括藥材性狀描述、顯微特征及薄層鑒定等。重點在含量測定及其方法學(xué)的探討，最終確定以乙醚-氯仿(3∶1)為提取溶媒，振搖作提取方法，實現(xiàn)對烏頭堿最佳提取效率，并通過空白實驗、穩(wěn)定性實驗、重復(fù)性實驗、精密度實驗及回收率實驗證明對溶劑系統(tǒng)對測定結(jié)果無影響、供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好、精密度等良好［12］。由此總結(jié)出了一套較為可靠的研究方法，為藥企業(yè)投料的準確性和臨床應(yīng)用的安全性提供了有用信息。

【摘要】目的研究川芎(CHX)生物堿對局灶性腦缺血再灌注（I/R）大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及動物蘇醒后神經(jīng)功能、腦梗死容積的影響。方法腹腔注射（ip）CHX生物堿50、100、200mg/kg和生理鹽水1w后將其制成局灶性腦大鼠損傷模型，并檢測血清中的SOD活性、MDA含量，神經(jīng)功能損傷評分以及腦梗死容積的變化，同時與假手術(shù)組比較。結(jié)果I/R組與假手術(shù)組相比，血清中的SOD活性降低，MDA含量增加（P＜0.01）。CHX50mg/kg組、CHX100mg/kg組、CHX200mg/kg組與I/R組相比，血清中的SOD活性均升高（P＜0.01），MDA含量均降低（P＜0.05），腦梗死容積明顯縮小（P＜0.01）；神經(jīng)功能評分差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論CHX生物堿對腦I/R引發(fā)的自由基損傷有保護作用，從而減輕腦I/R后腦組織的損害。

【關(guān)鍵詞】川芎生物堿；缺血再灌注；超氧化物歧化酶；丙二醛；自由基

近年來，人們傾向于采用超早期溶栓治療腦梗死，迅速恢復(fù)局部血供，以達到理想的治療效果，但缺血再灌注（I/R）損傷可引起一系列復(fù)雜的繼發(fā)改變，導(dǎo)致缺血組織損傷惡化〔1〕。如何防止腦I/R，尋找有效的防治藥物，促進腦卒中后中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能恢復(fù)，一直是相關(guān)學(xué)科研究的重點之一。某些中藥如叁附、大黃、川芎等經(jīng)臨床驗證可通過多種環(huán)節(jié)防止缺血性損傷〔2〕,但目前國內(nèi)有對照的臨床研究病例數(shù)較少,本實驗通過觀察川芎（CHX）中的生物堿對大鼠腦I/R損傷后血清中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量及動物蘇醒后神經(jīng)功能評分、腦梗死容積大小的影響探討CHX生物堿對腦I/R損傷的保護作用，為CHX防治中樞神經(jīng)系統(tǒng)缺血性損傷提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1動物分組及給藥方法選擇健康Wistar大鼠50只,體重280～350g，由吉林大學(xué)實驗動物中心提供。編號：SCXK(吉)20030004，隨機分成5組，每組10只。CHX生物堿由北華大學(xué)藥學(xué)院中藥研究室制備,用時調(diào)配至所需濃度。①I/R組（生理鹽水組10ml/kg），腹腔注射（ip）生理鹽水10ml/kg7d，每天1次。②I/R＋CHX50mg/kg組，ipCHX生物堿50mg/kg連續(xù)7d，每天1次。③I/R＋CHX100mg/kg組，ipCHX生物堿100mg/kg連續(xù)7d，每天1次。④I/R＋CHX200mg/kg，ipCHX生物堿200mg/kg連續(xù)7d，每天1次。⑤假手術(shù)組，進行手術(shù)而未制造大鼠局灶性腦I/R病理模型。⑥陽性對照組，用葛根素（GGS）5mg/kg，連續(xù)7d，每天1次。除假手術(shù)組外，其余各組用藥7d。后制造大鼠局灶性腦I/R病理模型。

1.2I/R造摸方法大鼠用25％烏拉坦ip（0.3ml/100g）加乙醚吸入麻醉。背位固定，頸右側(cè)切口，暴露右頸總動脈（CCA）。向外牽引二腹肌和胸鎖乳突肌，由CCA分叉處向頭端依次游離。電凝頸外動脈（ECA）的所有分支。在甲狀腺上動脈遠端結(jié)扎，切斷ECA，使其主干游離備用，然后分離頸內(nèi)動脈（ICA）至顱底，結(jié)扎其分支翼腭動脈，僅保留ICA入頸主干。用1號絲線在ECA根部打一松扣，用動脈夾暫時關(guān)閉CCA和ICA，將預(yù)先制備好的尼龍線經(jīng)ECA主干的切口插入至CCA分叉處,將ECA根部的絲線縛緊,以防止其中的尼龍線滑出或出血，然后移去ICA的動脈夾，將動脈夾緩慢向ICA入頸的方向推進，以分叉處為標(biāo)記，推進約17mm時可感到阻力，表明尼龍線的頭端已通過大腦中動脈（MCA）的起始處,到達較細的大腦前動脈內(nèi)，移去CCA上的動脈夾，此時即完成右側(cè)MCA的阻塞，縫合切口，將尼龍絲的尾端留在皮外，再灌注時將尼龍線輕輕抽感到阻力時，表明尼龍線的頭端已回到ECA的主干中，從而實現(xiàn)MCA的再灌注。術(shù)中及術(shù)后注意保持體溫，室溫保持在20℃～24℃。