導語：如何才能寫好一篇詠柳的意思，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

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1、《詠柳》是盛唐詩人賀知章寫的一首七言絕句。詩句譯文：高高的柳樹長滿了翠綠的新葉，輕柔的柳枝垂下來，就像萬條輕輕飄動的綠色絲帶。這細細的嫩葉是誰的巧手裁剪出來的呢？原來是那二月里溫暖的春風，它就像一把靈巧的剪刀。

2、原文為：碧玉妝成一樹高，萬條垂下綠絲絳。 不知細葉誰裁出，二月春風似剪刀。

3、這首詩是一首詠物詩。詩的前兩句連用兩個新美的喻象，描繪春柳的勃勃生氣，蔥翠裊娜；后兩句更別出心裁地把春風比喻為“剪刀”，將視之無形不可捉摸的“春風”形象地表現(xiàn)出來，不僅立意新奇，而且飽含韻味。

（來源：文章屋網(wǎng) ）

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[關鍵詞] 急性胰腺炎；TNF-α

[中圖分類號] R657.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2014）07-0159-02

急性胰腺炎（acute pancreatitis）是臨床上的急腹癥，其發(fā)病機制目前尚不明確。自從1988年Rinderknecht提出了白細胞過度激活學說[1]后，細胞因子在急性胰腺炎發(fā)病機制中的作用逐漸被重視，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）作為急性胰腺炎始動因子的作用已經(jīng)得到證實[2]?，F(xiàn)就促炎性細胞因子TNF-α在急性胰腺炎中的作用綜述如下。

1 腫瘤壞死因子

1.1 TNF-α的產(chǎn)生

1975 年Carswell等發(fā)現(xiàn)了能使荷瘤鼠腫瘤發(fā)生出血、 壞死而對正常組織細胞無明顯作用的腫瘤細胞毒因子，Old將其命名為腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor TNF）。TNF主要分為由活化T細胞產(chǎn)生的 TNF-β和活化的單核細胞產(chǎn)生的 TNF-α。在人體內(nèi)，產(chǎn)生TNF-α的主要細胞是單核巨噬細胞。Ramudo等的研究表明，胰腺相關性腹水時胰腺腺泡細胞中的TNF-α量增加，而非單核細胞或淋巴細胞，可見腺泡細胞是真正產(chǎn)生TNF-a的炎癥細胞[3]。

1.2 TNF-α的調(diào)節(jié)

正常人循環(huán)中的TNF-α水平為（10～80）pg/mL。在人和動物，能誘導產(chǎn)生TNF-α物質(zhì)為LPS，靜脈輸入LPS后2h，血清TNF-α達到高峰，4h內(nèi)恢復到基線水平。部分細胞因子也能誘導TNF-α，例如：IFN、IL-1、IL-2等。糖皮質(zhì)激素、IL-4、IL-6、IL-10、PAF受體拮抗劑和抗MHC-Ⅱ類分子抗體等均能在轉(zhuǎn)錄水平或轉(zhuǎn)錄后水平抑制TNF-α產(chǎn)生。能抑制NF-κB活性的物質(zhì)（N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽等）和能抑制氧化酶的物質(zhì)均能抑制TNF-α產(chǎn)生。

1.3 TNF-α的生物學活性

1.3.1 TNF-α對血管的影響 TNF-α能引起血管內(nèi)皮細胞結構變化（如肌動蛋白微絲等重排，失去精密連接）、損傷內(nèi)皮細胞，導致血漿蛋白和水大量滲漏，于是機體發(fā)生毛細血管滲漏綜合征。大量的TNF-α會引起廣泛的凝血使器官壞死，出現(xiàn)毛細血管滲漏綜合征，使全身脫水和肺衰竭，導致全身性炎癥反應綜合征。

1.3.2 TNF-α對肝臟的作用 TNF-α能誘導肝臟產(chǎn)生急性期蛋白，抑制白蛋白的合成，并通過誘導IL-1和IL-6的生成放大這種效應，導致肝臟發(fā)生病理改變。

1.3.3 TNF-α與其他細胞因子 TNF-α在體內(nèi)能誘導IL-1、IL-6、IL-8、IFN-γ等細胞因子的產(chǎn)生，IL-10、CNTF等抑制TNF-α的作用，而IL-1、LIF、LPS則增強TNF-α的活性。

2 腫瘤壞死因子與急性胰腺炎

2.1 TNF-α在急性胰腺炎中的地位

目前對于急性胰腺炎的發(fā)病機制，“細胞因子所形成的三次打擊學說”是研究的熱點。大量的促炎因子和抗炎因子的相互作用導致胰腺局部損害（第一次打擊）、胰腺外臟器功能損害（第二次打擊）以及系統(tǒng)性炎癥反應綜合征（第三次打擊）[4]。TNF-α是急性胰腺炎的起動因子，在發(fā)病過程中起到“板機”樣作用[5]。在急性胰腺炎中，TNF-α升高的程度與胰腺損傷及炎癥程度呈正相關，并在急性胰腺炎發(fā)病及其全身并發(fā)癥發(fā)生過程中起著重要作用[6]。TNF-α在急性胰腺炎發(fā)病的早期即可檢測到，高濃度的TNF-α能夠誘發(fā)和調(diào)控多種炎性細胞因子如IL-1、IL-6、IL-8等的釋放， 直接和間接參與引起機體內(nèi)兩次高水平細胞因子血癥， 引起炎癥瀑布樣級聯(lián)反應，引起胰腺的病理變化[7]。

2.2 TNF-α在胰腺損傷中的作用

急性胰腺炎時，胰腺濾泡細胞產(chǎn)生大量TNF-α，這些TNF-α與胰腺細胞相關受體結合，使細胞產(chǎn)生氧自由基，激活核酸內(nèi)切酶將DNA 裂解成片段，造成細胞死亡[8]。并刺激炎癥細胞產(chǎn)生多種炎癥介質(zhì)及細胞因子來加劇胰腺組織損傷[9]。TNF-α還可直接損傷血管內(nèi)皮細胞，并可通過使細胞表面黏附因子與內(nèi)皮配位子的接觸時間延長和更加緊密而加劇內(nèi)皮細胞損害[10]。

2.3 TNF-α在肝臟損傷中的作用

TNF-α介導肝臟損傷途徑為：TNF-α的毒性作用直接導致肝竇內(nèi)皮細胞損傷，引起肝血竇微循環(huán)障礙，激活補體系統(tǒng)，誘發(fā)IL-1、IL-6、PGE2等細胞因子釋放，并與IL-1、IL-6等細胞因子協(xié)同介導肝損傷[11]。Sindram等研究發(fā)現(xiàn)，在肝細胞中，庫普弗細胞和血小板通過釋放TNF-α來激活凋亡通路[12]。

2.4 TNF-α在腸黏膜損傷中的作用

急性胰腺炎中，腸黏膜缺血、缺氧，黏膜屏障破壞，腸黏膜通透性異常增加，細菌移位引起繼發(fā)感染，再度激活巨噬細胞，導致TNF-α大量釋放，可誘發(fā)自身破壞性進程的“級聯(lián)瀑布反應”，這是機體遭受的第二次打擊，最后導致生命器官的功能衰竭。

急性胰腺炎引起腸道出現(xiàn)缺血再灌注損傷是導致腸管黏膜出現(xiàn)功能障礙的主要原因之一[13]。此時，腸道黏膜細胞內(nèi)可產(chǎn)生大量活性氧、各種細胞因子、炎癥介質(zhì)，導致細菌及內(nèi)毒素得以穿越損傷的腸黏膜上皮而發(fā)生移位[14]。由于內(nèi)毒素刺激單核巨噬細胞釋放 TNF-α使腸黏膜上皮細胞凋亡，導致腸屏障功能障礙，引起氧自由基和蛋白水解酶等有害物質(zhì)釋放，并激活補體系統(tǒng)通過細胞毒性作用加重組織損傷。

2.5 抑制TNF-α的產(chǎn)生可有效緩解急性胰腺炎癥狀

細胞內(nèi)信號傳導通路介導的胰腺炎癥反應機制目前主要包括絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK） 核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB） 等[15]。其中p38MAPK 存在于胰腺細胞激活的早期，在炎癥細胞浸潤到組織內(nèi)時就活化，各種不同刺激均可以激活 p38MAPK[16]。因此，對關鍵的信號轉(zhuǎn)導通路進行有效地阻斷和調(diào)節(jié)，可以有效地調(diào)控促炎細胞因子的產(chǎn)生，從而阻斷 SIRS 和 MOF 的發(fā)生或減輕其嚴重程度，從而明顯減輕臨床癥狀。有研究表明[17]，MAPK抑制劑預處理后能顯著減少急性胰腺炎大鼠血漿中促炎細胞因子TNF-α的產(chǎn)生，抑制胰腺組織中TNF-α mRNA 的表達。通過抑制TNF-α的表達，明顯改善胰腺病理改變，從而減輕胰腺炎癥狀。

3 總結

綜上所述， 促炎性細胞因子TNF-α在急性胰腺炎中起重要作用，不僅對機體本身造成損傷，同時促進其他細胞因子、炎癥介質(zhì)和氧自由基等的大量釋放，對胰腺及全身多個器官造成損傷，阻斷其表達通路可明顯緩解臨床癥狀。

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篇3

精益物流中的“精”表示少而精，不投入多余的生產(chǎn)要素，只是在適當?shù)臅r間生產(chǎn)必要數(shù)量的市場急需產(chǎn)品(或下道工序急需的產(chǎn)品）；“益”表示所有經(jīng)營活動都要有效益，具有經(jīng)濟性。精益生產(chǎn)就是及時制造，消滅故障，消除一切浪費，向零缺陷、零庫存進軍[2]。

目前，我國大多數(shù)軍工企業(yè)仍然采取批量生產(chǎn)方式，這一生產(chǎn)方式的形成與中國軍工企業(yè)發(fā)展的歷史有一定的關系。現(xiàn)今，軍工企業(yè)的市場發(fā)生了較大的變化，軍工企業(yè)面臨著市場轉(zhuǎn)變的機遇與挑戰(zhàn)，本文試圖將精益物流理論應用于軍工企業(yè)，調(diào)整以往的少品種大批量的生產(chǎn)方式向多品種小批量生產(chǎn)方式改進。

1.X軍工生產(chǎn)企業(yè)簡介

X軍工生產(chǎn)企業(yè)是國內(nèi)專業(yè)的軍用電機生產(chǎn)廠家，其現(xiàn)有的生產(chǎn)模式為面向用戶的單件、批量生產(chǎn)模式。目前X企業(yè)電機產(chǎn)品的生產(chǎn)，仍還采用傳統(tǒng)的職能分工模式進行計劃、調(diào)度管理，這已明顯不能適應當前市場多品種，小批量的需求，此種生產(chǎn)模式已成為軍品生產(chǎn)的瓶頸，對其進行精益物流改造已成當務之急。

2.X軍工生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)現(xiàn)狀及存在問題

X軍工企業(yè)目前的生產(chǎn)方式為大規(guī)模批量生產(chǎn)模式，生產(chǎn)效率有進一步提高的空間，管理方式有待進一步改進。

工廠整體生產(chǎn)過程首先是由科研計劃生產(chǎn)部根據(jù)投產(chǎn)任務和產(chǎn)品合同要求，編制研制生產(chǎn)主計劃，根據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)的必要條件，完成產(chǎn)品生產(chǎn)文件、物料、設備、等準備工作；采購部門根據(jù)企業(yè)年度經(jīng)營計劃，編制企業(yè)物料作業(yè)計劃、采購作業(yè)計劃，根據(jù)計劃采購物資，包括：產(chǎn)品用主料、輔料；設備維修、保養(yǎng)用零組件、材料；產(chǎn)品制造部根據(jù)科研生產(chǎn)主計劃要求，編制本部門產(chǎn)品生產(chǎn)加工作業(yè)計劃，按照作業(yè)計劃設計圖紙的要求，進行工藝研究，對機械加工車間，熱處理車間，裝配車間進行管理指揮調(diào)度，及時完成生產(chǎn)加工作業(yè)及零部件、產(chǎn)品的周轉(zhuǎn)；生產(chǎn)過程中，運行保障部負責設備的安裝、調(diào)試、驗收、移交和保養(yǎng)，技安部負責安全生產(chǎn)監(jiān)督管理、環(huán)境保護監(jiān)督管理，職業(yè)衛(wèi)生監(jiān)督管理，運輸部負責公司部門用車申請進行出車安排和車輛調(diào)度，質(zhì)量部負責公司質(zhì)量管理。

X軍工生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)在應對多品種小批量的市場需求顯現(xiàn)了它的不足之處：

第一、企業(yè)生產(chǎn)線的布置靈活性不強，面對突如其來的訂單，沒有足夠快的反應速度進行生產(chǎn)調(diào)整。第二、公司的設備不夠集中，增加了半成品、成品的搬運距離，造成了搬運浪費。第三、企業(yè)的組織結構是適應于批量生產(chǎn)的直線職能制模式，生產(chǎn)計劃至上而下層層下達，生產(chǎn)的方式主要是大批量的“推式”生產(chǎn)，這樣增加的是生產(chǎn)組織時間，不能快速的對市場作出反應。第四、公司的信息系統(tǒng)不夠完善，生產(chǎn)信息不能在各部門之間快速的傳遞。

3. X軍工生產(chǎn)企業(yè)的精益物流改造

（1）“一個流”的生產(chǎn)方式

為了消除機群式布置下批量生產(chǎn)所造成的浪費，可以采用精益物流中“一個流”的生產(chǎn)理念，最大限度的消除搬運，等待所造成的浪費。所謂“一個流”生產(chǎn)，是指將作業(yè)場地、人員、設備合理配置，使產(chǎn)品在生產(chǎn)時，每個工序最多只有一個在制品或成品，從生產(chǎn)開始到完成之前，沒有在制品放置在生產(chǎn)場地。

為了縮短工人走動的距離，增加員工之間的交流，可把生產(chǎn)線布置成U型，這樣還可以節(jié)省空間。

電機生產(chǎn)品主要由四個部分組成：一、前端蓋；二、后端蓋；三、轉(zhuǎn)子；四、定子。

可將生產(chǎn)工藝相近的前端蓋與后端蓋組成一道U型生產(chǎn)線，將轉(zhuǎn)子與定子分別組成兩道U型生產(chǎn)線，生產(chǎn)出來的配件輸送到裝配區(qū)域進行統(tǒng)一裝配，實現(xiàn)生產(chǎn)一個流。

（2）組織結構重組

在新的市場環(huán)境下，企業(yè)直線組織模式在X軍工企業(yè)顯現(xiàn)出了部門間信息交流的不足；直線部門與職能部門（參謀部門）之間目標不統(tǒng)一，職能部門之間橫向聯(lián)系較差，信息傳遞路線較長，矛盾較多；系統(tǒng)剛性大，適應性差，容易因循守舊，對新情況不易及時做出反應等弊端。為了更能適應多變的市場，為適應改造后的生產(chǎn)線生產(chǎn)，需要將X軍工生產(chǎn)企業(yè)現(xiàn)有的組織結構進行調(diào)整，打破原有的部門界限，繞過中間管理層次，直接面對顧客和公司總體目標，建立扁平化的組織結構

（3）建立生產(chǎn)制造執(zhí)行系統(tǒng)

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關鍵詞：高值耗材 招標采購 供配流程管理

中圖分類號：F243 文獻標識碼：A

文章編號：1004-4914（2012）10-232-02

精益管理源于精益生產(chǎn)，是一種先進的管理理念，它起源于20世紀60年代日本豐田公司著名的“豐田生產(chǎn)方式”，是一種消除浪費，要求企業(yè)的各項活動都必須運用“精益思維”，來提升流程速度與效率的管理工具。精益管理理論在大型醫(yī)院醫(yī)用耗材招標采購供配流程管理與降低運營成本方面非常實用，通過消除所有無增值的程序，以有限的資金及人力物力資源，為患者提供安全、及時、有效的服務保障。

醫(yī)用高值耗材一般指分屬于?？剖褂茫苯幼饔糜谌梭w，對安全性有嚴格要求。現(xiàn)如今，由于醫(yī)院的快速發(fā)展，醫(yī)療技術的不斷創(chuàng)新，醫(yī)用高值耗材需求量大幅增加，采購數(shù)量逐年攀升，品種繁多，材質(zhì)多樣，規(guī)格型號復雜，專業(yè)性強。以筆者所在的湖北醫(yī)藥學院附屬太和醫(yī)院為例，我院是一所集醫(yī)療、教學、科研、防保、急救、康復為一體的綜合性國家三級甲等醫(yī)院。多年來，醫(yī)院始終致力于醫(yī)療質(zhì)量和醫(yī)療安全的持續(xù)改進，重視醫(yī)用高值耗材招標采購、供配流程管理，醫(yī)院取得了經(jīng)濟效益和社會效益雙豐收。主要有以下幾個特點。

一、重視醫(yī)用高值耗材招標采購流程環(huán)節(jié)管理

隨著我國醫(yī)改工作的不斷深入，國家基本藥物制度的逐步推行，針對醫(yī)藥衛(wèi)生領域醫(yī)用高值耗材價格虛高、質(zhì)量參差不齊以及購銷環(huán)節(jié)的種種問題，加強對醫(yī)療供應商的管理和規(guī)范采購環(huán)節(jié)與流程，是醫(yī)院醫(yī)療工作的中心任務。以我院為例，醫(yī)用高值耗材使用量較大，是醫(yī)院診療收入、藥品收入、醫(yī)技檢查收入以外的重要經(jīng)濟要素。因此，對醫(yī)用高值耗材招標流程環(huán)節(jié)的管理是醫(yī)院醫(yī)療管理的重點環(huán)節(jié)。

（一）健全招標采購民主管理機構

醫(yī)院成立了招標采購民主管理機構及物資招標采購選標工作組，成員由院長、主管后勤工作的副院長，后勤、財經(jīng)、監(jiān)審處等有關人員組成。為提高醫(yī)用高值耗材采購決策的透明度，確保比價招標采購的公開、公平與公正，不同的采購方式選擇不同的監(jiān)管方式。通過有力的行政管理和有效的民主監(jiān)督，確保物資采購管理逐步、穩(wěn)定地向規(guī)范化、制度化方向推進，做好醫(yī)用耗材管理的宏觀調(diào)控，把握投資方向。主管院長負責指導醫(yī)用耗材項目的評審工作；財經(jīng)處對相應耗材品種的定價對成交價格進行嚴格核定；紀委監(jiān)察、財務、審計等有關部門履行對招投標及審核結果進行監(jiān)督檢查，發(fā)現(xiàn)問題及時向醫(yī)院招標采購民主管理機構建議，提出切實可行的糾錯辦法。

（二）采取有效措施確保耗材質(zhì)量

1.組織實施招標采購。根據(jù)公平、公開、公正、科學、擇優(yōu)的原則，嚴格審核招標文件、進行集體評議、確定中標結果。嚴格按照招標文件規(guī)定的標準和方法進行評標，突出各類耗材的關鍵技術指標。在非公開化狀態(tài)下，按照成立談判小組、確定耗材的技術要求和配置，嚴格審核廠商資格資質(zhì)及產(chǎn)品注冊，組織商務澄清、集體評議，開展成本分析、市場調(diào)查，分別談判的程序進行，選擇性價比高、質(zhì)量可靠、售后服務有保障的產(chǎn)品。

2.供應商的循證管理。主要包括：（1）資質(zhì)證據(jù)。包括注冊證、生產(chǎn)許可證、經(jīng)營許可證等證明產(chǎn)品和企業(yè)的合法性。（2）質(zhì)量證據(jù)。衛(wèi)生許可證和國家藥品監(jiān)督管理局質(zhì)量檢測報告。（3）供應商行為證據(jù)。供貨的及時性、準確性等。（4）供應鏈管理證。包括合同、標書、發(fā)票、送貨單、出庫單等，主要保證信息流、資金流和物流的高效流動。（5）外部溝通證據(jù)。談判的現(xiàn)場記錄、商變更登記、法定代表人授權書等。（6）內(nèi)部溝通證據(jù)。醫(yī)用耗材的準入審核、采購、供應、使用及收費涉及到醫(yī)院醫(yī)政管理部門、財務部門、供應部門及臨床科室，完善的信息化辦公系統(tǒng)可以自動留下證據(jù)，紙質(zhì)文件證據(jù)是必需的。應嚴格審查各種證件復印件的真實性和有效性，查驗是否加蓋經(jīng)營單位公章。把所有能反映供應商資質(zhì)、信譽及產(chǎn)品質(zhì)量的文件、產(chǎn)品圖書、證書歸檔，建立供應商檔案，方便查閱和全程管控。

3.主渠道供應控制。一是加強對高值醫(yī)用耗材的準入控制。履行嚴格的審批程序，包括使用申請、技術審查等。二是加強對高值醫(yī)用耗材的采購控制。在規(guī)定的渠道以核定的價格進行采購，嚴格按招標管理規(guī)定組織實施招標采購。三是加強對高值醫(yī)用耗材的使用控制。從嚴控制高質(zhì)耗材的采購預算，合理搭配不同檔次的品種供病人選擇。嚴格履行告知義務，當患者必須使用高質(zhì)醫(yī)用耗材時，主管醫(yī)生須先告知并征得其同意，并由病人簽署高質(zhì)醫(yī)用耗材使用同意書(使用同意書的要件必須包括：病人擬使用的高質(zhì)醫(yī)用耗材的名稱、數(shù)量、進口或國產(chǎn)、價格)。醫(yī)生不得通過故意夸大進口與國產(chǎn)品種間的質(zhì)量差異來誘導消費。我院對科室使用的重要輸血材料、透析材料、手術材料、心臟監(jiān)測材料、超聲材料、介入材料、麻醉材料、內(nèi)窺鏡材料等，禁止臨床科室直接向公司購買耗材的現(xiàn)象，杜絕了產(chǎn)生耗材質(zhì)量問題的隱患。

（三）確保招標采購價格公正合理

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【摘要】 目的 構建生存素（survivin）短發(fā)夾狀RNA表達載體，檢測其對骨肉瘤細胞survivin mRNA及蛋白表達的影響。方法 體外構建survivin shRNA 表達載體pSilence2.1neosurvivin，轉(zhuǎn)染骨肉瘤細胞系MG63，RTPCR、免疫組化方法檢測轉(zhuǎn)染前后survivin mRNA及蛋白的表達，MTT比色法檢測細胞增殖活性。結果 pSilence2.1neo survivin載體轉(zhuǎn)染能顯著抑制survivin mRNA、蛋白表達，轉(zhuǎn)染后48h細胞增殖的抑制率為61.83%。結論 pSilence2.1neosurvivin可顯著抑制MG63細胞survivin mRNA、蛋白的表達及細胞的增殖活性。

【關鍵詞】 survivin；RNA干擾；短發(fā)夾RNA；骨肉瘤

Inhibition of the Expression of survivin in Osteosarcoma Cell by A Short Hairpin RNA

Key words：survivin；RNA interference；Short hairpin RNA；Osteosarcoma

RNA 干擾（RNA interference，RNAi）是一種新興的轉(zhuǎn)錄后基因阻斷技術， 可以簡單、有效、特異地下調(diào)細胞中目的基因的表達。我們以survivin為靶點，體外構建短發(fā)夾狀RNA的表達載體， 觀察其對MG63細胞survivin基因表達的影響，為骨肉瘤基因治療的進一步研究提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

人骨肉瘤細胞系MG63為本教研室保存，Lipofectamine 2000為Invitrogen公司產(chǎn)品，pSilence2.1neo為Ambin公司產(chǎn)品， RTPCR試劑盒為MBI公司產(chǎn)品，鼠抗人survivin單克隆抗體及SP試劑盒為Santa Cruz公司產(chǎn)品。

1.2 實驗方法

1.2.1 pSilence2.1neosurvivin表達載體構建及細胞轉(zhuǎn)染 參照Harborth等［1］的干涉RNA 設計原則，以人survivin的mRNA序列5′TTCGTCCGGTTGCGCTTTC 3′為靶點，體外合成兩端帶有BamHⅠ和HindⅢ粘端酶切位點、內(nèi)含5TTCGTCCGGTTGCGCTTTCTTCAAGAGAGAAAGCGCAACCGGACGAA3發(fā)夾狀序列的雙鏈DNA，將合成的片段接入pSilence2.1neo載體，篩選、擴增后經(jīng)測序證實構建成功。分4組進行細胞轉(zhuǎn)染處理：空白組、脂質(zhì)體組、空載體組、shRNA組。

1.2.2 RTPCR檢測細胞survivin mRNA的表達 分別收集轉(zhuǎn)染24、48、72h細胞， 提取細胞總RNA，并進行逆轉(zhuǎn)反應。引物的序列為： survivin：上游：5′ATGGGTGCCCCGACGTTG3′下游：5′AGAGGCCTCAATCCATGG3′，擴增產(chǎn)物436bp。βactin：上游：5′TGGCATTGCCGACAGGATGCAGAA3′下游：5′CTCGTCATACTCCTGCTTGCTGAT3′，擴增產(chǎn)物172bp。以survivin與βactin條帶的積分吸光度（IA）比值表示survivin mRNA的相對含量。

1.2.3 免疫組化法檢測survivin蛋白的表達 按上法處理細胞24、48、72h后，SP法進行免疫組化染色。以細胞漿和/或核呈現(xiàn)棕黃或棕褐色顆粒為陽性細胞，并計算陽性表達率：陽性表達率=（每500個細胞中陽性細胞數(shù)/500）×100%。

1.2.4 MTT法檢測細胞增殖活性 按上法處理細胞24、48、72、96h后，行MTT染色，測OD值，計算細胞增殖抑制率：細胞增殖抑制率=（空白組OD值處理組OD值）/空白組OD值×100%。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，對數(shù)據(jù)進行t檢驗。

2 結果

2.1 RTPCR結果

shRNA組436 bp處的條帶亮度顯著低于其余各組，見圖1，與空白組相比shRNA組24、48、72h mRNA 表達抑制率分別為68.52%、74.87%和71.93%， 其抑制作用在24～48h逐步增加，48～72h有所減低，余各組之間無明顯差別，見表1。表1 survivin shRNA對MG63細胞survivin mRNA表達的影響

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2.2 免疫組化結果

空白組、脂質(zhì)體組、空載體組多數(shù)細胞中均出現(xiàn)明顯的棕黃色的顆粒狀細胞漿和/或核著色，見圖2，而shRNA組細胞著色較淡，陽性細胞數(shù)目較少，見圖3。 統(tǒng)計結果顯示，shRNA組survivin蛋白表達明顯低于其他組，見表2。表2 survivin shRNA對MG63細胞 survivin蛋白表達的影響

2.3 MTT比色法比較細胞增殖活性

與空白組相比，載體轉(zhuǎn)染后24、48、72、96h細胞的增殖活性均受到了顯著抑制，48h抑制率最高，為61.83%。其他組間細胞的增殖情況的差異無統(tǒng)計學意義，見表3。

3 討論

RNAi是指在生物體細胞內(nèi)，外源性或內(nèi)源性的雙鏈RNA（double－stranded RNA， dsRNA）引起同源mRNA 特異性的降解，從而高度特異性、高效性地抑制目的基因表達的技術。利用siRNA 干涉技術特異地抑制癌基因、癌相關基因或突變基因的過度表達，使這些基因保持在靜寂或休眠狀態(tài)，可表3 MTT法檢測shRNA對MG63人骨肉瘤細胞增殖的抑制作用達到抗腫瘤作用。Lin等［2］利用RNAi 技術使bcl2 基因靜寂，從而抑制了前列腺癌LNCaP 細胞的生長，并可見到染色體濃縮、基因組DNA 斷裂等細胞凋亡的特征性變化；Elbashir等［3］將體外合成的特異性siRNA轉(zhuǎn)染入人宮頸癌Hela細胞， 結果發(fā)現(xiàn)其靶向mRNA 所表達的蛋白質(zhì)的量比轉(zhuǎn)染前降低了90%。

survivin是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子，屬于凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins，IAP）家族的新成員。survivin表達于胚胎和發(fā)育的胎兒組織，在終末分化的成人組織中不表達（胸腺除外），但在人類大多數(shù)的惡性腫瘤組織中高表達且與腫瘤的惡性程度及預后密切相關［4，5］。其通過抑制凋亡通路末端的效應子caspase3和caspase7而阻斷各種刺激（如Fas、caspase、bax、化療藥物）誘導的腫瘤細胞凋亡過程［6］。 采用反義技術阻斷腫瘤細胞survivin基因的表達可抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞凋亡、增強化療或放療的敏感性，故此survivin基因已成為當前腫瘤基因治療研究的熱點。

本研究設計并構建了針對 survivin 的shRNA表達載體pSilence2.1neosurvivin，并證實該載體轉(zhuǎn)染可以顯著抑制 MG63細胞中survivin mRNA及蛋白的表達并顯著抑制MG63細胞的增殖活性，為靶向survivin基因進行骨肉瘤基因治療的進一步研究提供了實驗基礎。

【參考文獻】

［1］ Harborth J，Elbashir SM， Bechert K，et al. Identification of essential genes in cultured mammalian cells using small interfering RNAs［J］. J Cell Sci，2001， 114(Pt 24): 45574565.

［2］ Lin SL， Chuong CM，Ying SY.A novel mRNA－cDNA interference phenomenon for silencing bcl2 expression in human LNCaP cells［J］. Biochem Biophys Res Commun， 2001， 281(3)：639644.

［3］ Elbashir SM， Harborth J， Lendeckel W， et al. Duplexes of 21 nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells［J］. Nature， 2001， 411(6836): 494498.

［4］ Altieri DC. The molecular basis and potential role of survivin in cancer diagnosis and therapy［J］. Trends Mol Med，2001， 7(12): 542547.

篇6

關鍵詞：鋼絲繩芯膠帶，膠接，硫化工藝。

一.前言

我礦現(xiàn)有正處于“保安全，降成本，求生存，促發(fā)展”階段，降低成本是必然趨勢，而且眾所周知采煤行業(yè)是一個高危行業(yè)，生產(chǎn)安全管理對于一個煤礦企業(yè)尤為重要，機電運輸系統(tǒng)又是管理難度最大，最易發(fā)生事故的一個環(huán)節(jié)，然而主運皮帶運輸又是決定煤炭生產(chǎn)量大小的必要因素。在此前提之下，珙泉煤礦機電運輸部在集團公司領導及礦領導的關心和指導下，遵照上級領導對礦井安全生產(chǎn)的要求，對煤炭運輸工作當中的不足進行了一系列的改革，其中一項就是：將煤炭用礦車運輸和普通膠帶運輸改為鋼絲繩芯膠帶運輸?，F(xiàn)本文就對鋼絲繩芯膠帶硫化接頭和修補在安全生產(chǎn)管理當中的實用性、經(jīng)濟性和大家進行分析。

二.珙泉形勢概況

1.礦上正處在“保安全，降成本，求生存，促發(fā)展?！钡目焖侔l(fā)展階段， 要求在礦井生產(chǎn)建設中要以科技創(chuàng)新為主，大力推廣應用新技術、新工藝、小設計、小改革和技術創(chuàng)新。

2.大幅度的降低成本投入節(jié)能降耗和提高珙泉煤礦的生產(chǎn)效益。在珙泉礦技改項目中，對各采煤工作面煤炭的順利開采和運輸提供高效、安全、可靠的保障。

三.鋼絲繩芯膠帶硫化工藝流程

1.硫化機技術特征

1.1.安裝，拆卸方便易行、部件輕、主要部件材質(zhì)為鑄鋁合金。

1.2.部件有足夠的強度和鋼度、在滿負荷工作時不斷裂、變形量小。

1.3.熱板工作面平整光潔，技術要求7以上。

1.4.施加工作壓力后縫隙小于0.5mm。

1.5.升溫快，從室溫升至標準硫化溫度的時間為30-50min。

1.6.上、下熱板表面溫度均勻一致，工作面各點溫度差在2.5C以內(nèi)，硫化過程中，溫度波動2.5C。

1.7.加壓后，熱板單位壓力為1.8-2.8Mpa。

1.8.熱板長度和寬度與膠帶尺寸關系？a）長度比接頭長300mm以上，？b）寬度比接頭寬150mm以上。

2.接頭用材料

2.1.鋼絲繩芯膠帶接頭，必須使用規(guī)定的材料，其種類和用途如見下表

表1

2.2.安徽天地人生產(chǎn)的各種鋼絲繩芯膠帶須使用該公司提供的膠片。因這些膠料的配比是在反復試驗的基礎上經(jīng)過嚴格選擇指定的，能確保接頭部位性能達到要求，不同品種的帶型需要不同性能的膠料匹配。接頭用膠片最好使用新壓制的膠片，壓延后在存放溫度不超過35的情況下存放時間不超過3個月。存放溫度高或時間超過3個月，使用前應進行鑒定，只有確認其未變質(zhì)時才能使用。

2.3.接頭用膠漿可在使用前于現(xiàn)場配制，汽油和芯膠的重量比為5：1。配置前可先在容器中加所需汽油的1/3，將膠片切碎的汽油中，浸泡2小時以上即可開始攪拌，攪拌時太粘稠可酌情再加少許汽油，當膠漿攪或均勻的無塊狀時再將剩余的汽油倒進，并攪拌均勻即可使用。膠漿存放時間不宜太長，使用中如因溶劑揮發(fā)膠漿太綢時，可加入少量汽油攪勻使用。

3.膠帶接頭尺寸和技術要求

3.1.接頭長度和幾何結構的設計取決于鋼絲繩直徑d、鋼絲繩間距t、鋼絲繩的拉伸強度Fbs、鋼絲繩粘合強度Fa。

3.2.本礦使用的鋼絲繩芯膠帶分別為：ST1000、 ST2000、 ST3150，接頭方式各分為：一級接頭、二級接頭、三級接頭，各級接頭的最小階梯長度和接頭長度在表2中給出（單位mm）。

表2

4.膠帶搭頭操作方法

4.1.交接前準備

（1）選擇搬運與操作方便的地方做膠接施工。場地要清楚干凈，無雜放物品。

（2）在運輸機架上搭一矩形操作平臺，其長度較硫化機長度略長，寬應較膠帶寬度略寬。

（3）將硫化機底座、下熱板放在工作臺上。將待接的帶頭放在下熱板上。以上準備完畢即可作業(yè)。

4.2.膠帶準備

（1）標記中心線：找出三個相互距離大于1000mm的中心點，用鮮明、牢固的顏色畫出膠帶的縱向中心線

（2）畫出接頭線：按照已確定的接頭型式和尺寸，在兩個帶頭上畫出接頭線。

4.3.剝膠及截鋼絲繩

（1）沿上圖所示虛線用刀橫向割開膠帶上下兩面覆蓋膠，深度近達鋼絲繩，但不可觸及或損傷鋼絲繩。將鋼絲繩端頭膠割開，用電工鉗夾緊鋼絲繩繩頭，沿水平方向朝側旁施力平按（不允許向上、下撕拉、不允許將鋼絲繩拉彎），最后將鋼絲繩從膠中抽出。從膠帶邊部第一根鋼絲繩做起，用同樣方法依次抽出全部鋼絲繩。

（2）將鋼絲繩按需要長度截好。

（3）刮掉鋼絲繩表面的附膠。

（4）接合處切成約60°斜坡。

4.4.打毛

（1）用鋼絲刷將接觸部位的硫化膠打毛。

（2）將鋼絲繩上附著的硫化膠盡量打掉。打磨完畢后，將帶頭和鋼絲繩上的膠沫清除干凈。

4.5.膠接成型

（1）將兩帶頭鋼絲繩平鋪在硫化機下熱板上，并且要對放、對放位置須使最長的鋼絲繩端頭與另一帶頭鋼絲繩根部接開間距100mm。

（2）重新校驗兩帶頭中心線，調(diào)整成一條直線為止。

（3）將兩帶頭用卡子固定定位。

（4）將兩帶頭的鋼絲繩翻向兩邊，放在預先鋪有干凈的布上畫。

（5）用干凈毛刷蘸120#汽油，將鋼絲繩逐根擦拭干凈，汽油揮發(fā)后也均勻涂上2-3遍膠漿、使鋼絲繩表面均被膠漿覆蓋。每次在涂下遍膠漿時，當遍膠漿必須已晾干。

（6）將覆蓋膠的一頭裁成與帶體斜坡面相一致的斜接頭（另一頭暫不裁）并對正帶體的覆蓋膠斜坡面上緣，鋪平且放置在硫化機的下熱板上。在這之前，下熱板預先鋪平面積足夠的干凈白布或玻璃紙。

用毛刷蘸120#汽油，將已放妥的覆蓋膠擦干凈，曬干后，壓牢。貼合時芯膠端頭也須照斜坡裁齊、芯膠端頭與覆蓋膠端頭應平行錯開一定距離。

用毛刷蘸汽油清擦干凈芯膠表面，晾干。

（7）將帶頭及鋼絲繩放在芯膠上。

（8）借助另一帶頭將芯膠、覆蓋膠定長截斷、隨后也將這一帶頭及鋼絲繩鋪在芯膠表面上。

（9）再找校一次中心線、調(diào)整或無錯時將兩帶頭的中間一根或兩根鋼絲繩定位。

（10）從帶頭中間向兩側逐根拉緊、拉直、擺放、排列均勻所有鋼絲繩，并保持各繩不得變形、彎曲、拱起等。

（11）再在已鋪放達到要求的全部鋼絲繩上涂膠漿一至兩遍、晾干。

（12）各膠接型式的接頭結構圖共分四種，在“膠接型式，膠接原理及其選擇”一節(jié)已畫出，可供選擇。

（13）用芯膠片作邊膠條、貼在外側鋼絲繩外邊、將兩邊補至與原帶體帶邊對齊。

（14）仿照以上要求和作法，將上芯膠片鋪貼在鋼絲繩上。再將上覆蓋膠片貼合再芯膠片上。

（15）在膠帶兩側放出邊線，將帶接頭部寬出原帶體的膠料割去。

（16）在上覆蓋膠與硫化機熱板間鋪放平整足夠面積的白布或玻璃紙。

4.6.硫化工藝

（1）先把硫化機4個角上的螺栓擰緊，且松緊一致。

（2）在成型完畢的帶頭兩旁（指帶頭縱向）的原帶體表面上，各鋪墊三組四層紗布，其寬度要適當。放在頂緊墊鐵的位置上。？？？平板硫化機對帶頭的定長，是在縱向兩端皆應長出接頭長度Ls值100mm為宜。

（3）蓋上上熱板，安放千斤頂。安放上橫梁，開始加壓。由兩人同時操作，并由一側開始按順序逐漸加壓，然后，反向順序加壓，使達額定壓力。（硫化機沒有水壓板時，則用泵加壓）。

（4）接通電路：

A、當熱板溫度升至135時排氣一次，繼續(xù)加溫。

B、當熱板溫度至140時，再排氣一次，此時必須把硫化機中的冷凝水排完。

C、當熱板溫度至145時，開始計算硫化時間。

4.7.膠接成環(huán)形帶

（1）將最后一個接頭膠接完畢時，線形膠帶便成為配套在輸送機上的環(huán)形帶了，在膠接這個接頭時，應將兩個帶頭分別用夾板夾緊，用張緊裝置對膠帶加張力，直至膠帶符合張緊裝置的要求，方能進行最后一個頭的膠接作業(yè)。

（2）重疊兩個帶頭準備膠接時，張緊滾筒應處于行程的上部極限位置。

（3）膠接的環(huán)形帶長度，要留有補貼余量，這個補貼量以環(huán)形膠帶受張力后，張緊滾筒基本上位于最上限位置為最佳。

四.結束語：

綜合上述，此項技術的實施應用不僅節(jié)約了經(jīng)濟成本，還大大提高了工作質(zhì)量，它凝聚了珙泉礦技術管理人員們的心血與智慧，是無數(shù)次實踐中得出的經(jīng)驗總和，展現(xiàn)了大家以科技創(chuàng)新為目標，以保安全，降成本為核心的新型煤礦價值觀。

作者簡介：

篇7

【關鍵詞】中期妊娠流產(chǎn) 米非司酮 依沙吖啶

以往對于妊娠12周-16周流產(chǎn)一般都采取經(jīng)陰插管注藥加鉗刮術，因操作繁瑣，難度大，易逆行感染，患者痛苦大，副作用多，現(xiàn)在我們已經(jīng)放棄此法；對于16周-28周者多采用直接經(jīng)腹依沙吖啶羊膜腔內(nèi)注入術，因其容易發(fā)生蛻膜殘留，我們對此做了改進。自2000年12月到2009年9月我們應用米非司酮配伍依沙吖啶聯(lián)合應用于12周-28周妊娠流產(chǎn)，并與同期單用依沙吖啶流產(chǎn)及米非司酮配伍米索前列醇經(jīng)陰道給藥和口服法進行了對比研究?，F(xiàn)報告如下：

1 資料與方法

1.1 研究對象 從2000年12月到2009年9月12-16周妊娠住院接受流產(chǎn)的健康婦女260例 其中初產(chǎn)婦148例、經(jīng)產(chǎn)婦112例．肝腎功能均正常，排除嚴重內(nèi)科疾患，均經(jīng)彩超檢查核實孕周及胎盤定位與宮頸從解剖學內(nèi)口到外口的長度。

1.2 研究方法 260例孕婦隨機分成兩組．研究組100例．對照組160例。對照組又隨機分成兩組，即A組(60例)與B組(100例)。因B組系用同一藥物兩種不同給藥途徑．故又將B組分成B1組(60例)、 B2組(40例)。

1.2.1 藥物應用方法 研究組米非司酮150mg，共1次，口服藥物的同時即給予經(jīng)腹羊膜腔內(nèi)注入依沙吖啶100mg；對照組：A組為經(jīng)腹羊膜腔內(nèi)注入依沙吖啶l00mg。B1組為米非司酮25mg tid，共6次，總量是150mg。服完于次晨經(jīng)陰道后穹窿放置米索前列醇600ug。對無效或?qū)m縮弱者間隔6h再放200—400ug?？偭坎怀^1500ug。B2組：米非司酮用法同B1組。服完次晨空腹口服米索前列醇600ug。對無宮縮或?qū)m縮逐漸減弱者。間隔6h加服600ug，總量亦不超過1500ug，再觀察48h無宮縮者為失敗。研究組與對照A組從經(jīng)腹注入依沙吖啶開始觀察并記錄宮縮開始時間及胎兒、胎盤排出時間。B組從口服米索前列醇或于陰道首次放米索前列醇開始觀察并記錄宮縮開始時間及胎兒、胎盤排出時間。

1.2.2 疼痛分級 根據(jù)孕婦臨床表現(xiàn)和主訴分四級 。I級：無痛或稍感不適，活動自如，無出汗；Ⅱ級：輕度疼痛，可忍受，合作，微出汗；Ⅲ級：中度疼痛，難以忍受，輾轉(zhuǎn)不安，合作欠佳，出汗伴肢冷；Ⅳ級：重度疼痛，不能忍受，出汗伴肢冷。

1.2.3 觀察指標 宮縮開始時間．胎兒流產(chǎn)時間，胎盤排出時間，流產(chǎn)程，出血量，疼痛分級，副作用，流產(chǎn)效果及宮頸長度對產(chǎn)程、流產(chǎn)痛的影響。

l.2.4 流產(chǎn)效果評定標準 胎兒及胎盤完整娩出者為完全流產(chǎn)；胎兒娩出后胎盤滯留者為不全流產(chǎn)。兩者合計為成功率，末次用藥48h后妊娠仍繼續(xù)者為失敗。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包，組間比較采用t檢驗和X2檢驗，P

2 結果

2.1 用藥次數(shù)及劑量研究組米非司酮150mg，共1次，總量為150mg。口服藥物的同時即給予經(jīng)腹羊膜腔內(nèi)注入依沙吖啶100mg，均1次成功。對照A組依沙吖啶100mg羊膜腔內(nèi)注入成功58例，用藥48h后無效2例，改用米非司酮50mg口服，12h后配伍米索前列醇經(jīng)陰道放藥1次成功。對照Bl組陰道放藥600ug，1次成功40例(66.67％)、2次成功16例(26.67％)、3次成功2例(3.33％)，失敗2例改用依沙吖啶羊膜腔內(nèi)注入。對照B2組口服米索前列醇600ug，1次成功32例(80％)，2次成功2例(5％)，服藥48h無效應6例(15％)，改用依沙吖啶100mg羊膜腔內(nèi)注入，均在36h之內(nèi)流產(chǎn)。

2.2 研究組與對照A組流產(chǎn)成功時間比較見表1。

兩組平均宮縮開始時間差異無顯著性(P>0.05)。研究組平均胎兒流產(chǎn)時間明顯短于對照A組，差異有高度顯著性(P

2.3 各組流產(chǎn)效果的比較見表2。

研究組100例均獲成功，胎盤、胎膜完整排出84例，完全流產(chǎn)率為84％ ，不全流產(chǎn)16例，其中胎盤粘連或小葉殘留8例行鉗刮術；胎膜不全8例，其中4例因胎膜殘留1/3—1/2行鉗刮術，4例殘留1／4-1／3未作處理，24h后自行排出。對照A組成功58例，胎盤胎膜完整排出36例，完全流產(chǎn)率為62％；不全流產(chǎn)22例，其中胎盤殘留或粘連6例、胎膜不全16例，均行清宮術。對照B1組60例放藥1次成功40例、2次成功16例、3次成功2例，其中胎盤胎膜完整排出50例，完全流產(chǎn)率為80％；不全流產(chǎn)10例，其中胎盤粘連不下5例，胎盤部分粘連或胎膜殘留3例、胎盤早剝2例，均行清宮術。對照組B2組成功34例、失敗6例；胎盤胎膜完整排出32例，完全流產(chǎn)率為80％ ，其中有2例胎盤胎膜殘留，行清宮術。

2.4 宮頸長度與流產(chǎn)程、流產(chǎn)痛比較 對照A組產(chǎn)痛程度明顯高于研究組與對照B組。4組孕婦的宮頸長度2．5 -3．5cm 90例，平均總流產(chǎn)程7h；3．6-4．5cm 108例，平均總流產(chǎn)程10h；4．6—5．5cm 52例，平均總流產(chǎn)程12h。見表3、表4

轉(zhuǎn)貼于

由表3可見。研究組及對照B組產(chǎn)痛明顯低于對照A組，研究組與對照A組，產(chǎn)痛差異有高度顯著性(P0.05)。通過宮頸長度與流產(chǎn)程比較，發(fā)現(xiàn)宮頸長度與流產(chǎn)程時間關系極為密切，宮頸越長，流產(chǎn)程時間越長，差異有高度顯著性(P

2.5 副作用及處理 對照B組副作用的發(fā)生率為32％，主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、乏力、腹瀉。皮疹伴瘙癢4例、肢體麻木2例、寒戰(zhàn)6例，除寒戰(zhàn)患者給予地塞米松5mg肌注外，余未作特殊處理，觀察2h后逐漸好轉(zhuǎn)。用依沙吖啶經(jīng)腹羊膜腔內(nèi)注入及聯(lián)合流產(chǎn)法者未發(fā)生不良反應。單用依沙吖啶者(對照A組)副作用的發(fā)生率為16％，關節(jié)腫痛2例、發(fā)熱4例、強直性宮縮伴嘔吐4例，給予杜冷丁100mg肌肉注射，癥狀緩解。

3 討論

3.1 應用米非司酮配伍米索前列醇行中期妊娠流產(chǎn)的缺點 主要是副作用的發(fā)生率超過了其他流產(chǎn)法?？诜姿髑傲写剂鳟a(chǎn)成功率低，只占85％，經(jīng)陰道放米索前列醇有21％的孕婦需放第2次或第3次，反復陰道操作可增加逆行感染的機會。

3.2 單用依沙吖啶流產(chǎn)的優(yōu)、缺點 此法成功率較高，是臨床上中期妊娠流產(chǎn)的主要方法，缺點是流產(chǎn)痛時間長．重度腹痛發(fā)生率高達60％。本組有4例出現(xiàn)強直性宮縮．需使用強鎮(zhèn)痛劑緩解。胎盤、胎膜的殘留率為36.67％。

3.3 米非司酮與依沙吖啶聯(lián)合流產(chǎn)法的優(yōu)點 本法流產(chǎn)痛時間短，重度流產(chǎn)痛的發(fā)生率僅為10％，明顯低于單用依沙吖啶的60％，完全流產(chǎn)率為84％，高于單用依沙吖啶者的60％。清宮率為16％，低于單用依沙吖啶者的36．67％，流產(chǎn)的成功率為100％，高于對照各組。聯(lián)合用米非司酮與米索前列醇的副作用發(fā)生率為32％。單用依沙吖啶的副作用發(fā)生率為16％，聯(lián)用米非司酮與依沙吖啶則未發(fā)生明顯的副作用。聯(lián)合流產(chǎn)法能夠發(fā)揮優(yōu)勢流產(chǎn)作用主要取決兩種藥物的協(xié)同作用，米非司酮在分子水平結合孕酮受體，阻斷孕酮發(fā)揮作用，使子宮肌對催產(chǎn)素的敏感性增加。而宮頸情況是流產(chǎn)成功的主要決定因素。米非司酮使宮頸膠原纖維降解，宮頸變軟，易于擴張，成為加速分娩的因素之一[1]。依沙吖啶主要作用于胎盤，蓄積在蛻膜細胞的藥物通過酶作用使細胞分解、壞死，胎膜剝離致胎兒死亡，依沙吖啶還能使蛻膜細胞中前列腺素合成及釋放增加，增強子宮肌的收縮，促使胎兒排出。兩種藥物的聯(lián)合作用避免了單用依沙吖啶流產(chǎn)發(fā)動宮縮與宮頸成熟的不同步致宮縮過強，流產(chǎn)程長．清宮率高等缺點，還能克服聯(lián)合用米非司酮與米索前列醇流產(chǎn)的各種副作用。我們在研究中還發(fā)現(xiàn)宮頸的長度與流產(chǎn)痛分級、流產(chǎn)程時間有關，用依沙吖啶流產(chǎn)時宮頸長度與流產(chǎn)痛、流產(chǎn)程的正相關關系更為突出。

3.4 由于中期妊娠宮頸不成熟，擴張條件差且宮縮并非自發(fā)，極易出現(xiàn)不協(xié)調(diào)性宮縮和強直宮縮，子宮下段擴張能力弱，向?qū)m頸方向傳導宮壓能力亦下降，更易出現(xiàn)產(chǎn)程延長、宮縮痛劇烈、胎盤殘留及軟產(chǎn)道損傷， 所以在產(chǎn)程發(fā)動前對宮頸做一定的預處理顯得尤為重要。米非司酮不僅可對抗孕酮， 刺激子宮平滑肌興奮，使產(chǎn)程發(fā)動早且能加強宮頸膠原纖維分解，松弛和軟化宮頸[2]。

綜上所述，我們認為米非司酮與依沙吖啶聯(lián)合用于12周-28周妊娠流產(chǎn)操作簡便，效果確切，副作用小，值得臨床推廣。

參 考 文 獻

篇8

【摘要】 目的: 研究可溶性IL15Rα與脾細胞共同孵育后對小鼠黑色素瘤細胞生長的免疫調(diào)節(jié)作用。方法: 制備小鼠脾細胞， 分成兩組， 一組加入可溶性重組IL15Rα (sIL15Rα)， 另外一組不加， 培養(yǎng)48 h后， 分離兩組的貼壁細胞和非貼壁細胞， 流式細胞術(FCM)分析CD4、 CD8、 B220、 CD11c、 CD1a的表達; 并把上述4組細胞（即脾細胞非貼壁細胞組， 脾細胞貼壁細胞組， 脾細胞+sIL15Rα非貼壁細胞組， 脾細胞+sIL15Rα貼壁細胞組）和黑色素瘤細胞一起分別注射到小鼠腹部皮下， 觀察小鼠腹部皮下腫瘤生長抑制情況， 對照組只注射小鼠黑色素瘤細胞。結果: 脾細胞+sIL15Rα貼壁細胞組小鼠黑色素瘤的生長速度顯著小于其他各組; FCM分析， 此組細胞主要成分可能為樹突狀細胞（DC）。 結論: sIL15Rα與脾細胞共同孵育后， 可能通過DC的作用， 對黑色素瘤的生長進行免疫調(diào)節(jié)， 從而抑制瘤細胞的生長。

【關鍵詞】 sIL15Rα; IL15; 樹突細胞; 黑色素瘤

IL15 屬于IL2家族， 它與IL2共用β和γ受體進行信號傳導， 但同時又擁有自己獨特的α受體， 是與IL2功能有所不同的一種T 細胞生長因子［1］。在生理條件下， IL15與膜上的IL15Rα結合， 但一般認為， 只有在出現(xiàn)IL2/15Rβ和γc時， 才能進行信號傳導［2］。IL15Rα分布廣泛， 在很多組織和細胞都能被檢測出來， 例如腦、 腸、 肝、 外周血單核細胞（PBMC）等。它在體內(nèi)以兩種形式存在， 一種是膜型， 一種是可溶型， 可通過自分泌、 內(nèi)分泌、 旁分泌或近分泌形式作用于靶器官和組織。其中， 可溶型的IL15Rα（sIL15Rα）相對分子質(zhì)量（Mr）為42 000， 在生理條件下， 很低的濃度（pmol/L）就能與IL15有很高的親和力?，F(xiàn)在認為， 這種sIL15Rα是錨在膜上的IL15Rα通過金屬蛋白酶水解后脫落的， 它可以阻斷IL15與細胞膜表面受體的連接， 抑制IL15的作用。因為sIL15Rα對IL15有高親和力， 有假說認為， sIL15Rα可能扮演一種類似分子清洗物的作用來去除多余的IL15; 當然， 它們之間的這種高親和力的結合也許還起到其他作用， 目前仍不清楚［3， 4］。本實驗中， 我們把sIL15Rα與脾臟細胞共同孵育后， 進一步研究其對小鼠黑色素瘤生長的影響。1 材料和方法

1.1 材料 6～8周齡的雄性C57BL/6小鼠， 質(zhì)量22～25 g購自揚州大學實驗動物中心。飼養(yǎng)溫度為25℃左右， 光照周期為光照12 h， 黑暗12 h（12L: 12D）， 自由采食、 飲水。小鼠黑色素瘤細胞（B16）為本實驗室長期擁有， 培養(yǎng)于RPMI1640培養(yǎng)液中， 含100 mL/L新生小牛血清， 10萬U/L的青霉素/鏈霉素(INVITROGEN)。CD4、 CD8、 B220、 CD1a、 CD11c單克隆抗體（mAb）均購自美國BD公司。小鼠IL15、 IL2、 IFNγ ELISA試劑盒購自R&D 公司?？扇苄灾亟MIL15Rα/Fc嵌和體(sIL15Rα) 購自R&D 公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠脾細胞的制備 拉頸椎處死小鼠， 無菌條件下取出脾臟， 放入盛有 RPMI1640完全培養(yǎng)液的平皿中， 研磨， 過濾， 獲得粗制的脾細胞懸液; 4℃低速離心1 000 r/min， 5～10 min， 棄上清， 重懸細胞， 加入預冷TrisNH4Cl紅細胞裂解液1 mL， 輕輕吹打混勻， 室溫靜置1～2 min， 溶解紅細胞; 加5 mL RPMI1640完全培養(yǎng)液終止反應， Hank’s液洗2次， 最后將沉淀細胞重懸于2 mL RPMI1640完全培養(yǎng)液中; 細胞計數(shù)及測定存活率。

1.2.2 FCM檢測 把上述制備的小鼠脾細胞， 分成兩組， 一組加入可溶性重組IL15Rα(sIL15Rα)， 另外一組不加， 培養(yǎng)48 h后， 分離兩組的貼壁細胞和非貼壁細胞， 用FCM分析其組分。即把上述4組細胞: 脾細胞非貼壁細胞組（SC NA）， 脾細胞貼壁細胞組（SC AD）， 脾細胞加入IL15Rα非貼壁細胞組（SC+sIL15Rα NA）， 脾細胞加入IL15Rα貼壁細胞組（SC+sIL15Rα AD）， 分別用PBS洗滌2次， 將細胞重懸于PBS中， 加入抗CD4PE、 CD8PE、 CD11cPE、 CD1a、 B220PE。充分混勻， 置4℃黑暗中孵育30 min， PBS洗滌2次后， 用FCM檢測。

1.2.3 動物實驗 共60只小鼠， 分5組。第1組為對照組， 注射小鼠黑色素瘤細胞， 其余4組分別注射上述培養(yǎng)48 h后分離的細胞（即SC NA、 SC AD、 SC+sIL15Rα NA、 SC+sIL15Rα AD）和小鼠黑色素瘤細胞的混懸液。具體如下: 用750 mL/L乙醇消毒小鼠腹部皮膚， 用注射器吸取上述細胞懸液0.2 mL（5×105）， 接種于小鼠腹部皮下。接種1周后， 用游標卡尺測量腫瘤結節(jié)的最長徑a和最短徑b， 根據(jù)公式計算腫瘤體積 (V)［5］， V=a×b2/2， 求其平均值繪制腫瘤生長曲線。并根據(jù)不同時間段繪制無瘤小鼠的百分比曲線， 以評價各組小鼠腫瘤生長情況。

1.2.5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS10.0軟件分析數(shù)據(jù)， 兩兩比較采用Student’s t檢驗， 以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。流式細胞儀采用CellQuest軟件獲取， WinMDI2.8分析。

2 結果

2.1 細胞表型分析 SC NA與SC+sIL15RαNA組細胞表型分析: CD11c、 CD1a表達陰性， CD4、 CD8、 B220表達陽性， 提示其主要成分為T、 B細胞。SC AD組與SC+sIL15RαAD組， CD11c、 CD1a表達陽性， CD4、 CD8、 B220表達陰性， 提示其主要組分可能為樹突狀細胞（圖1）。

2.2 小鼠黑色素瘤的生長抑制情況 對照組腫瘤生長速度最快， 其次為SC NA組 和SC+sIL15RαNA組， 再其次為SC AD組， SC+sIL15RαAD組腫瘤生長速度最慢。SC+ sIL15RαAD組與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05， 圖2）。

2.3 不同時間段無瘤小鼠的百分比 對照組從第20天開始小鼠均出現(xiàn)腫瘤， 無瘤百分比為0; SC NA（圖3A）組在第27天有6只小鼠出現(xiàn)腫瘤， 第39天時共有9只小鼠出現(xiàn)腫瘤; SC+sIL15Rα NA組（圖3B）在第20天3只小鼠出現(xiàn)腫瘤， 第27天時共有6只小鼠出現(xiàn)腫瘤; SC AD組（圖3C）在第27天有3只小鼠開始出現(xiàn)腫瘤; SC+sIL15RαAD組（圖3D）直到第35天才開始有3只小鼠出現(xiàn)腫瘤。各組無瘤小鼠的百分比情況基本跟腫瘤的生長抑制情況一致。其中SC+sIL15RαAD組無瘤小鼠的百分比最高。

3 討論

IL15是一個對原發(fā)性和過繼性免疫都非常重要的多效性細胞因子。IL15Rα作為IL15的獨特型受體， 對IL15而言是非常重要的。在本實驗中使用的sIL15Rα是與IL15具有高親和力的的重組IL15Rα/Fc的嵌合體， 其Mr為42 600， 與IL15結合后， 能競爭性抑制IL15與膜上IL15Rα受體的連接［6］， 已經(jīng)成為研究可溶型IL15Rα的工具。

實驗中顯示， 當把對IL15有高親和性的可溶型的IL15Rα和脾臟細胞共同培養(yǎng)后與小鼠黑色素瘤細胞一起種植到小鼠皮下， 其中SC+sIL15RαAD組出現(xiàn)腫瘤的時間最晚， 腫瘤的生長速度最慢， 分析其組分發(fā)現(xiàn)， 其主要成分可能為DC， 同樣SC AD組細胞表型與其相同。DC是體內(nèi)非常重要的一種高度特異性抗原遞呈細胞， 在免疫系統(tǒng)中起著非常重要的作用。為什么兩者的細胞表型相同， 但對小鼠黑色素瘤的抑制情況卻不同呢？我們考慮主要是sIL15Rα的作用， 在培養(yǎng)48 h后， sIL15Rα可以與脾細胞中各種細胞分泌的IL15相結合， 從而能競爭性抑制IL15與膜上IL15Rα受體的連接［6］， 使得DC膜上的IL15Rα可能得以保存。當把這種細胞和黑色素瘤細胞一起注射到小鼠體內(nèi)時， DC細胞表面的IL15Rα能夠遞呈IL15給鄰近的細胞， 例如NK細胞， CD8+細胞， 啟動它們分泌細胞因子和細胞毒效應， 來殺傷腫瘤細胞［7］。而SCAD組， DC膜上的IL15Rα被IL15結合， 不能起到遞呈作用， 所以效果不顯著。而在其他兩組， sIL15Rα NA和SC NA組， 由于缺乏DC的作用， 不能啟動小鼠體內(nèi)的免疫監(jiān)視， 導致腫瘤生長速度較快。各組無瘤小鼠的百分比跟上述結果一致， 生長速度最快的對照組， 無瘤小鼠的百分比最低， 生長速度最慢的SC+sIL15RαAD組， 無瘤小鼠的百分比最高。

本實驗中我們進一步揭示了可溶型IL15Rα在IL15作用機制中的重要性， 它與脾細胞共同孵育后， 可能通過DC的作用發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用， 從而抑制小鼠黑色素瘤的生長?？扇苄偷腎L15Rα將來也許能成為一個有前景的藥物， 特別是對腫瘤的免疫治療方面， 可能起到更重要的作用。

參考文獻

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［2］Stoklasek TA， Schluns KS， Lefrancois L. Combined IL15/IL15Ralpha immunotherapy maximizes IL15 activity in vivo［J］. J Immunol， 2006， 177(9): 6072-6080.

［3］ GironMichel J， Giuliani M， Fogli M， et al. Membranebound and soluble IL15/IL15R complexes display differential signaling and functions on human hematopoietic progenitors［J］. Blood， 2005， 106: 2302-2310.

［4］ Rubinstein MP， Kovar M， Purton JF， et al. Converting IL15 to a superagonist by binding to soluble IL15R［J］. PNAS， 2006， 103: 9166-9171.

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篇9

在教學古詩的時候，首先給學生看一些圖片，引導學生觀察書上面的插圖，然后啟發(fā)學生回憶在戶外看見的柳樹樣子，并且讓學生說出自己的對所想到的柳樹形象的感受。之后，老師在慢慢的將學生帶入書中，引導學生結合書中詩人所寫的《詠柳》進行思考：詩人是如何在詩中描述自己當時所見的情景，他在詩中向我們展示了一幅怎么樣的畫面呢？學生們經(jīng)過幾遍之后的朗讀，對其中的意境也有所體會，當然在自己的腦海中也形成了一幅完美的畫面。然后老師進行講解：“碧玉妝成一樹高，萬條垂下綠絲絳”從這一句詩看得出詩人是在遠處看到柳樹之后因為感嘆而發(fā)出的。這是讓學生抬起頭望著窗外的柳樹，閉上自己的眼睛進行想象：窗外屹立的那一棵棵婀娜多姿的垂柳是多么的像一位位亭亭玉立的少女，那細長的枝條就像是少女的頭發(fā)隨著清風舞動起來。然后再重點品位詩句中的“碧玉”、“綠”、“一樹高”、“思絳”等這些詞語，體會出詩人心目中的柳樹的形態(tài)和顏色的美，使柳樹充滿活力生機，變得靈動起來?！安恢毴~誰裁出，二月春風似剪刀”，這一句的前半句體現(xiàn)出詩人在面對畫面中“細葉”的時候心中油然而生的一句贊嘆，而后半句形象的比喻，將無形之中的“春風”刻畫的栩栩如生。把“二月春風”擬成“剪刀”，使學生將柳樹的美與春天的緊密相連，從中領悟出：詩句看似寫柳樹，其實隱藏在贊美春天。對與這篇古詩的講解，最好是先當學生走進柳樹、了解柳樹，并且仔細的觀察柳樹、柳葉，記住它們的樣子，然后再學習這首詩，通過現(xiàn)實與詩中的畫面進行對比，學生更能體會作者在用“春風”和“剪刀”的妙處。最后，再讓學生熟讀并背誦這首《詠柳》，在熟讀的過程中聯(lián)系自己看見的柳樹在大腦中形成自己的畫面，與每句詩進行對比，抓住事物的特點，注意柳樹的形態(tài)、顏色、姿態(tài)等進行描畫。

2拓展學生的思維，了解詩人的表達方式

自古以來，詩人對春天的描寫都是以“楊柳”、“春風”為題材進行描寫。《詠柳》中抒寫的是柳樹，運用比喻、擬人等的修飾手法，無形之中贊美了春天。例如詩中將高高的柳樹用碧玉女進行修飾，“碧玉”一詞形象的形容了柳樹的晶瑩、翠綠，深刻的突出了柳樹的顏色的美。還有第三句中的“不知”一詞使用了發(fā)問的口氣，詩人明明知道是春風裁剪的細葉，但是運用的發(fā)問語氣將春風描寫的更加形象化，從而增加了《詠柳》的情趣。若想拓展學生的思維可在上課之前為學生舉例一些有關春天其他詩人的古詩作品，例如：王維的“渭城朝雨浥輕塵，客舍青青柳色新”這一句中體現(xiàn)出了沐雨之后的柳樹顯得格外的清新、青翠、淡綠；戴叔倫，唐代的詩人寫的“垂柳萬條絲，春來織別離”一句中將纖細的柳條比如“絲”；清代時期的高鼎寫的“草長鶯飛二月天，拂堤楊柳醉春煙”，從中描繪了一幅鶯飛草長的季節(jié)中醉柳拂堤的畫面。這些詩人所描繪的畫中都主要是抓住了柳條的纖細長的特點，使讀者誦讀之后難以忘記。學生在學習完這些古詩之后將其的共同點進行總結：古詩中所蘊含的特點是詩人對生活、大自然的熱愛，將自己的真實感情融合于實物中，加之深厚的生活體驗，豐富了其想象，加強了觀察的細致。這樣還能引導學生寫好作文。

3結合實物，加強練習

《詠柳》詩句上描寫的是柳樹，實質(zhì)是贊美春天，贊美大自然。古詩中既然能用文字將柳葉精致的裁剪出來，那么鮮艷嫩綠的花草也能修飾出來，自然繁花似錦的春天也能裁剪出。請問同學們，在春天你們還與歐留意什么事物嗎？請根據(jù)自己的喜愛選擇一種景物進行描寫，結合詩中的寫法，使學生在運用中去感受理解，從而鍛煉學生的想象力、觀察力，并鼓勵學生將真情融入到表達中，在寫作中培養(yǎng)自己的審美情趣。

篇10

走進碧津湖，眼前變是一棵棵綠油油的柳樹。一陣秋風吹過那柳樹像一個愛美的小姑娘在梳理他那長長的辮子！又像一個和藹可親的阿姨在親吻水里的條條小魚！這不禁讓我想起了詠柳這一首詩：

碧玉妝成一樹高，

萬條垂下綠絲絳。

不知細葉誰裁出，

二月春風似剪刀。