導(dǎo)語：如何才能寫好一篇大學(xué)畢業(yè)感想，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

1、簡單感悟。對于自己這些年的學(xué)習(xí)生活進(jìn)行一個很真摯的總結(jié)，從而更多的把自己的想法與感受融入其中。

2、學(xué)習(xí)回顧。對于自己的學(xué)習(xí)生活進(jìn)行一個很好的回顧，每一年可以分為一個段落，把重點(diǎn)部分呈現(xiàn)出來，讓人感動的一個個故事。

3、精彩片刻。學(xué)習(xí)生活肯定有很多的事情發(fā)生，把大家都有共同感受的事情重點(diǎn)寫一下，這會很吸引人，也會引發(fā)共鳴。

4、總結(jié)。在最后的一段中進(jìn)行總體的描述，回憶過去的同時再展望一下未來吧，讓未來的美好去引發(fā)眾人的想象。

（來源：文章屋網(wǎng) ）

篇2

【摘要】

【目的】 探討原癌基因hccr mrna、fbi?1 mrna在肝癌相關(guān)患者血液中的表達(dá)及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系?！痉椒ā坎捎脽晒舛烤酆厦告湻磻?yīng)(pcr)技術(shù),檢測41例肝細(xì)胞癌、3例肝硬化患者術(shù)前血液標(biāo)本及10例健康者血液標(biāo)本中hccr mrna、fbi?1 mrna 含量,分析其與臨床指標(biāo)的關(guān)系?！窘Y(jié)果】 肝細(xì)胞癌患者血液中hccr mrna、fbi?1 mrna 水平高于肝硬化患者,健康者血液中未發(fā)現(xiàn)兩基因的mrna 表達(dá)。同時發(fā)現(xiàn),血液中fbi?1 mrna 與甲胎蛋白(afp)水平顯著相關(guān)(p＜0?01),fbi?1 mrna 與hccr mrna 的表達(dá)水平顯著相關(guān)(p＜0?01)?！窘Y(jié)論】肝細(xì)胞癌、肝硬化患者血液中hccr mrna、fbi?1 mrna表達(dá)異常增高,fbi?1 mrna 表達(dá)與afp水平顯著相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 肝腫瘤 基因表達(dá) 相關(guān)分析

abstract:objectiveto investigate mrna expression of proto?oncogene fbi?1 and hccr in the blood of hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis, and to explore their relation with clinic parameters. methodsquantity real?time fluorescence polymerase chain reaction (pcr) was used for the detection of fbi?1 and hccr mrna expression in the blood of 41 hepatocellular carcinoma patients before surgery, 3 liver cirrhosis patients before surgery, and 10 healthy volunteers. the relationship of fbi?1 and hccr mrna expression with clinic parameters was analyzed by fisher?s exact test or spearman?s analysis of correlation. resultsthe level of fbi?1 and hccr mrna expression was higher in the blood of hepatocellular carcinoma patients than that in hepatic cirrhosis patients. fbi?1 and hccr mrna expression was negative in the blood of the healthy volunteers. fbi?1 mrna expression was positively correlated with alpha fetoprotein (afp) level (p<0?01), and also positively correlated with hccr mrna expression (p<0?01). conclusionabnormal increase of fbi?1 and hccr mrna expression occurs in the blood of hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis patients. fbi?1 mrna expression is positively correlated with afp level．

key words: liver neoplasms；gene expression；correlation analysis

原癌基因fbi?1(factor that binds to inducer of short transcripts?1),其編碼的蛋白具有特殊結(jié)構(gòu),即其氮末端具有poz(poxvirus zinc finger)區(qū),碳末端具有由k型鋅指結(jié)構(gòu)組成的蛋白結(jié)合區(qū)。研究發(fā)現(xiàn)fbi?1可以通過其特殊蛋白結(jié)構(gòu)特異結(jié)合p14arf啟動子,以及抑制p53通路參與腫瘤的發(fā)生［1］。其蛋白在、肺、膀胱、前列腺、肝臟等腫瘤中有異常高表達(dá)［1-3］。原癌基因hccr(human cervical cancer oncogene)最先在人宮頸癌中分離。研究顯示,hccr是p53基因的負(fù)調(diào)控因子,能下調(diào)p21waf1基因啟動子活性,其蛋白在人乳腺、腎、淋巴、胃、結(jié)腸、卵巢等腫瘤中異常高表達(dá)［4-6］。本研究檢測了肝癌相關(guān)患者血液中hccr 及fbi?1基因mrna的表達(dá)情況及探討其與患者臨床指標(biāo)的聯(lián)系,現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1　標(biāo)本及來源

肝細(xì)胞癌(hcc)患者術(shù)前血液標(biāo)本41例,肝硬化(lc)患者術(shù)前血液標(biāo)本3例,均取自中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中山大學(xué)腫瘤防治中心。各患者的臨床指標(biāo)都收集于中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中山大學(xué)腫瘤防治中心檢驗(yàn)科的檢測記錄。3例正常肝組織來源于肝移植的健康供體肝。10例健康者血液標(biāo)本取自廣東省東莞市中心血站,來源于健康獻(xiàn)血者,年齡22～40歲,均排除肝腎疾病。

1.2　主要試劑與儀器

trizol(invitrogen 公司)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(fermentas公司)，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)所用試劑盒(達(dá)安基因診斷公司)，引物、探針(invitrogen 公司合成)，pmd18?t載體(takara公司)， uvmini?1240型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，7000型熒光定量pcr儀(美國abi公司)，9700型普通pcr儀(美國abi公司)。

1.3　標(biāo)本rna的提取和cdna第1鏈合成

臨床取來的血液標(biāo)本用乙二胺四乙酸(edta)抗凝管4℃保存,并在1 d內(nèi)提取rna,提取時1 ml血液用9 g/l nacl對倍稀釋后,緩慢加入已裝有2 ml淋巴細(xì)胞分離液的離心管中,2 500 r/min離心10 min,吸取中間單個核細(xì)胞層置于1?5 ml ep管中,5 000 r/min離心5 min,棄上清,在沉淀中加入trizol提取rna。臨床取來的其他組織標(biāo)本馬上-80℃冷凍,提取時加入液氮碾磨,之后用trizol提取rna。所有rna用紫外分光光度計(jì)測出光密度d260與d280比值,并使用普通pcr儀、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cdna第1鏈,其在普通pcr儀上的運(yùn)行條件為：37℃、60 min,95℃、5 min。cdna第1鏈-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4　熒光定量pcr檢測fbi?1 mrna、hccr mrna

1.4.1　引物探針設(shè)計(jì)

根據(jù)genebank上fbi?1、hccr?2和人β?actin mrna序列,應(yīng)用primer express 2?0(applied biosystems company)設(shè)計(jì)。引物探針序列見表1。表1熒光定量rt?pcr所用的引物和探針（略）

1.4.2　熒光定量pcr檢測fbi?1 mrna、hccr mrna方法建立

用forward primer、reverse primer擴(kuò)增cdna第1鏈,所得基因片段克隆入pmd18?t載體。提取重組質(zhì)粒經(jīng)測序證實(shí)后,通過光密度(d)值算出拷貝數(shù),并用三羥甲基氨基甲烷—鹽酸乙二胺四乙酸溶液(tris?hcl edta, te緩沖液)倍比稀釋后作為系列標(biāo)準(zhǔn)品。將fbi?1、hccr、β?actin系列標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本cdna同時在熒光定量pcr儀完成以下程序：93℃預(yù)變性2 min，93℃變性30 s,55℃退火45 s,共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后,將樣本與各基因標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對比分別得到fbi?1、hccr、β?actin的原始拷貝數(shù)后,用fbi?1原始拷貝數(shù)除以β?actin原始拷貝數(shù)即得fbi?1的相對表達(dá)量。用hccr原始拷貝數(shù)除以β?actin原始拷貝數(shù)即得hccr的相對表達(dá)量。

1.5　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)應(yīng)用spss 11?0統(tǒng)計(jì)軟件包處理,對于2個均為計(jì)數(shù)資料的采用卡方檢驗(yàn)fisher精確概率法進(jìn)行分析；對于1個為計(jì)數(shù)資料1個為計(jì)量資料的,將計(jì)量資料以其中位數(shù)分為2類后,使用卡方檢驗(yàn)fisher精確概率法進(jìn)行分析；對于2個均為計(jì)量資料的采用spearman 相關(guān)分析。

2　結(jié)果

2.1　熒光定量 pcr檢測fbi?1 mrna、hccr mrna方法建立

所有提取rna的 d260與d280均在1?8～2?0之間。各基因熒光定量pcr擴(kuò)增動力曲線圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1、圖2,從擴(kuò)增動力曲線圖可見不同模板濃度(101～108 copies/ml)擴(kuò)增曲線的上升起始點(diǎn)不同,但都呈形狀相似的“s”型曲線,分布均勻。從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖可見不同梯度模板濃度的對數(shù)值與閾值(ct)之間有非常好的線性相關(guān)關(guān)系,標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸相關(guān)系數(shù)r都大于0?990,表明標(biāo)準(zhǔn)品與ct值有著良好的線性關(guān)系。而陰性對照或陰性樣本的擴(kuò)增曲線不是“s”型,而且都處于基線以下。

2.2　血液中fbi?1、hccr基因的表達(dá)情況

應(yīng)用已建立的熒光定量法檢測fbi?1、hccr表達(dá),測得fbi?1、hccr在hcc患者、lc患者、以及健康者血液中的表達(dá)情況見表2。在大部分患者血液中兩者都有表達(dá),其中hcc患者不僅兩者的陽性率略高于lc患者,兩基因的表達(dá)水平也高于lc患者。而在10例健康者血液中均未檢測到hccr、fbi?1的表達(dá),即hccr mrna、fbi?1 mrna在正常人血液當(dāng)中的陽性率為0％。表2各組血液中fbi?1、hccr表達(dá)情況（略）

2.3　hcc和lc患者血液中fbi?1、hccr表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系

表3結(jié)果顯示,fbi?1 mrna、hccr mrna表達(dá)水平與大部分臨床指標(biāo)的關(guān)聯(lián)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但fbi?1 mrna與hccr mrna水平及fbi?1 mrna與afp水平的相關(guān)分析均有顯著性意義(p<0?01)。表3肝癌相關(guān)患者血液中fbi?1 mrna、hccr mrna表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系（略）

3　討論

3.1　肝癌相關(guān)患者血液中fbi?1 mrna的表達(dá)

本研究中設(shè)計(jì)了更為嚴(yán)格的健康者血液標(biāo)本的入選標(biāo)準(zhǔn),即來源于血站的獻(xiàn)血者，且確定排除了肝、腎疾病和肝炎病毒感染,從而盡可能的排除未知因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。結(jié)果顯示健康者血液中fbi?1 mrna均為陰性,而肝癌、肝硬化患者血液中大多有不同程度的fbi?1 mrna表達(dá),提示fbi?1 mrna具有作為一個肝癌相關(guān)標(biāo)記物的可能。本研究選用甲胎蛋白(alpha fetoprotein,afp)數(shù)值作為臨床指標(biāo)參與統(tǒng)計(jì),發(fā)現(xiàn)患者血液中fbi?1 mrna表達(dá)與afp水平顯著相關(guān),而afp數(shù)值的動態(tài)變化與患者肝癌病情發(fā)展有關(guān)［7］。本研究還發(fā)現(xiàn)肝癌患者血液中fbi?1 mrna水平高于肝硬化患者,結(jié)合已有研究結(jié)果［8］認(rèn)為：fbi?1 mrna在hcc遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移患者血液中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于其他人群,提示血液中fbi?1 mrna的水平高低可能與hcc患者的病情發(fā)展有關(guān)。

3.2　肝癌相關(guān)患者血液中hccr mrna的表達(dá)

hccr有2種不同的剪接方式,即hccr?1和hccr?2,研究發(fā)現(xiàn)hccr?2更多與腫瘤形成有關(guān)［4］。因此本研究根據(jù)hccr?2設(shè)計(jì)并建立血液中hccr mrna 檢測方法。研究發(fā)現(xiàn)hccr可增強(qiáng)p53蛋白穩(wěn)定性，但降低了p53蛋白調(diào)控功能,并可下調(diào)p21waf1基因啟動子活性［4］。而fbi?1是通過結(jié)合并抑制p14arf基因啟動子活性,參與影響p14?p53基因信號旁路［1］。說明hccr、fbi?1均參與了p14arf～p53～p21waf1通路。本研究發(fā)現(xiàn),hccr mrna的水平與fbi?1 mrna水平顯著相關(guān)，這說明hccr和fbi?1在致癌機(jī)理上可能有一定的相關(guān)性。而fbi?1參與作用的p14arf～p53位于該通路上游,所以可能是hccr基因參與了fbi?1基因所引起的后續(xù)反應(yīng)。

另基于本研究中發(fā)現(xiàn)fbi?1與hccr及afp均顯著相關(guān),但hccr與afp不相關(guān),提示fbi?1基因所引起的后續(xù)反應(yīng)中是否不僅包含hccr基因參與的一條路徑,可能還包含其他途徑,有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

3.3　兩基因聯(lián)合檢測肝癌的可能性

本研究發(fā)現(xiàn)血液標(biāo)本中兩基因均未檢出mrna的患者共有4例,都屬于hcc病例。因此在本實(shí)驗(yàn)中,兩基因聯(lián)合檢測hcc的陽性率(檢出率)為90%(37/41)。而因?yàn)榻】嫡哐褐芯礄z出兩基因的mrna,因此其特異性為100%。同樣,肝硬化患者的檢出率(3/3)和特異性均為100%。這說明fbi?1 mrna、hccr mrna聯(lián)合檢測有可能用于檢測肝癌,但其是否能作為一種新的檢測方法,則需要更多的hcc、lc患者及其他肝病或其他疾病患者以及健康者的血液標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證和研究,為中醫(yī)藥治療肝癌提供新靶點(diǎn)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］maeda t,hobbs r m,merghoub t,et al. role of the proto?oncogene pokemon in cellular transformation and arf repression［j］. nature,2005,433(7023)：278．

［2］zhao z h,wang s f,yu l,et al. overexpression of pokemon in non?small cell lung cancer and foreshowing tumor biological behavior as well as clinical results［j］?lung cancer,2008,62(1)：113．

［3］計(jì)勇,何曉順,馬毅,等. pokemon在肝細(xì)胞癌及癌旁、癌以遠(yuǎn)組織、肝硬化組織及正常肝組織中的表達(dá)［j］. 中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2007,24(2)：187．

［4］ko j,lee y h,hwang s y,et al. identification and differential expression of novel human cervical cancer oncogene hccr?2 in human cancers and its involvement in p53 stabilization［j］. oncogene,2003,22(30)：4679．

［5］chung y j,kim j w. novel oncogene hccr: its diagnostic and therapeutic implications for cancer［j］. histol histopathol,2005,20(3)：999．

［6］ha sa,shin s,kim h,et al. oncoprotein hccr?1 expression in breast cancer is well correlated with known breast cancer prognostic factors including the her2 level, p53 mutation, and er/pr expression［j］. bmc cancer,2009,9(1)：51．

［7］ liaw y f,tai d i,chen t j,et al. alpha?fetoprotein changes in the course of chronic hepatitis: relation to bridging hepatic necrosis and hepatocellular carcinoma［j］. liver,1986,6(3)：133．

［8］計(jì)勇,何曉順,馬毅,等. pokemon在肝細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、肝硬化和健康人群外周血中的表達(dá)及意義［j］. 中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2007,24(11)：1320．

【摘要】

【目的】 探討原癌基因hccr mrna、fbi?1 mrna在肝癌相關(guān)患者血液中的表達(dá)及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系。【方法】采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)技術(shù),檢測41例肝細(xì)胞癌、3例肝硬化患者術(shù)前血液標(biāo)本及10例健康者血液標(biāo)本中hccr mrna、fbi?1 mrna 含量,分析其與臨床指標(biāo)的關(guān)系。【結(jié)果】 肝細(xì)胞癌患者血液中hccr mrna、fbi?1 mrna 水平高于肝硬化患者,健康者血液中未發(fā)現(xiàn)兩基因的mrna 表達(dá)。同時發(fā)現(xiàn),血液中fbi?1 mrna 與甲胎蛋白(afp)水平顯著相關(guān)(p＜0?01),fbi?1 mrna 與hccr mrna 的表達(dá)水平顯著相關(guān)(p＜0?01)?！窘Y(jié)論】肝細(xì)胞癌、肝硬化患者血液中hccr mrna、fbi?1 mrna表達(dá)異常增高,fbi?1 mrna 表達(dá)與afp水平顯著相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 肝腫瘤 基因表達(dá) 相關(guān)分析

abstract:objectiveto investigate mrna expression of proto?oncogene fbi?1 and hccr in the blood of hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis, and to explore their relation with clinic parameters. methodsquantity real?time fluorescence polymerase chain reaction (pcr) was used for the detection of fbi?1 and hccr mrna expression in the blood of 41 hepatocellular carcinoma patients before surgery, 3 liver cirrhosis patients before surgery, and 10 healthy volunteers. the relationship of fbi?1 and hccr mrna expression with clinic parameters was analyzed by fisher?s exact test or spearman?s analysis of correlation. resultsthe level of fbi?1 and hccr mrna expression was higher in the blood of hepatocellular carcinoma patients than that in hepatic cirrhosis patients. fbi?1 and hccr mrna expression was negative in the blood of the healthy volunteers. fbi?1 mrna expression was positively correlated with alpha fetoprotein (afp) level (p<0?01), and also positively correlated with hccr mrna expression (p<0?01). conclusionabnormal increase of fbi?1 and hccr mrna expression occurs in the blood of hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis patients. fbi?1 mrna expression is positively correlated with afp level．

key words: liver neoplasms；gene expression；correlation analysis

原癌基因fbi?1(factor that binds to inducer of short transcripts?1),其編碼的蛋白具有特殊結(jié)構(gòu),即其氮末端具有poz(poxvirus zinc finger)區(qū),碳末端具有由k型鋅指結(jié)構(gòu)組成的蛋白結(jié)合區(qū)。研究發(fā)現(xiàn)fbi?1可以通過其特殊蛋白結(jié)構(gòu)特異結(jié)合p14arf啟動子,以及抑制p53通路參與腫瘤的發(fā)生［1］。其蛋白在、肺、膀胱、前列腺、肝臟等腫瘤中有異常高表達(dá)［1-3］。原癌基因hccr(human cervical cancer oncogene)最先在人宮頸癌中分離。研究顯示,hccr是p53基因的負(fù)調(diào)控因子,能下調(diào)p21waf1基因啟動子活性,其蛋白在人乳腺、腎、淋巴、胃、結(jié)腸、卵巢等腫瘤中異常高表達(dá)［4-6］。本研究檢測了肝癌相關(guān)患者血液中hccr 及fbi?1基因mrna的表達(dá)情況及探討其與患者臨床指標(biāo)的聯(lián)系,現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1　標(biāo)本及來源

肝細(xì)胞癌(hcc)患者術(shù)前血液標(biāo)本41例,肝硬化(lc)患者術(shù)前血液標(biāo)本3例,均取自中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中山大學(xué)腫瘤防治中心。各患者的臨床指標(biāo)都收集于中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院、中山大學(xué)腫瘤防治中心檢驗(yàn)科的檢測記錄。3例正常肝組織來源于肝移植的健康供體肝。10例健康者血液標(biāo)本取自廣東省東莞市中心血站,來源于健康獻(xiàn)血者,年齡22～40歲,均排除肝腎疾病。

1.2　主要試劑與儀器

trizol(invitrogen 公司)，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(fermentas公司)，熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(pcr)所用試劑盒(達(dá)安基因診斷公司)，引物、探針(invitrogen 公司合成)，pmd18?t載體(takara公司)， uvmini?1240型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，7000型熒光定量pcr儀(美國abi公司)，9700型普通pcr儀(美國abi公司)。

1.3　標(biāo)本rna的提取和cdna第1鏈合成

臨床取來的血液標(biāo)本用乙二胺四乙酸(edta)抗凝管4℃保存,并在1 d內(nèi)提取rna,提取時1 ml血液用9 g/l nacl對倍稀釋后,緩慢加入已裝有2 ml淋巴細(xì)胞分離液的離心管中,2 500 r/min離心10 min,吸取中間單個核細(xì)胞層置于1?5 ml ep管中,5 000 r/min離心5 min,棄上清,在沉淀中加入trizol提取rna。臨床取來的其他組織標(biāo)本馬上-80℃冷凍,提取時加入液氮碾磨,之后用trizol提取rna。所有rna用紫外分光光度計(jì)測出光密度d260與d280比值,并使用普通pcr儀、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cdna第1鏈,其在普通pcr儀上的運(yùn)行條件為：37℃、60 min,95℃、5 min。cdna第1鏈-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4　熒光定量pcr檢測fbi?1 mrna、hccr mrna

1.4.1　引物探針設(shè)計(jì)

根據(jù)genebank上fbi?1、hccr?2和人β?actin mrna序列,應(yīng)用primer express 2?0(applied biosystems company)設(shè)計(jì)。引物探針序列見表1。表1熒光定量rt?pcr所用的引物和探針（略）

1.4.2　熒光定量pcr檢測fbi?1 mrna、hccr mrna方法建立

用forward primer、reverse primer擴(kuò)增cdna第1鏈,所得基因片段克隆入pmd18?t載體。提取重組質(zhì)粒經(jīng)測序證實(shí)后,通過光密度(d)值算出拷貝數(shù),并用三羥甲基氨基甲烷—鹽酸乙二胺四乙酸溶液(tris?hcl edta, te緩沖液)倍比稀釋后作為系列標(biāo)準(zhǔn)品。將fbi?1、hccr、β?actin系列標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本cdna同時在熒光定量pcr儀完成以下程序：93℃預(yù)變性2 min，93℃變性30 s,55℃退火45 s,共40個循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后,將樣本與各基因標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對比分別得到fbi?1、hccr、β?actin的原始拷貝數(shù)后,用fbi?1原始拷貝數(shù)除以β?actin原始拷貝數(shù)即得fbi?1的相對表達(dá)量。用hccr原始拷貝數(shù)除以β?actin原始拷貝數(shù)即得hccr的相對表達(dá)量。

1.5　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所得數(shù)據(jù)應(yīng)用spss 11?0統(tǒng)計(jì)軟件包處理,對于2個均為計(jì)數(shù)資料的采用卡方檢驗(yàn)fisher精確概率法進(jìn)行分析；對于1個為計(jì)數(shù)資料1個為計(jì)量資料的,將計(jì)量資料以其中位數(shù)分為2類后,使用卡方檢驗(yàn)fisher精確概率法進(jìn)行分析；對于2個均為計(jì)量資料的采用spearman 相關(guān)分析。

2　結(jié)果

2.1　熒光定量 pcr檢測fbi?1 mrna、hccr mrna方法建立

所有提取rna的 d260與d280均在1?8～2?0之間。各基因熒光定量pcr擴(kuò)增動力曲線圖和標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1、圖2,從擴(kuò)增動力曲線圖可見不同模板濃度(101～108 copies/ml)擴(kuò)增曲線的上升起始點(diǎn)不同,但都呈形狀相似的“s”型曲線,分布均勻。從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖可見不同梯度模板濃度的對數(shù)值與閾值(ct)之間有非常好的線性相關(guān)關(guān)系,標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸相關(guān)系數(shù)r都大于0?990,表明標(biāo)準(zhǔn)品與ct值有著良好的線性關(guān)系。而陰性對照或陰性樣本的擴(kuò)增曲線不是“s”型,而且都處于基線以下。

2.2　血液中fbi?1、hccr基因的表達(dá)情況

應(yīng)用已建立的熒光定量法檢測fbi?1、hccr表達(dá),測得fbi?1、hccr在hcc患者、lc患者、以及健康者血液中的表達(dá)情況見表2。在大部分患者血液中兩者都有表達(dá),其中hcc患者不僅兩者的陽性率略高于lc患者,兩基因的表達(dá)水平也高于lc患者。而在10例健康者血液中均未檢測到hccr、fbi?1的表達(dá),即hccr mrna、fbi?1 mrna在正常人血液當(dāng)中的陽性率為0％。表2各組血液中fbi?1、hccr表達(dá)情況（略）

2.3　hcc和lc患者血液中fbi?1、hccr表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系

表3結(jié)果顯示,fbi?1 mrna、hccr mrna表達(dá)水平與大部分臨床指標(biāo)的關(guān)聯(lián)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但fbi?1 mrna與hccr mrna水平及fbi?1 mrna與afp水平的相關(guān)分析均有顯著性意義(p<0?01)。表3肝癌相關(guān)患者血液中fbi?1 mrna、hccr mrna表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的關(guān)系（略）

3　討論

3.1　肝癌相關(guān)患者血液中fbi?1 mrna的表達(dá)

本研究中設(shè)計(jì)了更為嚴(yán)格的健康者血液標(biāo)本的入選標(biāo)準(zhǔn),即來源于血站的獻(xiàn)血者，且確定排除了肝、腎疾病和肝炎病毒感染,從而盡可能的排除未知因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。結(jié)果顯示健康者血液中fbi?1 mrna均為陰性,而肝癌、肝硬化患者血液中大多有不同程度的fbi?1 mrna表達(dá),提示fbi?1 mrna具有作為一個肝癌相關(guān)標(biāo)記物的可能。本研究選用甲胎蛋白(alpha fetoprotein,afp)數(shù)值作為臨床指標(biāo)參與統(tǒng)計(jì),發(fā)現(xiàn)患者血液中fbi?1 mrna表達(dá)與afp水平顯著相關(guān),而afp數(shù)值的動態(tài)變化與患者肝癌病情發(fā)展有關(guān)［7］。本研究還發(fā)現(xiàn)肝癌患者血液中fbi?1 mrna水平高于肝硬化患者,結(jié)合已有研究結(jié)果［8］認(rèn)為：fbi?1 mrna在hcc遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移患者血液中的表達(dá)量遠(yuǎn)高于其他人群,提示血液中fbi?1 mrna的水平高低可能與hcc患者的病情發(fā)展有關(guān)。

3.2　肝癌相關(guān)患者血液中hccr mrna的表達(dá)

hccr有2種不同的剪接方式,即hccr?1和hccr?2,研究發(fā)現(xiàn)hccr?2更多與腫瘤形成有關(guān)［4］。因此本研究根據(jù)hccr?2設(shè)計(jì)并建立血液中hccr mrna 檢測方法。研究發(fā)現(xiàn)hccr可增強(qiáng)p53蛋白穩(wěn)定性，但降低了p53蛋白調(diào)控功能,并可下調(diào)p21waf1基因啟動子活性［4］。而fbi?1是通過結(jié)合并抑制p14arf基因啟動子活性,參與影響p14?p53基因信號旁路［1］。說明hccr、fbi?1均參與了p14arf～p53～p21waf1通路。本研究發(fā)現(xiàn),hccr mrna的水平與fbi?1 mrna水平顯著相關(guān)，這說明hccr和fbi?1在致癌機(jī)理上可能有一定的相關(guān)性。而fbi?1參與作用的p14arf～p53位于該通路上游,所以可能是hccr基因參與了fbi?1基因所引起的后續(xù)反應(yīng)。

另基于本研究中發(fā)現(xiàn)fbi?1與hccr及afp均顯著相關(guān),但hccr與afp不相關(guān),提示fbi?1基因所引起的后續(xù)反應(yīng)中是否不僅包含hccr基因參與的一條路徑,可能還包含其他途徑,有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

3.3　兩基因聯(lián)合檢測肝癌的可能性

本研究發(fā)現(xiàn)血液標(biāo)本中兩基因均未檢出mrna的患者共有4例,都屬于hcc病例。因此在本實(shí)驗(yàn)中,兩基因聯(lián)合檢測hcc的陽性率(檢出率)為90%(37/41)。而因?yàn)榻】嫡哐褐芯礄z出兩基因的mrna,因此其特異性為100%。同樣,肝硬化患者的檢出率(3/3)和特異性均為100%。這說明fbi?1 mrna、hccr mrna聯(lián)合檢測有可能用于檢測肝癌,但其是否能作為一種新的檢測方法,則需要更多的hcc、lc患者及其他肝病或其他疾病患者以及健康者的血液標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證和研究,為中醫(yī)藥治療肝癌提供新靶點(diǎn)。

(致謝：衷心感謝廣東省東莞市中心血站的劉景春博士對本研究的大力支持和幫助!)

【參考文獻(xiàn)】

［1］maeda t,hobbs r m,merghoub t,et al. role of the proto?oncogene pokemon in cellular transformation and arf repression［j］. nature,2005,433(7023)：278．

［2］zhao z h,wang s f,yu l,et al. overexpression of pokemon in non?small cell lung cancer and foreshowing tumor biological behavior as well as clinical results［j］?lung cancer,2008,62(1)：113．

［3］計(jì)勇,何曉順,馬毅,等. pokemon在肝細(xì)胞癌及癌旁、癌以遠(yuǎn)組織、肝硬化組織及正常肝組織中的表達(dá)［j］. 中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2007,24(2)：187．

［4］ko j,lee y h,hwang s y,et al. identification and differential expression of novel human cervical cancer oncogene hccr?2 in human cancers and its involvement in p53 stabilization［j］. oncogene,2003,22(30)：4679．

［5］chung y j,kim j w. novel oncogene hccr: its diagnostic and therapeutic implications for cancer［j］. histol histopathol,2005,20(3)：999．

［6］ha sa,shin s,kim h,et al. oncoprotein hccr?1 expression in breast cancer is well correlated with known breast cancer prognostic factors including the her2 level, p53 mutation, and er/pr expression［j］. bmc cancer,2009,9(1)：51．