導(dǎo)語：麻竹葉黃酮研究論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的利用麻竹葉黃酮進(jìn)行了小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)和致突變實(shí)驗(yàn)。方法采用急性毒性實(shí)驗(yàn)、小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)和鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體實(shí)驗(yàn)。結(jié)果小鼠經(jīng)口LD50>25g·（kg·bw）-1，腹腔注射LD50>10g·（kg·bw）-1；竹葉黃酮各劑量組不能使鼠傷寒沙門氏菌移碼突變株和堿基置換突變株發(fā)生回復(fù)突變；沒有對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞染色體的斷裂效應(yīng)及紡錘體毒效應(yīng)；也對(duì)小鼠精子的畸形無影響。結(jié)論竹葉黃酮是一種安全的保健食品功能因子。但對(duì)人體有無毒副作用還需作臨床實(shí)驗(yàn)。

【關(guān)鍵詞】竹葉黃酮半數(shù)致死量Amees實(shí)驗(yàn)微核致突變作用毒理學(xué)

ToxicologicalTestonFlavonoidsfromLeavesofDendrocalamusLatiflorus

Abstract:ObjectiveAcutetoxicityexperimentsandmutationexperimentswereconductedonmicewiththeflavonoidsfromtheleavesofDendrocalamuslatiflorus.MethodsBymeansofacutetoxicitytest,malformationtestofmicesperm,micronucleustestofbonemarrowcellandAmestest.ResultsLD50（ig）formicewasmorethan25g·（kg·bw）-1andinLD50（ip）formicewasmorethan10g·（kg·bw）-1.MutagenicactionofflavonoidfrombambooleavesonTA97，TA98，TA100andTA102，andtoxiceffectonmicemarrowmicronucleusaswellaseffectonmalformationofmicespermwereallnegative.ConclusionTheflavonoidsfromleavesofDendrocalamuslatifloruswasatypeofsecurefunctionfactorofhealthyfood，butwhetherithastoxicornegativeeffectonhumanornotitneedfurtherobservationinclinicalapplication.

Keywords:Flavonoidsfrombambooleaves（FBL）；LD50；Amesexperiment；Micronucleus；Mutationexperiments；Toxicology

麻竹Dendrocalamuslatiflorus又名甜竹、八月麻（福建），屬禾本科牡竹屬，是廣泛分布于我國(guó)福建、臺(tái)灣、廣東、廣西、云南、貴州和四川等南亞熱帶和熱帶地區(qū)的大型叢生竹種［1］。麻竹葉大，寬4～7cm以上，內(nèi)含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，很值得開發(fā)利用。竹葉在我國(guó)具有悠久的食用和藥用歷史［2～4］。竹葉提取物具有優(yōu)良的抗自由基、抗氧化、抗衰老、調(diào)節(jié)血脂、阻斷亞硝化反應(yīng)、增強(qiáng)免疫和抗菌抑菌的作用［2～4］。竹葉中所含的功能因子主要是黃酮糖苷和香豆素類內(nèi)酯等［3,4］。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)用竹葉黃酮系麻竹葉黃酮，本實(shí)驗(yàn)室自備［2］，總黃酮>80%。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠：為BALB/C純系小鼠（醫(yī)動(dòng)字2004第002號(hào)），♂，♀各半，8～10周齡，體重18～20g，由重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.3菌株鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型突變株TA97，TA98（移碼型突變株）和TA100，TA102（堿基置換型突變株）：均由重慶市疾控中心提供。

1.2方法

1.2.1竹葉黃酮的經(jīng)口（ig）、腹腔注射（ip）急性毒性（LD50）實(shí)驗(yàn)［5～7］采用霍恩法。實(shí)驗(yàn)劑量以最大注射量或經(jīng)口灌胃不超過1ml/只小鼠為限。竹葉黃酮經(jīng)口的劑量組設(shè)4個(gè)組為2.15，4.64，10.0，21.5g·（kg·bw）-1；竹葉黃酮經(jīng)腹腔注射劑量組設(shè)4個(gè)組為1.00，2.15，4.64，10.00g·（kg·bw）-1。取健康小鼠，禁食16h后，給預(yù)受試物后觀察7d，記錄小鼠的活動(dòng)和死亡情況。

1.2.2竹葉黃酮的鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體實(shí)驗(yàn)（Ames實(shí)驗(yàn)）［6,8～10］采用平板滲入法。實(shí)驗(yàn)菌株采用TA97，TA98（移碼型突變株）和TA100，TA102（堿基置換型突變株），實(shí)驗(yàn)前菌種的5個(gè)遺傳特征要作鑒定，達(dá)到規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)才能使用，并且在實(shí)驗(yàn)前均要在營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于37℃水浴振蕩培養(yǎng)14h增菌，得到大約2×108的菌株懸浮液。按急性毒性實(shí)驗(yàn)所用腹腔注射最高劑量（10.00g/kg）的1/10，1/20，1/40，1/80，1/160，1/320設(shè)6個(gè)劑量組，另設(shè)陰性對(duì)照組（竹葉黃酮為0mg/平皿）和陽(yáng)性對(duì)照組（2-AF、敵克松、疊氮鈉），共10個(gè)實(shí)驗(yàn)組，并各實(shí)驗(yàn)組分別進(jìn)行加S9（20μl/平皿）活化和不加S9活化的實(shí)驗(yàn)，每次實(shí)驗(yàn)做3個(gè)平行樣品，取兩次實(shí)驗(yàn)的平均數(shù)，以超過自然回變數(shù)（陰性對(duì)照組）的2倍作為陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3竹葉黃酮的骨髓微核實(shí)驗(yàn)［9］取健康小鼠，隨機(jī)分成5組，每組動(dòng)物10只，按急性實(shí)驗(yàn)所用腹腔注射最高劑量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的1/2，1/4和1/8設(shè)3個(gè)劑量組，另設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組〔環(huán)磷酰胺40mg·（kg·bw）-1〕和陰性對(duì)照組共5組，連續(xù)腹腔注射給藥2d，1次/d。第2次給予受試物后6h，頸椎脫臼處死小鼠，取胸骨，用止血鉗擠出骨髓液與玻片一端的小牛血清混勻，常規(guī)涂片。涂片自然干燥后放入甲醇中固定5～10min，再放入Giemsa應(yīng)用液中，染色10～15min，立即用pH6.8的磷酸鹽緩沖液沖洗晾干，寫好標(biāo)簽，置干燥器中保存。選擇細(xì)胞完整、分散均勻、著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域，在油鏡下觀察，以有核細(xì)胞形態(tài)完好作為判斷制片優(yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)，觀察嗜多染紅細(xì)胞的微核（呈灰藍(lán)色），而成熟紅細(xì)胞呈粉紅色。每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，觀察含有微核的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)，計(jì)算微核率：

微核率（‰）=含微核細(xì)胞數(shù)觀察細(xì)胞數(shù)×1000

1.2.4竹葉黃酮的小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)［6,7,9］取健康小鼠，隨機(jī)分成5組，每組動(dòng)物10只，按急性實(shí)驗(yàn)所用腹腔注射最高劑量〔10.00g·（kg·bw）-1〕的1/2，1/4和1/8設(shè)3個(gè)劑量組，另設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組〔環(huán)磷酰胺40mg·（kg·bw）-1〕和陰性對(duì)照組共5組，連續(xù)腹腔注射給藥5d，于第1次腹腔注射給藥后的第35天用頸椎脫臼處死小鼠，取出兩側(cè)副睪，放入盛有適量生理鹽水（1ml）的小燒杯中。用眼科剪將副睪縱向剪1～2刀，靜置3～5min，輕輕搖動(dòng)，用4層擦鏡紙過濾，吸濾液涂片。于空氣中干燥后，用甲醇固定8min，干燥后用1%～2%伊紅染色1h，用水輕沖，干燥。在低倍鏡下（用綠色濾光片）找到清晰、精子重疊少的部位，用高倍鏡順序檢查精子形態(tài)，計(jì)數(shù)結(jié)構(gòu)完整的精子，每只動(dòng)物至少檢查1000個(gè)精子，觀察畸形精子數(shù)，計(jì)算精子畸形率：

精子畸形率（%）=畸形精子數(shù)觀察的精子數(shù)×100

1.2.5數(shù)據(jù)處理采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和方差分析，并以LDS法進(jìn)行組間的兩兩比較，檢驗(yàn)的顯著性水平設(shè)定為P<0.05(顯著水平)和P<0.01(極顯著水平)。

2結(jié)果與分析

2.1竹葉黃酮的經(jīng)口、腹腔注射急性毒性（LD50）實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1～2。表1經(jīng)口給藥后小鼠毒性反應(yīng)情況（略）表2竹葉黃酮的經(jīng)口急性毒性（略）

從表1～2的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出：竹葉總黃酮經(jīng)口LD50實(shí)驗(yàn)，小鼠的飲食、行動(dòng)、皮毛、大便等均正常，未發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，無小鼠死亡，測(cè)不出其LD50。推測(cè)其LD50>21.50g/kg·bw，屬實(shí)際無毒。

從表3和表4可以看出：竹葉總黃酮經(jīng)腹腔注射LD50實(shí)驗(yàn)，小鼠的飲食、行動(dòng)、皮毛、大便等均正常，未發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，無小鼠死亡，測(cè)不出其LD50。推測(cè)其LD50>10.00g·（kg·bw）-1，屬實(shí)際無毒。表3腹腔注射給藥后小鼠毒性反應(yīng)情況（略）表4竹葉黃酮的經(jīng)腹腔注射急性毒性（略）

2.2竹葉黃酮的鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動(dòng)物微粒體實(shí)驗(yàn)（Ames實(shí)驗(yàn)）結(jié)果見表5～6。表5竹葉黃酮對(duì)TA98和TA100的致突變作用（略）表6竹葉黃酮對(duì)TA97和TA102的致突變作用（略）

由表5～6可知，麻竹葉黃酮的6個(gè)測(cè)試濃度在加S9或不加S9活化的情況下，4個(gè)菌株TA97，TA98，TA100和TA102的回變菌落數(shù)均與陰性對(duì)照組很接近，沒有顯著性差異（P>0.05）且沒有超過陰性對(duì)照組的2倍,而與陽(yáng)性對(duì)照組比較要低得多,有極顯著性差異(P>0.01)，因此竹葉黃酮不能使鼠傷寒沙門氏菌移碼突變株和堿基置換突變株發(fā)生回復(fù)突變的現(xiàn)象。

2.3竹葉黃酮的骨髓微核實(shí)驗(yàn)竹葉黃酮的骨髓微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。表7竹葉黃酮的骨髓微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

由表7可知,陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺)具有微核嗜多染色紅細(xì)胞數(shù)與陰性對(duì)照組(竹葉黃酮0.00g/kg)相比,差異極顯著(P<0.01)。竹葉黃酮的各劑量組小鼠具有微核嗜多染紅細(xì)胞率與陰性對(duì)照組相比，微核率值非常接近，無明顯差異（P>0.05），且無劑量-效量關(guān)系，因此竹葉黃酮沒有對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞染色體的斷裂效應(yīng)及紡錘體毒效應(yīng)。

2.4竹葉黃酮的小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表8。表8竹葉黃酮的小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

由表8可知,陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺)具有小鼠精子畸形率與陰性對(duì)照組(竹葉黃酮0.00g/kg)相比,差異極顯著(P<0.01)。竹葉黃酮的各劑量組小鼠精子畸形率與陰性對(duì)照組相比，小鼠精子畸形率非常接近，均無顯著差異（P>0.05），且無劑量-效量關(guān)系，揭示竹葉黃酮對(duì)小鼠精子的畸形無影響。

3結(jié)論

通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果可得出如下結(jié)論：小鼠經(jīng)口LD50>25g·（kg·bw）-1，腹腔注射LD50>10g·（kg·bw）-1，屬實(shí)際無毒；竹葉黃酮各劑量組不能使鼠傷寒沙門氏菌移碼突變株和堿基置換突變株發(fā)生回復(fù)突變；沒有對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞染色體的斷裂效應(yīng)及紡錘體毒效應(yīng)；也對(duì)小鼠精子的畸形無影響。

以上結(jié)果顯示竹葉黃酮是一種安全的保健食品。但對(duì)人體長(zhǎng)期毒副作用研究還需臨床試驗(yàn)。

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