導(dǎo)語：消痛靈搽劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的建立消痛靈搽劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法（TLC）對處方中的梔子、姜黃、乳香、沒藥進(jìn)行定性鑒別；采用反相高效液相色譜法（RPHPLC）定量分析消痛靈搽劑中大黃素和大黃酚的含量。結(jié)果TLC分離效果好，斑點(diǎn)清晰；大黃素在0.248～1.984μg，大黃酚在0.292～2.336μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率大黃素為99.7%，RSD﹦0.64%；大黃酚為99.2%，RSD﹦0.89%。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、能有效控制該復(fù)方制劑的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】消痛靈搽劑；大黃素；大黃酚；薄層色譜；反相高效液相色譜

Abstract：ObjectiveToestablishthequalitystandardofXiaotonglingliniment．MethodsFructusGardeniae,RhizomaCurcumaelongae,Olibanum,MyrrhawereidentifiedbyTLC.ThecontentofemodinandchrysophanolinXiaotonglinglinimentwasdeterminedbyRPHPLC．ResultsTheidentifiedcharacteristicsofchromatographyweredistinctandthespotswereclear.Thestandardcurvewaslinearwithintherangeof0.248～1.984μgforemodinand0.292～2.336μgforchrysophanol．Theaveragerecoveryofemodinwas99.7%withRSDof0.64%,withthatofchrysophanolwas99.2%withRSDof0.89%．ConclusionThemethodisconvenient,accurateandhasagoodreappearance．Thepreparation''''squalitycanbecontrolledeffectively．

Keywords：Xiaotonglingliniment；Emodin；Chrysophanol；TLC；HPLC

消痛靈搽劑是由我院文紹敦教授根據(jù)中醫(yī)藥理論和多年臨床經(jīng)驗(yàn)，篩選有效藥物研制而成的中藥復(fù)方外用制劑，全方以大黃為君藥，梔子為臣藥，佐以姜黃、乳香、沒藥，具有清熱止痛、化淤散結(jié)的功效，主要用于治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、局部淤腫疼痛等病癥，臨床療效顯著。為了有效控制該制劑的質(zhì)量，本文建立了TLC法對梔子、姜黃、乳香、沒藥等4味藥材進(jìn)行定性鑒別；并采用RPHPLC法測定君藥大黃中的大黃素和大黃酚的含量。研究結(jié)果表明，該方法具有簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，能有效控制消痛靈搽劑的質(zhì)量。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀（LC10AT泵，SPD10A紫外檢測器，日本島津公司）；N2000型色譜數(shù)據(jù)工作站（浙江大學(xué)智能信息工程研究所）；KQ100超聲波清洗器（浙江昆山市超聲儀器有限公司）；硅膠G板（自制，規(guī)格：12cm×24cm)；大黃素、大黃酚、梔子苷、姜黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；乳香、沒藥對照藥材由青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院中藥教研室魏全嘉教授鑒定；消痛靈搽劑及陰性對照樣品（自制）；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2薄層色譜鑒別

2.1梔子的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺梔子的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取梔子苷對照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點(diǎn)樣于同一塊硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇（5∶2）為展開劑，展開，取出，晾干。用10%的硫酸乙醇液顯色，110℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯淺黃色斑點(diǎn)，陰性對照溶液在相應(yīng)的位置上無此斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

2.2姜黃的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺姜黃的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取姜黃素對照品，加甲醇制成每毫升含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點(diǎn)樣于同一塊硅膠G薄層板上，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸（5.5∶1.2∶0.6）為展開劑，展開，取出，晾干。用濃氨水顯色，110℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯黃色斑點(diǎn)，陰性對照溶液在相應(yīng)的位置上無此斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2。

圖1梔子的TLC圖譜（略）

圖2姜黃的TLC圖譜（略）

2.3乳香的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺乳香的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取乳香對照藥材0.5g，加乙醚10ml，超聲處理20min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上,以石油醚（30～60℃）-醋酸乙酯（34∶6）為展開劑，展開，取出，晾干。用5%香草醛硫酸溶液顯色，110℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯紫色斑點(diǎn)，而陰性對照溶液在相應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)。結(jié)果見圖3。

2.4沒藥的TLC法鑒別取消痛靈搽劑作為供試品溶液。取缺沒藥的陰性樣品作為陰性對照溶液。另取沒藥對照藥材0.5g，加乙醚10ml，超聲處理20min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。吸取上述溶液各3μl，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上,以環(huán)己烷-丙酮（17∶2）為展開劑，展開，取出，晾干。用5%香草醛硫酸溶液顯色，110℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯紫色斑點(diǎn)，而陰性對照溶液在相應(yīng)的位置上無斑點(diǎn)。結(jié)果見圖4。

圖3乳香的TLC圖譜（略）

圖4沒藥的TLC圖譜（略）

3含量測定

3.1色譜條件色譜柱：HypersilC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（87∶13）；檢測波長：254nm；流速：1.0ml·min-1；進(jìn)樣量：10μl。

3.2線性范圍的考察精密稱取大黃素對照品6.2mg，大黃酚對照品7.3mg，分別置兩個(gè)50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2，4，6，10，16μl，進(jìn)樣，在上述色譜條件下測定峰面積，以大黃素、大黃酚進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y大黃素=1.26×103X－12.95，r=0.9997；Y大黃酚=2.81×103X－7.52，r=0.9995。結(jié)果表明，大黃素、大黃酚進(jìn)樣量在0.248～1.984μg和0.292～2.336μg線性關(guān)系良好。

3.3供試品溶液的制備精密量取消痛靈搽劑樣品3ml，置水浴上蒸干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3.4陰性對照實(shí)驗(yàn)取缺大黃陰性對照樣品，按“3.3”項(xiàng)下方法制備陰性對照品溶液，取10μl進(jìn)樣，結(jié)果在與大黃素、大黃酚對照品保留時(shí)間相同的位置上無色譜峰出現(xiàn)，表明缺大黃的陰性對照品溶液對測定無干擾。

3.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取大黃素、大黃酚對照品溶液各10μl,在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，大黃素、大黃酚峰面積積分值的RSD分別為0.86%，1.02%，結(jié)果表明該方法的精密度良好。

3.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號樣品5份，分別按“3.3”項(xiàng)下操作，依法測定，計(jì)算得大黃素、大黃酚的平均含量分別為0.136，0.283mg·ml-1，RSD分別為1.53%和0.71%。

3.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液放置不同時(shí)間(0，2，4，8，12h)后進(jìn)樣，測定峰面積，結(jié)果RSD為0.23%，表明溶液在12h內(nèi)保持穩(wěn)定。

3.8加樣回收實(shí)驗(yàn)取已知含量的樣品5份，分別精密加入大黃素對照品溶液（0.124mg·ml-1）、大黃酚對照品溶液（0.146mg·ml-1）各2ml，按“3.3”項(xiàng)下制備回收率測定用樣品溶液，依法測定，計(jì)算回收率，大黃素平均回收率為99.7%，RSD=0.64%；大黃酚平均回收率為99.2%，RSD=0.89%，結(jié)果表明本方法的回收率好。

3.9樣品測定精密吸取對照品和供試品溶液，依上述條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果見表1。

表1樣品含量測定結(jié)果（略）

4討論

薄層色譜法（TLC）鑒別項(xiàng)下選用的展開系統(tǒng)均參照《中國藥典》（2005年版）的鑒別方法［1］制定，方中梔子、姜黃選擇主要有效成分梔子苷、姜黃素作為對照品，而乳香、沒藥無對照品，則選用對照藥材作對照，樣品及陰性對照品采用平行試驗(yàn),結(jié)果表明各檢出成分分離效果好，不受其他成分的干擾，操作簡便，專屬性強(qiáng)，可作為該制劑的定性控制指標(biāo)。

大黃為消痛靈搽劑的君藥，主要含有游離和結(jié)合的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚，其中大黃素具有抑菌、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抑制血小板聚集、改善微循環(huán)、降低血液黏度、抗氧化、清除自由基、保護(hù)肝腎等作用［2］；大黃酚具有止咳、抗菌、止血、抗氧化、清除自由基等作用［3］，這些藥理作用在很大程度上與該復(fù)方制劑的功能主治相一致，故選擇君藥大黃中的大黃素、大黃酚作為質(zhì)量控制指標(biāo)成分，結(jié)合文獻(xiàn)［4］用RP-HPLC進(jìn)行含量測定，前處理過程簡單，陰性無干擾，靈敏度高，準(zhǔn)確性及重現(xiàn)性好，可作為本品的定量控制指標(biāo)。

根據(jù)樣品測定結(jié)果，5批樣品中大黃素的平均含量為0.131mg·ml-1，大黃酚的平均含量為0.287mg·ml-1，考慮到藥材來源、制劑工藝等因素，建議其限度為本品含大黃以大黃素和大黃酚的總量計(jì),不得少于0.4mg·ml-1。

【參考文獻(xiàn)】

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