導(dǎo)語：內(nèi)酯含量測(cè)定研究管理論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的探討外標(biāo)四點(diǎn)法的可行性。方法HPLC法，色譜柱：ALLTECHC18(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相：正丙醇-四氫呋喃-水(1：15：85)，流速1.0ml/min，ELSD參數(shù)：漂移管溫度108.0℃；載氣(壓縮空氣)流速3.10L/min。結(jié)果外標(biāo)四點(diǎn)法得出回歸方程，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法證明成立，且相關(guān)系數(shù)r顯著。結(jié)論外標(biāo)四點(diǎn)法可以用于銀杏萜類內(nèi)酯的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】銀杏葉萜類內(nèi)酯；含量測(cè)定；HPLC-ELSD；外標(biāo)四點(diǎn)法

StudyonreliabilityofESMoffourpointstodeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones

【Abstract】ObjectiveStudyonthereliabilityofESMoffourpoints.MethodsHPLCsystemconsistingofanAlltechC18column(4.6mm×250mm，5μm)，andthemobilephasewasn-Propylalchol，tetrahydrofuranandwater(1:15:84)atflowrateof1.0ml/min.Thedetectortemperaturewas108.0℃andthedrygasflowratewas3.10L/min.ResultsTheESMoffourpointshasbeenestablished.ConclusionTheESMoffourpointscanbeusedondeterminetheassayforGinkgoTerpeneLactones.

【Keywords】ginkgoterpenelactones；assay；HPLC-ELSD；ESMoffourpoints

有關(guān)銀杏葉中萜類內(nèi)酯的含量測(cè)定方法的報(bào)道較多，目前銀杏葉制劑的萜類內(nèi)酯含量測(cè)定方法采用的多為HPLC法［1～3］。我們亦采用2005版中國藥典收錄的HPLC法［4］，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。HPLC-ELSD使用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程分別計(jì)算白果內(nèi)酯、銀杏葉內(nèi)酯A、銀杏葉內(nèi)酯B和銀杏葉內(nèi)酯C的含量，四種銀杏內(nèi)酯的含量之和為萜類內(nèi)酯含量。我們?cè)趯?shí)際工作中使用外標(biāo)兩點(diǎn)法時(shí)，直接從數(shù)值上難以判斷對(duì)照溶液的配制是否準(zhǔn)確，及其外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)應(yīng)的工作曲線(n＝2)是否可靠。因此，同時(shí)配制兩份對(duì)照溶液各自分別測(cè)定5μl、10μl兩點(diǎn)，將四個(gè)濃度和相應(yīng)峰面積一條標(biāo)準(zhǔn)曲線（n＝4），得出回歸方程及相關(guān)系數(shù)r，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法考察曲線和回歸方程是否成立［5］。

1儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀：SHIMADZU-10A；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器ALLTECHELSD2000。

1.2試藥白果內(nèi)酯，銀杏葉內(nèi)酯B、銀杏葉內(nèi)酯C對(duì)照品購于中國藥品生物制品檢定所；銀杏葉內(nèi)酯A對(duì)照品購于SIGMA。甲醇為色譜純；水為自制超純水；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：ALLTECHC18(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：正丙醇-四氫呋喃-水(1：15：84)；流速1.0ml/min；ELSD參數(shù)：漂移管溫度108.0℃；載氣(壓縮空氣)流速3.10L/min；柱溫35℃；進(jìn)樣量5、15μl。理論塔板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，相鄰峰的分離度應(yīng)＞1.5。

2.2對(duì)照品溶液的制備分別精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的白果內(nèi)酯、銀杏葉內(nèi)酯A、銀杏葉內(nèi)酯B和銀杏葉內(nèi)酯C對(duì)照品適量，置同一10ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，混勻，即得。

2.2.1對(duì)照品溶液一白果內(nèi)酯22.73mg、銀杏內(nèi)酯A13.42mg、銀杏內(nèi)酯B11.13mg和銀杏內(nèi)酯C9.05mg。

2.2.2對(duì)照品溶液二白果內(nèi)酯14.71mg、銀杏內(nèi)酯A11.34mg、銀杏內(nèi)酯B12.24mg和銀杏內(nèi)酯C18.99mg。

以對(duì)照品濃度的自然對(duì)數(shù)InC(x)為橫坐標(biāo)，峰面積的自然對(duì)數(shù)InA(y)為縱坐標(biāo)作圖，見圖2～5。

圖中四點(diǎn)有成一條直線的趨勢(shì)，在直線方程y＝ax+b中，通過統(tǒng)計(jì)計(jì)算按公式1、2、3分別求出兩個(gè)常數(shù)a，b及直線的相關(guān)系數(shù)r，見表2。

2.3外標(biāo)四點(diǎn)法直線回歸方程的確定分別精密吸取對(duì)照品溶液一和二5μl、15μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果：對(duì)照溶液中白果內(nèi)酯(tR＝8.375)、銀杏葉內(nèi)酯A(tR＝9.811)、銀杏葉內(nèi)酯B(tR=12.040)和銀杏葉內(nèi)酯C(tR＝7.194)，相鄰組分分離效果良好(見圖1)。濃度與峰面積的數(shù)據(jù)及處理見表1。

(出峰順序?yàn)殂y杏內(nèi)酯C，白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A，銀杏內(nèi)酯B)

1

2.4直線回歸方程的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)

2.4.1相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)法相關(guān)系數(shù)表示兩變量間關(guān)系的密切程度。使用相關(guān)系數(shù)檢驗(yàn)法來進(jìn)行相關(guān)系數(shù)的顯著性測(cè)驗(yàn)。見表2。

檢驗(yàn)rn＝4，顯著性水平α為0.01時(shí)，查相關(guān)系數(shù)臨界值表得r0.01，4＝0.990，表2中r＞r0.01，4，說明確立的回歸方程是有意義的。

2.4.2t檢驗(yàn)法進(jìn)行相關(guān)系數(shù)r的顯著性測(cè)驗(yàn)t檢驗(yàn)法進(jìn)行相關(guān)系數(shù)的顯著性測(cè)驗(yàn)，公式4如下：

t＞t(n-2)，0.01時(shí)，x(InC)與y(InA)間的相關(guān)關(guān)系有非常顯著意義。查表得t（2）0．01＝9．93。表2中t均＞t(2)0.01，所以認(rèn)為x(InC)與y(InA)之間存在線性相關(guān)關(guān)系。外標(biāo)四點(diǎn)對(duì)數(shù)方程法的直線可確立。

2.4.3外標(biāo)四點(diǎn)法的重復(fù)性考察取對(duì)照一與對(duì)照二，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備進(jìn)行六次實(shí)驗(yàn)，分別得到六組標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)r，見表3。

3結(jié)論

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中外標(biāo)四點(diǎn)法對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)均大于r0.01，4＝0.990，線性相關(guān)且回歸方程是有意義的。在實(shí)驗(yàn)得到的回歸方程當(dāng)相關(guān)系數(shù)＞0.990時(shí)可用計(jì)算內(nèi)酯的含量，該方法增加了標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性，可有效控制制劑的質(zhì)量。

【參考文獻(xiàn)】

1MarkBlumenthal.GermangovernmentlimitsGinkgolivlactonelevelsinginkgoleaf.HerralGram，1997，(41):29.

2ZhangL，ChenXP，DongXP，etal.DeterminationofGinkgolactoneinGinkgocapsulesbyHPLC(HPLC法測(cè)定銀杏葉膠囊的含量).JiangsuPharmacyandClinicalResearch(江蘇藥學(xué)與臨床研究)，2004，12(1)：29-32.

3TangJW.DeterminationofGinkgolactoneinKangmailingcapsulesbyHPLC(HPLC法測(cè)定康脈靈膠囊中銀杏萜內(nèi)酯的含量).TianjinPharmacy(天津藥學(xué))，2005，17(1)：11-13.

4ChP.(中國藥典).VolI.2005.

5蔣子剛，顧學(xué)梅.分析檢驗(yàn)的質(zhì)量保證和計(jì)量認(rèn)證.上海：華東理工大學(xué)出版社，1998，50-210.