導(dǎo)語：益母草藥效成分及其人工種植研究論文一文來源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的考察益母草野生品和栽培品中主要有效成分水蘇堿和多糖的含量，為人工種植益母草的必要性提供依據(jù)。方法分別采用薄層掃描法測(cè)定水蘇堿，分光光度法測(cè)定多糖。結(jié)果栽培品中水蘇堿和多糖含量普遍比野生品含量高，且含量變化有一定規(guī)律性。結(jié)論為保證益母草藥材質(zhì)量，應(yīng)該采用人工種植為好。

【關(guān)鍵詞】益母草；水蘇堿；多糖

益母草來源于唇形科植物益母草(LeonurusjaponicusHoutt.)的新鮮或干燥的地上部分，為婦科經(jīng)產(chǎn)要藥。本實(shí)驗(yàn)為考察黔產(chǎn)益母草野生品和栽培品的質(zhì)量，通過測(cè)定益母草中主要有效成分水蘇堿和多糖的含量[3，4]，對(duì)益母草野生品和栽培品的質(zhì)量進(jìn)行比較，為人工種植益母草提供依據(jù)，達(dá)到提高益母草藥材質(zhì)量的目的。

一、儀器、試劑與藥材

1儀器與試劑CS-9301PC雙波長(zhǎng)飛點(diǎn)層析掃描儀(日本島津公司)；CAMAGLINOMATV半自動(dòng)點(diǎn)樣儀(瑞士卡馬公司)；定量毛細(xì)管(美國MICROCAPS公司)；XS205雙量程電子分析天平，量程：萬分之一和十萬分之一兩檔(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；硅膠G板(青島海洋化工廠)；DU-70紫外-可見分光光度計(jì)(美國BACKMAN公司)；鹽酸水蘇堿對(duì)照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110712-200407；苯酚、濃硫酸和葡萄糖等其他化學(xué)試劑均為分析純；水為蒸餾水。

2藥材分別采自貴州省惠水縣和貴陽市郊烏當(dāng)，藥材樣品均經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院魏升華講師鑒定為紅花益母草LeonurusjaponicusHoutt.，本實(shí)驗(yàn)均用益母草地上部分。

二、方法與結(jié)果

2.1水蘇堿的分析

2.1.1供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥益母草樣品粉末約1g，置圓底燒瓶中，加入乙醇約50ml，加熱回流1.5h，放冷，濾過，濾渣及回流容器用乙醇50ml分次洗滌，合并濾液和洗液，蒸干，殘?jiān)靡掖既芙猓D(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心(5000轉(zhuǎn)/min，5min)，取上清液作為供試品溶液。精密稱取在105℃干燥3h的水蘇堿對(duì)照品適量，加乙醇制成每1ml含2.030mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2薄層色譜分析條件用硅膠G薄層板，點(diǎn)狀點(diǎn)樣，點(diǎn)樣量10μl。以正丁醇-鹽酸-乙酸乙酯(8：3：1)為展開劑，展開，取出晾干后，在105℃加熱15min，放冷，噴以稀碘化鉍鉀試液-1%三氯化鐵乙醇溶液(10：1)混合溶液至斑點(diǎn)顯色清晰，晾干，立即在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布密封。反射法單波長(zhǎng)鋸齒形掃描。波長(zhǎng)λS=510nm，狹縫0.4mm×0.4mm。在上述分析條件下對(duì)薄層色譜進(jìn)行掃描分析。

2.1.3線性關(guān)系的考察用半自動(dòng)點(diǎn)樣儀在同一硅膠G薄層板上點(diǎn)鹽蘇堿對(duì)照溶液2、4、6、8、10、12、14μl，用上述條件展開顯色后進(jìn)行薄層掃描測(cè)定，以點(diǎn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，求出回歸方程為：Y=185.75X-411.09，r=0.996，表明水蘇堿在4.06～28.42μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。由于直線不通過原點(diǎn)，因此用外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。

2.1.4穩(wěn)定性考察在同一塊薄層板上分別點(diǎn)8μl樣品溶液和10μl對(duì)照品溶液，依上述色譜條件和掃描條件操作，分別在0、0.5、1、1.5、2h掃描測(cè)定鹽酸水蘇堿峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為0.38%，表明鹽酸水蘇堿在本實(shí)驗(yàn)條件下2h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.5同板精密度和異板精密度試驗(yàn)分別在同一薄層板上和在另外5塊薄層板上點(diǎn)同一供試品溶液五個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)10μl，并以水蘇堿對(duì)照品溶液3、8μl作為隨行標(biāo)準(zhǔn)，分別掃描測(cè)定其峰面積，按上述分析條件測(cè)定，以峰面積計(jì)算，同板精密度RSD為1.00%，異板精密度RSD為1.90%。

2.1.6重復(fù)性試驗(yàn)和回收率試驗(yàn)分別稱取同一益母草藥材5份，按2.1.1“供試品溶液的制備”和2.1.2“薄層色譜分析條件”操作，測(cè)得水蘇堿平均含量為1.09%，RSD為2.52%。精密稱取鹽酸水蘇堿平均含量為1.09%的益母草藥材5份，每份約0.5g，精密加入水蘇堿對(duì)照品5.00mg，同時(shí)加入約50ml乙醇回流提取，按上述“供試品溶液的制備”方法和“薄層色譜分析條件”進(jìn)行溶液制備和測(cè)定，結(jié)果5次回收率平均值：99.76%，RSD=1.34%。

2.1.7含量測(cè)定與結(jié)果按上述“供試品溶液制備方法”和“薄層色譜分析條件”對(duì)各樣品進(jìn)行溶液制備和測(cè)定，結(jié)果見表1。表1益母草樣品中水蘇堿和多糖含量測(cè)定結(jié)果

2.2多糖的分析

2.2.1供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥益母草粉末約0.3g，置圓底燒瓶中，精密加入50ml蒸餾水后稱重，加熱回流提取3h，冷卻后稱重，用水補(bǔ)足損失量，搖勻，過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液4ml于50ml容量瓶中，用水定容至刻度，作樣品液。從樣品液中精密量取2ml于25ml比色管中，分別精密加入5%的苯酚1ml、濃硫酸5ml，搖勻，置沸水浴中保持15min后取出，冷至室溫，即為供試品溶液。精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的無水葡萄糖適量，用水制成每1ml含56.17μg的溶液，作對(duì)照品溶液。

2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密吸取56.17μg/ml葡萄糖對(duì)照品溶液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5、1.8、2.0ml，分別置于25ml比色管中，體積不足2ml者用水補(bǔ)足至2ml，以下按2.2.1“供試品溶液的制備”項(xiàng)下“分別精密加入5%的苯酚1ml”起，同法操作即得。以相應(yīng)試劑為空白，于491nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=0.0592C-0.00113；r=0.9997

結(jié)果表明葡萄糖在2.1064～14.0425μg/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.2.3精密度和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)用同一供試品溶液連續(xù)5次測(cè)定其吸光度和每隔1h測(cè)定一次吸光度，共測(cè)定4次，計(jì)算出精密度實(shí)驗(yàn)的RSD%為0.22；穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD%為0.55。表明儀器精密度良好，顯色后的溶液3h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn)和回收率試驗(yàn)精密稱取2005年6月采收的惠水野生益母草樣品5份，每份約0.3g，按2.2.1“供試品溶液的制備”方法制備供試溶液，按2.2.2“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作”項(xiàng)下的相同測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定。樣品含量平均值為4.46%，RSD%為0.79。精密稱取已知多糖平均含量為4.46%的益母草供試品5份，每份約0.16g，分別精密加入濃度為0.142g/ml的葡萄糖對(duì)照品溶液50ml，以下按2.2.1“供試品溶液的制備”方法制備供試溶液，按2.2.2“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作”項(xiàng)下的相同測(cè)試條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果平均回收率為98.87%，RSD%為0.71。

2.2.5樣品含量測(cè)定按“2.2.1”項(xiàng)供試品溶液制備方法制備供試品溶液，用“2.2.2”“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作”項(xiàng)下的相同測(cè)試條件對(duì)各樣品進(jìn)行多糖含量測(cè)定(含量按葡萄糖計(jì))結(jié)果。

三、討論

水蘇堿是益母草的主要藥用成分之一，而多糖雖不是益母草的主要藥用成分，但對(duì)許多疾病的輔助治療作用卻不可忽視。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)看出，人工種植益母草中水蘇堿含量在開花前隨生長(zhǎng)年限變化呈遞增趨勢(shì)，此時(shí)益母草中的多糖含量也相對(duì)較高。而到果期水蘇堿含量明顯下降的同時(shí)，多糖含量也明顯下降。多糖類化合物廣泛存在于植物細(xì)胞壁中，也就是說多糖的存在是水蘇堿在植物體內(nèi)合成的一種保障，果期由于植物體內(nèi)大量消耗糖分，水蘇堿的合成也相應(yīng)降低，含量也隨之降低。人工種植益母草與野生益母草相比，由于注意管理，人工種植益母草中水蘇堿和多糖含量較高，而野生益母草中卻相對(duì)較低。公務(wù)員之家

從人工種植益母草中水蘇堿和多糖含量變化有一定規(guī)律來看，中藥制劑的質(zhì)量首先是原料藥材的質(zhì)量要得到保證，其質(zhì)量才可控，而野生益母草生長(zhǎng)年限難以確定，水蘇堿和多糖含量變化也不易掌握，因此用其作為原料生產(chǎn)的復(fù)方制劑質(zhì)量也難以保證。人工種植益母草是中藥制劑質(zhì)量控制的一個(gè)發(fā)展方向，掌握其最佳采收時(shí)間，控制原料藥材的質(zhì)量，也就保證了中藥制劑質(zhì)量的穩(wěn)定。所以，益母草由野生轉(zhuǎn)為人工種植勢(shì)在必行。

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