導(dǎo)語(yǔ)：黃連有效成分分析論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢(xún)客服老師，歡迎參考。

【摘要】目的研究黃連（味連）有效成分積累的動(dòng)態(tài)規(guī)律，為確定黃連最佳采收期提供依據(jù)。方法定期定點(diǎn)采集2～5年生黃連樣品，分析黃連根莖中鹽酸小檗堿和總生物堿的含量，分別用高效液相色譜（HPLC）法和UV法測(cè)定。結(jié)果黃連根莖中有效成分動(dòng)態(tài)積累有一定規(guī)律，鹽酸小檗堿含量每年4月（開(kāi)花結(jié)實(shí)期）幾乎均為全年最低，4～5年生黃連以10～11月黃連根莖中的小檗堿含量達(dá)到全年最高值，而以5年生黃連的鹽酸小檗堿含量為最高；總生物堿含量呈上升趨勢(shì)，每年在10～11月含量達(dá)到全年最高，而以5年生黃連的總生物堿含量最高。結(jié)論根據(jù)黃連有效成分的積累動(dòng)態(tài)規(guī)律，黃連的最佳采收期為10～11月的5年生黃連根莖。

【關(guān)鍵詞】黃連有效成分動(dòng)態(tài)積累

Abstract：ObjectiveTostudythedynamicaccumulationregulationoftheeffectivecomponentsofCoptischinensis,sotoprovidetheexperimentaldataofoptimalharvesttimeofCoptischinensis.MethodsThesamplesoftwotofiveyearsweregatheredfromthesameglebeandtime.BerberineandthetotalalkaloidswereanalyzedbyHPLCandUVmethods.ResultsThedynamicaccumulationofeffectivecomponentsintherootstalkoftheCoptischinensishadregularityinthecertainextend.ThecontentsofberberineinsampleswerealmostthelowestinAprilineveryyear,whichweremostlythehighestinOctoberandNovemberfromthesamplesgrown4～5years,butthecontentofthecomponentwasmostlythehighestin5-year-oldCoptischinensisintheseriessamples.ThecontentofthetotalalkaloidsincreasedyearbyyearintherootstalkoftheCoptischinensis,whichwasmostlythehighestinOctoberandNovemberineveryyear,butthecontentofthecomponentwasmostlythehighestin5-year-oldCoptischinensisinthesamples.ConclusionAccordingtotheaccumulationpatternoftheeffectivecomponentsintheCoptischinensis,theoptimalharvesttimeisfromSeptembertoNovember.

Keywords：Coptischinensis;Effectivecomponents;Dynamicaccumulation

黃連CoptischinensisFranch是我國(guó)人工種植栽培歷史較早的常用中藥材和出口藥材，有600余年的栽培歷史［1］，主產(chǎn)于重慶石柱，其產(chǎn)量占全國(guó)產(chǎn)量的40%～60%左右，品質(zhì)優(yōu)良。為此，石柱縣擁有“黃連之鄉(xiāng)”的美稱(chēng)。黃連根莖中的鹽酸小檗堿和總生物堿是黃連的主要有效成分，是考察黃連質(zhì)量的主要指標(biāo)，為此，我們研究了黃連根莖中鹽酸小檗堿和總生物堿含量積累動(dòng)態(tài)規(guī)律，為確定黃連最佳采收期，制定黃連標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程提供科學(xué)依據(jù)。

1材料和方法

2002-04起，定期、定點(diǎn)采集石柱黃水黃連農(nóng)場(chǎng)譚從軍家（海拔1300m）同一地塊、同一生長(zhǎng)年限、大小基本相同的2～5年生黃連根莖植株樣品恒溫干燥備用。

1.1黃連根莖中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定

1.1.1儀器與試藥儀器：高效液相色譜儀：waters公司的Alliance2690泵，996二極管陣列檢測(cè)器；Millennium32色譜工作站，超聲波清洗機(jī)（KQ—50B型）；四孔單列恒溫水浴鍋。

試藥：鹽酸小檗堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0713—200107（供含量測(cè)定用）乙腈為色譜純，甲醇等其它試劑均為分析純，水為去離子水。

1.1.2方法色譜柱：迪馬公司DimonsilC18(4.6mm×250mm，5μm);純流動(dòng)相，乙腈-0.1mol磷酸二氫鉀（35∶65）檢測(cè)波長(zhǎng)345nm，柱溫室溫，流速0.7ml·min-1。

1.1.3線(xiàn)性關(guān)系考察精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品5.45mg置25ml量瓶中，加甲醇適量溶解，再加甲醇稀釋至刻度、混勻，得標(biāo)準(zhǔn)貯備液。精密吸取此標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.2，0.5，1.0，2.0，4.0，5.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，得到6個(gè)不同濃度的對(duì)照溶液，分別精密吸取20μl，注入液相色譜儀中測(cè)定，記錄峰面積，并以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程：

Y=-4215+1660625X(r=0.9998)

以峰面積（Y）-進(jìn)樣量（X）作圖，得一直線(xiàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在0.0872～2.18μg范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿的峰面積與進(jìn)樣量有良好的線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1線(xiàn)性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

1.1.4精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照溶液20μl（濃度0.0872mg/ml）重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定、記錄鹽酸小檗堿峰面積，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

實(shí)驗(yàn)表明，精密度良好。

1.1.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品供試液，分別于0，4，8，12，16h分別進(jìn)樣20μl，測(cè)定，記錄鹽酸小檗堿的峰面積，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

實(shí)驗(yàn)表明，樣品供試液在16h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

1.1.6供試品溶液的制備將黃連樣品于60℃烘干，粉碎，過(guò)三號(hào)篩，粉末取約0.1g，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加鹽酸-甲醇（1∶100）95ml，置60℃恒溫水浴中加熱15min，取出，用超聲波清洗機(jī)超聲30min，取出，放置過(guò)濾，用鹽酸-甲醇（1∶100）定容，混勻，用0.2μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作樣品液。

1.1.7樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，用外標(biāo)法計(jì)算含量。

1.2黃連根莖總生物堿的含量測(cè)定

1.2.1儀器與試藥

儀器：紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(島津公司UV-1604型)。

試藥：乙醇、甲醇、氧化鋁等均為分析純。

1.2.2方法供試液制備及測(cè)定：黃連樣品低溫烘干，粉碎，過(guò)三號(hào)篩，樣品粉末置干燥器中備用。精密稱(chēng)取黃連粉末約0.8g，置索氏提取器中，用鹽酸甲醇（1∶100）適量加熱回流提取，至提取液無(wú)色，將提取液適當(dāng)濃縮，轉(zhuǎn)移到50ml量瓶中，用鹽酸-甲醇（1∶100）少量洗滌容器，洗滌液并入提取液中，并加至刻度，照柱色譜法［2］(《中國(guó)藥典》2000版Ⅰ部附錄32試驗(yàn))，精密量取5ml，加于已處理好的氧化鋁柱(玻璃柱，內(nèi)徑約9mm，中性氧化鋁5g，濕法裝柱，用30ml乙醇預(yù)洗)上，用乙醇25ml分次洗脫，收集洗脫液，置50ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，精密吸取2ml，置50ml量瓶中，加硫酸液(0.05mol/L)稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法［2］(附錄26)，在345nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C20H17NO4·HCl的吸收系數(shù)為728計(jì)算，即得：黃連中總生物堿的含量以鹽酸小檗堿計(jì)算，公式如下:

總生物堿百分含量（%）=A×50ml×50ml×50ml728×100×2ml×5ml×w×100%

2結(jié)果

2.1黃連根莖中的鹽酸小檗堿的含量變化結(jié)果見(jiàn)表4及圖1～2。

從表4和圖1可見(jiàn)，2年生黃連根莖中鹽酸小檗堿的含量在8月底和9月中旬達(dá)到全年的最高峰，12月底其根莖中的鹽酸小檗堿含量是當(dāng)年鹽酸小檗堿含量的第2個(gè)高峰值，在開(kāi)花結(jié)實(shí)期的4月，黃連根莖中的小檗堿含量幾乎為全年最低，這是否與開(kāi)花結(jié)實(shí)期消耗大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有關(guān)。

由表4和圖2可見(jiàn)，3年生黃連根莖中的有效成分鹽酸小檗堿的含量變化趨勢(shì)為6月底達(dá)到最高峰，在開(kāi)花結(jié)實(shí)期的四月，黃連根莖中的小檗堿含量幾乎為全年最低，到5月中旬逐漸升高，其余各月鹽酸小檗堿的含量基本一致。

表4黃連根莖藥材不同時(shí)間有效成分鹽酸小檗堿含量變化規(guī)律（略）

圖1兩年生黃連不同時(shí)間的小檗堿含量（略）

圖23年生黃連不同時(shí)間的小檗堿含量（略）

由表4可見(jiàn)，4年生黃連和5年生黃連根莖中鹽酸小檗堿的含量為所測(cè)各年份中含量最高，此兩年中的鹽酸小檗堿的含量尤以9～10月為最高，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)進(jìn)行回歸分析，4年生根莖中鹽酸小檗堿的含量與采收日期間呈二次回歸關(guān)系，擬合的方程式為：

Y=5.64+0.591X-0.029X2r=0.86

5年生黃連根莖中鹽酸小檗堿的含量與采收日期也呈二次回歸關(guān)系，擬合的方程為：

Y=6.22+0.38X-0.017X2r=0.74

2.2黃連根莖中總生物堿的含量動(dòng)態(tài)結(jié)果見(jiàn)圖3及表5。

圖3黃連根莖不同年份總生物堿的含量變化（略）

從表5和圖3可見(jiàn)，黃連不同年份根莖中的總生物堿含量呈逐年上升的趨勢(shì)，10～11月含量最高，尤以5年生黃連為最高。在2～5年生黃連根莖中，以10～11月黃連根莖中的小檗堿含量達(dá)到最高值，其中尤以5年生黃連的鹽酸小檗堿含量為最高。這與黃連干物質(zhì)積累也是在10月左右達(dá)到最高峰的情況近似。

3討論

鹽酸小檗堿和總生物堿是黃連生理活動(dòng)的次生代謝產(chǎn)物［3］，我們的研究結(jié)果表明，黃連在生育后期其干物質(zhì)和次生代謝產(chǎn)物的含量顯著增加。黃連生育后期的生理活動(dòng)可能有利于黃連次生代謝產(chǎn)物的形成。

表5黃連根莖中總生物堿的含量動(dòng)態(tài)（略）

從質(zhì)量角度確定黃連采收的主要依據(jù)是黃連根莖中的鹽酸小檗堿和總生物堿的積累規(guī)律。研究結(jié)果表明：黃連的最佳采收期為9～11月的5年生為最高，建議作為最佳采收期，這與傳統(tǒng)習(xí)慣的采收期相吻合。說(shuō)明幾百年來(lái)石柱縣黃連產(chǎn)區(qū)形成的黃連采收期能夠保證黃連的質(zhì)量，具有科學(xué)依據(jù)。

有關(guān)黃連根莖中鹽酸小檗堿的含量研究較多［3，4］，各家研究結(jié)果有一定差異，這可能與取樣和不同的生態(tài)地理環(huán)境有關(guān)。對(duì)黃連總生物堿的含量動(dòng)態(tài)研究鮮有報(bào)道，我們認(rèn)為，對(duì)黃連根莖中有效成分的積累規(guī)律研究應(yīng)與總生物堿相結(jié)合來(lái)作為黃連藥材的質(zhì)量指標(biāo)的依據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】

［1］孔文彥,黃正方.實(shí)用黃連栽培技術(shù)［M］.重慶：重慶出版社，1984：3.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：附錄32，附錄26.

［3］彭強(qiáng),劉汗蘭,周大衛(wèi).黃連不同生長(zhǎng)期小檗堿含量的變化［J］.中藥材,1989,2(3):7.

［4］吳春紅,謝穎.RP-HPLC法測(cè)定黃連中小檗堿含量的研究［J］.華西醫(yī)學(xué),2006,21(3):467.