天參益智膠囊的藥理功能探析論文
時(shí)間:2022-01-19 08:46:00
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【摘要】目的研究天參益智膠囊對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響,探討其抗衰老的作用及機(jī)理。方法采用Morris水迷宮進(jìn)行行為學(xué)測試,以GSH-Px,SOD,AChE,ChAT,MDA為指標(biāo),觀察其對(duì)衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。結(jié)果不同劑量的天參益智膠囊均能提高小鼠學(xué)習(xí)記憶成績,使小鼠血清中GSH-Px,SOD及ChAT活性升高,AChE活性及MDA含量降低。結(jié)論天參益智膠囊對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力下降有明顯保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與其抗氧化和抑制乙酰膽堿酯酶作用密切相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】天參益智膠囊D-半乳糖學(xué)習(xí)記憶衰老
天參益智膠囊是在中醫(yī)抗衰老經(jīng)驗(yàn)方的基礎(chǔ)上研制而成,該復(fù)方由天麻、人參等藥材組成,具有補(bǔ)氣健腦、扶正固本、開竅益智等功能。
本論文旨在探討該復(fù)方對(duì)抗衰老、改善記憶的作用機(jī)制,選用了D-半乳糖衰老動(dòng)物模型,采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測試,檢測體內(nèi)相關(guān)指標(biāo)以驗(yàn)證其療效并闡明其可能的作用機(jī)制。
一、材料與儀器
1.1動(dòng)物昆明種小鼠,雌、雄各半,體重(22±2)g,由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):SCXK(黔)2004-0001。普通飼料飼養(yǎng),清潔級(jí),光照時(shí)間12/12,室溫22~23℃。
1.2儀器Morris水迷宮;BI2000圖像分析系統(tǒng)(成都泰盟公司產(chǎn)品)。
1.3藥品與試劑天參益智膠囊(由貴陽醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院分析化學(xué)教研室提供);D-半乳糖(美國Amresco公司);健腦膠囊(青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司)。
二、方法
2.1動(dòng)物分組、造模方法及給藥方案昆明種小鼠(雌、雄各半)進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),直到定向航行實(shí)驗(yàn)成績穩(wěn)定為止(連續(xù)兩天成績差異無顯著性)。將經(jīng)Morris水迷宮篩選合格的84只小鼠隨機(jī)分為6組(n=14),分別為正常對(duì)照組(NS14ml?kg-1)、模型組(NS14ml?kg-1)、復(fù)方高、中、低(天參益智膠囊1.52,0.61,0.30g?kg-1)劑量組及陽性對(duì)照組(健腦膠囊,0.03g?kg-1)。除正常對(duì)照組外,其余各組均采用皮下注射5%D-半乳糖溶液0.5ml?kg-1造模,然后連續(xù)灌胃給藥45d。
2.2Morris水迷宮行為測試水迷宮由圓形水池、安全島和記錄系統(tǒng)3部分組成。水池直徑130cm,高60cm,水池內(nèi)壁涂成乳白色。池中水深30cm,水溫保持在(24±2)℃,用奶粉使池水渾濁。池壁標(biāo)記4個(gè)入水點(diǎn),將水池分為四個(gè)均等的象限,池壁上固定位置貼有一幅畫作為參照物。安全島置于第1象限中點(diǎn),直徑10cm,高28cm,距水面2cm。記錄系統(tǒng)為成都泰盟公司提供的BI2000系統(tǒng)的行為學(xué)檢測模塊。從第39天開始進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn),連續(xù)測試5d。將小鼠從安全島之外的3個(gè)象限任一入水點(diǎn)面向池壁放入置有安全島的水池中,經(jīng)BI2000圖像處理系統(tǒng)自動(dòng)記錄小鼠在120s內(nèi)找到安全島的時(shí)間(逃避潛伏期)和游泳路徑(搜索距離),并讓小鼠在島上停留10s。超過120s找不到安全島的記為120s,并引導(dǎo)小鼠上安全島。定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,間隔1天,拆除安全島,將小鼠從同一入水點(diǎn)放入池中,記錄小鼠在120s內(nèi)尋找安全島過程中在原安全島所在象限內(nèi)的搜索時(shí)間(空間探索時(shí)間)及探索距離。
2.3生化指標(biāo)測定行為學(xué)測試結(jié)束后,小鼠眼眶采血,分離血清,測定小鼠血清中GSH-Px,SOD,AChE,ChAT活性及MDA含量。
2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)處理采用±s表示,組間均數(shù)比較采用方差分析和t檢驗(yàn)。
三、結(jié)果
3.1對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響對(duì)比模型組和給藥組小鼠空間探索實(shí)驗(yàn)成績,顯示小鼠給藥后學(xué)習(xí)記憶水平提高,探索時(shí)間縮短、探索距離減小,與模型組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01),提示天參益智膠囊對(duì)衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有明顯的改善作用。結(jié)果見表1。表1小鼠空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)與正常對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;n=14
3.2對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠血清中GSH-Px和SOD活性及MDA含量的影響模型組小鼠血清中GSH-Px和SOD活性降低,MDA含量升高,與正常對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。灌胃給藥后小鼠血清中GSH-Px和SOD活性升高,MDA含量降低,與模型組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01),提示天參益智膠囊具有較明顯的抗氧化和減弱自由基損傷的作用。結(jié)果見表2。表2對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠血清中GSH-PX和SO(略)與正常對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;n=14
3.3對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠血清中AChE和ChAT活性的影響模型組小鼠血清中ChAT活性降低,AChE活性升高,與正常對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。灌胃給藥后小鼠血清中ChAT活性升高,AChE活性降低,與模型組比較有顯著性差異(P<0.05或P<0.01),提示天參益智膠囊具有一定的抑制乙酰膽堿脂酶活性。結(jié)果見表3。表3對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠血清中AChE和ChAT活性的影響(略)與正常對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;n=14
四、討論
本實(shí)驗(yàn)用Morris水迷宮觀察了天參益智膠囊對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。結(jié)果表明,天參益智膠囊明顯改善了該模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,表現(xiàn)為明顯縮短了空間探索實(shí)驗(yàn)中小鼠的探索時(shí)間和探索距離。
GSH-Px和SOD是體內(nèi)重要的抗氧化酶類,在機(jī)體抗氧化損傷中起著重要作用。MDA是體內(nèi)自由基對(duì)不飽和脂肪酸引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終分解產(chǎn)物,其含量的多少可以反映體內(nèi)自由基的多少及其反應(yīng)強(qiáng)度。MDA含量的增加可能是體內(nèi)自由基生成異?;驒C(jī)體抗氧化保護(hù)系統(tǒng)的抗氧化能力減弱。天參益智膠囊明顯提升了D-半乳糖所致衰老小鼠血中這兩種酶的活性,同時(shí)降低了該模型小鼠血中MDA的含量,說明其具有較明顯的抗氧化活性。wWw.gWyoO
中樞膽堿能系統(tǒng)與學(xué)習(xí)記憶功能密切相關(guān)。本研究顯示天參益智膠囊能顯著提高D-半乳糖所致衰老小鼠血中ChAT活性,抑制AChE活性,提示天參益智膠囊改善中樞膽堿能系統(tǒng)功能是其增強(qiáng)模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的基礎(chǔ)。
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示天參益智膠囊抗衰老的作用機(jī)制與其抗氧化作用和乙酰膽堿酯酶抑制活性有關(guān)。
【參考文獻(xiàn)】
[1]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004:33.
[2]MorrisRG,GarrudP,RawlinstJN,etal.Placenavigationimpairedinratswithhippocampallesions[J].Nature,1982,297(5868):681.
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