導(dǎo)語(yǔ)：飛蓬提取工藝分析論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢(xún)客服老師，歡迎參考。

1儀器與材料

1.1儀器日本島津高效液相色譜儀（N2000色譜工作站）；UV－1700紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；超聲波發(fā)生器（昆山市超聲儀器有限公司）；HHSY21-Ni4-C型電熱恒溫水浴鍋（北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）。

1.2材料飛蓬干燥全草（采自長(zhǎng)白山，經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)鄧明魯教授鑒定）；野黃芩苷對(duì)照品，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（供含量測(cè)定用）購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；其余試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1飛蓬總黃酮含量測(cè)定

2.1.1對(duì)照品溶液制備精密稱(chēng)取干燥至恒重的無(wú)水蘆丁對(duì)照品5.05mg置于25ml容量瓶中，加適量70%的乙醇超聲處理5min，用乙醇定容至刻度，搖勻，得濃度為0.202mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.1.2供試品溶液制備精密稱(chēng)取樣品干燥粉末1g，置于50ml容量瓶中，加適量70%的乙醇超聲處理5min，用乙醇定容至刻度，搖勻，作為供試品液。

2.1.3測(cè)定波長(zhǎng)選擇精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液0.5ml和樣品溶液1ml于具塞試管中，精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6min，再加入10%硝酸鋁0.3ml，搖勻，放置6min，加4%NaOH溶液4ml，用70%的乙醇定容至10ml，搖勻，放置10～15min。以相同試劑為空白。在400～900nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，記錄最大吸收波長(zhǎng)為510nm，見(jiàn)圖1。

圖1蘆丁和飛蓬樣品最大吸收波長(zhǎng)圖

2.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密吸取標(biāo)準(zhǔn)蘆丁溶液0.0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分別加入6支具塞試管中，按照“2.1.3”項(xiàng)操作，于510nm處測(cè)定吸光度。并以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，蘆丁對(duì)照品溶液濃度（C,mg/ml）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A＝11.227C-0.013，r＝0.9999（n=6），見(jiàn)圖2。結(jié)果表明：在0.101～1.01mg范圍內(nèi)蘆丁對(duì)照品顯色后的吸光度與濃度呈良好線性關(guān)系。

圖2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.1.5供試品含量測(cè)定取供試品溶液0.2ml于具塞試管中，按照“2.1.3”項(xiàng)下操作，于510nm處測(cè)定吸光度,然后根據(jù)線性方程計(jì)算其總黃酮的含量。

2.2飛蓬燈盞乙素含量測(cè)定

2.2.1色譜條件ChmmasilC18柱(5μm，4.6mm×150mm)；測(cè)定波長(zhǎng)λ＝335nm（依衛(wèi)生部頒發(fā)的藥品標(biāo)準(zhǔn)）；流動(dòng)相：甲醇－0.1％磷酸（40：60）；流速1.0ml／min。

2.2.2對(duì)照品溶液制備精密稱(chēng)取野黃芩苷對(duì)照品1.05mg，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，過(guò)濾，搖勻，制成濃度為0.105mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

2.2.3供試品溶液制備精密稱(chēng)取樣品干燥粉末1g，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，過(guò)濾，搖勻，作為供試品液。

2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密量取對(duì)照品溶液2，4，6，8，10，12，14，16μl注入液相色譜儀，測(cè)定野黃芩苷色譜峰的面積。并以吸收峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（C,μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=1359349.2409C-68257.6517，r=0.9999（n=8），結(jié)果表明野黃芩苷濃度在0.21～1.68μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.2.5供試品含量測(cè)定精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，見(jiàn)圖3。

2.3提取工藝的優(yōu)選

2.3.1提取溶劑的優(yōu)選稱(chēng)取100g飛蓬，分別加入14倍量不同的提取溶劑，80℃水浴恒溫提取2h，抽濾，定容，分別按“2.1”測(cè)定總黃酮含量，按“2.2”項(xiàng)中方法測(cè)定燈盞乙素含量，結(jié)果見(jiàn)表1。表1不同提取溶劑的總黃酮和燈盞乙素含量

從表1可知，堿液提取雖然得膏率很高，但是總黃酮和燈盞乙素含量低，且堿液提取加熱容易破壞黃酮類(lèi)化合物的母核。用水和乙醇作為提取溶劑，雖然得膏率相同，但是水提取的總黃酮和燈盞乙素含量較低，且由于其極性大，易把蛋白質(zhì)、糖類(lèi)等溶于水的成分浸提出來(lái)，使得提取液存放時(shí)，易腐敗變質(zhì)。乙醇提取的總黃酮和燈盞乙素含量高，因此為這3種溶劑中的最佳提取溶劑。下面的實(shí)驗(yàn)均采用乙醇作為提取溶劑，分別選取乙醇浸漬法、滲漉法、回流提取法、索氏提取法、超聲波法進(jìn)行提取。

2.3.2提取方法的優(yōu)選稱(chēng)取100g飛蓬，分別選取乙醇浸漬法、滲漉法、回流提取法、索氏提取法、超聲波法進(jìn)行提取，提取液抽濾，定容，分別按“2.1”項(xiàng)中方法測(cè)定總黃酮含量，按“2.2”項(xiàng)中方法測(cè)定燈盞乙素含量。不同方法提取的飛蓬總黃酮和燈盞乙素含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表2不同提取方法的總黃酮和燈盞乙素含量

經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，不同提取方法直接影響著醇提工藝中的總黃酮和燈盞乙素的測(cè)定結(jié)果。綜合考慮，用回流法提取飛蓬中的總黃酮和燈盞乙素是比較合適的方法。為此，設(shè)計(jì)正交，進(jìn)一步優(yōu)化采用乙醇回流法進(jìn)行提取的最佳醇提工藝。

2.3.3正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選飛蓬乙醇回流提取工藝根據(jù)實(shí)際情況，選擇乙醇濃度、溶媒量、提取時(shí)間、提取次數(shù)作為考察因素，每個(gè)因素選擇3個(gè)水平，因素水平表見(jiàn)表3。表3正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平按均勻取樣的規(guī)則取飛蓬100g，按L9（34）正交實(shí)驗(yàn)表安排實(shí)驗(yàn)，每組兩次平行實(shí)驗(yàn)，以總黃酮和燈盞乙素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，測(cè)定結(jié)果取平均值。結(jié)果見(jiàn)表4。表4正交實(shí)驗(yàn)方案與結(jié)果表5方差分析

以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，直觀分析結(jié)果表明A2>D3>C1>B2；以燈盞乙素提取率為考察指標(biāo)，直觀分析結(jié)果表明A2>D3>C3>B3，方差分析（表5）結(jié)果表明A因素和D因素對(duì)總黃酮及燈盞乙素的提取均具有顯著性影響，而B(niǎo)因素及C因素對(duì)提取結(jié)果沒(méi)有影響，為了節(jié)省時(shí)間和能源，最終確定工藝條件為A2B1C1D3，即以70%乙醇回流提取3次，1h/次，加醇量為每次14倍量。

2.4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)稱(chēng)取藥材按最佳工藝進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明總黃酮和燈盞乙素含量與正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果吻合，取得較好的結(jié)果，說(shuō)明該工藝可行。

3討論［4］

目前，提取工藝篩選試驗(yàn)中常用化學(xué)法、生物學(xué)法及有效浸出物綜合評(píng)價(jià)的方法，因此實(shí)驗(yàn)中僅用一種評(píng)價(jià)指標(biāo)篩選提取工藝條件往往不夠全面。而且飛蓬中含有多種黃酮類(lèi)化合物，采用紫外分光光度法測(cè)得結(jié)果通常是總黃酮的含量，并不能準(zhǔn)確反映燈盞乙素的含量，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)研究建立了燈盞乙素含量測(cè)定的HPLC法，提高了準(zhǔn)確度，穩(wěn)定可靠。

在實(shí)驗(yàn)中，曾試用了甲醇－0.5％磷酸溶液(45∶55)、甲醇－1％磷酸溶液(35∶65)、乙腈－1％冰醋酸(25∶75)為流動(dòng)相條件，經(jīng)反復(fù)比較，以正文所選流動(dòng)相重復(fù)性最佳，出峰時(shí)間較快，峰形尖銳、對(duì)稱(chēng)，且燈盞乙素主峰與雜質(zhì)峰明顯分離。

通過(guò)L9（34）正交實(shí)驗(yàn)，最終確定了飛蓬中總黃酮和燈盞乙素醇提工藝的最佳條件，并通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明該工藝，穩(wěn)定可靠，有效富集了飛蓬中總黃酮和燈盞乙素的含量，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)飛蓬中總黃酮有效部位奠定基礎(chǔ)。

【參考文獻(xiàn)】

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［2］吉林省中醫(yī)中藥研究所,長(zhǎng)白山自然保護(hù)區(qū)管理局,東北師范大學(xué)生物系.長(zhǎng)白山植物藥志［M］.長(zhǎng)春：吉林人民出版社，1982：1177.

［3］胡宇慧,張浩,張志鋒.飛蓬屬多種植物的化學(xué)成分含量研究［J］．藥物分析雜志,2005,25(1)：21.

［4］謝秀瓊.中藥新制劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社,2000：14.

【摘要】目的對(duì)飛蓬中總黃酮有效部位進(jìn)行研究，并以此為依據(jù)開(kāi)發(fā)中藥五類(lèi)新藥。方法以總黃酮和燈盞乙素提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選取不同提取溶劑和提取方法，利用正交實(shí)驗(yàn)L9（34）優(yōu)選乙醇回流提取飛蓬的工藝。結(jié)果飛蓬最佳提取工藝為70%乙醇回流提取3次，1h/次，加醇量為14倍量。結(jié)論優(yōu)選的工藝穩(wěn)定可行，可作為開(kāi)發(fā)飛蓬藥材資源的參考。

【關(guān)鍵詞】飛蓬總黃酮燈盞乙素正交試驗(yàn)