【摘要】本文對(duì)眼底熒光血管造影檢查技術(shù)進(jìn)行了基本介紹，對(duì)眼底熒光造影室護(hù)士應(yīng)具有的素質(zhì)進(jìn)行綜述，通過做好造影前的宣教、明確造影過程中可能出現(xiàn)的各項(xiàng)不良反應(yīng)及應(yīng)對(duì)措施等一系列方法來提高造影室護(hù)理人員的綜合素質(zhì)，以期更好地預(yù)防患者造影檢查過程中不良反應(yīng)的發(fā)生。

【關(guān)鍵詞】眼底熒光造影；不良反應(yīng)；護(hù)理；素質(zhì)

1眼底熒光血管造影的簡(jiǎn)介及重要性

眼底熒光血管造影（fundusfluoresceinangiography，F(xiàn)FA）是一項(xiàng)特殊的診斷眼底疾病的檢查方法，目前已廣泛應(yīng)用于對(duì)眼科疾病患者的診治中[1]。這項(xiàng)技術(shù)的原理是對(duì)患者靜脈注射熒光造影劑，利用熒光造影劑在眼睛血液循環(huán)過程中產(chǎn)生的熒光，采用眼底照相機(jī)動(dòng)態(tài)地記錄病人眼底血管的結(jié)構(gòu)及異常狀況，從而反映病人眼底血管的生理及病理變化[2]。眼底熒光血管造影檢查是眼科一種重要的形態(tài)檢查，可以發(fā)現(xiàn)眼底鏡難以確定的視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜病變[3]，能夠盡快了解到視網(wǎng)膜的血液循環(huán)情況及血管狀態(tài)，為臨床提供重要診斷參考[4]。但是熒光素鈉注入人體后可能發(fā)生一系列不良反應(yīng)，如惡心、嘔吐、皮疹、過敏性休克，嚴(yán)重的甚至威脅生命[5]。因此，在實(shí)施FFA前應(yīng)向病人做好細(xì)致的溝通及有效的護(hù)理，消除病人的疑慮和緊張心理，醫(yī)護(hù)人員熟悉FFA容易引起的各類不良反應(yīng)的表現(xiàn)及應(yīng)對(duì)方法，有利于減少不良反應(yīng)的發(fā)生、提高病人的檢查配合度，因此提高眼底熒光造影室護(hù)士的自身素質(zhì)有著非常重要的意義。

2眼底熒光造影室護(hù)士應(yīng)具有的素質(zhì)

眼底熒光造影檢查存在一定的潛在風(fēng)險(xiǎn)，熒光造影室護(hù)士的技術(shù)水平、護(hù)理經(jīng)驗(yàn)及對(duì)搶救病人的熟練程度直接關(guān)系病人的安危及不良反應(yīng)的發(fā)生幾率，為減少不良反應(yīng)的發(fā)生，提高造影檢查效果，必須科學(xué)、嚴(yán)格、規(guī)范地對(duì)造影室進(jìn)行管理，并提高造影室護(hù)理人員的專業(yè)素質(zhì)水平。2.1遵循護(hù)理原則。造影前應(yīng)嚴(yán)格遵循“三查七對(duì)”制度，檢查藥液有無破損、變質(zhì)，有效期，觀察藥物是否有渾濁或顆粒物。充分告知患者眼底熒光造影檢查的意義，不良反應(yīng)及禁忌癥，患者知情同意書上患者及家屬雙人簽字，為患者做造影編號(hào)，記錄患者電話，疾病種類，住址，對(duì)患者基本情況進(jìn)行造冊(cè)登記。2.2做好造影前的宣教。2.2.1對(duì)患者進(jìn)行飲食護(hù)理。由于空腹患者接受眼底造影檢查更易發(fā)生嘔吐、惡心、暈厥等不良反應(yīng)，因此造影前應(yīng)做好充分告知患者不能空腹進(jìn)行造影檢查，鼓勵(lì)患者正常進(jìn)食后再進(jìn)行檢查。檢查前，囑咐患者清淡飲食，盡量不要食用刺激、辛辣及易導(dǎo)致腹脹的食物，也不要暴飲暴食，患者應(yīng)在機(jī)體處于正常的狀況下接受檢查。2.2.2對(duì)患者進(jìn)行常規(guī)檢查。詢問病人既往史、藥物過敏史、全身疾病史及家族史，對(duì)孕婦及嚴(yán)重過敏體質(zhì)的患者必須禁止其做造影檢查以防止不良事件的發(fā)生。2.2.3對(duì)患者進(jìn)行心理護(hù)理。造影前向患者及其家屬詳細(xì)介紹檢查的流程及造影時(shí)需要注意的事項(xiàng)。由于造影是在暗室進(jìn)行，患者易出現(xiàn)緊張、恐懼、無助的心理，因此應(yīng)主動(dòng)與患者進(jìn)行互動(dòng)，給予患者鼓勵(lì)與肯定，讓患者情緒穩(wěn)定，配合醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行造影檢查。還應(yīng)告知患者散瞳后出現(xiàn)視物模糊及畏光屬于正?，F(xiàn)象，6～8h后癥狀消失，以消除患者的疑慮、緩解患者的緊張、無助情緒，增強(qiáng)患者的安全感[6]。2.3搶救藥物及設(shè)備的準(zhǔn)備。造影室內(nèi)要備齊各項(xiàng)搶救物品及搶救器械，如血壓計(jì)、聽診器、供氧管、輸液器、刀片、頭皮針、手電筒、電動(dòng)吸引器、氧氣袋、心內(nèi)注射針等及急救藥品，如阿托品、鹽酸腎上腺素、異丙腎上腺素、多巴胺、尼克剎米、鹽酸洛貝林、地塞米松、25%葡萄糖、0.9%NS等。由造影室護(hù)士每天清點(diǎn)、審核并記錄，保證搶救儀器設(shè)備均處于備用狀態(tài)，搶救藥品無過期情況。造影室門口備用平車，便于轉(zhuǎn)送患者時(shí)使用，造影室內(nèi)有完善的患者過敏性休克搶救操作流程，眼科醫(yī)護(hù)人員要做到全員掌握。2.4明確造影過程中可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)及應(yīng)對(duì)措施。2.4.1胃腸道刺激反應(yīng)、惡心、嘔吐與應(yīng)對(duì)措施。造影過程中常常出現(xiàn)胃腸道刺激反應(yīng)、惡心、嘔吐等一過性的不良反應(yīng)，一般發(fā)生在熒光素鈉注入后的30～80秒內(nèi)，此時(shí)囑咐患者深呼吸數(shù)次，精神放松，休息片刻，同時(shí)按掐患者的內(nèi)關(guān)穴，數(shù)秒后癥狀即自行緩解。2.4.2皮膚瘙癢、蕁麻疹與應(yīng)對(duì)措施。如果遇到病人出現(xiàn)皮膚瘙癢、蕁麻疹，若癥狀較輕可給予患者口服抗過敏藥撲爾敏4mg，若癥狀較為嚴(yán)重，需要給患者注射5mg地塞米松。吸氧對(duì)癥處理后大多數(shù)患者當(dāng)天瘙癢癥狀即消失，皮疹逐漸減退[7]。2.4.3呼吸困難、暈厥，胸悶、氣促與應(yīng)對(duì)措施極少數(shù)患者在造影開始后出現(xiàn)呼吸困難、暈厥，胸悶、氣促等不良反應(yīng)，此時(shí)應(yīng)立即停止檢查，醫(yī)護(hù)人員輔助患者取平臥體位，就地?fù)尵?，遵醫(yī)囑給予患者靜脈注射地塞米松、腎上腺素，同時(shí)給予氧氣吸入5L/min，密切關(guān)注患者血壓、脈搏的變化情況[8]。必要時(shí)給患者建立靜脈通道并請(qǐng)急診內(nèi)科或麻醉科醫(yī)師協(xié)助搶救。2.5造影結(jié)束后的健康宣教。造影檢查結(jié)束后叮囑患者在造影室內(nèi)休息30min以進(jìn)一步觀察病人情況，確定無不良反應(yīng)后方可讓其離去。造影檢查完后應(yīng)注重交代患者因散瞳及注射熒光造影劑會(huì)導(dǎo)致暫時(shí)的視覺改變，視物模糊，流淚、畏光等現(xiàn)象，叮囑病人多休息，避免強(qiáng)光，禁止駕車等活動(dòng)。熒光素鈉染料大部分經(jīng)腎臟代謝隨尿液快速排出體外，因此注射熒光素鈉數(shù)小時(shí)后尿會(huì)變黃，必須向病人及家屬解釋這是正常現(xiàn)象，以消除患者的恐懼心理。指導(dǎo)患者檢查結(jié)束當(dāng)天大量飲白開水，促進(jìn)體內(nèi)的熒光素盡快排出體外，通常24h內(nèi)造影劑即可從患者體內(nèi)完全排出。2.6加強(qiáng)責(zé)任心。護(hù)理職業(yè)的高風(fēng)險(xiǎn)性質(zhì)決定了從業(yè)人員必須具備高度的責(zé)任心，一個(gè)優(yōu)秀的造影室護(hù)士必須具有高穩(wěn)定性、高自律性、高慎獨(dú)性，眼睛是一盞明燈，作為一名造影室護(hù)士更應(yīng)具備時(shí)刻維護(hù)患者生命和安全的責(zé)任心。

1常用照明方法與特點(diǎn)

常用的電光源主要有熱致發(fā)光光源，氣體放電發(fā)光光源，固體發(fā)光光源等三類。

熱致發(fā)光光源如白熾燈，它利用斯涅藩－波爾茲曼定律，即物體溫度越高，它幅射出的能量越大。這可用式（1）表示。

E=μ×ξ×T4（1）

式中：E為物體在溫度T時(shí)單位面積和單位時(shí)間內(nèi)的紅外幅射總能量；

圖1

[摘要]在原子熒光的含量分析過程中，由于生物樣品成分復(fù)雜，對(duì)于不同種類的生物樣品，其前處理方法的多樣性對(duì)分析測(cè)試的效率和精密度均有影響，并有多種進(jìn)樣技術(shù)被用于生物樣品的分析測(cè)試中。本文歸納總結(jié)了目前原子熒光光譜技術(shù)中常見的生物樣品如綠葉植物、果蔬、糧食制品、酒類、動(dòng)物源制品等生命應(yīng)用等領(lǐng)域的常見生物類樣品的預(yù)處理及儀器進(jìn)樣與聯(lián)用技術(shù)，旨在為與生物樣品相關(guān)的原子熒光分析提供參考。

[關(guān)鍵詞]生物樣品；原子熒光；前處理；消解；進(jìn)樣技術(shù)

原子熒光光譜分析技術(shù)基于不同原子的波長(zhǎng)輻射特異性，經(jīng)熒光強(qiáng)度對(duì)樣品進(jìn)行定量分析，具有高效率和高準(zhǔn)確率的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于污染檢測(cè)，食品科學(xué)，生命科學(xué)，地質(zhì)學(xué)等領(lǐng)域[1-3]。目前，我國已將利用原子熒光光譜分析技術(shù)檢測(cè)食品中的重金屬含量列為國家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)之一。在原子熒光光譜分析領(lǐng)域，所涉及的生物樣品種類繁多，且不同種類的樣品如植物、肉類、糧食、糧油、毛發(fā)等的有機(jī)物組成和元素含量有較大差別，在實(shí)際測(cè)試時(shí)，選用有針對(duì)性的樣品預(yù)處理方法與進(jìn)樣預(yù)處理聯(lián)用技術(shù)，有利于提高測(cè)試效率，降低基體干擾，減少儀器損耗。不同于常規(guī)巖石，礦石，沉積物，土壤等固體樣品，為了保證樣品的代表性和結(jié)果的可靠性，在樣品消解前，需有針對(duì)性地進(jìn)行選材，干燥，勻漿和研磨等預(yù)處理流程。此外，生物樣品含有大量有機(jī)物，目前采用的前處理消解方法有直接稀釋法、萃取法、干灰化法、酸溶法、加壓分解法、微波消解法和酶分解法等。其中，低溫干灰化法和高溫干灰化法中高溫或干燥的處理過程，會(huì)使微量金屬離子損失嚴(yán)重，導(dǎo)致各微量元素的回收率降低。一般采用酸溶法破壞樣品中的有機(jī)物，釋放被測(cè)元素，以利于后續(xù)測(cè)定。常見的酸溶法有敞口酸消解法、加壓消解法和微波消解法等。針對(duì)不同類型的生物樣品，在消解前，需要進(jìn)行預(yù)處理。

1樣品預(yù)處理

1.1植源性樣品

植物根、莖、葉樣品經(jīng)清洗，低溫干燥，研磨，過篩后，使用酸溶法溶解。在敞開酸溶法中，一般采用硝酸+高氯酸組合，加熱溶解樣品。使用微波消解時(shí)，一般采用硝酸+過氧化氫溶解樣品。陳雙等[4]優(yōu)化了微波消解茶葉的硝酸和過氧化氫最佳含量，提出硝酸8mL和過氧化氫1mL進(jìn)行消解時(shí)，可將0.2000g茶葉完全消解，且熒光強(qiáng)度較好。蔬菜、水果類樣品，將樣品清洗干凈后，將樣品分為皮、果肉和種子，果肉可用攪拌機(jī)打成糊狀并勻漿；或?qū)⒐?，果肉，種子分別用烘箱低溫烘干至恒重，粉碎研磨后備用。大米，淀粉類糧食樣品，直接研磨，過篩后，使用酸溶法溶解。酒類樣品，將樣品先進(jìn)行低溫消解，揮發(fā)酒精，整個(gè)過程中應(yīng)注意防止樣品沸騰以致碳化。在樣品剩余1~2mL時(shí)加入硝酸進(jìn)行常規(guī)酸溶法消解。糧油類樣品，可直接稱取樣品后進(jìn)行消解處理。沈佳等[1]在使用原子熒光光譜法測(cè)定山茶油中的痕量砷時(shí)發(fā)現(xiàn)，使用濕法消解過程中，樣品反應(yīng)劇烈，易有泡沫溢出且易爆沸，且樣品容易發(fā)生碳化。經(jīng)優(yōu)化后發(fā)現(xiàn)消化0.30g樣品油，使用硝酸6mL和過氧化氫4mL進(jìn)行消解時(shí)，消解最完全，測(cè)定結(jié)果的精密度較為理想。開建榮[6]等將大米用粉碎機(jī)粉碎，過100目篩，稱取適量過篩后的大米粉分別按照10毫升混合酸(硝酸與高氯酸體積比為4︰1)濕法消解和6mL硝酸混合2mL過氧化氫微波消解進(jìn)行前處理，測(cè)試的結(jié)果表明，微波消解試劑消耗量少，耗時(shí)短，過程繁瑣，從可量化的指標(biāo)來看，微波消解優(yōu)于濕法消解。此外，對(duì)于菌類樣品，金針菇等攜帶培養(yǎng)基質(zhì)的鮮品，需去除根部培養(yǎng)基；雙孢蘑菇、草菇、香菇等鮮品，需將帶有培養(yǎng)基質(zhì)或覆土的菇腳部分去除，并用干凈紗布或毛刷輕輕擦去樣品表面的附著物。水分含量在15%以上的干制食用菌樣品，清洗完后需在60~70℃下烘至適宜粉碎(用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品除外)，同時(shí)測(cè)定烘干前后樣品水分。食用菌干品，用干凈毛刷或紗布除去表面附著物，不可水洗。經(jīng)碎樣后進(jìn)行常規(guī)酸溶法消解。

摘要：電子鎮(zhèn)流器由于具有節(jié)能，發(fā)光無頻閃和易于實(shí)現(xiàn)聯(lián)網(wǎng)控制（如IEC929附錄E的有關(guān)要求）等一系列優(yōu)點(diǎn)，而得到了廣泛的應(yīng)用。熒光燈如采用適當(dāng)?shù)臒艚z預(yù)熱方法，對(duì)提高熒光燈的壽命有非常重要的作用。介紹了幾種常用的熒光燈燈絲預(yù)熱方法及特點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：熒光燈；燈絲電流預(yù)熱型；燈絲電壓預(yù)熱型

1常用照明方法與特點(diǎn)

常用的電光源主要有熱致發(fā)光光源，氣體放電發(fā)光光源，固體發(fā)光光源等三類。

熱致發(fā)光光源如白熾燈，它利用斯涅藩－波爾茲曼定律，即物體溫度越高，它幅射出的能量越大。這可用式（1）表示。

E=μ×ξ×T4（1）

［摘要］目的：合成(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物，并用于構(gòu)建妊娠相關(guān)血漿蛋白A固相時(shí)間分辨免疫熒光試劑。方法：用PVA作為載體結(jié)合BCPDAEu3+和生物素親和素，以雙抗體夾心法原理，結(jié)合生物素標(biāo)記抗體和包被抗體建立PAPPA時(shí)間分辨免疫熒光試劑，并進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)。結(jié)果：成功的合成了活性的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物，構(gòu)建PAPPA試劑檢測(cè)靈敏度為0.7mIU/L；批內(nèi)變異系數(shù)在3.89%～4.96%之間,批間變異系數(shù)在7.35%～9.27%之間。結(jié)論：合成的(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+復(fù)合物較高的反應(yīng)活性，可以用于多種試劑的構(gòu)建。構(gòu)建的PAPPA試劑靈敏度高，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。

［關(guān)鍵詞］妊娠相關(guān)血漿蛋白A；固相時(shí)間分辨熒光免疫；親和素—生物素—聚乙烯胺—4,7二氯磺苯基1，10啡羅啉2，9二羧酸—銪復(fù)合物；唐氏綜合征

DevelopADirectSolidPhaseLanthaneTimeresolvedFluoroimmunoassayReagentofPAPPAutilizingPVA

Abstract:ObjectiveTodevelopadirectsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassayreagentofPAPPAbysynthesizingacomplexof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+.MethodsPolyvinylamine(PVA)waslabeledwithbiotinstreptavidinandeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid(BCPDA).UsinglabeledPVAcomplex,WedesignedtwositesandwichtimeresolvedfluoroimmunoassayofPAPPAandevaluatedassaycharacteristicsofPAPPAkit.ResultsWesuccessedsynthesizingaconjuageteof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+andareagentofPAPPA.Detectionlimitsachievedwere0.7mIU/L.Thecalibrationcurvewaslinear010000mIU/L.Intraandinterassayimprecision(CV)was3.89%4.96%and7.35%9.27%.Recoverywas95.8%104.2%.ConclusionsTheconjugateof(SA)z(Bio)xPVA(BCPDA)yEu3+synthesiziedwasreactive,highlyfouorescent.Asortsofkitcouldbesynthesized,takingadvantageofit.ThereagentofPAPPAwaspotentiallysuitedforuseinclinicalwithhighlyanalyticalsensitivity.

Keywords:PregnancyassociatedplasmaproteinA;Directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay;StreptavidinbiotinPolyvinylamineeuropiumchelateof4,7bis(chlorosulfophenyl)1,10phenanthroline2,9dicarboxylicacid;Down''''sSyndrome

妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PregnancyassociatedplasmaproteinA，PAPPA)是一種高分子α2糖蛋白，20世紀(jì)70年代在孕婦血清中被發(fā)現(xiàn)［1］。在孕婦血中主要PAPPA是胎盤滋養(yǎng)層組織分泌，它是一種異源四聚體，由兩個(gè)分子量為200000~250000亞基構(gòu)成。PAPPA亞基和兩個(gè)嗜紅細(xì)胞主要基礎(chǔ)蛋白(Proformofeosinophilmajorbasicprotein)以二硫鍵結(jié)合而成［2］，在孕婦血中只存在微量游離單體PAPPA。PAPPA亞基由1547個(gè)多聚核苷酸構(gòu)成，包括1個(gè)拉長(zhǎng)的鋅指結(jié)構(gòu)，3個(gè)Lin—notch重復(fù)序列，以及5個(gè)短一致重復(fù)序列［3］。在體內(nèi)PAPPA是一種蛋白酶，主要針對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)和胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5(IGFBP5)起作用。胰島素樣生長(zhǎng)因子I(IGFI)在促進(jìn)細(xì)胞分裂和增殖起重要作用，它主要通過IGF1受體起作用，IGFI、II的生物活性受6個(gè)高親和性IDFBP調(diào)節(jié)［4，5］。PAPPA主要用于產(chǎn)前篩查唐氏綜合征(Down''''sSyndrome，DS)，迄今醫(yī)學(xué)上對(duì)此病尚無有效的治療和預(yù)防措施，只能通過產(chǎn)前篩查防止DS兒的出生，但目前開展的絨毛活檢,羊水穿刺及臍帶血穿刺均為侵入性檢查,有1%～3%的流產(chǎn)率,且方法繁瑣,出報(bào)告時(shí)間長(zhǎng),不適宜大范圍孕婦的普查,僅限于高危人群的診斷。大量報(bào)道認(rèn)為PAPPA可作為DS胎兒產(chǎn)前篩查的的標(biāo)志物。在15周～20周通過結(jié)合孕婦孕周、超聲診斷和FreeβHCG可以鑒別65%～75%，但要在3個(gè)月～6個(gè)月結(jié)合AFP、游離E3以及抑制素上述成分可鑒別85%～90%［6］。有文獻(xiàn)［7］報(bào)道PAPPA在急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)的早期診斷有一定的意義，PAPPA在ACS患者血清含量＜30mIU/L，同時(shí)結(jié)構(gòu)不同于孕婦體內(nèi)的PAPPA且存在動(dòng)態(tài)變化，必須利用超靈敏的方法進(jìn)行檢測(cè)。國內(nèi)PAPPA的診斷試劑大多為ELISA和PerkinElmer公司生產(chǎn)的解離增強(qiáng)時(shí)間分辨熒光免疫分析(dissociatedenhancelanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DELFIA)試劑，無國產(chǎn)PAPPA時(shí)間分辨熒光試劑。我們利用PVA(聚乙烯胺)作為載體結(jié)合BCPDA鑭系螯合物合成一種高靈敏的固相時(shí)間分辨熒光免疫分析(directsolidphaselanthanetimeresolvedfluoroimmunoassay,DSLFIA)試劑。為提高檢測(cè)靈敏度和克服BCPDA標(biāo)記抗體使抗體失活的問題，我們引入了生物素親和素(biotinstreptavidinsystem)系統(tǒng)。

【摘要】目的采用熒光光度法測(cè)定加替沙星的含量。方法在pH6.0的Britton-Robinson(B-R)緩沖溶液中,剛果紅能與鈣黃綠素生成配合物,使鈣黃綠素?zé)晒忖?加入加替沙星后,加替沙星與剛果紅可生成比鈣黃綠素-剛果紅更穩(wěn)定的配合物,使鈣黃綠素游離重現(xiàn)熒光。結(jié)果將該方用于片劑、粉針劑和尿液中加替沙星的測(cè)定,結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的紫外法一致。結(jié)論所用方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、靈敏。

【關(guān)鍵詞】鈣黃綠素;剛果紅;加替沙星

Fluorometrydeterminationofgatifloxacinwithcalcein-congored

【Abstract】ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofgatifloxacinbyfluorometry.MethodsThecomplexbetweencongored(CR)andcalceininpH6.0Britton-Robinson(B-R)buffersolutionquenchedfluorescenceofcalcein.Thecomplexofgatifloxacin-CRwasmorestablethanthatofcalcein-CR.Whengatifloxacinwasaddedintosystem,thecalceincouldbefreedanditsfluorescenceappearedagain.ResultsThismethodhadbeenappliedtothedeterminationofgatifloxacinintablet,injectionandurine,andtheresultswereveryclosetothoseobtainedbyusingUVmethodthatreported.ConclusionThismethodissimple,rapid,accurateandsensitive.

【Keywords】calcein;congored;gatifloxacin

加替沙星(gatifloxacin,AM-1155,GFLX)是新的第四代喹諾酮類抗生素藥物,具有抗菌譜廣,抗菌活性強(qiáng)的特點(diǎn)。它對(duì)革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、厭氧菌及衣原體均具有強(qiáng)大的抗菌作用[1]。加替沙星的測(cè)定方法有高效液相色譜法、熒光光度法、反相離子對(duì)色譜法、高效毛細(xì)管電泳法和紫外分光光度法[2~6]等。但利用鈣黃綠素-剛果紅熒光體系來測(cè)定加替沙星含量還未見報(bào)道。本文經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)剛果紅能與鈣黃綠素生成沒有熒光的配合物,使鈣黃綠素?zé)晒忖?加入加替沙星后,加替沙星與剛果紅反應(yīng)生成比鈣黃綠素-剛果紅更穩(wěn)定的配合物,游離出鈣黃綠素,釋放出熒光。以此為基礎(chǔ),建立了測(cè)定加替沙星的新方法。

摘要：熒光PCR定量技術(shù)(QuantitativePCR)是一種新興的基因定位技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)靈敏、簡(jiǎn)便、快速、不需使用放射性同位素，PCR完成后，通過測(cè)序儀的自動(dòng)識(shí)別即可對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行定量分析。在遺傳病，特別是一些以大片段缺失為主要突變類型的遺傳病診斷中，熒光PCR定量技術(shù)發(fā)揮了很重要的作用。

關(guān)鍵詞：熒光PCR定量技術(shù)；基因定位技術(shù)；遺傳病

在早期的遺傳學(xué)分子診斷中，主要依賴于SouthernBlotting，寡核苷酸雜交等技術(shù)。自1985年Saiki等首次描述聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)以來，PCR技術(shù)因?yàn)槠潇`敏特異，省時(shí)省力等諸多優(yōu)點(diǎn)而受到了人們的高度重視，已經(jīng)應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)和化學(xué)等基礎(chǔ)研究的各個(gè)領(lǐng)域，并且成為醫(yī)學(xué)臨床和法醫(yī)學(xué)研究的強(qiáng)有力分析工具之一[1-3]。然而，近幾年來，研究者們不再滿足于得知某一特異DNA序列的存在與否，他們更著眼于對(duì)其進(jìn)行精確的核酸定量。盡管把PCR作為一種定量的工具，在技術(shù)上還面臨著一些挑戰(zhàn)。熒光PCR基因定位技術(shù)是近十余年來興起的一種分子生物學(xué)技術(shù)，與其他定量方法相比，具有靈敏、簡(jiǎn)便、快速、不需使用放射性同位素的特點(diǎn)，在基因表達(dá)、傳染病和遺傳病的診斷等方面迅速得到了廣泛應(yīng)用。

一、熒光PCR基因定位技術(shù)的原理

熒光PCR定量技術(shù)的主要原理為：在PCR前，通過化學(xué)方法在引物的5’端通過共價(jià)方式連接一個(gè)熒光分子。由于在進(jìn)行PCR時(shí)，引物和待擴(kuò)增模板端的堿基不需要完全匹配，熒光PCR引物和普通PCR引物一樣，能夠?qū)Υ郎y(cè)模板進(jìn)行指數(shù)擴(kuò)增。擴(kuò)增完成后，根據(jù)PCR的產(chǎn)量，將熒光PCR產(chǎn)物直接或按一定比例稀釋后，和內(nèi)標(biāo)、載樣緩沖液混合，在自動(dòng)測(cè)序儀上進(jìn)行電泳。在自動(dòng)測(cè)序儀內(nèi)激光的激發(fā)下，PCR產(chǎn)物上的熒光分子發(fā)出固定波長(zhǎng)的激發(fā)光，被儀器內(nèi)的光電管捕獲。根據(jù)PCR產(chǎn)物從開始電泳到經(jīng)過光電管的時(shí)間，測(cè)序儀自動(dòng)計(jì)算出相應(yīng)產(chǎn)物的實(shí)際堿基數(shù)。不同泳道之間電泳速度的差別，通過各產(chǎn)物內(nèi)混合的內(nèi)標(biāo)校正。同時(shí)，測(cè)序儀也自動(dòng)標(biāo)出相應(yīng)產(chǎn)物的熒光強(qiáng)度，該數(shù)值就是熒光PCR定量技術(shù)對(duì)模板進(jìn)行定量與定位的基礎(chǔ)。與非定量PCR分析方法不同，熒光PCR的操作程序有助于評(píng)估污染的情況，即測(cè)出污染的程度，即使陰性對(duì)照產(chǎn)生了正的信號(hào)，只要這些信號(hào)比實(shí)驗(yàn)樣品的低得多，依據(jù)這樣的結(jié)果，至少可以推測(cè)出實(shí)驗(yàn)中所得出的信號(hào)是真實(shí)的。在一定程度上，熒光PCR消除了普通PCR過于敏感、假陽性率高的缺點(diǎn)。熒光PCR常用于研究發(fā)病機(jī)制、估計(jì)病毒的負(fù)荷量、監(jiān)測(cè)臨床治療進(jìn)展或用于診斷遺傳缺陷等。通過對(duì)靶基因量的檢測(cè)，將其與疾病的臨床表現(xiàn)、臨床分型以及各種標(biāo)志酶的值聯(lián)系起來，為疾病的診斷和藥物治療監(jiān)測(cè)提供科學(xué)的依據(jù)。目前，該技術(shù)已廣泛應(yīng)用于多種遺傳病的診斷和產(chǎn)前篩查，如地中海貧血、兒童型脊肌萎縮癥、杜氏/貝氏肌營養(yǎng)不良、胖骨肌萎縮癥和各種染色體病等。

二、熒光PCR基因定位技術(shù)在遺傳病診斷中的應(yīng)用

一、方法

1.材料

實(shí)驗(yàn)于2013年4～5月在連云港市第一人民醫(yī)院麻醉科、疼痛科、病理科、影像科、連云港市臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心與神經(jīng)外科實(shí)驗(yàn)室完成。健康清潔級(jí)三、四月齡家兔8只，雌雄各半，體重2.5～3.1kg，由徐州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供[許可證號(hào)：SCXX（蘇）2003～0003]。動(dòng)物置于安靜、溫暖（15～20℃）、避強(qiáng)光的環(huán)境下正常喂養(yǎng)48h，禁食24h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)中對(duì)動(dòng)物的處置符合中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部頒布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》的相關(guān)要求。儀器與試劑：?jiǎn)螌勇菪鼵T機(jī)(SiemensEmotion)、CM1100冰凍切片機(jī)(Leica，Germany)、ZX-004熒光顯微鏡，PM-30照相系統(tǒng)(Olympus，Japan)、丙泊酚（商品名：得普利麻；200mg/支，AstrZeneca，UK）、氯胺酮（0.1g/支，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司）、核黃(Sigma，USA)。

2.實(shí)驗(yàn)方法

核黃逆行神經(jīng)追蹤8只家兔按隨機(jī)數(shù)字表法分為2組。經(jīng)耳緣靜脈注射丙泊酚(2mg/kg)和氯胺酮(2mg/kg)麻醉家兔后，在CT引導(dǎo)下經(jīng)雙側(cè)C3/4關(guān)節(jié)突關(guān)節(jié)分別注射熒光逆行神經(jīng)追蹤劑核黃50ul(1g/L)，進(jìn)行神經(jīng)追蹤。組織標(biāo)本制備及形態(tài)學(xué)觀察：分別于術(shù)后18、36h再次麻醉家兔，經(jīng)心臟依次灌注生理鹽水300～400ml、20g/L多聚甲醛和12.5g/L戊二醛的0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.3）500～800ml、含50g/L蔗糖的磷酸緩沖液（4℃）500ml。隨后分別取雙側(cè)頸胸椎脊神經(jīng)節(jié)、雙側(cè)頸胸交感神經(jīng)節(jié)、腸系膜下神經(jīng)節(jié)、脊髓、頸椎間盤纖維環(huán)、頸椎間盤髓核、頸椎關(guān)節(jié)突滑膜、肩關(guān)節(jié)滑膜，在含200g/L蔗糖的磷酸緩沖液（4℃）中過夜后，行連續(xù)冰凍切片，分別做成2套，一套20um蒸餾水貼片，直接在OlympusZX-004熒光顯微鏡下觀察，拍攝光學(xué)相片。另一套7um行蘇木精-伊紅染色后置于熒光顯微鏡下，觀察有無新的發(fā)現(xiàn)。

3.主要觀察指標(biāo)

縣科技有限公司座落在縣鳳凰工業(yè)園區(qū)，占地110畝，分二期建設(shè)。目前，一期52畝建筑面積11000平方米已全部竣工，辦公樓、員工宿舍全部裝修完成，擬于12月中旬入駐，四棟廠房正在設(shè)備安裝，擬于12月底試生產(chǎn)。

一、關(guān)于縣科技有限公司原材料的來源

該公司生產(chǎn)用的主要原材料是硼廢料和熒光粉廢料。其中硼廢料來源于硼磁材在生產(chǎn)加工中成型、切削、磨床廢料，約占硼產(chǎn)量的30%；熒光粉廢料來源于稀土三基色制粉、涂料及廢管回收環(huán)節(jié)。該公司大多股東在冶金行業(yè)中工作多年，長(zhǎng)期與產(chǎn)品上下游的硼和熒光粉生產(chǎn)或需求企業(yè)建立了良好的合作關(guān)系，公司成立后，與市新世紀(jì)材料有限公司、黃山桂明廢舊金屬回收有限公司、贛州立強(qiáng)新材料有限責(zé)任公司、贛州海川工貿(mào)有限公司等企業(yè)分別簽訂了每月提供硼廢料100噸的長(zhǎng)期合作合同（四個(gè)公司合計(jì)每月400噸）。原材料供應(yīng)充分。

二、關(guān)于縣科技有限公司工藝技術(shù)

該公司是從事硼廢料及熒光粉廢料的生產(chǎn)企業(yè)，工藝技術(shù)采用氧化焙燒、鹽酸優(yōu)溶的硼生產(chǎn)的專有技術(shù)，以及低酸低溫回收熒光粉廢料的專有技術(shù)，其中關(guān)鍵設(shè)備有內(nèi)熱式回轉(zhuǎn)窯及外熱式回轉(zhuǎn)窯、雷蒙磨大型壓濾機(jī)等，均是硼廢料及熒光粉廢料綜合利用的專用設(shè)備。

從上述情況看，該公司是專業(yè)從事硼廢料及熒光粉廢料綜合利用的生產(chǎn)企業(yè)，建設(shè)年處理硼廢料5000噸、熒光粉廢料10000噸，綜合回收生產(chǎn)氧化鐠、氧化鋱、氧化銪等高純稀土氧化物1500噸，無論是原料來源，還是工藝技術(shù)以及經(jīng)營管理等方面，都有本身的優(yōu)勢(shì)。

摘要化學(xué)冷光源是一種新型的有機(jī)發(fā)光材料。本文對(duì)化學(xué)光源的特點(diǎn),結(jié)構(gòu)與組成,化學(xué)發(fā)光機(jī)理和影響發(fā)光體系的因素進(jìn)行了討論,并簡(jiǎn)要介紹了化學(xué)發(fā)光物質(zhì)草酸酯和熒光劑的合成與應(yīng)用,論述了相關(guān)研究的進(jìn)展情況。

關(guān)鍵詞化學(xué)發(fā)光,化學(xué)光源,草酸酯,熒光劑,合成

1發(fā)展背景

化學(xué)發(fā)光是指某些化學(xué)反應(yīng)中發(fā)出可見光的反應(yīng)過程?；瘜W(xué)發(fā)光體系有數(shù)種,但適用于化學(xué)光源的只有過氧草酸酯類化學(xué)發(fā)光體系。它以草酸酯、過氧化氫和熒光劑為主要成分,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的一種最有效的化學(xué)(非生物)發(fā)光體系,量子產(chǎn)率高達(dá)20%～30%。

過氧草酸酯類化學(xué)發(fā)光最早發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)60年代。此后,20世紀(jì)70年代AmericanCyanamide公司的Rauhut等合成了一系列草酸酯。Rauhut等研究的主要目的是開發(fā)應(yīng)急光源,并稱之為“化學(xué)光源”(chemicallight),成為草酸酯獲得實(shí)際應(yīng)用的重要實(shí)例之一,并成功地研制和開發(fā)了發(fā)光棒。最初化學(xué)光源只是用于軍事活動(dòng),后來逐步進(jìn)入民用市場(chǎng)。使用這種冷光源可以杜絕因電火花或熱光源引起火災(zāi)的可能性,也可用作緊急照明等。近年來,這種化學(xué)冷光源已日益流行于各大晚會(huì)上,具有很大的市場(chǎng)前景。另外,將應(yīng)急光源與警報(bào)結(jié)合的緊急設(shè)施有利于人們?cè)诎l(fā)生火災(zāi)時(shí)的逃生。

2化學(xué)光源的結(jié)構(gòu)和組成