摘要：目的探討端粒酶活性與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)之間的關(guān)系及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌術(shù)后治療方案制定和預(yù)測(cè)預(yù)后的意義。方法采用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增聚合酶鏈反應(yīng)-酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(TRAP-PCR-ELISA)和免疫組織化學(xué)鏈霉素生物蛋白過(guò)氧化物酶(S-P)法對(duì)80例乳腺癌組織、36例乳腺癌相應(yīng)癌旁組織和10例乳腺良性病變的端粒酶活性及增殖細(xì)胞核抗原進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果(1)80例乳腺癌患者癌組織標(biāo)本、36例乳腺癌相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本中端粒酶表達(dá)陽(yáng)性率分別為650%和83%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P001)；10例乳腺良性病變組織標(biāo)本中未檢測(cè)出端粒酶活性；腋窩淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移與端粒酶陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P005)。(2)80例乳腺癌組織中PCNA的陽(yáng)性表達(dá)率為6375%；乳腺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組PCNA陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P001)，且呈正相關(guān)(P001)，即淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度越低，PCNA陽(yáng)性表達(dá)率亦越低。(3)端粒酶活性與PCNA表達(dá)具有一致性(P001)，且呈正相關(guān)(P001)，一致率為8625%。結(jié)論端粒酶活性與PCNA表達(dá)具有一致性，端粒酶活性與PCNA聯(lián)合檢測(cè)，可為乳腺癌術(shù)后治療方案的制定和預(yù)測(cè)預(yù)后提供輔助依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】乳腺癌；端粒酶；增殖細(xì)胞核抗原；多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；免疫組織化學(xué)

增殖細(xì)胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)是一種表達(dá)細(xì)胞增殖周期的36kd多肽，直接參與細(xì)胞增殖過(guò)程中DNA的復(fù)制，其表達(dá)程度能客觀(guān)反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性，過(guò)度表達(dá)增加了瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移趨勢(shì)的危險(xiǎn)性，PCNA可作為判斷腫瘤預(yù)后的指標(biāo)〔1〕。為探索乳腺癌組織端粒酶活性與增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的關(guān)系，對(duì)80例乳腺癌組織、36例乳腺癌相應(yīng)癌旁組織和10例乳腺良性病變的端粒酶活性及增殖細(xì)胞核抗原進(jìn)行檢測(cè)。

1對(duì)象與方法

11對(duì)象收集我院1992～2002年女性乳腺癌根治標(biāo)本病理檢查存檔資料80例，乳腺癌相應(yīng)癌旁組織(距離腫瘤2cm以上)36例，年齡32～72歲，平均年齡4846歲；乳腺良性病變10例，平均年齡3850歲。全部資料經(jīng)2位病理醫(yī)師審核，患者術(shù)前未做過(guò)放、化療。乳腺癌分類(lèi)根據(jù)“中國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤診治規(guī)范”分為非浸潤(rùn)性癌、早期浸潤(rùn)性癌、浸潤(rùn)性特殊癌、浸潤(rùn)性非特殊癌4類(lèi)。

12試劑與儀器端粒多聚酶鏈反應(yīng)-酶聯(lián)免疫吸附(TelomerasePCRELISA)試劑盒(德國(guó)BoehringerMannhein公司)；陽(yáng)性對(duì)照為腫瘤293細(xì)胞株(檢測(cè)試劑盒提供)；陰性對(duì)照為不含蛋白的裂解液；Ⅰ抗PCNApc10和鏈霉素生物蛋白過(guò)氧化物酶(S-P)試劑盒及過(guò)氧化物酶底物作用液二氨基聯(lián)苯氨(Diaminobenzidine,DAB)(北京中山生物技術(shù)有限公司)；用已知乳腺癌組織陽(yáng)性切片(北京中山生物技術(shù)有限公司)為陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(phosphatebufferedsaline,PBS)代替Ⅰ抗做陰性對(duì)照。酶標(biāo)儀(SPECTRAⅢ)(美國(guó)Dynex公司)PCR(T-1thermoblock)(德國(guó)Biometra公司)。

【摘要】目的研究銀杏葉提取物(EGb)對(duì)點(diǎn)燃模型幼鼠學(xué)習(xí)記憶等認(rèn)知功能，對(duì)大鼠海馬乙酰膽堿酯酶（AChE）、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（ChAT）活性的影響。方法21、35日齡SD大鼠各40只，經(jīng)初篩后隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、點(diǎn)燃對(duì)照組及EGb大、中、小劑量治療組，采用戊四氮（PTZ）誘導(dǎo)幼鼠點(diǎn)燃模型，以Y型電迷宮及生化檢測(cè)方法，觀(guān)察用藥前后大鼠學(xué)習(xí)記憶功能和海馬AChE、ChAT活性的變化。結(jié)果EGb呈劑量依賴(lài)性顯著改善實(shí)驗(yàn)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,并顯著抑制海馬AChE活性、增強(qiáng)ChAT的活性。結(jié)論EGb可以通過(guò)抑制功能腦區(qū)AChE活性、增加ChAT的活性,增強(qiáng)中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的功能，改善發(fā)育期癲疒間大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。

【關(guān)鍵詞】銀杏葉提取物；學(xué)習(xí)記憶；乙酰膽堿酯酶；膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶；點(diǎn)燃模型；大鼠

EffectofextractsofGinkgobilobaleafonthelearning-memoryabilityandtheactivity

ofAChEandChATinthehippocampusinratswithkindling-inducedepilepsy

DUANFangrong,YUANBaoqiang*

(DepartmentofPediatrics,TheAffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou,Jiangsu221002,China)

摘要：采樣了毛竹根區(qū)土壤微生物數(shù)量和酶活性。結(jié)果表明：毛竹根區(qū)土壤細(xì)菌數(shù)量明顯多于林間土，其R/S值平均為1.53；從不同年齡竹來(lái)看，Ⅰ、Ⅱ度竹根區(qū)細(xì)菌數(shù)量多于Ⅲ度竹。毛竹根區(qū)土壤真菌數(shù)量也明顯多于林間土，R/S值平均為2.05；其中Ⅱ度竹根區(qū)真菌數(shù)量顯著多于Ⅰ、Ⅱ度竹根區(qū)，差異達(dá)顯著水平。放線(xiàn)菌數(shù)量無(wú)論是毛竹根區(qū)與林間土之間還是不同年齡毛竹根區(qū)土之間均無(wú)明顯不同。毛竹根區(qū)土壤過(guò)氧化氫酶、脲酶和蔗糖酶的活性明顯高于林間土，R/S值分別平均為1.28、1.48、和1.94，但在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度竹根區(qū)之間這3類(lèi)酶的活性無(wú)明顯差異。毛竹根區(qū)土壤蛋白酶和磷酸酶的活性也明顯高于林間土，其R/S值分別平均為2.00和1.82，并且蛋白酶活性Ⅱ度竹根區(qū)明顯高于Ⅰ、Ⅲ度竹根區(qū)，磷酸酶活性Ⅱ度竹也顯著高于Ⅲ度竹根區(qū)，差異均達(dá)顯著水平。

關(guān)鍵詞：毛竹；根區(qū)土壤；微生物；酶。

根際區(qū)是植物體與土壤物質(zhì)、能量交換的場(chǎng)所。一方面植物體通過(guò)呼吸、分泌有機(jī)物質(zhì)根際土壤性質(zhì)[1]；另一方面，土壤又通過(guò)根際區(qū)以各種方式向植物體提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。農(nóng)作物上有關(guān)根際的已十分深入[2、3、4]，并都針對(duì)表根幾個(gè)毫米的根面土（RhizoplaneSoil）和根際土（RhizosphereSoil），而林木上的研究相對(duì)滯后。一方面林木立地條件差異較大，另一方面，對(duì)林木而言，確定幾個(gè)毫米的根際有很大難度。雖國(guó)內(nèi)外有關(guān)林木根際土壤研究有零星報(bào)道[5、6、7、8]，但研究都較農(nóng)作物上粗放。由于林木根形態(tài)的特殊性，有些研究只對(duì)林木根際附近一個(gè)較大的區(qū)域即根區(qū)展開(kāi)[9]。毛竹作為禾木科植物與農(nóng)作物玉米（Zeamays）、小麥（Triticamaesticum）和水稻(Oryzasativa)一樣，在根際區(qū)也具有聯(lián)合固氮微生物[10、11]，因而開(kāi)展毛竹根際區(qū)土壤的研究顯得十分重要。但至今為止，未見(jiàn)毛竹根際區(qū)土壤生物化學(xué)性質(zhì)方面的系統(tǒng)研究報(bào)道。為此，作者采集了不同年齡毛竹根區(qū)土樣，旨在這方面作些探討。

1樣地與

1.1采樣地概況

采樣地設(shè)在浙江省臨安市郊青山鎮(zhèn)。該區(qū)屬亞熱帶季風(fēng)氣候，地理座標(biāo)為119042′N(xiāo)，30014′E，屬丘陵地區(qū)，年平均氣溫15.9℃，最高氣溫41.3℃，最低氣溫-13.3℃，年降水量1424mm，無(wú)霜期236d。土壤成土以富鋁化和生物集化同時(shí)進(jìn)行，土壤為發(fā)育于花崗巖的紅壤。土壤pH在4.5～5.5，有機(jī)質(zhì)含量在20.00g·kg-1左右，全氮含量在0.8～1.3g·kg-1之間，土壤水解氮、有效磷和速效鉀分別平均為93.23、10.96和77.26mg·kg-1。采樣地海拔高度為100～120m。竹林密度4100株·hm-2，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度分別占35.5%、31.2%、和33.3%(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度竹齡分別為1～2a、3～4a和5～6a)，毛竹平均眉徑為8.5cm。

【關(guān)鍵詞】鉛；血清酶；逆向變化

Primarystudyonreversechangesofenzymeactivitiesinserumofleadpoisonedrat

【Abstract】AIM:Tounderstandthemechanismunderlyingthereversechangesofenzymeactivityinserumofratpoisonedbylead.METHODS:FemaleWistarratswererandomlydividedinto4groups:controlgrouptreatedwithdistilledwater;leadgroupstreatedwith10,30and60mg/kgPbAc2,respectively,ip,onceevery2d,for7times.Subsequently,allanimalsweresacrificedformeasuringtheactivityofALT,AST,ALP,LDHandγGTinserum.TheserumofratstreatedwithdifferentconcentrationofPbAc2(0,30and300μmol/L)wasincubatedin37℃.Threehourslater,theactivitiesofALT,AST,LDH,ALPandγGTintheserumwereassayed.RESULTS:Invivo,comparedwiththecontrolgroup,theactivitiesofAST,γGTinserumweresignificantlyhigher，andtheactivityofALP,LDHinserumweresignificantlylower(P<0.05),andtheactivitiesofALTinserumweresignificantlylowerin10mg/kgPbgroup(P<0.05).Inthehistopathologicalexamination,paredwiththatofthecontrolgroup,invitro,theactivityofALTinserumwassignificantlylower(P<0.05)andtheactivitiesofLDH,ALP,ASTandγGTinserumshowednosignificantinhibition.CONCLUSION:Themechanismofthereversechangesofenzymeactivityinserumisduetothedifferentdegreesofactivityinhibitionbylead.

【Keywords】lead;seroenzyme,reversedchanges

【摘要】目的：實(shí)驗(yàn)研究鉛中毒以闡明血清酶活性逆向變化的機(jī)制.方法：Wistar雌性大鼠隨機(jī)分為4組，對(duì)照組，對(duì)照組10，30和60mg/kg組.醋酸鉛腹腔注射，隔天染毒1次，7次后處死動(dòng)物，取血分離血清，測(cè)血清酶活性.另分別向大鼠血清中加入醋酸鉛使其終濃度為0，30及300μmol/L，37℃孵育3h，測(cè)定血清酶活性.結(jié)果：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，隨染鉛劑量的增加，血清ALP與LDH活性變化呈下降趨勢(shì)（P＜0.05）；而γGT及AST活性變化呈上升趨勢(shì)（與對(duì)照組比較，P＜0.05）；ALT活性變化先下降（與對(duì)照組比較，P＜0.05），而后隨鉛劑量的增加而呈上升趨勢(shì).體外實(shí)驗(yàn)表明，鉛對(duì)ALT活性抑制較明顯（與對(duì)照組比較，P＜0.05），而對(duì)LDH，ALP，AST及γGT活性未見(jiàn)有抑制作用.結(jié)論：鉛中毒所引起的部分血清酶活性逆向變化的機(jī)制是由于其活性受到鉛等因素不同程度的抑制所致.

【關(guān)鍵詞】鉛；血清酶；逆向變化

目前已公認(rèn)乳腺癌是一種全身性疾病，在其早期即有轉(zhuǎn)移，因此，探索提高乳腺癌術(shù)前確診率的診斷方法對(duì)于提高乳腺癌的治療效果有重要意義。端粒酶是近年發(fā)現(xiàn)的一種具有一定特異性的腫瘤標(biāo)記物，是一種含有蛋白質(zhì)和端粒?；パa(bǔ)，的核糖核蛋白酶，也是一種逆轉(zhuǎn)錄酶。幾乎在所有的人類(lèi)原發(fā)惡性腫瘤中均可檢測(cè)到端粒酶活性，而在惡性腫瘤起源的正常組織細(xì)胞中則大多檢測(cè)不到端粒酶活性。這使端粒酶作為一種新的腫瘤標(biāo)記物應(yīng)用于臨床成為可能。我們對(duì)，例患者的乳腺腫塊分別行穿刺細(xì)胞端粒酶活性檢測(cè)和光鏡細(xì)胞學(xué)檢查，對(duì)比了兩種方法的診斷準(zhǔn)確率，研究了乳腺腫瘤生物學(xué)特性與端粒酶活性表達(dá)的相關(guān)性，從而對(duì)端粒酶活性檢測(cè)的臨床應(yīng)用價(jià)值和提高乳腺癌術(shù)前確診率的新方法進(jìn)行了探討。

一、資料與方法

1，一般資料

乳腺腫塊患者，在我院普外科病房接受治療的女性患者，患者均在檢查后，內(nèi)手術(shù)。經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)，乳腺癌例，乳腺良性腫塊例，乳腺腫塊直徑。

2，主要試劑及儀器

端粒酶活性檢測(cè)采用山東醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)研究中心提供的微量穿刺標(biāo)本端粒酶檢測(cè)試劑盒，主要成分包括，**。公司，引物，華美生物工程公司合成，**酶公司?！?，擴(kuò)增采用美國(guó)∞公司產(chǎn)的，型熱循環(huán)儀。電泳采用北京六一儀器廠(chǎng)生產(chǎn)的電泳儀及電泳裝置。

【摘要】目的觀(guān)察巴戟天寡糖對(duì)腎性高血壓（RH）大鼠心肌組織H2O2含量及紅細(xì)胞Na+/K+-ATP酶活性的影響，探討其改善RH大鼠長(zhǎng)期預(yù)后的可能機(jī)制。方法40只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、RH組、巴戟天寡糖高、中、低劑量組（60，40，20mg·kg-1·d-1）。給藥4周后經(jīng)腹主動(dòng)脈采血并留取心肌組織，測(cè)定心肌H2O2含量及紅細(xì)胞Na+/K+-ATP酶活性。結(jié)果巴戟天寡糖可以顯著降低RH大鼠心肌組織H2O2含量，改善大鼠紅細(xì)胞Na+/K+-ATP酶活性。結(jié)論巴戟天寡糖降低RH大鼠心肌組織H2O2含量，增強(qiáng)紅細(xì)胞Na+/K+-ATP酶活性可能是改善RH大鼠長(zhǎng)期預(yù)后的機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】高血壓，腎性；過(guò)氧化氫；鈉鉀交換-ATP酶；巴戟天寡糖

《全球疾病、創(chuàng)傷和危險(xiǎn)因素研究》分析顯示，心血管疾病造成的人類(lèi)壽命損失年明顯增加［1］，高血壓病是其中的第一大危險(xiǎn)因素［2］。單體物質(zhì)巴戟天寡糖（morindaofficinalisoligosaccharides，MOOs）主要用于治療慢性應(yīng)激所致抑郁樣行為［3］，臨床研究證實(shí)MOOs在治療輕中度抑郁時(shí)安全有效［4］，并有一定的心血管保護(hù)作用［3］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，MOOs可以有效改善高血壓大鼠的情緒與活動(dòng)狀態(tài)，提高高血壓大鼠的抗病能力與生存數(shù)量，減少其死亡。推測(cè)MOOs在高血壓病的治療及預(yù)后中有一定應(yīng)用價(jià)值。本課題擬通過(guò)觀(guān)察MOOs對(duì)腎性高血壓（RH）大鼠心肌組織中H2O2的含量及血紅細(xì)胞Na＋/K＋-ATP酶活性的影響，研究MOOs在高血壓治療及預(yù)后改善中可能的機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1材料和方法

1．1藥品、試劑與儀器：巴戟天寡糖（北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠(chǎng)）；H2O2測(cè)試盒與超微量Na＋/K＋-ATP酶測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）。紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（香港力康），恒溫水浴鍋（金怡）。1．2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組：選取健康雄性SD大鼠40只（購(gòu)于山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），體質(zhì)量200~220g，以隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、RH組、MOOs高、中、低劑量組，每組8只，灌胃給藥。其中假手術(shù)組和RH組給予等體積0.9%氯化鈉注射液，MOOs劑量分別為60、40、20mg·kg-1·d-1。連續(xù)給藥4周。1．3制備RH模型：大鼠以5％水合氯醛（7ml/kg）腹腔注射麻醉，左側(cè)臥位固定，行右腎動(dòng)脈縮窄術(shù)，4周后大鼠血壓穩(wěn)定于（180±10）/（100±5）mmHg（1mmHg=0.133kPa），成功制備穩(wěn)定的RH模型。1．4標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測(cè)：RH模型制備成功并給藥第4周末，禁飲食12h，以5％水合氯醛（7ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈測(cè)量血壓后取血，快速開(kāi)胸取出心臟，存于-80℃冰箱備用。檢測(cè)時(shí)取出標(biāo)本，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，分別于405nm和636nm波長(zhǎng)處以紫外分光光度法測(cè)定心肌組織H2O2含量及紅細(xì)胞Na＋/K＋-ATP酶活性。1．5數(shù)據(jù)處理及分析：應(yīng)用SPSS19．0統(tǒng)計(jì)學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，計(jì)量資料以x±s表示，差異比較用t檢驗(yàn)。以P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

1端?？s短與衰老

端粒是真核生物染色體末端的重復(fù)DNA序列，由端粒DNA(TTAGGG)n和端粒蛋白質(zhì)（如TRF1和TRF2等）組成，端粒的功能除保證DNA完整復(fù)制外，還在維持染色體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定（保護(hù)染色體不分解和染色體重排及末端不相互融合等），染色體在細(xì)胞中的定位（使之不隨機(jī)分布）和引起細(xì)胞衰老等方面起著重要作用。人類(lèi)的端粒DNA重復(fù)序列長(zhǎng)約2－15kb。眾所周知，真核DNA是線(xiàn)性DNA，復(fù)制時(shí)由于模板DNA起始端為RNA引物先占據(jù)，新生鏈隨之延伸；引物RNA脫落后，其空缺處的模板DNA無(wú)法再度復(fù)制成雙鏈。因此，DNA每復(fù)制一次端粒即丟失50~200bp[1]，即出現(xiàn)真核細(xì)胞分裂中的“末端復(fù)制問(wèn)題”。當(dāng)末端縮短到達(dá)5~7kb時(shí)不能維持染色體的穩(wěn)定，染色體發(fā)生融合或丟失，與端粒DNA相鄰的基因丟失，最后導(dǎo)致細(xì)胞衰老而死亡，故端粒又稱(chēng)“細(xì)胞分裂計(jì)時(shí)器”。即人正常體細(xì)胞在經(jīng)過(guò)有限次的有絲分裂，分裂次數(shù)達(dá)到“Hayflick極限”，染色體端粒長(zhǎng)度縮短到一定程度后，細(xì)胞進(jìn)行的有絲分裂便不可逆地被阻斷在細(xì)胞周期G1期和G2/M期之間的某個(gè)時(shí)期，這時(shí)細(xì)胞進(jìn)入了老化期并隨后死亡[3]。大多數(shù)正常體細(xì)胞在增殖60~70代會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞衰老和死亡[4]。故有人稱(chēng)端?？s短是觸發(fā)細(xì)胞衰老的分子鐘[5]。端粒隨年齡的增長(zhǎng)而逐漸縮短，老年人要比青年人的端粒明顯縮短，可見(jiàn)端粒的長(zhǎng)度與細(xì)胞的壽命密切相關(guān)[6]。

2端粒假說(shuō)

1973年Olovfnikov博士首次提出了端粒去失與衰老關(guān)系的理論[7]。后人對(duì)此進(jìn)行不斷完善，1990年Harley指出在端粒酶處十抑制狀態(tài)的細(xì)胞分裂時(shí)，DNA不完全復(fù)制會(huì)引起端粒DNA的少量丟失。端粒隨細(xì)胞分裂次數(shù)增加而不斷縮短，當(dāng)端?？s短到一定程度，細(xì)胞就會(huì)停止復(fù)制而衰老死亡，這就是端粒假說(shuō)。此外，他們還發(fā)現(xiàn)端粒酶可催化端粒復(fù)制，從而延長(zhǎng)細(xì)胞生命，所以胚胎細(xì)胞、永生化細(xì)胞和其它一些表達(dá)端粒酶活性的干細(xì)胞壽命均比無(wú)端粒酶活性的細(xì)胞長(zhǎng)。有研究表明，正常人類(lèi)組織的實(shí)體細(xì)胞中的端粒酶序一般不具有活性，而在胚胎組織、生殖細(xì)胞和少數(shù)造血干細(xì)胞及癌細(xì)胞等永生化細(xì)胞中端粒酶則具有穩(wěn)定的活性。Kim等[8]用TRAP法對(duì)18種人體組織培養(yǎng)細(xì)胞做端粒酶測(cè)試，發(fā)現(xiàn)100個(gè)永生化細(xì)胞株中有98個(gè)有端粒酶活性，22個(gè)非永生化細(xì)胞則無(wú)一例表達(dá)。而進(jìn)過(guò)誘導(dǎo)，可使已發(fā)生老化的人正常雙倍體成纖維細(xì)胞呈現(xiàn)出端粒酶活性，端粒酶活性在這些細(xì)胞中的重建導(dǎo)致了端粒長(zhǎng)度增加，細(xì)胞壽命延長(zhǎng)[9，10]。Harley等人在研究體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞時(shí)，得到細(xì)胞衰老過(guò)程中端粒損失的直接證據(jù)。他們分別取新生兒、24歲、71歲和91歲的供體的成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，并使之衰老。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著成纖維細(xì)胞的不斷分裂，染色體末端限制性片段（TRF）的長(zhǎng)度都逐漸減少，而染色體內(nèi)部的重復(fù)序列并不減少。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明，如果細(xì)胞不分裂，則TRF的長(zhǎng)度不減少。說(shuō)明染色體末端重復(fù)序列TITFAGGG（端粒）在細(xì)胞衰老過(guò)程中特異地依賴(lài)DNA復(fù)制而丟失。相反，精子中的端粒長(zhǎng)度與受試者的年齡無(wú)關(guān)。這是因?yàn)榫又杏卸肆Ｃ傅谋磉_(dá)，使端粒保持恒定長(zhǎng)度的緣故。所以，端粒的長(zhǎng)度被認(rèn)為是人體細(xì)胞壽命的標(biāo)志[11]。

3端粒酶與衰老

端粒的長(zhǎng)度主要由端粒酶決定，端粒酶的活性高，端粒DN段就長(zhǎng)。端粒酶自身攜帶有RNA組份作為復(fù)制時(shí)的模板，這是端粒酶區(qū)別于一般DNA聚合酶的主要特征。

1材料與方法

1.1材料

檸檬酸鈉抗凝的新鮮豬血漿。

1.2主要試劑

纖維蛋白原和凝血酶標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自美國(guó)SIGMA公司，Bradford蛋白質(zhì)定量檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)BioRad。其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

檸檬酸鋇吸附法使用的四種溶液分別為，溶液A：1.0mol/LBaCl2溶液；溶液B：0.02mol/LTris，0.15mol/LBaCl2，0.10mol/LNaCl，pH7.4；溶液C：0.02mol/LTris，0.10mol/LNaCl，0.20mol/LNa2EDTA，pH7.4；溶液D：0.02mol/LTris，0.15mol/LNaCl，pH6.5.

摘要：為了解決飼用玉米種植田質(zhì)量下降的問(wèn)題，進(jìn)行了生態(tài)有機(jī)肥還田對(duì)飼用玉米種植田有機(jī)質(zhì)及酶活性和重金屬影響的試驗(yàn)研究。結(jié)果明，施用生態(tài)有機(jī)肥與農(nóng)戶(hù)習(xí)慣施用化肥相比，飼用玉米種植田有機(jī)質(zhì)、有機(jī)碳和供碳量分別增加了14.44％、13.48％和13.49％，細(xì)菌和放線(xiàn)菌分別增加了17.61％和20.69％，蔗糖酶、脲酶、磷酸酶和多酚氧化酶活性分別增加了7.58％、2.14％、1.12％和21.43％；真菌、Hg、Cr、Pb、Cu、Cd和Zn含量分別降低了9.98％、10.20％、10.98％、13.10％、12.50％、9.09％和8.33％。施用生態(tài)有機(jī)肥，提高了飼用玉米種植田有機(jī)質(zhì)、細(xì)菌、放線(xiàn)菌數(shù)量和酶活性，降低了真菌和重金屬含量。

關(guān)鍵詞：生態(tài)有機(jī)肥；飼用玉米；有機(jī)質(zhì)；酶活性；重金屬

酒泉市肅州區(qū)種植的飼用玉米長(zhǎng)期施用化肥，種植地有機(jī)質(zhì)含量較低，微生物數(shù)量和酶活性降低，土壤養(yǎng)分比例失調(diào)，飼用玉米產(chǎn)量和品質(zhì)下降，影響了飼用玉米產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。有關(guān)功能性肥料對(duì)土壤性質(zhì)和玉米經(jīng)濟(jì)效益影響的研究報(bào)道較多[1-13]，生態(tài)有機(jī)肥還田對(duì)飼用玉米種植田有機(jī)質(zhì)、有機(jī)碳、供碳量、微生物數(shù)量及酶活性和重金屬影響的研究少見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。為了解決土壤養(yǎng)分比例失調(diào)的問(wèn)題，進(jìn)行了生態(tài)有機(jī)肥還田對(duì)飼用玉米種植田有機(jī)質(zhì)及酶活性和重金屬影響的試驗(yàn)研究。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)地概況

GCH1基因即指導(dǎo)合成GTP環(huán)化水解酶1的基因，GTP環(huán)化水解酶1不僅是GTP合成四氫生物蝶呤（BH4）途徑中的起始酶，還是它的限速酶。BH4是芳香族氨基酸羥化酶的必須輔助因子，參與他們的活性調(diào)節(jié)論文。因此，GCH1基因的缺陷以及突變將影響B(tài)H4的生物合成從而影響生物體內(nèi)一系列的生理病理現(xiàn)象，本文僅就GTP環(huán)化水解酶1（GCH1）基因與四氫生物蝶呤BH4代謝異常性疾病研究進(jìn)展進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹。

1.四氫生物蝶呤(BH4)的生物合成與調(diào)節(jié)

1.1四氫生物蝶呤(BH4)的生物合成

BH4的分子式為C9H15N5O3,其在體內(nèi)的合成有從頭合成和補(bǔ)救合成兩種途徑。生理情況下，BH4系從頭合成（denovosynthesis）,I型三磷酸鳥(niǎo)苷環(huán)化水解酶（GTPcyclohydrolaseI,GTPCHI）是合成BH4的限速酶；病理情況下，BH4可通過(guò)Salvage通路合成，即在墨蝶呤還原酶的作用下由細(xì)胞內(nèi)的墨蝶呤轉(zhuǎn)化而來(lái)(圖1)。

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1.2四氫生物蝶呤(BH4)合成調(diào)節(jié)