導(dǎo)語：如何才能寫好一篇肺纖維化，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

肺纖維化這個醫(yī)學(xué)名詞并不是指單純的一種病，而是多種疾病的統(tǒng)稱，說得更具體一點就是多種肺部疾病，隨著病情進(jìn)展，會發(fā)展到肺纖維化。例如結(jié)節(jié)病，大多數(shù)患者就診時并沒有肺纖維化，但有的會逐步發(fā)展，出現(xiàn)肺纖維化。肺纖維化，在臨床上常常是放射科醫(yī)生根據(jù)胸片或者肺部CT的影像表現(xiàn)給出的結(jié)論，即使輕微的、不一定有臨床意義的肺纖維化，他們也會在報告中進(jìn)行說明。呼吸科醫(yī)生拿到這份報告后，會根據(jù)患者的癥狀結(jié)果、查體結(jié)果、其他化驗檢查結(jié)果等，綜合分析后，才能做出臨床診斷。呼吸科醫(yī)生只做出“肺纖維化”這個診斷是不夠的，還要對可能的類型、可能的病因，做出進(jìn)一步的判斷。這樣，才有可能達(dá)到治病治本的目標(biāo)。當(dāng)然，臨床上很多肺纖維化患者即使進(jìn)行了廣泛、深入的檢查，也難以明確疾病類型和可能病因。這反映了臨床醫(yī)學(xué)本身的局限性，說明肺纖維化這個領(lǐng)域還有很多未知數(shù)，需要研究解決。

還有一個與肺纖維化關(guān)系非常密切的醫(yī)學(xué)名詞叫作“肺間質(zhì)病”或“間質(zhì)性肺病”。肺間質(zhì)病是呼吸科醫(yī)生常用的專業(yè)術(shù)語，所涵蓋的范圍更廣，其中包括肺纖維化。簡單地說，呼吸系統(tǒng)疾病可分為幾個大類，哮喘、慢阻肺、支氣管擴張等氣道疾病為一大類，呼吸道感染例如肺炎、肺結(jié)核等為一大類，各種肺部腫瘤為一大類，胸膜疾病例如胸膜炎為一大類；除此之外，另一大類就是肺間質(zhì)病了。各種環(huán)境職業(yè)因素導(dǎo)致的職業(yè)性肺病、風(fēng)濕免疫病的肺部表現(xiàn)、特發(fā)性肺纖維化、結(jié)節(jié)病、外源性過敏性肺泡炎，還有少見的肺泡蛋白沉積癥，都屬于肺間質(zhì)病的范疇。

有時候在放射科的報告中，會看到“肺間質(zhì)改變”這樣的說法。這種肺間質(zhì)改變，有的可能是肺間質(zhì)病，有的并不是肺間質(zhì)病，如肺部炎癥吸收好轉(zhuǎn)后，有的會遺留輕微的肺間質(zhì)改變。

導(dǎo)致肺纖維化的原因很多。常見的有環(huán)境、職業(yè)、物理和化學(xué)因素等，例如石棉、礦物粉塵、化療藥物、放射損傷、有害氣體吸入等。接觸鴿糞、動物皮毛、發(fā)霉枯草等引起的外源性過敏性肺泡炎，亦可導(dǎo)致肺纖維化。一些風(fēng)濕免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、皮肌炎、硬皮病等，可伴發(fā)肺纖維化，有的肺纖維化甚至發(fā)生在前。而所謂的特發(fā)性肺纖維化，病因尚不明確，也沒有療效確切的治療方法，是大家比較熟悉的一種肺纖維化類型。

肺纖維化的共同特點是緩慢起病，以干咳為主，痰少，活動后氣促突出。氣促是最常見的首診癥狀，按平常速度走路或者步行上樓即感到胸悶，有“氣不夠用”的感覺，并漸進(jìn)性加重，疾病后期常出現(xiàn)呼吸衰竭。多數(shù)患者的肺部有特殊的啰音。

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關(guān)鍵詞：肌成纖維細(xì)胞 肺纖維化 成纖維細(xì)胞

PF早期病理特點為彌漫性肺泡炎，后期大量FB病理性增殖轉(zhuǎn)型及細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM） 進(jìn)行性異常積聚，肺泡結(jié)構(gòu)重塑。肌成纖維細(xì)胞最早由Gabbiani[1]等在組織損傷修復(fù)的研究中發(fā)現(xiàn)并命名，超微結(jié)構(gòu)和生理功能介于平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞之間。肺纖維化因致病因素眾多，缺乏有效防治手段，針對其發(fā)病機制的研究一直是國內(nèi)外研究的熱點。本文主要就MF的特征及其在纖維化病理進(jìn)程中的作用一綜述， 進(jìn)一步探討可能發(fā)病機制，從而為PF的治療提供新思路。

一 、肌成纖維細(xì)胞的特征

隨著對肌成纖維細(xì)胞的研究深入，Sappino [2]等發(fā)現(xiàn)，肌成纖維細(xì)胞存在于多種正?；虿±斫M織中，形態(tài)學(xué)特征相似，表達(dá)多種間質(zhì)性標(biāo)志物和膠原產(chǎn)物。

1.1形態(tài)學(xué)特征 FB具有嗜酸性或者嗜雙色性，通常呈梭形或者星形，細(xì)胞核凝縮、常呈鋸齒狀，染色質(zhì)散在分布、呈顆粒狀，核仁一般較明顯。

1.2超微結(jié)構(gòu)特征 主要包括三個超微結(jié)構(gòu)特征：（1）應(yīng)力纖維是最主要的收縮結(jié)構(gòu)，由β-/γ-肌動蛋白或α平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）組成。（2）纖維連接復(fù)合體，由黏著斑蛋白、樁蛋白、張力蛋白等構(gòu)成，為肌成纖維細(xì)胞特有結(jié)構(gòu)，是肌成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)聯(lián)系和相互作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。（3）細(xì)胞連接，如縫隙連接等，對組織收縮具有重要作用。

1.3免疫組織化學(xué)染色 α-SMA 免疫組織化學(xué)染色最早在2002年由Tomasek[3] 等提出，是鑒定肌成纖維細(xì)胞普遍認(rèn)可的形態(tài)學(xué)方法。熒光顯微鏡或激光共聚焦掃描顯微鏡下進(jìn)行觀察，陽性信號于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈細(xì)絲狀排列。

二、 成纖維細(xì)胞分化為肌成纖維細(xì)胞

Vancheri[ 4]等的體外實驗證實了TGF-β1、 IL4、 IL13和緩激肽等可誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的分化，最為關(guān)鍵的是TGF-β1，它是目前認(rèn)為的致纖維化作用最強的細(xì)胞因子之一，通過與相應(yīng)受體結(jié)合，刺激成纖維細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其向MF轉(zhuǎn)化。Hashimoto[5]等通過體外實驗發(fā)現(xiàn)，TGF-β1誘導(dǎo)人類肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)化呈明顯的劑量依賴性。TGF-β1可能主要通過JNK 途徑完成上述調(diào)節(jié)過程，即刺激人類肺成纖維細(xì)胞c-Jun氨基末端激酶（c-Jun-NH2-Terminal kinase，JNK）和細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶發(fā)生磷酸化。Kuang[6]等的小鼠實驗通過熒光蛋白的標(biāo)記成功檢測到α-SMA的表達(dá)，從另一個方面也有力證實了肌成纖維細(xì)胞可以由體內(nèi)肺成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來。

對損傷修復(fù)的研究表明，機械性張力、細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子3個因素共同影響著肌成纖維細(xì)胞的分化。第一，損傷后結(jié)締組織所承受的機械性張力或者炎癥反應(yīng)引起結(jié)締組織微環(huán)境的改變，成纖維細(xì)胞沿?fù)p傷周邊區(qū)局部聚集并轉(zhuǎn)化為原始肌成纖維細(xì)胞。原始肌成纖維細(xì)胞的特征性結(jié)構(gòu)為應(yīng)力纖維，由成熟黏著斑和由β-/γ-肌動蛋白構(gòu)成。第二，通過機械性張力、細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子共同作用，α-SMA 黏集到應(yīng)力纖維上，原始肌成纖維細(xì)胞最終轉(zhuǎn)變?yōu)榉只图〕衫w維細(xì)胞。Choe等[7] 的氣道三維模型實驗證實在沒有炎癥參與的狀態(tài)下，低強度動態(tài)張力可導(dǎo)致的肌成纖維細(xì)胞分化增加。人體的肺是一個彈性器官， 為了維持生理性呼吸功能，胸廓擴張對肺組織有一個持續(xù)的牽拉作用，這種張力持續(xù)作用于肺內(nèi)成纖維細(xì)胞。肺纖維化進(jìn)程中，多種因素的共同影響，尤其是大量細(xì)胞因子的刺激作用，會使FB 不斷地增殖和轉(zhuǎn)型為MF。成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的具體轉(zhuǎn)化機制還有待進(jìn)一步研究證實。

三、肌成纖維細(xì)胞在肺纖維化中的作用

3-1 肺泡上皮損傷 上皮損傷是PF纖維形成及間質(zhì)細(xì)胞增殖的核心。PF 患者的許多區(qū)域肺泡上皮灶性脫落，破壞了肺泡上皮完整性。Waghray[8]等從PF病人肺臟中分離出成纖維細(xì)胞，并和小氣道上皮細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)研究，使用TGF-β1單獨刺激成纖維細(xì)胞，使其表達(dá)α-SMA，而且會分泌H2O2，可以使在其上層的小氣道上皮細(xì)胞發(fā)生死亡。這些結(jié)果表明肺肌成纖維細(xì)胞與肺泡上皮細(xì)胞的損傷密切相關(guān)。

3-2 細(xì)胞外基質(zhì)的異常沉積 通過分析PF 患者的肺成纖維細(xì)胞， 肌成纖維細(xì)胞在PF 來源的肺成纖維細(xì)胞占多數(shù)。實驗表明，用博來霉素處理大鼠肺臟1-2周后，可以觀察到肌成纖維細(xì)胞表達(dá)的前膠原mRNA水平達(dá)到一個高峰。研究還發(fā)現(xiàn)，肌成纖維細(xì)胞會表達(dá)金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue ihhibitor of metalloproteinase，TIMP）等。高表達(dá)的TIMP一方面能夠抑制膠原纖維的降解，造成一種膠原不能被降解的微環(huán)境；另一方面能夠降解基底膜， 有利于間質(zhì)的成纖維細(xì)胞從基底膜缺損處向肺泡腔的遷移，這些都造成了細(xì)胞外基質(zhì)的異常沉積。

3-3 加重炎癥反應(yīng) 肌成纖維細(xì)胞可分泌TGF-β1、單核細(xì)胞趨化因子（MCP-1）等多種細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子也都是炎性介質(zhì)。在肺纖維化進(jìn)程中，肌成纖維細(xì)胞分泌的這些細(xì)胞因子通過促進(jìn)炎性細(xì)胞聚集， 強化炎癥程度，形成一個正反饋的炎癥反應(yīng)機制。致纖維化因子TGF-β1等的高水平表達(dá)促使這些炎癥反應(yīng)持續(xù)存在、肺泡上皮細(xì)胞損壞增加， 貫穿于纖維化病程的整個進(jìn)程之中。

3-4 降低肺的順應(yīng)性 收縮特性是肺肌成纖維細(xì)胞另一個重要特征。MF除表達(dá)成纖維細(xì)胞標(biāo)志物-成纖維細(xì)胞特異蛋白之外， 還特異性表達(dá)α-SMA。研究發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染cDNA 的3T3成纖維細(xì)胞比沒有轉(zhuǎn)染的或者轉(zhuǎn)染心肌或胞漿肌動蛋白的成纖維細(xì)胞收縮性更強， 進(jìn)一步表明肌成纖維細(xì)胞收縮性的這種特性與其α-SMA的表達(dá)有關(guān)。肌成纖維細(xì)胞通過改變纖維化肺組織收縮特性，使肺順應(yīng)性下降， 臨床表現(xiàn)為限制性呼吸困難。

四、 結(jié)語

肺纖維化是由多種原因引起彌漫性肺部炎性疾病的共同結(jié)局，臨床病理特征為肺泡上皮損傷、ECM 過度沉積及肌成纖維細(xì)胞聚集。PF時， 肌成纖維細(xì)胞持續(xù)增殖，產(chǎn)生大量膠原纖維，造成細(xì)胞外基質(zhì)的異常沉積；分泌多種炎性介質(zhì)加重肺泡上皮損傷；收縮特性使肺順應(yīng)性下降。隨著MF數(shù)目的增加，肺部逐漸形成成纖維灶，并且逐漸取代正常的肺組織結(jié)構(gòu)，進(jìn)而觸發(fā)PF。到目前為止對肺纖維化的研究顯示肌成纖維細(xì)胞對纖維化進(jìn)程影響的程度還有待進(jìn)一步評估。隨著對肌成纖維細(xì)胞研究的不斷深入，對肺纖維化發(fā)病機制的認(rèn)識和治療靶點的尋找也有了一些積極的進(jìn)展。希望目前關(guān)于肌成纖維細(xì)胞在肺纖維化進(jìn)程中的研究，可以發(fā)現(xiàn)相應(yīng)治療靶點，從而逆轉(zhuǎn)或減緩纖維化過程、重建正常的損傷修復(fù)機能。

參考文獻(xiàn)：

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【關(guān)鍵詞】 肺纖維化；，，腎陽虛；，，糖皮質(zhì)激素；，，受體

摘要：目的探討糖皮質(zhì)激素受體(GR) mRNA在腎陽虛肺纖維化和肺纖維化大鼠肺組織的表達(dá)及其意義。方法60只健康SD大鼠，隨機分為生理鹽水組(NS)、肺纖維化組(BLM)及腎陽虛肺纖維化組(RYA)，每組再分成兩亞組，每亞組10只，用博萊霉素氣管內(nèi)滴入及腺嘌呤灌胃復(fù)制肺纖維化及腎陽虛肺纖維化大鼠模型，于14 d及28 d取大鼠肺組織，運用組織芯片，通過HE及膠原纖維染色以判斷肺炎癥及纖維化程度和對肺內(nèi)膠原蛋白定量，通過原位雜交(ISH)對肺組織GRmRNA表達(dá)進(jìn)行定位定量分析。結(jié)果14 d時，腎陽虛組及肺纖維化組GRmRNA表達(dá)皆呈上調(diào)趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；28 d時，BLM組GRmRNA表達(dá)明顯上調(diào)，與BLM組比較，RYA組GRmRNA表達(dá)則明顯下調(diào)(P

關(guān)鍵詞：肺纖維化； 腎陽虛； 糖皮質(zhì)激素； 受體

Abstract：ObjectiveTo investigate the glucocorticoid receptor(GR)mRNA expression in lung tissues in pulmonary fibrosis with renalyang asthenia and pulmonary fibrosis rat models and its clinical value.Methods60 healthy SpragueDawley rats were randomly pided into the NS group(NS)，the pulmonary-fibrosis group(BLM) and the pulmonary fibrosis with renal-yang asthenia group(RYA)，every group had 20 rats and were subpided into two subgroups by 14 days and 28 days courses，each subgroup had 10 rats.Pulmonary fibrosis rat models were established by blemycin-induced by way of oncedripping into trachea， in addition， pulmonary fibrosis with renalyang asthenia rat models as well as adding adenine by primed-stomach once each day，on day 14 and day 28 respectively，these rats were killed and the rat lung tissues were acquired;and by means of tissue microarray associated with computer-picture analysis technology，the severe degree of inflammation and fibrosis，collagen quantity in rat lungs，were estimated by HE and collagen dye， GR mRNA expression were detected by in situ hybridization way.ResultsGR mRNA expression in rat lung of BLM were upregulated(P0.05)，however，those in RYA were downregulated(versus BLM P0.05) on day28; GR mRNA expression among three groups were not significant on day14.ConclusionGR mRNA upregulation in lung tissue could be one of the mechanism of glucocorticoid's effective cure for pulmonary fibrosis，and GR mRNA downregulation in lung tissue in renalyang asthenia syndrome could be one of cause of glucocorticoid's noneffective therapy for pulmonary fibrosis，in addition，the Chinese traditional medicine with warming Yang effect could be effective therapy for pulmonary fibrosis.

Key words：Pulmonary fibrosis; Renal-Yang asthenia; Glucocorticoid ; Receptor

肺纖維化的治療目前臨床上仍以糖皮質(zhì)激素為主，雖有一定療效，但病情的進(jìn)展惡化往往難以逆轉(zhuǎn)甚至延緩；腎陽虛證經(jīng)研究證實主要為下丘腦-垂體-靶腺軸(腎上腺、性腺、甲狀腺)功能減退所致，腎上腺軸功能減退致糖皮質(zhì)激素分泌減少為其主要機制之一［1］；此外，糖皮質(zhì)激素只有與其受體(GR)結(jié)合方能將信號傳遞而發(fā)揮作用，故明確GR mRNA在腎陽虛肺纖維化和肺纖維化大鼠肺組織的表達(dá)，對評價糖皮質(zhì)激素及具溫腎壯陽(溫陽)作用的中藥在肺纖維化防治中的作用和指導(dǎo)其臨床應(yīng)用將具有非常重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料COOLPIX450高級數(shù)碼像機(日本Nikon公司)，美國Imagepro plus 專業(yè)圖像分析軟件系統(tǒng)(美國Media Cybernetics公司) ;Model 2000，MicroHybridization Incubator雜交箱(美國Robbins Scientific Corporation) ;GR原位雜交檢測試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司); 博來霉素(批號Y32480)15 mg/支(日本化藥株式會社) ;腺嘌呤(Adenine 11003) (北京欣經(jīng)科生物技術(shù)有限公司);健康SD大鼠60只，150~250 g，6~7周齡，雌雄各半(四川大學(xué)華西實驗動物中心提供)。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組、動物模型的建立［2~4］及標(biāo)本的采集①健康SD大鼠60只，雌雄各半，實驗條件下飼養(yǎng)1周后分組，先按性別分層后隨機分為生理鹽水組(NS)、肺纖維化組(BLM)及 腎陽虛肺纖維化組(RYA)，每組20只，再據(jù)14，28 d兩時相再分成兩亞組，每亞組雌雄各5只；②大鼠稱重后，予速眠新II(1 ml/kg)大腿外側(cè)肌注麻醉，生效后在無菌操作下于頸前正中切開皮膚2~3 cm，鈍性分離皮下組織及肌肉，暴露氣管，用7號針頭連1 ml注射器，于氣管環(huán)間刺入氣管后平行進(jìn)氣管，將針頭斜面對著氣管前壁緩慢滴入博來霉素(5 mg/kg)，然后縫合切口，將大鼠直立旋轉(zhuǎn)使藥液于肺內(nèi)分布均勻，放回籠中正常飼養(yǎng)，并從即日起，BLM組每天灌胃生理鹽水3 ml，RYA組，則在BLM組基礎(chǔ)上每天灌胃腺嘌呤(300 mg/kg)；③ NS組氣管內(nèi)滴入生理鹽水0.2~0.3 ml，并每天灌胃生理鹽水3 ml。所有大鼠分別于第15天和第29天早上8~9點速眠新II麻醉下取標(biāo)本。先于腹腔靜脈抽血3~5 ml，靜置15 min后3 500 r/min離心10 min，吸取上層血漿于Ep管中，于20℃保存?zhèn)溆茫瑫r于腹主動脈放血至動物死亡后剖開胸腔將肺完整取出，先觀察肺大體情況并稱肺重，然后用4%多聚甲醛灌注左肺后剪下左肺下葉于4%多聚甲醛中固定；④按肺系數(shù)= 肺重 (g)/體重( g)×100%計算肺系數(shù)，肺纖維化程度越重，其肺系數(shù)就越大；⑤據(jù)文獻(xiàn)方法［2~4］，從肺組織HE染色的病理改變膠原纖維染色及定量對肺纖維化模型進(jìn)行鑒定，并在此基礎(chǔ)上，結(jié)合大鼠的整體表現(xiàn)、腎臟的肉眼及顯微鏡下改變和腎功能及血漿皮質(zhì)醇的變化對腎陽虛肺纖維化模型進(jìn)行鑒定。

1.2.2 效應(yīng)指標(biāo)的檢測

1.2.2.1 血漿尿素氮(BUN)肌酐(Cr)及皮質(zhì)醇(Cor)含量測定①BUN和 Cr的測定采用比色法，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作；② Cor的測定采用放射免疫法，并運用自動γ計數(shù)儀進(jìn)行測定，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.2.2.2 組織芯片的制作及相關(guān)指標(biāo)的檢測［5，6］(1)制作:肺組織于4%多聚甲醛中固定8 h后制成蠟塊，并將28 d BLM組作兩份切片(6 μm)，用于從原位雜交(ISH) 水平鑒定組織芯片用。之后按文獻(xiàn)方法［5，6］操作，將所有蠟塊用于制作組織芯片，共制作4套組織芯片蠟塊，同時相的3組標(biāo)本放在同一組織芯片塊上，每套兩個組織芯片蠟塊，每個蠟塊含30點陣，每點直徑2 mm。 切片:將組織芯片蠟塊于切片機上切片(6 μm)，漂片后粘貼于玻片上于80℃烘烤3 h后室溫下保存?zhèn)溆?。將備用的組織芯片玻片分別用于HE及膠原纖維染色、原位雜交檢測GR mRNA。鑒定:肉眼及用膠原纖維染色，觀察玻片上各點陣情況，若點陣上各點完整無缺失則組織芯片合格。此外，從原位雜交GR mRNA定量比較組織芯片及原蠟塊以鑒定組織芯片對原蠟塊的代表性。(2)膠原纖維染色:采用顯示膠原纖維細(xì)胞和肌肉的新染法，按文獻(xiàn)方法［3］進(jìn)行，結(jié)果判斷為膠原纖維呈紅色，細(xì)胞核和血細(xì)胞呈綠色，肌肉呈黃色。（3）GR mRNA.表達(dá)的原位檢測［2，3］：①運用組織芯片，常規(guī)脫蠟脫水，在探針雜交前所用的液體皆加入RNA酶的抑制劑Erasol使?jié)舛冗_(dá)0.1%；② 30%H2O21份加蒸餾水10份滴加于切片上室溫10 min，蒸餾水洗3次；③ 切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶，室溫消化組織芯片5 min(石蠟切片10 min)，用原位雜交用PBS洗3次各5 min，蒸餾水洗1次；④室溫后固定10 min，蒸餾水洗3次；⑤ 每張切片加20 μl預(yù)雜交液，放于濕盒中于雜交箱中40℃預(yù)雜交2 h，吸取多余液體后于每張切片加雜交液20 μl，蓋上封口膜于雜交箱中40℃雜交過夜；⑥雜交后的洗滌:揭掉封口膜37℃左右水溫的2×SSC洗5 min×2次；37℃0.5×SSC洗15 min×1次；37℃0.2×SSC洗15 min×1次；⑦滴加封閉液于37℃反應(yīng)30 min，甩去多余液體后滴加生物素化鼠抗地高辛于37℃反應(yīng)60 min，原位雜交用PBS洗5 min×4次；⑧滴加SABC于37℃反應(yīng)20 min，原位雜交用PBS洗5 min×3次，之后滴加生物素化過氧化物酶于37℃反應(yīng)20 min，原位雜交用PBS洗5 min×4次；⑨DAB顯色20~30 min，水洗終止反應(yīng)，經(jīng)蘇木素復(fù)染、鹽酸酒精分化及自來水沖洗后脫水、透明、封片。⑷ 圖像采集、處理及分析定量：利用 Imagepro plus 專業(yè)圖像分析軟件系統(tǒng)，于組織芯片上的每點(包括部份石蠟切片)的左右上下四個視野各采集一張100倍的圖像用于圖像處理及分析，4張圖像的平均值代表該芯片上該指標(biāo)的量，4套芯片上相對應(yīng)的同一指標(biāo)的4點再取平均值，代表該大鼠肺組織的該指標(biāo)的量:①HE染色，運用圖像分析軟件的計數(shù)功能對圖像上的細(xì)胞核進(jìn)行分離然后自動計數(shù)細(xì)胞核數(shù)，每個細(xì)胞核代表一個細(xì)胞，并與正常對照組細(xì)胞數(shù)的均數(shù)比較，其高出的差值越大，示炎癥程度越重；② 膠原纖維染色定量總膠原和原位雜交定量GR mRNA，運用圖像分析軟件先進(jìn)行顏色分離，然后自動計算其積分光密度(IOD)；IOD為各個單獨探測到的像素光密度的總和，包含了橫向的面積和縱向的像素深度，其值越大示所檢測指標(biāo)含量越高，故IOD越大示纖維化程度越重，此外，由于圖像分析軟件不能區(qū)分肺組織的不同細(xì)胞，故只能肉眼定位，大致判斷目的基因表達(dá)的分布。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)處理實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件行單因數(shù)方差分析(ANOVA)，所測數(shù)據(jù)以 ±s表示。

2 結(jié)果

2.1 動物表現(xiàn)肺纖維化組 (14 d及28 d)大鼠取食排便活動均減少，腎陽虛纖維化組還表現(xiàn)為消瘦，有的倦縮拱背，毛發(fā)松散脫落，口唇蒼白，瞇眼，尾巴濕冷。生理鹽水組活動取食皆活躍。

轉(zhuǎn)貼于

2.2 病理改變

2.2.1 腎陽虛纖維化組雙腎腫脹增大，表面見黃色米粒狀顆粒彌漫分布，但不突起肺纖維化組和生理鹽水組雙腎無明顯腫脹增大。生理鹽水組肺表面光滑，呈粉紅色，彈性良好；肺纖維化組及腎陽虛纖維化組肺呈暗紅色，體積增大，彈性較差，表面凸凹不平，但肺纖維化組更為明顯見。圖1~3。

1.NS(28d 肺腎) 2.BLM(28d 肺腎) 3.RYA(28d 肺腎)

圖1 各組大鼠肺腎大體改變比較（略）

2.2.2 腎臟及肺病理光鏡觀察腎陽虛大鼠腎皮質(zhì)區(qū)大多數(shù)腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞增多，腎小球呈分葉狀，除見較多異物肉芽腫結(jié)節(jié)之外，主要病變在腎小管，尤其是近曲小管與間質(zhì)的炎癥、異物肉芽腫、腎小管囊狀擴張并有較多纖維化病灶形成。肺纖維化組和生理鹽水組腎組織未見異常改變。生理鹽水組肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁未見增厚，肺泡上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，膠原染色示無明顯膠原沉積。肺纖維化組肺泡間隔顯著增寬，肺泡腔變形、閉塞、成纖維細(xì)胞及其基質(zhì)增生，其中有較多的單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤，膠原染色示紅色的膠原條索狀彌漫沉積，交織成網(wǎng)。腎陽虛纖維化組上述改變較輕，但炎性細(xì)胞浸潤程度依舊；膠原染色示肺泡間隔區(qū)域膠原沉積減輕，但支氣管壁及其周圍仍沉積明顯。見圖2。

2.3 各組肺系數(shù)肺炎癥及纖維化程度比較14 d時，RYA組和BLM組肺膠原纖維的沉積及炎性細(xì)胞浸潤皆非常明顯，但二者比較無明顯差異(P

表1 各組肺系數(shù)肺炎癥及纖維化程度比較（略）

與NS組比較P>0.05;， ，，，＃，＃＃， ＃，P0.05; ， ＃，P0.05; P

1.NS(28d 膠原染色 ×100)

2.BLM(28d 膠原染色 ×100)

3.RYA(28d 膠原染色 ×100)圖

圖2 各組大鼠肺組織膠原沉積程度比較（略）

1.NS(28d ISH ×100)

2.BLM(28d ISH ×100)

3.RYA(28d ISH ×100)

圖3 各組大鼠肺組織GRmRNA表達(dá)比較（略）

2.4 各組血漿Cr BUN及Cor含量比較RYA組大鼠血漿Cr 及BUN皆明顯升高，Cor則明顯降低，提示RYA組大鼠腎陽虛形成；BLM組三指標(biāo)則無明顯改變。見表2。

表2 各組血漿Cr BUN及Cor含量比較（略）

與NS組比較，*P>0.05， **P

2.5 腎陽虛肺纖維化和肺纖維化大鼠肺組織GRmRNA的表達(dá)14 d時，RYA組及BLM組GRmRNA表達(dá)皆呈上調(diào)趨勢，但與NS組比較無統(tǒng)計學(xué)意義；28 d時，BLM組肺組織GRmRNA表達(dá)明顯上調(diào)，主要分布于Ⅱ型肺泡上皮及支氣管上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞的胞核胞漿中，而RYA組無明顯上調(diào)，但與BLM組比較，GRmRNA表達(dá)則明顯下調(diào)。見圖3及表3。

表3 腎陽虛肺纖維化和肺纖維化大鼠肺組織GRmRNA的表達(dá)（略）

與NS比較*，＃， ＃＃P>0.05， ** P0.05， ＃＃P

3 討論

肺纖維化為肺間質(zhì)結(jié)締組織代謝失衡而過度沉積所致，目前還未有特效的治療方法，臨床上仍以糖皮質(zhì)激素治療為主，雖有一定療效，但病情的進(jìn)展惡化往往難以逆轉(zhuǎn)甚至延緩；據(jù)研究證實，腎陽虛證的本質(zhì)主要為下丘腦-垂體-靶腺軸功能減退所致，而溫陽中藥能改善此軸功能，其中，以腎上腺軸功能減退糖皮質(zhì)激素分泌減少為主要機制［1］，據(jù)此機制，說明糖皮質(zhì)激素具有溫陽作用，而具有溫陽作用的中藥也可能具有防治肺纖維化的潛在價值；此外，糖皮質(zhì)激素只有與其受體結(jié)合方能將信號沿受體后信號通路下傳而調(diào)控靶基因的表達(dá)而發(fā)揮作用，故我們運用中西醫(yī)結(jié)合之優(yōu)勢，建立了腎陽虛肺纖維化及肺纖維化大鼠模型，并從GR mRNA表達(dá)的水平來評估溫陽中藥及糖皮質(zhì)激素在肺纖維化防治中的價值。據(jù)腺嘌呤致腎陽虛和博萊霉素致肺纖維化動物模型相關(guān)文獻(xiàn)的評價方法［2~4］結(jié)合客觀指標(biāo)腎功能及血漿皮質(zhì)醇的改變，說明腎陽虛肺纖維化及肺纖維化大鼠模型復(fù)制成功。據(jù)Pujol L［7］等研究發(fā)現(xiàn)，對糖皮質(zhì)激素敏感的間質(zhì)性肺疾病結(jié)節(jié)病和隱源性間質(zhì)性肺炎患者肺組織GRalpha mRNA的表達(dá)明顯高于對激素不敏感的特發(fā)性間質(zhì)纖維化的患者，而GRbeta mRNA則無明顯差異；但肺纖維化肺組織GR mRNA的具體表達(dá)情況目前還未完全明了。據(jù)我們的實驗結(jié)果顯示，在博萊霉素致大鼠肺纖維化形成過程中，GR mRNA在肺纖維化大鼠肺組織的表達(dá)于2周時無明顯上調(diào)，4周時卻明顯上調(diào)，而此時相是以I型膠原纖維沉積為主，這就說明肺組織GR mRNA表達(dá)的上調(diào)是糖皮質(zhì)激素防治肺纖維化之所以有效的機制之一；此外，大鼠肺組織的炎癥反應(yīng)程度于2周及4周兩時相無明顯差異，提示肺組織GR mRNA表達(dá)的上調(diào)與肺組織炎癥反應(yīng)程度無明顯比例關(guān)系，說明糖皮質(zhì)激素防治肺纖維化的作用并不完全依賴其抗炎作用。據(jù)實驗結(jié)果顯示，在大鼠腎陽虛肺纖維化形成過程中， 肺組織GR mRNA表達(dá)無明顯上調(diào)，提示腎陽虛抑制了肺纖維化肺組織GR mRNA表達(dá)的上調(diào)，即在腎陽虛狀態(tài)下肺纖維化肺組織GR mRNA表達(dá)下調(diào)；據(jù)中醫(yī)認(rèn)為，久病及腎，久病必累及腎之陰陽［8］，故隨著肺纖維化病人病程的進(jìn)展，常常會致腎陽虛之發(fā)生，而此時肺組織GR mRNA表達(dá)下調(diào)，這就是臨床上許多肺纖維化病人對糖皮質(zhì)激素不敏感及糖皮質(zhì)激素未能阻止病程進(jìn)展的原因之一，當(dāng)然，肺組織GR mRNA表達(dá)下調(diào)也可認(rèn)為是腎陽虛證的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。此外，經(jīng)上千年的臨床實踐已明確溫陽藥能糾正腎陽虛，現(xiàn)代研究也證實溫陽藥確能改善下丘腦-腎上腺軸之功能［1］，正常情況下，糖皮質(zhì)激素高分泌日久會導(dǎo)致GR的下調(diào)，反之亦然，但在腎陽虛狀態(tài)下，據(jù)實驗結(jié)果顯示血漿糖皮質(zhì)激素及肺組織GR mRNA表達(dá)皆明顯降低，故溫陽藥在改善下丘腦-腎上腺軸功能的同時也極有可能上調(diào)肺組織GR mRNA的表達(dá)， 而糖皮質(zhì)激素防治肺纖維化的作用巳非常明確，故可認(rèn)為溫陽中藥對肺纖維化具有防治作用，值得進(jìn)一步研究。

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篇4

50%肺病患者“后知后覺”

據(jù)相關(guān)流行病學(xué)統(tǒng)計顯示，目前全球約有6.3億人患肺病，且50%的患者并不了解自己的實際病情。世界衛(wèi)生組織認(rèn)為，這主要是因為肺部有30%發(fā)生病變后仍可以正常生活，但達(dá)到40%的臨界點時，肺功能就會成倍地惡化，從而出現(xiàn)嚴(yán)重的咳喘、憋悶癥狀。如果不及時治療，病情還會加速發(fā)展，最終使得患者死于呼吸衰竭或心臟衰竭。

一般來說，肺部疾病主要有兩個病理改變，一是炎癥，但僅出現(xiàn)在呼吸疾病的急性期，診斷確切后用抗生素治療即可緩解病情，而另一個病理改變則是肺纖維化，這也是引起咳喘憋悶等癥狀的根源所在，臨床上僅采用解痙、擴張支氣管或應(yīng)用激素等辦法緩解癥狀，但往往需要患者長期服藥，且病情也會逐年加重。

肺泡起“老繭”影響呼吸

肺纖維化，其實并不是指一種獨立的疾病，而是一大類疾病的總稱。醫(yī)學(xué)上將肺纖維化歸屬于彌漫性肺間質(zhì)疾?。ê喎Q肺間質(zhì)病）。通俗地講，肺纖維化就是指肺組織疤痕累累，肺泡上或肺泡之間起了不少的“老繭”，導(dǎo)致肺泡的彈性、舒縮功能下降或者彌散功能降低，且逐漸被纖維性物質(zhì)取代。這樣一來，肺組織就會變硬、變厚，并導(dǎo)致肺臟氣體交換，氧氣進(jìn)入血液的能力逐步變?nèi)?。具體表現(xiàn)在患者身上，是因不同程度的缺氧，出現(xiàn)的呼吸困難、走路喘促等問題。且病情總是反復(fù)發(fā)作，咳咳喘喘，痛苦不堪，診斷治療不及時，還會存在因呼吸衰竭而死亡的可能。

為了方便大家理解，打個比方。將氧氣比作水，健康人的肺就像是干凈的優(yōu)質(zhì)海綿，有很好的吸水功能。但如果海綿里吸進(jìn)了膠水，海綿就會隨著膠水的凝固變硬。這時，吸水就成了很難的事情。而這里的“膠水”就是指肺部組織上沉積的纖維化物質(zhì)，當(dāng)它們滲入肺部后，便導(dǎo)致患者出現(xiàn)呼吸困難的癥狀。

病因眾多

導(dǎo)致肺纖維化的原因很多，常見的有環(huán)境、職業(yè)、物理和化學(xué)因素等，例如石棉、礦物粉塵、化療藥物、放射損傷、有害氣體吸入等。接觸鴿糞、動物皮毛、發(fā)霉枯草等引起的外源性過敏性肺泡炎，也可導(dǎo)致肺纖維化。還有一些風(fēng)濕免疫性疾病，例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征、皮肌炎、硬皮病等，也可伴發(fā)肺纖維化。

上樓氣不夠用，高度警惕

對于肺纖維化患者而言，明確診斷、早期干預(yù)對于預(yù)后和遏制疾病的發(fā)生顯得尤為重要。尤其是早期診斷，雖然肺纖維化包含的病種廣泛，但它們的共同特點是一般都表現(xiàn)為緩慢起病，初期多以干咳為主，痰少，快走或運動后喘促突出，也有部分患者會無任何癥狀。氣促是該類疾病的最常見首發(fā)癥狀，患者如果按平常速度走路或者步行上樓即感到胸悶，有“氣不夠用”的感覺，且這種不適呈漸進(jìn)性加重，就要引起高度警惕了。而疾病后期，則常出現(xiàn)呼吸衰竭，多數(shù)患者聽診后發(fā)現(xiàn)肺部有音。

對于特發(fā)性肺纖維化，目前西醫(yī)臨床上主要是以腎上腺皮質(zhì)激素及免疫抑制藥為主進(jìn)行治療。皮質(zhì)激素通過抑制炎癥細(xì)胞的趨化作用，能有效減少炎癥細(xì)胞的聚集，從而減少膠原的合成，但它同時也抑制了膠原酶的產(chǎn)生，因此效果不甚理想且副作用明顯，此外，長期應(yīng)用皮質(zhì)激素還可使機體免疫功能下降從而引發(fā)嚴(yán)重的繼發(fā)感染。

中醫(yī)辨治，從“肺脾腎”入手

雖然肺纖維化作為疑難病還未被完全攻克，但相比西醫(yī)、西藥這把“雙刃劍”，傳統(tǒng)中醫(yī)藥在論治該類疾病上，沒有明顯副作用，且治療相對溫和，療效很好，非常值得推廣。

從中醫(yī)內(nèi)科理論來看，肺纖維化雖然病在肺臟，但其反復(fù)發(fā)作、纏綿難愈與肺、脾、腎三臟關(guān)系密切。脾、腎為咳喘之本，肺為咳喘之標(biāo)。若脾氣虛弱，運化功能失調(diào)，就會影響至肺臟，即會出現(xiàn)咳痰等癥狀。而若肺氣虛損，也會反過來影響到腎臟，患者即會出現(xiàn)氣短、喘息、呼多吸少等腎不納氣癥狀。

具體到治療上，中醫(yī)學(xué)強調(diào)“整體辨證”為先，目標(biāo)主要是為了改善肺纖維化的臨床癥狀，延緩病情發(fā)展，減輕西藥的副作用?；诖?，在早、中、晚期，分別以疏風(fēng)祛邪、清熱祛瘀、祛痰、補益肺腎為大法，具體治療過程中再依據(jù)不同證型和兼癥佐以疏肝解郁、活血化瘀、健脾益氣等法貫徹其中，并實現(xiàn)個體化治療。

防治結(jié)合：飲食多樣化，遠(yuǎn)離過敏原

相對于治療而言，早期的預(yù)防顯得更為重要。而要真正A防肺纖維化，首先就是要保證規(guī)律的作息、足夠的休息，平時還要注意保暖，避免受寒，預(yù)防各種感染。注意氣候變化，特別是冬春季節(jié)，氣溫變化劇烈，及時增減衣物，做好防寒工作非常重要。在居住環(huán)境方面，建議居室一定要干凈衛(wèi)生，空氣要清新、濕潤、流通，避免煙霧、香水、空氣清新劑等帶有濃烈氣味的刺激因素，也要避免吸入過冷、過干、過濕的空氣。

在飲食方面，建議飲食清淡、易消化是第一原則，平時要多吃瓜果蔬菜，多飲水，汲取各種營養(yǎng)物質(zhì)，避免營養(yǎng)失衡，還要避免食用辛、酸、麻、辣、油炸的食物及蛋、魚、蝦等易誘發(fā)哮喘的食物。如果是已經(jīng)確診的患者，最好以流質(zhì)或半流質(zhì)飲食為主。

篇5

[關(guān)鍵詞]姜黃素；肺纖維化；細(xì)胞凋亡；Bcl-xl

[中圖分類號]R563　[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1672-4208(2009)19-0001-03

肺纖維化發(fā)病機制復(fù)雜，缺乏有效的治療方法，因此肺纖維化的臨床和基礎(chǔ)成為研究熱點。抗凋亡蛋白Bcl―x1能夠保護肺組織免受各種刺激，對肺纖維化有潛在治療的可能。肺纖維化早期應(yīng)用姜黃素，可降低血清Ⅲ、Ⅳ膠原、層粘連蛋白及透明質(zhì)酸含量，從而減輕肺組織纖維化程度，但姜黃素是否通過調(diào)節(jié)Bcl-xl的表達(dá)發(fā)揮抗肺纖維化的作用尚未見報道，筆者利用博來霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠模型，使用姜黃素對大鼠模型肺纖維化的進(jìn)展過程進(jìn)行干預(yù)，觀察其肺組織Bcl-x基因的表達(dá)，探討姜黃索治療肺纖維化的分子生物學(xué)機制。

1　材料與方法

1.1　實驗動物及分組　健康SD大鼠(二級)96只，雄性，4―6周齡，體重180｀220 g，由南華大學(xué)實驗動物部提供。

1.2　主要試劑　姜黃素由成都思科華生物技術(shù)有限公司提供，博來霉素由日本化藥株式會社提供，兔抗鼠Bcl―xl多克隆抗體及SABC免疫組化試劑盒購于武漢博士德公司，MMLV第一鏈CDNA合成試劑盒、PCR擴增試劑盒購自上海生物工程技術(shù)有限公司。

1.3　動物模型的建立　模型組、潑尼松龍組、姜黃素組，均一次性氣管內(nèi)給予博萊霉素(5 mg／kg)制作肺纖維化動物模型。對照組同樣方法一次性氣管內(nèi)注入等體積的生理鹽水。自造模后第1天起，姜黃素組每天以100 mg／kg姜黃素羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，正常對照組和模型組每天以1％羧甲基纖維素鈉10 ml／kg灌胃1次，潑尼松龍組以5mg／kg每日灌胃1次。大鼠在造模7、14、28 d后分3次取材，每次各組隨機處死8只，取材分別進(jìn)行HE染色，SABC法進(jìn)行免疫組化和RT-PCR法檢測RNA。

1.4　免疫組化檢測肺組織Bcl-xl免疫組化SABC法檢測，方法步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行(Bcl―x1多克隆抗體用1：150稀釋)，對照組設(shè)計以PBS代替一抗為陰性對照。陽性結(jié)果為細(xì)胞漿內(nèi)有棕黃色顆粒且著色明顯高于背景者，免疫組化在400倍視野下，每張玻片隨即取10個視野，用PIPS-2020高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)分別測定陽性顆粒的平均吸光度值(A值)，進(jìn)行分析處理。

RT―PCR檢測：目的基因Bcl―xl上游引物序列：5-GGCATCTTCTCCTYCCAGC-3，下游引物序列：5-CCCAGCCTCCGTFATCC-3，擴增片段為439 bp；內(nèi)參照B―actin上游引物序列：5-TCATCACTATCGGCAATGAGCG-GT-3，下游引物序列：5-ACTCCTGCTTGC TGATCCA-CATCT-3，擴增片段為345 bp。PCR引物由上海生物工程技術(shù)有限公司合成。提取肺組織總RNA，cDNA的合成嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，PCR擴增的條件與參數(shù)：94℃3min，94℃ 30 s，54℃ 30 s，72℃1 min，共30個循環(huán)，循環(huán)完畢后72℃延伸10 min。反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。確認(rèn)PER反應(yīng)產(chǎn)物。紫外燈下觀察結(jié)果、拍照和Total Lab凝膠成像系統(tǒng)軟件進(jìn)行條帶分析，測定電泳條帶密度，計算BCL-xlmRNA的相對量(A值)：BCL-xlmRNA相對量=BCL-xl產(chǎn)物電泳條帶密度／β―actin產(chǎn)物電泳條帶密度x100。

1.5　統(tǒng)計學(xué)分析　計量資料數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，組間比較采用單因素方差分析(One―Way ANOAY)，兩兩比較方差齊者采用SNK―Q法。所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。

2　結(jié)果

2.1 肺組織病理變化　空白組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)正常，模型對照組第7天為明顯的急性炎癥期，14天肺泡炎較前有所減輕，有膠原沉積及斑片狀的纖維化改變，28天肺泡炎較前略有減輕，大量肺泡結(jié)構(gòu)萎陷、破壞，大量膠原沉積在新生的毛細(xì)血管周圍。姜黃素組及潑尼松龍組肺泡炎、肺纖維化的程度都輕于模型對照組。

2.2　大鼠肺組織Bcl-x1免疫組化及mRNA結(jié)果肺組織Bcl―xJ蛋白表達(dá)陽性反應(yīng)主要表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞，同時段各組Bcl一2蛋白表達(dá)不同，正常肺組織有基礎(chǔ)表達(dá)，模型對照組表達(dá)明顯減弱，兩個治療組表達(dá)高于模型對照組，高于空白對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)，在第28天肺纖維化形成期姜黃素組和潑尼松龍組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P

3　討論

篇6

關(guān)鍵詞：百草枯中毒；肺纖維化；臨床護理

百草枯（PQ）又名“對草快”“克無蹤”，被大多數(shù)國家廣泛使用，尤其是發(fā)展中國家。它屬有機雜環(huán)類高效除草劑，易溶于水，在酸性及中性溶液中穩(wěn)定，遇堿分解，因其對人畜毒性強，治療難度大，預(yù)后差，死亡率高達(dá)50～80%。由于無特效解毒劑，血漿致死濃度低，口服致死量為1～3g，可致多臟器功能障礙綜合征。百草枯進(jìn)入人體內(nèi)導(dǎo)致肺、腎、肝及腎上腺出現(xiàn)不同程度的損傷，最典型的表現(xiàn)是肺損傷引起肺泡早期上皮細(xì)胞受損，肺泡內(nèi)出血水腫，炎癥細(xì)胞浸潤，也成為PQ患者中毒的主要死亡原因。PQ引起肺損傷及后期肺纖維化的病理生理機制尚未闡明?，F(xiàn)將2012年1月～2014月4月共收治百草枯中毒患者14例o理體會報告如下。

一、血液灌流護理

由于百草枯中毒缺乏特異性治療，目前臨床治療建議應(yīng)盡早行血液灌流護理，一般在中毒24h內(nèi)行血液灌流效果較好，可最大限度避免組織損傷。血液灌流通過吸附作用清除與蛋白結(jié)合的毒物及一部分游離毒物，在救治百草枯中毒中有較肯定的療效。血液灌流應(yīng)由專人操作注意治療前后的病情變化，記錄出入液量及血壓、脈搏、心率，同時予心電監(jiān)護并記錄，灌流結(jié)束后繼續(xù)觀察生命體征變化，每30分鐘記錄1次。因急性百草枯中毒可導(dǎo)致多器官臟器損害，應(yīng)盡早行重復(fù)血液灌流治療，可改善患者預(yù)后，降低患者的死亡率。

二、洗胃

早期徹底洗胃，清除體內(nèi)殘余毒物、減少毒物吸收是搶救成功的重要環(huán)節(jié)。患者中毒12小時內(nèi)應(yīng)盡快洗胃，這里由于我院收治的病人情況一般在基層醫(yī)院已進(jìn)行過洗胃，但是由于各方面原因，到我院后都再次進(jìn)行洗胃，盡量清除體內(nèi)殘余毒物。洗胃的方法可采用口服洗胃法、注射器進(jìn)行手工操作或者予洗胃機進(jìn)行洗胃，壓力比較柔和，胃黏膜損傷較少，可有效地預(yù)防胃出血。后期行胃腸減壓、口服活性炭及甘露醇，吸出殘余毒物。洗胃時患者取頭低左側(cè)臥位，使胃底和胃體中上部位置最低，胃竇部抬高，保證灌注液積聚在胃底和胃體部，以降低胃竇部兩側(cè)的壓力差，防止含有毒物的沖洗液進(jìn)入腸道。

三、口腔及消化道護理

百草枯對口腔黏膜有較強的腐蝕性，很多PQ中毒患者存在不同程度的口咽部受損癥狀，因此口腔護理是護理人員護理PQ中毒患者重要護理措施之一。護士應(yīng)嚴(yán)密觀察患者口腔黏膜、舌苔等情況，指導(dǎo)患者就餐前后漱口刷牙。我院每日除了生理鹽水的常規(guī)護理之外，還使用康復(fù)新液和幾丁劑漱口。由于使用了活性炭及甘露醇，應(yīng)注意觀察大便的性狀、次數(shù)和量，注意觀察有無消化道出血并監(jiān)測血壓。

四、營養(yǎng)支持

這里可分為腸內(nèi)營養(yǎng)（EN）和腸外營養(yǎng)（PN）。早期，由于患者禁食及胃腸減壓，應(yīng)予PN治療，遵醫(yī)囑按時完成當(dāng)日補液量及各種藥品的輸入，同時觀察患者的血壓及出入量情況。禁食后期如情況允許，應(yīng)盡早給予EN，促進(jìn)患者消化道粘膜的恢復(fù)。鼓勵患者早期可服用米湯、牛奶等流質(zhì)食物，之后根據(jù)病情逐漸加入雞蛋、瘦肉等高熱量、高蛋白及高維生素飲食，若患者進(jìn)食困難，可行胃管鼻飼。因刺激性及粗糙食物會對消化道造成不適感，應(yīng)避免使用，有文獻(xiàn)報道可給予1%利多卡因含咽來減輕疼痛。

五、呼吸支持

百草枯進(jìn)入人體后可造成各臟器出現(xiàn)損傷，而其中毒的特征性改變是肺損傷，也是PQ中毒患者的主要死亡原因。24小時后均出現(xiàn)肺組織損傷。早期使用高濃度氧氣吸入可增加活性氧形成，加重肺組織損傷。當(dāng)患者氧飽和度低于50%可予以低濃度氧氣吸入。我們醫(yī)院及有關(guān)文獻(xiàn)報道在嚴(yán)重ARDS時也可使用高PEEP的機械通氣治療，效果頗佳。

六、總結(jié)

由于百草枯中毒的高毒性，同時無特效解毒藥，故死亡率高。影響百草枯中毒患者最終結(jié)果的決定因素是吸收的百草枯劑量，迅速清除毒物、減少吸收是治療關(guān)鍵。早期除了應(yīng)用血液灌流、口服活性炭治療外，口腔護理和呼吸支持的護理格外重要，可以減少患者的痛苦，增加搶救成功率，同時配以合理有效的心理治療更能減輕患者的生理和心理痛苦，改善患者的生存質(zhì)量，延長患者的生存時間。由于百草枯中毒的高毒性和治療局限性，給護理提出了更高的要求。

參考文獻(xiàn)：

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篇7

關(guān)鍵詞：特發(fā)性肺纖維化； 肺痿； 臨床研究

【中圖分類號】R453【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A【文章編號】1002-3763（2014）09-0183-01 特發(fā)性肺纖維化（IPF）的發(fā)病原因不明確，指的是以普通型間質(zhì)性肺炎（UIP）為特征的一種慢性疾病，肺纖維化、肺泡單位結(jié)構(gòu)紊亂及彌漫性肺泡炎是該疾病的主要表現(xiàn)，患者會出現(xiàn)呼吸困難、干咳等癥狀，還伴有不同程度的乏力、消瘦、關(guān)節(jié)疼痛、胸痛、發(fā)熱等現(xiàn)象[1]。近年來，隨著中醫(yī)學(xué)肺病研究的不斷深入，中醫(yī)肺病的藥物研制、診療方法、癥候分型等方面有了很大的完善，然而特發(fā)性肺纖維化在中醫(yī)癥候分類標(biāo)準(zhǔn)、診斷和療效評價等方面仍存在一些問題，使研究成果不能很好的應(yīng)用到臨床治療過程中。

1 證型分類及標(biāo)準(zhǔn)

特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化在中醫(yī)學(xué)中沒有相應(yīng)的病名，醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中普遍將該疾病的病機變化和臨床表現(xiàn)作為癥型分類的標(biāo)準(zhǔn)，主要包括肺脹、咳嗽、肺痿、喘證、氣短、痰飲及肺痹等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)專家把特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)病名診斷依據(jù)視為肺痿和肺痹，但由于該疾病尚未有明確的診斷標(biāo)準(zhǔn)，研究方法的不同導(dǎo)致診斷標(biāo)準(zhǔn)有很大的差異，醫(yī)學(xué)古書籍中眾多專家學(xué)者都僅依靠各自的診療經(jīng)驗對患者進(jìn)行分型和治療，很難進(jìn)行最后的療效評定。

《中醫(yī)內(nèi)科常見病診療指南―西醫(yī)疾病部分》中將特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化作為一種肺系統(tǒng)疾病進(jìn)行診斷和分型，主要包括陰陽俱損證、燥熱傷肺證、肺腎兩虛、氣滯血瘀證、肺陰虧損證、肺氣虛寒證及痰濁阻肺證7種癥型?！吨嗅t(yī)內(nèi)科常見病診療指南―中醫(yī)疾病部分》通過辯證治療的方式主要針對特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化中的肺痿進(jìn)行了研究，西醫(yī)間質(zhì)性肺疾病中出現(xiàn)肺痿的頻幾率較高，將癥型主要歸為腎虛血瘀證、上熱下寒證、虛寒證及虛熱證四大類[2]。

2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

從西醫(yī)診療的角度來看，特發(fā)性肺纖維化的診斷難度較大，主要分為病因未明和病因明確兩種。其中間質(zhì)性肺炎（IIP）、肺泡蛋白沉積癥、肺血管炎和肺淋巴管平滑肌瘤病等疾病都屬于病因未明的范圍，而已經(jīng)明確的病因主要包括藥物影響，真菌、病毒和細(xì)菌等感染，放射性損傷，二氧化硫和煙塵等氣體影響，棉塵和霉草塵等有機粉塵，煤塵和石棉等無機粉塵。醫(yī)學(xué)研究中將特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化歸為間質(zhì)性肺疾病中的一種，認(rèn)為特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的病理學(xué)特點是普通型間質(zhì)性肺炎。根據(jù)2008年頒布的《間質(zhì)性肺疾病指南》中描述，確診特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的依據(jù)是通過高分辨率CT獲得的普通型間質(zhì)性肺炎影像學(xué)或外科手術(shù)活檢取得普通型間質(zhì)性肺炎組織學(xué)類型，還要求患者必須具有特異性的明顯臨床癥狀。此外在接受經(jīng)支氣管鏡活檢或淋巴細(xì)胞在支氣管肺泡灌洗液并無增多現(xiàn)象，不存在其他疾病的診斷依據(jù)，也可診斷為特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化[3]。

在特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化實際診斷過程中，將組織病理學(xué)、放射學(xué)及臨床學(xué)多學(xué)科知識進(jìn)行綜合，相互補充，共同應(yīng)用于臨床診斷。然而針對我國目前特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)研究水平有限，存在缺乏專業(yè)的病理學(xué)醫(yī)師就影像學(xué)醫(yī)師，醫(yī)院胸肺活檢規(guī)模不大等問題，導(dǎo)致各種疾病的治療效果各不相同。所以要想做到明確診斷特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化，就要確定診斷疾病的標(biāo)準(zhǔn)，避免同其他疾病混淆，這就使特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)診斷研究顯得尤為重要。

3 科研設(shè)計方法

臨床研究中缺乏對非特異性間質(zhì)性肺炎纖維化型及間質(zhì)性肺病急性發(fā)作治療的對比研究，所以導(dǎo)致循證醫(yī)學(xué)證據(jù)不足，影響臨床治療效果，隨著研究的深入，目前發(fā)現(xiàn)華法林、匹非尼同等藥物具有一定的治療效果，但是還未找到最有效的治療方法。中醫(yī)臨床研究表明盲目的應(yīng)用糖皮質(zhì)激素不僅起不到治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化疾病的效果，還會增大患者的病死率，只有在出現(xiàn)隱源性纖維化肺泡炎情況下才能發(fā)揮藥物的作用。所以臨床治療中一定要慎用[4]。

目前特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化的治療方法缺乏特異性，通常采用綜合性治療方式進(jìn)行干預(yù)，要在眾多專家達(dá)成共識的基礎(chǔ)上，根據(jù)當(dāng)前最佳的研究成果，選取合理的藥物和措施，制定綜合性的設(shè)計方案。此外，在進(jìn)行隨機對照試驗時一定要先對不同疾病的特點進(jìn)行研究，根據(jù)不同疾病的特征選取合理的研究方法。特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化并非臨床常見疾病，要結(jié)合該疾病的研究目的、條件設(shè)定科研方案。

4 療效評定指標(biāo)

通過中醫(yī)藥治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化能夠有效的緩解患者的呼吸困難、咳痰、咳嗽等癥狀，明顯提高患者的生活質(zhì)量，大大縮短了治療期限，具有很好的療效。然而在療效評價方面還有一些問題有待完善，導(dǎo)致研究成果缺乏可靠性，中醫(yī)藥在臨床治療中沒有充分發(fā)揮優(yōu)勢。中醫(yī)藥目前面臨的主要問題就是怎樣客觀、合理、科學(xué)的進(jìn)行評療效價。

目前中醫(yī)藥治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化采用的療效評價標(biāo)準(zhǔn)僅局限于血液流、影像學(xué)、體征、肺功能等方面的變化，一些研究采用國家頒布的《中醫(yī)病癥診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》中對肺病的評判標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，大致上分為無效、好轉(zhuǎn)和治愈，還有很多研究中自行擬定療效評價標(biāo)準(zhǔn)[5]。然而不足之處是評價的標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)性和可操作性都較差，沒有明確進(jìn)行規(guī)范，還缺乏對患者肺纖維化指標(biāo)的描述。

綜上所述，中醫(yī)藥治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化具有很好的臨床療效，在臨床治療過程中要選取合適的研究方法，制定科學(xué)的研究方案，明確診斷、分型，規(guī)范療效評價標(biāo)準(zhǔn)，保證研究成果更加可靠、實用，更好的指導(dǎo)臨床治療。

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篇8

【關(guān)鍵詞】白藜蘆醇；肺纖維化；羥脯氨酸；丙二醛；超氧化物歧化酶

文章編號：1009-5519（2008）24-3643-03 中圖分類號：R5 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

肺纖維化(Pulmonary fibrosis，PF)是多種原因引起的急慢性間質(zhì)性肺疾?。↖nterstitial lung disease,ILD）的共同結(jié)局，病因復(fù)雜，1713年首次描述，認(rèn)為發(fā)生原因是有機抗原的吸入?，F(xiàn)認(rèn)為可能與遺傳易感性[1]、病毒感染、免疫功能異常[2]、環(huán)境污染、藥物及化學(xué)品、放射線等有關(guān)；發(fā)病機制不明，病理特點是肺部炎癥導(dǎo)致肺泡持續(xù)性損傷及細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）的過度沉積；臨床主要表現(xiàn)為進(jìn)行性呼吸困難，干咳、疲乏，最終發(fā)生低氧血癥和呼吸衰竭。特發(fā)性肺纖維化（Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）約占所有ILD的一半[3]，病情呈進(jìn)行性發(fā)展，患病率約為7~20/10萬人[4]，并隨年齡的增長而增加，5年生存率70％[5]，確診后中位生存期3年，或出現(xiàn)癥狀后5年。其病理改變以出現(xiàn)片狀、不均一、分布多變的間質(zhì)改變?yōu)樘卣?。目前擁有的治療肺纖維化的手段只能減輕患者的癥狀，并沒有使患者的生存率有所改善[6]。

白藜蘆醇(Resveratrol，Res)是含有芪類結(jié)構(gòu)的非黃酮類多酚化合物, 化學(xué)名為3，4'，5-三羥基反均二苯代乙烯,于1940年首次從毛葉藜蘆的根部分離得到,到目前為止發(fā)現(xiàn)其廣泛存在于葡萄、虎杖、花生、桑椹、松樹、買麻藤、朝鮮槐等12科、31個屬的72種植物中。研究發(fā)現(xiàn)它具有多方面有益于人類健康的重要生物藥理活性,包括抗菌消炎、抗氧化、生長抑制活性、抗血小板聚集、激素調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性等,深受國內(nèi)外生物醫(yī)學(xué)界的重視[7]。近年來越來越多的資料表明Res對肺部疾病如慢性阻塞性肺疾病、支氣管哮喘、急性肺損傷、肺癌、肺動脈高壓等具有防治作用[8]，但其對肺纖維化是否也有防治作用還不清楚。本實驗通過制備BLM誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化模型，觀察Res對BLM致小鼠肺纖維化模型肺組織的病理學(xué)改變，研究Res對肺纖維化動物模型的治療作用，從而為Res治療PF提供實驗依據(jù)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：清潔級健康昆明種小鼠120只，體重18～22 g，由蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后用于實驗。

1.2 實驗藥物與儀器：Res購自西安天一生物技術(shù)有限公司,化學(xué)純度為98%以上；醋酸潑尼松片購自天津藥業(yè)焦作有限公司生產(chǎn)；注射用BLM由日本化藥株式會社生產(chǎn)。羥脯氨酸（HyP）含量測定、超氧化物歧化酶（SOD）活力測定、丙二醛（MDA）含量測定、谷胱甘肽含量測定和總蛋白測定等試劑盒購自南京建成生物工程公司。OLYMPUS CX31光學(xué)顯微鏡；722型分光光度計。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物造模方法：用4%水合氯醛腹腔注射麻醉（0.1 ml/10g體重），小鼠仰臥固定于鼠臺上，頸部酒精消毒后逐層分離并暴露氣管，注射器經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管，然后緩慢注入0.05 ml BLM生理鹽水溶液（5 mg/kg）或生理鹽水溶液，注后立即將動物直立并左右旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)均勻分布。實驗期間，小鼠自由飲水和進(jìn)食。

1.3.2 動物分組與處理方法：昆明種小鼠隨機分為4組：假手術(shù)組、模型組、Res治療組和陽性藥物組(醋酸潑尼松片)，每組30只。昆明種小鼠造模后第二天，分別給各組小鼠生理鹽水，醋酸潑尼松和Res。Res治療組于造模第二天起給Res 100 mg/kg灌胃，潑尼松組給潑尼松6.67 mg/kg灌胃，假手術(shù)組和模型組給予等容積的生理鹽水灌胃。假手術(shù)組、模型組、Res治療組和陽性藥物組分別于給藥后7天、14天和28天頸椎脫臼處死，分離出雙肺，取右肺置于4%甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟切片，HE染色；部分肺組織在冰浴條件下制成5%勻漿并冷凍保存，用于生化指標(biāo)測定；部分肺組織冷凍保存，用于羥脯氨酸含量測定。

1.3.3 組織病理學(xué)觀察：取右肺，4％甲醛溶液固定，常規(guī)病理學(xué)方法脫水、包埋 、切片、HE染色。根據(jù)Szapiel等方法評價肺泡炎癥和肺纖維化程度。肺泡炎癥及纖維化的判斷：0級：無肺泡炎或纖維化；1級：病變范圍占全肺的20%以下；2級：病變范圍占全肺的20%～50%；3級：病變范圍超過全肺的50%。

1.3.4 肺組織HyP含量測定：肺組織HyP含量按HyP含量測定試劑盒說明書采用樣本堿水解法進(jìn)行。

1.3.5 肺組織SOD、MDA含量的測定：肺組織SOD、MDA含量按照南京建成的相關(guān)測定試劑盒進(jìn)行測定。

1.3.6 統(tǒng)計分析：實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件SPSS11.0進(jìn)行單因素方差分析,實驗結(jié)果采用（x±s）表示，P

2 結(jié)果

2.1 病理組織學(xué)改變：HE染色顯微鏡觀察可見：假手術(shù)組各時期肺支氣管和肺泡結(jié)構(gòu)正常；模型組第七天肺泡間隔增厚，肺泡腔及間隔內(nèi)炎癥細(xì)胞聚集，肺泡腔縮??；14天時炎性細(xì)胞滲出減輕，肺泡間隔增厚，成纖維細(xì)胞增多；第二十八天肺泡結(jié)構(gòu)破壞，纖維化明顯，證明造模成功。與模型組相比，Res治療組實驗小鼠在各相應(yīng)時點炎細(xì)胞浸潤、肺泡間隔增寬、肺泡結(jié)構(gòu)破壞及纖維化程度方面均有不同程度減輕（P

2.2 Res對肺纖維化小鼠肺組織HyP含量的影響：與正常組相比，模型組小鼠肺組織HyP含量在各相應(yīng)時點均升高，而在14、28天時顯著性升高（P

2.3 Res對肺纖維化小鼠肺組織SOD、MDA含量的影響：與正常組相比，模型組小鼠肺組織SOD活力在各時間點均顯著性降低（P

與正常組相比，模型組肺纖維化小鼠肺組織MDA含量在各相應(yīng)時間點均顯著升高（P

3 討論

PF的實質(zhì)是由于膠原和其他細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的合成與降解失衡,導(dǎo)致ECM在肺內(nèi)過量沉積。正常生理情況下，ECM各種成分的合成與降解處于平衡狀態(tài)。各種原因引起的組織損傷均可以使ECM代謝失去平衡。HyP是脯氨酸羥化酶對前α-肽鏈中脯氨酸殘基的羥化作用而形成，約占膠原肽鏈氨基酸的10%。在ECM中除彈性蛋白含有少量HyP（約1％）外，均不含HyP。由于HyP主要存在于膠原，HyP含量的測定可以間接反映膠原含量，因此，測定HyP的含量常被用于肺纖維化的研究[9]。本實驗肺組織HyP含量測定表明，與正常組相比，PF模型小鼠在14、28天時肺組織HyP含量明顯升高；與模型組相比，Res治療組小鼠在14、28天時肺組織HyP含量顯著下降。說明在PF晚期，Res可以調(diào)節(jié)肺組織中膠原的代謝，減輕膠原在肺間質(zhì)的沉積，起到減輕PF的作用。

氧自由基的大量產(chǎn)生在BLM所致的PF形成中起重要作用。BLM與組織中的亞鐵離子結(jié)合形成復(fù)合物，該復(fù)合物能為氧分子提供電子,催化Res的生成。Res可以通過多種方式損傷肺組織，最終促進(jìn)肺纖維化的形成。SOD是體內(nèi)重要的清除氧自由基的酶，對機體的氧化/抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用，可以保護肺組織細(xì)胞免受損傷。其活力的高低間接反映了機體清除氧自由基的能力。氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸,形成脂質(zhì)過氧化物，主要是MDA，其含量的高低可以反映機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映出細(xì)胞損傷程度。因此，SOD與MDA常同時測定來評價抗氧自由基的價值。Res是一個有效的羥基、超氧化物和金屬誘導(dǎo)基團的清除劑，并對活性氧Res引起的細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化和DNA損傷具有保護作用。本實驗研究發(fā)現(xiàn)BLM能造成小鼠體內(nèi)抗氧化酶系SOD活性的降低，MDA的含量增加,反映出脂質(zhì)過氧化物生成量的增加，而Res通過升高肺組織SOD活力，降低肺組織MDA的含量，清除體內(nèi)過多的氧自由基而抑制細(xì)胞外基質(zhì)的異常重構(gòu)所致的纖維化。

本實驗研究結(jié)果表明BLM誘導(dǎo)的PF小鼠體內(nèi)的SOD活力降低，MDA水平升高，產(chǎn)生過多的氧自由基，引發(fā)細(xì)胞和組織受到損傷，這可能是誘發(fā)PF的病因之一。

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篇9

【摘要】 目的探討大黃蟲丸防治肺纖維化作用及機理。方法用平陽霉素誘導(dǎo)大鼠肺纖維化模型后，第14天開始用藥組每天灌胃大黃蟲丸，第28天后處死各組大鼠，觀察、比較各組大鼠肺部病理組織學(xué)改變及肺組織中腫瘤壞死因子α（TNF-α）表達(dá)。結(jié)果模型組大鼠肺纖維化程度、肺組織中TNF-α表達(dá)均明顯高于正常對照組及用藥組(P

【關(guān)鍵詞】 肺纖維化；腫瘤壞死因子α；大黃蟲丸；大鼠

肺間質(zhì)纖維化是多種肺間質(zhì)疾病發(fā)展到晚期的一種常見病理變化。雖然導(dǎo)致肺纖維化的原因不同，但其病理變化都從肺泡炎開始。一般認(rèn)為肺纖維化改變是不可逆的， 西醫(yī)治療肺纖維化首選糖皮質(zhì)激素，但只有部分如非特異性間質(zhì)性肺炎（NSIP）和脫屑性間質(zhì)性肺炎（DIP）等對激素反應(yīng)較好，另一方面長期大劑量應(yīng)用激素必將引起嚴(yán)重的代謝紊亂、免疫抑制和繼發(fā)感染等不良反應(yīng)，故防治肺纖維化藥物的研究日益成為國際肺科學(xué)界關(guān)注的熱點。近年來中藥治療肺纖維化報道較多，取得可喜成效，已被列入中華醫(yī)學(xué)會肺纖維化防治方案中。本實驗在有關(guān)文獻(xiàn)和既往課題研究的基礎(chǔ)上， 觀察了大黃蟲丸對肺纖維化疾病模型的肺部病理損害和肺組織中腫瘤壞死因子α(TNF-α)表達(dá)的影響， 對肺纖維化的發(fā)病機制和大黃蟲丸對肺纖維化的干預(yù)機制進(jìn)行探討，為肺纖維化的中醫(yī)藥防治研究提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動物普通級健康Wistar大鼠48只，雌性，體質(zhì)量180～220 g，由河南省動物實驗中心提供，動物批號：0001432。飼養(yǎng)于河南中醫(yī)學(xué)院動物實驗中心，室溫（22±2）℃，相對濕度60%，常規(guī)飼料喂養(yǎng)，飲水量不限。

1.2 主要藥物、試劑與儀器

平陽霉素:天津太河制藥有限公司，批號07010203。大黃蟲丸:湖南九芝堂制藥廠，批號070602。潑尼松片:浙江仙琚制藥股份有限公司，批號:070608。兔抗人、鼠TNF-α多克隆抗體：武漢博士德生物工程有限公司，產(chǎn)品編號：BA0431。即用型SABC免疫組化試劑盒:武漢博士德生物工程有限公司， 產(chǎn)品編號SA1022。 DAB顯色試劑盒:武漢博士德生物工程有限公司，產(chǎn)品編號ED1022。HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng):同濟醫(yī)科大學(xué)千屏影像工程公司。

2 方法

2.1 動物分組

將動物隨機分為4組：正常對照組、模型對照組、大黃蟲丸組、潑尼松對照組，各組動物均為12只。

2.2 動物造模與用藥

本實驗選用大鼠氣管內(nèi)一次性注入平陽霉素復(fù)制肺纖維化模型［1］。除正常對照組正常飼養(yǎng)不作任何處理外，模型對照組及用藥組按文獻(xiàn)方法造模，以水合氯醛腹腔麻醉大鼠，取仰臥固定位，常規(guī)消毒，行頸正中切口，鈍型分離暴露氣管，經(jīng)氣管軟骨環(huán)間隙向心端穿刺注入平陽霉素生理鹽水溶液0.15 ml/100 g（平陽霉素3 mg/kg體質(zhì)量），立即將動物直立并行旋轉(zhuǎn)，使藥液在肺內(nèi)分布充分、均勻，縫合皮膚，待動物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。從造模后第14天開始，用藥組分別灌胃藥液1.5 ml/100 g體質(zhì)量，模型組灌入等量生理鹽水。每天給藥1次，每周復(fù)查動物體質(zhì)量以調(diào)整給藥量，各組于第28天處死。造模用藥平陽霉素按3 mg/kg進(jìn)行給藥，使用時用生理鹽水配制成2 mg/ml，按0.15 ml /100 g氣管內(nèi)給藥。其他藥物根據(jù)臨床常用藥量，參照動物與人體表面積折算系數(shù)計算動物每日用藥量大黃蟲丸1.2 g/kg，潑尼松片4 mg/kg體質(zhì)量，上述藥物使用時用蒸餾水配制。

2.3 檢測方法

2.3.1 觀察實驗

動物一般情況體質(zhì)量、飲食、皮毛、活動狀況等。

2.3.2 肺臟形態(tài)學(xué)觀察

實驗結(jié)束時稱取動物體質(zhì)量，腹主動脈取血處死動物，完整摘取肺臟，肉眼觀察臟器病變情況。

2.3.3 肺臟病理組織學(xué)檢查

取右肺下葉固定、脫水、包埋、切片，分別進(jìn)行HE、VG染色和免疫組織化學(xué)檢查。對HE、VG染色的切片參照文獻(xiàn)［2］將肺泡炎或肺纖維化程度分級: 0級無肺泡炎或無纖維化;Ⅰ級:輕度肺泡炎或纖維化，受累面積少于全肺的20%;Ⅱ級:中度肺泡炎或纖維化，受累面積20%～50%;Ⅲ級:重度肺泡炎或纖維化，受累面積>50%。

2.3.4 肺組織TNF-α檢測

采用免疫組織化學(xué)法。用HPIAS-1000計算機圖象分析系統(tǒng)對染色后的切片進(jìn)行定量分析，計算每張切片陽性細(xì)胞染色程度，免疫組化切片以細(xì)胞胞漿中呈清晰棕黃色為陽性。在高倍鏡下觀察，隨機選上、下、左、右、中央5個視野，測量目標(biāo)區(qū)域的平均光密度。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理，所用的統(tǒng)計檢驗均采用雙側(cè)檢驗，P值小于0.05將被認(rèn)為所檢驗的差別有統(tǒng)計意義。對服從正態(tài)分布的組間計量資料數(shù)據(jù)以±s表示，組間差異性判斷采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法，方差不齊時用Dunnett T3檢驗，肺纖維化程度為等級計數(shù)資料，采用Radit分析，以R值表示，組間R值的顯著性檢驗采用t檢驗。

3 結(jié)果

3.1 一般情況正常對照組大鼠活潑好動，強壯肥碩，皮毛光滑，體重逐漸增加，呼吸平穩(wěn)；模型對照組精神不振，行動遲緩，拱背蜷縮，皮毛干枯稀疏、無光澤、多見倒豎現(xiàn)象，身體較其它組消瘦，呼吸急促；潑尼松對照組開始尚可，后期出現(xiàn)皮毛干枯，反應(yīng)遲鈍，活動及飲食均減少，部分體重下降；大黃蟲丸組皮毛尚可，身體較壯，飲食較正常。

3.2 肺組織病理學(xué)檢查

3.2.1 肺整體形態(tài)觀察正常對照組肺外觀無明顯異常，呈粉紅色，表面光滑；模型對照組表面凹凸不平，呈暗紅色，邊緣有點狀出血，部分肺葉體積縮小，表面有大小不等的灰白色結(jié)節(jié)。大部分動物肺臟體積縮小，彈性明顯降低，表面條索狀凹溝。組間比較，潑尼松對照組與大黃蟲丸組雙肺色澤、體積、硬度、彈性、結(jié)節(jié)樣改變等情況有所好轉(zhuǎn)，兩肺顏色略暗紅，雙肺表面較模型對照組光滑，大部分動物肺臟彈性尚可，部分肺葉偶爾可見散在的點狀灰白色斑塊。

3.2.2 肺組織光鏡下病理檢查正常對照組大鼠肺結(jié)構(gòu)清晰，支氣管、肺泡及肺泡間隔組織結(jié)構(gòu)正常，無充血、水腫及急慢性炎癥等改變，各觀察點均未出現(xiàn)明顯病理改變。模型對照組肺泡間隔明顯增寬，成纖維細(xì)胞增生，膠原基質(zhì)明顯增多，炎性細(xì)胞浸潤；肺泡結(jié)構(gòu)破壞，部分肺泡腔消失、萎縮，肺泡壁顯著增厚、斷裂，肺纖維化病變等級多為Ⅱ～Ⅲ級。表明動物模型復(fù)制是成功的。潑尼松對照組、大黃蟲丸組與模型組比較，病理變化基本相似，但程度較輕，以肺纖維化病變?yōu)橹鳎闻萁Y(jié)構(gòu)破壞，肺纖維化瘢痕形成，毛細(xì)血管管腔閉塞。潑尼松對照組病變程度較大黃蟲丸組嚴(yán)重。肺纖維化程度經(jīng)Radit分析，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P

組別肺纖維化（第28天） 0Ⅰ級Ⅱ級Ⅲ級 R值正常對照 1200 0

3.2.3 各組肺組織中TNF-α的表達(dá)

TNF-α蛋白表達(dá)主要定位于肺泡巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及細(xì)支氣管上皮下組織以及肺間質(zhì)、血管平滑肌細(xì)胞中。TNF-α蛋白陽性表達(dá)呈棕黃色細(xì)顆粒狀，或呈棕黃色絲網(wǎng)狀，其表達(dá)越強，棕黃色細(xì)顆粒越多。

鏡下觀察肺組織免疫組化結(jié)果：正常肺組織切片可見少許陽性棕黃色產(chǎn)物分布。各組TNF-α的平均光密度值從高到低為：模型對照組>潑尼松對照組>大黃蟲丸組>正常對照組。模型對照組平均光密度值顯著高于正常對照組（P

4 討論

目前西醫(yī)治療肺纖維化首選糖皮質(zhì)激素，但僅對部分病人有效，另一方面，應(yīng)用激素可引起嚴(yán)重的代謝紊亂、免疫抑制、繼發(fā)感染等副作用。近年來中醫(yī)藥防治肺纖維化顯示出良好的前景，活血化瘀、補肺益腎、化痰通絡(luò)等治法與方藥證實對肺纖維化形成有預(yù)防和治療效果［3～5］。但對中醫(yī)藥防治肺纖維化的機制尚無統(tǒng)一認(rèn)識。

肺纖維化多由于肺泡上皮結(jié)構(gòu)和功能損傷，導(dǎo)致上皮基底膜裸出和斷裂，激活的成纖維細(xì)胞從斷裂的基底膜中間侵入肺泡腔內(nèi)，粘附在肺泡腔內(nèi)開始增殖，并向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變，分泌纖維粘蛋白、蛋白多糖和膠原等纖維成分，形成肺泡和間質(zhì)一體化的纖維化［6］，細(xì)胞因子在肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用，尤其是肺內(nèi)多處持續(xù)進(jìn)展的微小肺泡上皮損傷后產(chǎn)生細(xì)胞因子，其中TNF-α、TGF-β、PDGF、IL-1、內(nèi)皮素1（ET-1）、核蛋白中核因子（JBNF-JB）等與肺纖維化關(guān)系密切。TNF-α、IL-1是導(dǎo)致肺纖維化較關(guān)鍵的細(xì)胞因子，參與肺纖維化組織局部損傷與炎癥反應(yīng)。TNF-α是一種具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，與肺纖維化和間質(zhì)性炎癥有關(guān)，靜脈注射TNF-α可引起彌漫性肺泡損傷，以肺泡上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞壞死為主要表現(xiàn)。它可增加中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞的功能，并刺激其產(chǎn)生超氧化物，釋放溶酶體酶，對其周圍組織細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，它還可介導(dǎo)其他細(xì)胞因子和炎癥因子的表達(dá)，加重炎癥反應(yīng)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增殖并分泌大量的膠原［7］。 TNF-α在肺纖維化的發(fā)展過程中起雙重作用［8］。內(nèi)源性TNF-α的過量表達(dá)能促進(jìn)肺纖維化的形成；而外源性的TNF-α則可通過減少I型受體或增加前列腺素E2的分泌而抑制肺纖維化的形成。

總結(jié)文獻(xiàn)研究［9～12］，肺纖維化的病機包括氣虛、陰虛、血淤、痰濁等，一般早中期多實，大致包括瘀血阻滯、痰瘀互結(jié)、痰濁痹阻、風(fēng)濕痹阻等，但也有報道早期可出現(xiàn)肺腎兩虛［9］，晚期多虛，包括肺陰虧虛、肺氣虧虛、腎氣虧虛、肺腎兩虛、氣陰兩虛，也有因?qū)嵦撓嗷ビ绊懗霈F(xiàn)虛實夾雜。大黃蟲丸適應(yīng)的淤血阻滯病機可見于肺纖維化臨床病人。大黃蟲丸是《金匱要略》中治療虛勞挾瘀的代表方，長于緩消瘀血，多用于久病血淤。虛勞挾瘀是正虛與瘀血并存之證，臨床表現(xiàn)與肺纖維化后期表現(xiàn)相似。文獻(xiàn)報道大黃蟲丸能較好地減輕肝臟免疫性損傷，抑制纖維增生，防止肝纖維化［13］。大黃蟲丸對肺纖維化動物模型初期階段（7天）有一定的防治作用。

本研究提示大黃蟲丸具有減輕肺纖維化模型形成階段肺部病理改變的作用，大黃蟲丸具有顯著抑制肺組織中TNF-α表達(dá)的作用，這可能是其減輕肺纖維化模型形成階段肺部病理損害作用機制之一。

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篇10

【關(guān)鍵詞】肺纖維化 ；西醫(yī)；中醫(yī)

1基本概念

肺間質(zhì)纖維化亦稱彌漫性間質(zhì)性肺纖維化(Diffuse Interstitial Pulmonary Fibrosis，DIPF)或間質(zhì)性肺病(Interstitial Pulmonary Diseases，ILD)，泛稱為肺纖維化，是一種異型的疾病，病變主要發(fā)生于肺間質(zhì)，但也可累及肺泡上皮細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺的動靜脈。

2流行病學(xué)

各種CTD發(fā)生ILD的報道不一[1],隨著高分辨薄層CT(HRCT)的普遍應(yīng)用, CTD相關(guān)的ILD發(fā)現(xiàn)率也有增加。其中系統(tǒng)性硬皮病(SSc)(60%~70%)、混合性結(jié)締組織病(MCTD) (30% ~80%)、多發(fā)性肌炎(PM)/皮肌炎(DM)(23%~30%)[2]、干燥綜合征(PSS)(38%)[3]、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) (33%)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)(40%)[4]等發(fā)生率較高。

孫越、李海潮[5]回顧性分析1997年1月-2007年12月北京世紀(jì)壇醫(yī)院確診的90例CTD-ILD患者，其中類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)13例,系統(tǒng)性硬化癥(SSc)2例,皮肌炎/多發(fā)性肌炎(DM /PM)9例,干燥綜合征(SS)8例,系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)6例,重疊綜合征(OS)9例,未定型結(jié)締組織病(UD-CTD)10例,抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體相關(guān)性血管炎(AASV)33例。

張火亙、董怡、張奉春[6]對北京協(xié)和醫(yī)院1990年1月―1997年6月收治的842例CTD中ILD發(fā)病情況進(jìn)行了回顧性總結(jié)和分析，其中RA為22.5%, SLE為3.2%,SSc為49.4%, DM /PM為28.7%,原發(fā)性干燥綜合征(pSS)為15.5%,混合性結(jié)締組織病(MCTD)為14.5%。

3西醫(yī)治療

3.1原發(fā)病的治療

3.1.1 糖皮質(zhì)激素糖皮質(zhì)激素是一種傳統(tǒng)的治療間質(zhì)性肺疾病的藥物,對于非特異性間質(zhì)性肺炎、脫屑型間質(zhì)性肺炎和隱匿型機化性肺炎,激素療效通常較好,而對于特發(fā)性肺纖維化有效率極低或無效。其用法:潑尼松或其他等效制劑的糖皮質(zhì)激素,每天0.5 mg/kg(理想體重,以下同),口服4周;然后每天0.25 mg/kg,口服8周;繼之減量至每天0.125 mg/kg或0.25 mg/kg,隔天1次口服。另有研究證實[7],靜脈應(yīng)用甲基強的松龍沖擊(10 mg/kg)也可使病情穩(wěn)定,尤其適用于病情惡化或急性加重者。但糖皮質(zhì)激素不適用于:慢性病程;廣泛的纖維化;肺高分辨率CT沒有磨玻璃樣改變;患者有禁忌證。

3.1.2環(huán)磷酰胺 糖皮質(zhì)激素對肺泡炎的長期緩解效果不佳,可應(yīng)用環(huán)磷酰胺來彌補這一缺憾。應(yīng)用環(huán)磷酰胺可以使患者的用力肺活量(FVC)得到更明顯的改善。其用法:按每天2 mg/kg給藥,開始劑則可為每天25～50 mg口服,每7～14天增加25 mg,直至最大量150 mg/d。另有研究證實[7靜脈應(yīng)用環(huán)磷酰胺(15 mg/kg)也可使病情穩(wěn)定,尤其適用于病情惡化或急性加重者。糖皮質(zhì)激素與環(huán)磷酰胺聯(lián)合使用的療效優(yōu)于單一使用糖皮質(zhì)激素[8]。以上兩種藥物的治療至少持續(xù)6個月,用藥期間要監(jiān)測和預(yù)防藥物的不良反應(yīng)。

3.1.3抗纖維化新型廣譜抗纖維化復(fù)合物有吡非尼酮。探索階段的抗纖維化治療藥物有秋水仙堿、D-青酶胺和抗氧化劑(N-乙酰半胱氨酸)等?，F(xiàn)已證實在細(xì)胞水平,干擾素γ有抑制多種細(xì)胞增殖及抗纖維化的功能。另外北京協(xié)和醫(yī)院發(fā)現(xiàn)血管緊張素Ⅱ1型受體阻斷劑氯沙坦能夠干預(yù)實驗性肺纖維化[9]。

3.1.4基因治療 在一些實驗性纖維化模型的嘗試中獲得了一些成功,臨床療效亦不肯定。

3.2對癥治療

3.2.1 氧療 CTD相關(guān)的ILD可導(dǎo)致低氧血癥的發(fā)生,而低氧血癥又可加速重要臟器的損傷,影響預(yù)后,因此對于有低氧血癥的CTD相關(guān)ILD患者應(yīng)給予積極合理的氧療,爭取維持動脈血氧飽和度在90%以上。

3.2.2抗凝治療 ILD使炎癥和血管損傷導(dǎo)致的高凝狀態(tài)使患者額外死亡，近期,一項非雙盲實驗將56例先天性肺纖維化( IDF)患者分成單一潑尼松組及潑尼松+抗凝劑組,結(jié)果顯示IPF急性惡化相關(guān)死亡率在單一潑尼松組顯著低于潑尼松+抗凝劑組(18%vs 71%,P=0?008) [10]。

3.3手術(shù)治療對內(nèi)科治療無效的CTD相關(guān)的ILD的患者實施肺移植手術(shù)也是一種選擇。當(dāng)肺功能嚴(yán)重不全、低氧血癥迅速惡化,但不伴有嚴(yán)重的心肝腎病變年齡小于60歲者,可考慮進(jìn)行肺移植[11]。

4中醫(yī)治療

一些學(xué)者根據(jù)該病臨床表現(xiàn)而將其歸于“喘證”、“肺脹”“短氣”“痰飲”“咳嗽” “肺痿”。有人根據(jù)《素問?玉機真藏論》“病入舍于肺,名曰肺痹……發(fā)咳氣?！奔啊端貑?痹論》“皮痹不已,復(fù)感于邪,內(nèi)舍于肺……”的論述,結(jié)合現(xiàn)代研究,認(rèn)為肺間質(zhì)纖維化屬“肺痹”范圍。

4.1中藥分期、分型辨證治療金氏等[12]按病程分期辨證治療肺間質(zhì)纖維化18例,取得滿意療效。早期辨證為風(fēng)燥傷肺,方以桑杏湯加減；中期辨證為氣陰兩傷,方選保真湯加減；晚期辨證為痰熱郁肺,以桑白皮湯加減。

孔祥文[13]根據(jù)該病發(fā)生發(fā)展的病理過程,分三型進(jìn)行治療:痰熱郁肺型,治以瀉肺化痰平喘,方用桑白皮湯加減;痰熱互結(jié)型,治以活血通絡(luò),平喘化痰,方用血府逐淤湯、丹參飲合二陳湯加減;肺腎氣虛型,治以補腎納肺,降氣平喘,方用平喘固本湯和補肺湯加減。

王海彤等[14]認(rèn)為該病可分輕、中、重三期來辨證治療,亦有夾感發(fā)作與慢性遷延之分。早期,以肺脾氣虛,痰淤阻肺多見;中期以肺腎陰虛,痰熱淤阻或肺腎氣陰兩虛,痰熱互結(jié)多見;晚期多見肺腎陽虛,淤血水犯之候。一般遷延期以固本扶正,活血化淤為主,根據(jù)肺脾腎所虛之主次,予以調(diào)補,益肺腎氣陰為主,而尤應(yīng)重視補腎,并根據(jù)正邪盛衰,酌用養(yǎng)血活血之品。夾感發(fā)作期,以解表化淤,宣降肺氣為主,佐以益氣養(yǎng)陰或益氣活血之品.晚期呼吸衰竭,正虛邪盛,變證較多,需視證候立法選方。

趙子賢[15]強調(diào)復(fù)方治療本病,常根據(jù)辨證與辨病原則選藥,辨證針對本病的氣陰兩虛,兼有痰、瘀、熱之邪的病機,采用益氣養(yǎng)陰為主,兼用活血化瘀、清熱解毒、化痰定喘等治法。

曹世宏[16]認(rèn)為,本病以肺燥陰傷和肺氣虛冷為主,且相互兼夾。早期病情較輕時以肺陰虧虛的表現(xiàn)為多,晚期病情較重時則多見氣陽不足的表現(xiàn)。以滋陰清熱、健脾溫肺為治療大法,藥用太子參、黃芪、百合、生地、玉竹、麥冬、五味、蒼術(shù)、白術(shù)、山藥、茯苓等。

4.2復(fù)方中成藥治療楊氏等[17]治療肺纖維化24例,以刺五加注射液250 mL,每日靜滴2次,結(jié)果表明其可明顯降低IPF患者肺泡支氣管灌洗液(BALF)中腫瘤壞死因子(TNF-α)水平,癥狀有緩解。

劉氏等[18]觀察生脈注射液對惡性胸部腫瘤放療后肺纖維化的臨床療效,結(jié)果肺纖維化的發(fā)生率為33.85%,較單純放療組52.31%的發(fā)生率明顯為低。

黃氏等[19]用雙黃連凍干粉劑60 mg/kg和香丹注射液10～20 mL分別加入5%葡萄糖注射液250 mL中靜滴,治療放射性肺纖維化合并感染,總有效率93.8%。

4.3針灸療法以肺俞為主的腧穴治療肺纖維化由來已久,療效確切,但現(xiàn)代文獻(xiàn)極少報道針灸參與治療肺纖維化。李氏等用強的松加刺血與艾灸結(jié)合治療22例患者,少商、商陽用三棱針點刺出血,雙側(cè)肺俞、膏肓俞麥粒灸。結(jié)果該方法可明顯改善特發(fā)性肺纖維化（IPF）患者的肺功能,其療效優(yōu)于單純強的松治療者,并可提高糖皮質(zhì)激素對IPF的臨床療效。

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