導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫好一篇建蘭花，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

關(guān)鍵詞 建蘭花葉病毒；熒光RT-PCR；快速檢測(cè)；蜘蛛蘭

中圖分類號(hào) S682.31；S432.41；S188 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2011）21-0176-04

Rapid Detection of Trace Amounts of Cymbidium Mosaic Virus by Real-Time RT-PCR

LIU Ai-chun LIU Chao LI Feng

（ Hangzhou Academy of Agricultural Sciences in Zhejiang Province，Hangzhou Zhejiang 310024）

Abstract According to the conserved sequence of the coat protein gene of Cymbidium mosaic virus（CymMV）in the GeneBank，three pairs of primers used in real-time RT-PCR methods were designed and synthesized for detecting traces of the virus which could not be detected by ordinary RT-PCR-Agarose gel electrophoresis in spider orchid（Arachnis sp.）. Melting curve analysis showed that each amplified product was a single product form. Sequencing and homology analysis indicated that the actual sequence lengths of the amplified products were entirely consistent with expectations，and the amplified gene had between 94% to 96% homology with the corresponding gene of CymMV in GeneBank in spider orchid. Compared to ordinary normal RT-PCR，the real-time RT-PCR method characterized by high sensitivity，fast operation，intuitive and accurate，is suitable for detection of trace amounts of CymMV and early diagnosis in seedlings.

Key words Cymbidium mosaic virus；real-time RT-PCR；rapid detection；Arachnis sp.

建蘭花葉病毒（Cymbidium mosaic virus，簡(jiǎn)稱CymMV）和齒蘭環(huán)斑病毒（OdontogLossum ringspot virus，簡(jiǎn)稱ORSV）是發(fā)生最為普遍的蘭花病毒，廣泛分布于全世界栽培蘭花的地區(qū)[1-6]，這2種病毒傳染性強(qiáng)，其中CymMV相對(duì)ORSV更易傳染，在市場(chǎng)上蝴蝶蘭、文心蘭和卡特蘭CymMV的感染率高達(dá)66%以上[7]，病毒侵染導(dǎo)致植株生長(zhǎng)不良甚至死亡，有時(shí)病毒感染后還會(huì)在植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期出現(xiàn)較長(zhǎng)時(shí)間的隱癥現(xiàn)象，但帶毒植株開花小而少，花期縮短，發(fā)病蘭株觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值大為下降，還會(huì)導(dǎo)致種質(zhì)退化，對(duì)蘭花產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重危害。

多年來(lái)，國(guó)內(nèi)學(xué)者不斷深入地對(duì)CymMV的檢測(cè)技術(shù)開展研究工作：1997年，潘俊松等[8]從石桷蘭中分離出CymMV用于制備抗血清；鄭 平等[9]用組織涂抹酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測(cè)CymMV和ORSV；周國(guó)輝等[10]用RT-PCR方法對(duì)病毒分子進(jìn)行鑒定；2007年施農(nóng)農(nóng)等[11]對(duì)用電鏡法對(duì)CyMV和ORSV進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察；2008年高煥利等[12]用IC-RT-PCR檢測(cè)CymMV，提出了該方法可檢測(cè)到CymMV分離物的最低病毒量為2.72 ×10-7 μg/mL（428 個(gè)拷貝）。2006—2008年期間，筆者在根據(jù)文獻(xiàn)資料的多種方法對(duì)147個(gè)樣品進(jìn)行CymMV檢測(cè)，并相應(yīng)的隔離栽培，但不時(shí)發(fā)現(xiàn)有部分初檢為陰性的樣品，經(jīng)過一段時(shí)間養(yǎng)護(hù)后復(fù)檢為陽(yáng)性，對(duì)苗圃中蘭花種苗的檢測(cè)也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)這種情況。這就涉及檢出限的問題，說(shuō)明有部分樣品中只含有微量CymMV，用前述的方法不能被檢出。

為解決檢測(cè)工作中由于隱癥、病毒濃度低、干擾物質(zhì)存在而影響檢測(cè)結(jié)果的問題，筆者摸索建立了利用實(shí)時(shí)熒光PCR儀快速檢測(cè)微量建蘭花葉病毒的方法，使建蘭花葉病毒的檢測(cè)水平從靈敏度、準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性上有所提高。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試材料。供試材料為蝴蝶蘭（PhaLaenopsis sp.）（1#）、卡特蘭（CattLeya sp.）（2#）、文心蘭（Oncidium sp.）（3#）、蜘蛛蘭（Arachnis sp.）（4#）、皇后蘭（GrammatophyLLmn sp.）（5#）、蕙蘭（C.Faberi）（6#），所有樣品之前經(jīng)ELISA篩檢，并由筆者所在實(shí)驗(yàn)室分類保存，其中本試驗(yàn)所用的卡特蘭、文心蘭和蜘蛛蘭為加保護(hù)液凍存的葉片組織，其他為從植株上采的新鮮葉片。

1.1.2 供試試劑。供試試劑為：UNIQ-10柱式總RNA抽提試劑盒（上海Sangon），MMLV一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒（上海Sangon）、One Step SYBR PrimeScriptTM RT-PCR試劑盒（大連Takara公司）。

1.1.3 供試儀器。供試儀器為：Bio-Rad Opticon 2熒光定量PCR儀（美國(guó)），Thermo Labsystem MuLtiskan Mk 3酶標(biāo)儀（上海雷勃），TC-96/H/G基因擴(kuò)增儀（大和熱磁），VARIAN CAR Y50紫外-可見分光光度計(jì)（美國(guó)）。

1.2 引物設(shè)計(jì)與合成

查詢NCBI基因庫(kù)（GeneBank），根據(jù)CymMV保守序列，設(shè)計(jì)并合成3對(duì)特異性引物（表1）。

1.3 RNA提取

樣品用液氮研磨成粉狀，稱取粉狀未解凍試樣（約為100 mg），提取步驟參照RNA抽提試劑盒推薦方法稍加調(diào)整，因試樣較粘稠，每100 mg試樣加0.8 mL裂解液提取，洗脫體積為50 μL。取20 μL RNA提取物用無(wú)菌水稀釋100倍在分光光度計(jì)上以波長(zhǎng)260 nm檢測(cè)總RNA含量，以A260/280比值和200～400 nm掃描圖檢測(cè)RNA純度，純化提取物直到A260/280比值>1.9。將提取物10 μL/管分裝在RNAase free的PCR管中，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 普通RT-PCR-瓊脂糖電泳定性檢測(cè)熔解曲線分析

將1.3提取的蘭花RNA用MMLV一步法RT-PCR擴(kuò)增試劑盒，反應(yīng)條件參照文獻(xiàn)[7]。反應(yīng)結(jié)束后，取C1、C4、C7產(chǎn)物分別為4.0、5.0、6.0 μL，各加0.5 μL上樣緩沖液，于1.2%瓊脂糖凝膠上（含EB 0.2 μL/mL ）進(jìn)行電泳。

1.5 熒光RT-PCR定性檢測(cè)和熔解曲線分析

將1.3提取的蘭花RNA用One Step SYBR PrimeScript TM RT-PCR試劑盒進(jìn)行熒光PCR定性檢測(cè)，具體操作步驟：每孔加RT-PCR Buffer（內(nèi)含dNTP Mixture，Mg2+，SYBR？誖Green I）25 μL，反轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶混合物2.0 μL；10 μmoL/L上游、下游引物（C7）各1.0 μL；水20 μL；最后加1.0 μL標(biāo)準(zhǔn)品或試樣，制成總體積為50 μL反應(yīng)液體系，以無(wú)菌水代替試樣作空白對(duì)照，加蓋密封，1 000 r/min離心1 min，在熒光PCR儀上逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增反應(yīng)，經(jīng)優(yōu)化后的一步法RT-PCR反應(yīng)條件為：①43 ℃，30 min；②94 ℃，15 s；③94 ℃，5 s；④55 ℃，30 s；⑤72 ℃，20 s；⑥讀板；⑦將③～⑥步PCR反應(yīng)循環(huán)30次；⑧72 ℃，5 min。將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)一步做熔解曲線分析：55～94 ℃；每0.5 ℃讀板1次，每點(diǎn)持續(xù)5 s。

1.6 熒光RT-PCR定量檢測(cè)

由于普通RT-PCR與熒光PCR定性檢測(cè)存在差異，對(duì)有差異結(jié)果通過與一定濃度的重組質(zhì)粒同時(shí)擴(kuò)增進(jìn)行定量分析。

1.6.1 標(biāo)準(zhǔn)品的制備。將得到的經(jīng)純化的擴(kuò)增產(chǎn)物，與質(zhì)粒（pUCm-T載體）連接并克隆，提取相應(yīng)的重組質(zhì)粒，制成100 ng/mL的溶液，以此作為標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。

1.6.2 一點(diǎn)法粗略定量檢測(cè)。將C4重組質(zhì)粒儲(chǔ)備液以無(wú)菌去離子水逐級(jí)稀釋成2.8×102質(zhì)粒/μL標(biāo)準(zhǔn)使用液。4#樣品和標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下進(jìn)行反應(yīng)：RT-PCR Buffer 12.5 μL，反轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶混合物1.0 μL；10 μmoL/L上游、下游引物（C4）各0.5 μL；水10 μmoL；最后加0.5 μL標(biāo)準(zhǔn)品或試樣，制成總體積為25 μL反應(yīng)液體系，反應(yīng)條件為：①43 ℃， 30 min；②94 ℃，2 min；③94 ℃，30 s；④、55 ℃，30 s；⑤72 ℃，25 s；⑥讀板；⑦將③～⑥步PCR反應(yīng)循環(huán)35次；⑧72 ℃，10 min。

1.6.3 絕對(duì)定量法檢測(cè)。將C7重組質(zhì)粒儲(chǔ)備液以無(wú)菌去離子水逐級(jí)稀釋成2.6×107、2.6×105、2.6×102質(zhì)粒/μL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。將1#、4#和5#樣品和標(biāo)準(zhǔn)品在相同條件下進(jìn)行反應(yīng)，引物為C1，其他反應(yīng)試劑同1.62，反應(yīng)條件參照文獻(xiàn)[13]。對(duì)線性范圍內(nèi)未知樣品用絕對(duì)定量法計(jì)算其原始拷貝數(shù)，對(duì)線性范圍以下的樣品進(jìn)行半定量分析其濃度范圍。

1.7 測(cè)序驗(yàn)證

收集1.4和1.6的擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)純化、克隆，委托上海Sangon測(cè)序。

2 結(jié)果與分析

2.1 CymMV 的普通RT-PCR-瓊脂糖電泳定性檢測(cè)結(jié)果

用所設(shè)計(jì)3對(duì)的CymMV PCR 引物進(jìn)行RT-PCR 反應(yīng)，能夠成功地在部分蘭花病樣總RNA 抽提物中擴(kuò)增到與預(yù)期大小相符的單一明亮的DNA電泳條帶（圖1）。由圖1可見4#樣在電泳圖上未檢出CymMV，但該植株再經(jīng)過3個(gè)月的隔離栽培后出現(xiàn)癥狀，并用ELISA和PCR方法均檢出CymMV，隨后逐漸枯死。

2.2 熒光RT-PC定性檢測(cè)結(jié)果

由圖2可知，4#樣的總RNA提取物經(jīng)熒光RT-PC定性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該蜘蛛蘭已被CymMV感染，但其含量極低，對(duì)產(chǎn)物進(jìn)一步進(jìn)行熔解曲線分析，結(jié)果4#樣與其他樣品的產(chǎn)物Tm都是78.0 ℃，并由圖3可知，其熔解曲線均為單一產(chǎn)物形態(tài)，表明4#樣與其他樣品的具有相同的單一產(chǎn)物。

2.3 熒光RT-PCR半定量檢測(cè)結(jié)果

由圖4可知，4#樣的CymMV C4模板濃度

2.4 測(cè)序結(jié)果

測(cè)序結(jié)果表明，所有擴(kuò)增產(chǎn)物的實(shí)際長(zhǎng)度與預(yù)期完全相符。應(yīng)用NCBI基因庫(kù)的BLAST對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行同源性分析，C1產(chǎn)物與基因庫(kù)中CymMV相應(yīng)序列的同源性≥96%；C4產(chǎn)物同源性89%～99%。C7產(chǎn)物的測(cè)序結(jié)果同源性比較見圖6，由圖6可知，1#樣蝴蝶蘭同源性≥96%；5#樣皇后蘭同源性≥97%，與AM055640.2所報(bào)道的序列完全相同，與1#樣有5個(gè)堿基的差異（同源性97%）；4#樣蜘蛛蘭與基因庫(kù)序列的同源性94%～96%；與基因庫(kù)中EU672821.1序列最接近，存在7個(gè)堿基的差異（同源性96%）；4#樣與1#樣有12個(gè)堿基的差異（同源性94%），4#樣被其他樣品污染的可能性極小。因此，認(rèn)為該植株在引進(jìn)時(shí)已經(jīng)攜帶微量的CymMV。

3 結(jié)論與討論

3.1 建立了微量CymMV的快速檢測(cè)方法

傳統(tǒng)的PCR-電泳方法無(wú)法對(duì)起始模板準(zhǔn)確定量，只能對(duì)終產(chǎn)物進(jìn)行分析，必須在擴(kuò)增后用電泳方法分析，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且電泳分辨率限制了該方法的檢測(cè)靈敏度。

熒光RT-PCR法在檢測(cè)時(shí)可進(jìn)行實(shí)時(shí)觀察擴(kuò)增狀態(tài)，因此在很大程度上加快檢測(cè)速度；該方法因所有試驗(yàn)在封閉系統(tǒng)內(nèi)完成，可變因素大大減少，比普通PCR方法靈敏度提高了102倍；因?yàn)椴恍枰M(jìn)行后期處理，可防止強(qiáng)致癌物溴乙錠對(duì)操作人員的危害。本研究建立的CymMV實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法具有靈敏度高、操作快速、結(jié)果直觀準(zhǔn)確的特點(diǎn)，可應(yīng)用于種苗中微量CymMV的早期檢測(cè)，并對(duì)深入開展CymMV生物學(xué)特性研究打下基礎(chǔ)。

3.2 檢測(cè)靈敏度可達(dá)基因拷貝數(shù)僅在個(gè)位數(shù)

熒光RT-PCR檢測(cè)方法不但可以定性分析，也可進(jìn)行定量分析，導(dǎo)入基因拷貝數(shù)解析，在本文中主要針對(duì)病毒含量在定量限（2.6×102拷貝）以下的樣品進(jìn)行分析，因此只能通過半定量方法推算其基因拷貝數(shù)僅在個(gè)位數(shù)。

3.3 熒光RT-PCR定性和絕對(duì)定量檢測(cè)對(duì)引物要求高

熒光PCR法的熒光擴(kuò)增曲線，不能分辨擴(kuò)增產(chǎn)物有幾個(gè)，因此必須是單一產(chǎn)物的擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)束時(shí)，可用熔解曲線法對(duì)擴(kuò)增的特異性進(jìn)行驗(yàn)證。因此，要求引物具有高度的特異性和目標(biāo)基因的保守性。

熒光RT-PCR定量檢測(cè)方法分為絕對(duì)定量和相對(duì)定量法，相對(duì)定量法檢測(cè)成本高，本研究主要針對(duì)生產(chǎn)應(yīng)用，因此，采用了絕對(duì)定量法，該種方法對(duì)于引物的特異性、保守性和產(chǎn)物的穩(wěn)定性要求較高，所應(yīng)用的引物應(yīng)經(jīng)過反復(fù)驗(yàn)證。

本該研究中，最初設(shè)計(jì)了7對(duì)引物，其中C1和C7互為巢式擴(kuò)增引物，就是為了防止出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增而設(shè)計(jì)的。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)從中篩選出3對(duì)符合要求的引物：C1、C4和C7。這3對(duì)引物中，C1和C7的產(chǎn)物保守性相對(duì)較高。C7產(chǎn)物序列較短，擴(kuò)增快速度快，定性快速檢測(cè)時(shí)宜選用C7引物；在定量檢測(cè)時(shí)，C1產(chǎn)物通過與質(zhì)粒連接作為標(biāo)準(zhǔn)品，可獲得較好的定量效果[13]；C7引物的定量方法有待進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

[1] KHENTRY Y，PARADORNUWAT A.Incidence of Cymbidium mosaic virus and Odontoglossum ringspot virus in Dendrobium spp.in ThaiLand [J].Crop Protection ，2006（25）：926-932.

[2] HU J S，F(xiàn)ERREIRA S.Detection of Cymbidium Mosaic Virus，Odontog- lossum ringspot Virus，Tomato Spotted WiLt Virus，and Potyvirues Infec- ting Orchids in Hawaii[J].PIant Disease，1993，77（5）：464-467.

[3] ZETTLER F W，KO N J，WISLER G C.Viruses of orchids and their control[J].PIant Disease，1990，74（9）：621-626.

[4] WISLER G C，ZETTLER F W，WU L，et al.Virus infections of vanilla and other orchids in French Polynesia[J].PLant Disease，1987，71（12）：1125-1129.

[5] FROWD J A，TREMAINE J H.Physical，Chemical，and Serological Prop-erties of Cymbidium Mosaic Virus[J].EtioLogy，1977（67）：44-48.

[6] HU J S，F(xiàn)ERREIR S，XU M Q，et al.Transmission，movement，and inactl-vation of Cymbidium mosaic viruses and Odontoglossum ringspot viruses[J].PLant Disease，1994（78）：633-636.

[7] 柳愛春，劉超，趙蕓，等.利用ELISA檢測(cè)兩種蘭花病毒的研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，21（2）：91-95.

[8] 潘俊松，劉志昕，鄭學(xué)勤.建蘭花葉病毒的分離、鑒定及檢測(cè)研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，1997，18（1）：63-70.

[9] 鄭平，劉榮維，劉擎，等.兩種蘭花病毒的快速檢測(cè)初報(bào)[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，1997，18（2）：47.

[10] 周國(guó)輝，陳曉琴，周潔浪，等.廣東省蘭花建蘭花葉病毒分子鑒定及其外殼蛋白基因序列分析[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，23（4）：381-384.

[11] 施農(nóng)農(nóng)，徐鶯，王慧中，等.復(fù)合感染建蘭花葉病毒和齒蘭環(huán)斑病毒的蘭花超微結(jié)構(gòu)觀察及病原物快速鑒定[J].分子細(xì)胞生物學(xué)報(bào)，2007，40（2）：153-157.

篇2

2、然后把正方形對(duì)折，然后從右下向上對(duì)折，翻過來(lái)同樣方法對(duì)折。

3、把折從中間翻折。

4、把相對(duì)兩面的半角向下對(duì)折。

5、對(duì)折后，把折向做翻，然后把兩個(gè)角應(yīng)著中間對(duì)折，對(duì)面的同樣方法對(duì)折。

6、對(duì)折后，把上面的三角向下，對(duì)面同樣的方法對(duì)折。

7、把整個(gè)紙撐起來(lái)，花籃的雛形就做好了，但是外邊的花籃邊很長(zhǎng)，把花籃兩側(cè)的邊折進(jìn)里面就可以了。

篇3

1、君子蘭主要以春夏為主要的開花時(shí)間。另一方面，君子蘭對(duì)于環(huán)境的適應(yīng)能力也比較強(qiáng)，有一定的耐旱抗旱能力，因此全年都可以開花。

2、君子蘭（學(xué)名：Clivia miniata），別名劍葉石蒜、大葉石蒜，是石蒜科君子蘭屬的多年生草本植物，屬觀賞花卉，原產(chǎn)于南非南部?；ㄆ陂L(zhǎng)達(dá)30-50天，以冬春為主，元旦至春節(jié)前后也開花，忌強(qiáng)光，為半陰性植物，喜涼爽，忌高溫。生長(zhǎng)適溫為15-25℃，低于5℃則停止生長(zhǎng)。喜肥厚、排水性良好的土壤和濕潤(rùn)的土壤，忌干燥環(huán)境。君子蘭具有很高的觀賞價(jià)值，中國(guó)常在溫室盆栽供觀賞。

（來(lái)源：文章屋網(wǎng) ）

篇4

過了幾天，當(dāng)我照例又到陽(yáng)臺(tái)澆水時(shí)，發(fā)現(xiàn)破盆里那棵不起眼的小草竟然開花了，幾朵紫色的小花像一群好朋友緊緊地?fù)肀г谝黄?，雖然談不上艷麗，可端莊淡雅，小巧玲瓏，很討人喜歡。為了表示對(duì)它的歉意，我特地把它移植到一個(gè)精致的小花盆里。

這幾天天氣很不穩(wěn)定，上午天還不錯(cuò)，下午卻刮起大風(fēng)下起大雨。放學(xué)后，趕到家一看。哎呀！花兒們都被打得東倒西歪，七零八落。那開著紫色小花的小草當(dāng)然也不例外，花落了，莖斷了。我心疼地捧起它的軀體，小心翼翼地埋在泥土里，還壓上了一塊石頭。我默默地說(shuō)：可憐的小生命，安息吧！

誰(shuí)知奇跡出現(xiàn)了，今天下午我去陽(yáng)臺(tái)上，竟然看見小草從石頭旁邊又冒出來(lái)了。它的莖上長(zhǎng)出一對(duì)對(duì)綠油油的小葉子，充滿了生機(jī)，仿佛在向人們驕傲地宣布：“我又站起來(lái)了！”

篇5

1、蝴蝶蘭可以在2—3個(gè)月后二次開花。將蝴蝶蘭的花莖從基部的4節(jié)—5節(jié)處剪下，這種剪法適合想要在當(dāng)年再次欣賞蝴蝶蘭的花姿的花友，不過這樣做會(huì)使蝴蝶蘭的養(yǎng)分消耗過大，對(duì)蝴蝶蘭來(lái)年的生長(zhǎng)不利。

2、蝴蝶蘭可以在第二年?duì)N爛開花。將蝴蝶蘭的花莖，從基部剪下，這樣做，可以最大程度的減少養(yǎng)分的消耗，讓蝴蝶蘭得以休養(yǎng)生息，第二年，可以燦爛的開花。

（來(lái)源：文章屋網(wǎng) ）

篇6

新課標(biāo)為了培養(yǎng)學(xué)生的綜合素質(zhì)提倡將課堂還給學(xué)生，讓學(xué)生當(dāng)課堂的主人，但我認(rèn)為這并不是說(shuō)教師就可以“兩袖清風(fēng)”了，實(shí)質(zhì)上是對(duì)教師的課堂掌控能力和對(duì)教學(xué)的把握能力的要求更高了，在我看來(lái)，在新課標(biāo)下，要打造高效課堂，教師所分配下去的預(yù)習(xí)、討論、查閱、實(shí)驗(yàn)、總結(jié)、講解等的課堂活動(dòng)應(yīng)該緊緊問繞課題重難點(diǎn)由淺入深由表及里的形成一個(gè)主干，而學(xué)生的活動(dòng)則是圍繞著這個(gè)主干所長(zhǎng)出的葉所開出的花。要想花開的多而美那主干必須扎實(shí)深入堅(jiān)實(shí)有力。

像杜郎口中學(xué)以及一些其他的示范學(xué)校已經(jīng)形成了一種相對(duì)系統(tǒng)高效的教學(xué)模式，全國(guó)各地也在轟轟烈烈的學(xué)習(xí)，但我以為如果盲目的一刀切即刻效仿恐怕并不能夠成就第二個(gè)杜郎口，反而會(huì)“畫虎不成反類犬”。所以教師和學(xué)生從傳統(tǒng)的角色轉(zhuǎn)換過來(lái)需要一個(gè)過程。

課堂是由教師和學(xué)生共同構(gòu)成的，因而要讓課堂達(dá)到高效就必須要有教師高效的教和學(xué)生高效的學(xué)。教師要做好不動(dòng)的主干讓學(xué)生在課堂上充分展示開出絢爛的花，這樣才能讓思維碰撞出火花，讓每個(gè)知識(shí)的大樹根基扎實(shí)且葉繁花美。

修煉出的干：

1、修煉自身基本功常常會(huì)有這樣的例子，同一堂課一樣的設(shè)計(jì)但有的給人感覺清新自然如沐春風(fēng)有的卻讓人感覺拖沓冗長(zhǎng)枯燥無(wú)味。這實(shí)際上很大一部分都取決于教師的.本素質(zhì)，由形象到氣質(zhì)有聲音到穿著由語(yǔ)氣到語(yǔ)調(diào)等，都需要精心準(zhǔn)備和不斷錘煉。形象氣質(zhì)不需要貌美高雅但要自然親切，穿著勿需高級(jí)名牌但求得體大方。聲音的條件雖然是天生的，但語(yǔ)氣語(yǔ)調(diào)卻是可以修改和調(diào)整的，力求讓學(xué)生感覺舒適親切喜歡深入心靈。

2、修煉準(zhǔn)備課堂的硬功。一堂課要想高效教師的準(zhǔn)至關(guān)重要，首先是教學(xué)設(shè)計(jì)要反復(fù)修改，永遠(yuǎn)不要期望一遍就行大概就行，教材分析不一樣，結(jié)合學(xué)情不一樣，斟酌課后練習(xí)資料不一樣，聽過課后又不一樣，從預(yù)習(xí)學(xué)案到導(dǎo)學(xué)案從活動(dòng)到練習(xí)到作業(yè)都要反復(fù)推敲，每一次修改都是一次自身能力和素質(zhì)的升華和深化。其次課堂的語(yǔ)言也要精心組織，每一句話要盡可能的精煉精準(zhǔn)，不羅嗦不敷衍不模棱兩可，盡量縮減自己的語(yǔ)言，把發(fā)言權(quán)留給學(xué)生，絕不心急，剝奪學(xué)生說(shuō)話的機(jī)會(huì)，也盡可能的少重復(fù)學(xué)生的話，這是很多老師的弊病，生怕其他學(xué)生聽不懂，總想去重復(fù)或者已經(jīng)習(xí)慣去重復(fù)。

3、修煉?cǎi){馭課堂的內(nèi)功。課堂上教師需要做到：一是選擇重點(diǎn)問題重點(diǎn)討論，不要平均用力，簡(jiǎn)單容易的問題一帶而過，突出重點(diǎn)，解決難點(diǎn)、疑點(diǎn)。二是不要輕易打斷學(xué)生的展示，教師的打斷會(huì)使學(xué)生茫然不知所措，從而影響交流的效果并且耽誤時(shí)間。三是作為課堂互動(dòng)的一員，教師應(yīng)當(dāng)在適當(dāng)時(shí)候通過提問或追問的方式給出你的問題，讓學(xué)生討論回答，通過學(xué)生的討論和回答實(shí)現(xiàn)你的教學(xué)意圖。四是對(duì)學(xué)生的展示要給予適當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)是無(wú)形的激勵(lì)，恰當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)能促進(jìn)學(xué)生課堂展示水平的提高，它直接影響到學(xué)生課堂展示的積極性和課堂教學(xué)的效果，多給學(xué)生鼓勵(lì)，多用贊美的語(yǔ)言，多用欣賞的眼光鼓勵(lì)學(xué)生積極參與。

臺(tái)上一分鐘，臺(tái)下十年功，教師的課堂功夫不是一朝一夕修煉而成的，但只要肯用心修煉，構(gòu)建課堂的引導(dǎo)主干就會(huì)越來(lái)越堅(jiān)實(shí)越來(lái)越有營(yíng)養(yǎng)，才可能去支撐起我們努力打造的高效課堂。

展示出的花：

如果說(shuō)教師有效的課堂引導(dǎo)是構(gòu)建高效課堂的主干的話，那么學(xué)生的展示則是依附主干所開出的花，是高效課堂的重要環(huán)節(jié)，是學(xué)生學(xué)習(xí)內(nèi)驅(qū)力的金鑰匙。是學(xué)生樂學(xué)善學(xué)的動(dòng)力是學(xué)生能力得以培養(yǎng)的基礎(chǔ)。如何讓課堂展示成為課堂上師生共同創(chuàng)造奇跡，喚醒各自沉睡的潛能，點(diǎn)燃學(xué)生智慧的重要抓手，讓課堂展示在課堂教學(xué)中呈現(xiàn)高效，讓每一朵花都開放，讓一些花開得大而美，是成就高效課堂的關(guān)鍵。

1、精化展示內(nèi)容。課堂上交流展示的內(nèi)容必須是學(xué)生深入探究的問題，無(wú)論是個(gè)人展示（獨(dú)立展示），組內(nèi)展示(小展示）、還是班級(jí)展示（大展示），都應(yīng)當(dāng)立足于展示是知識(shí)觀點(diǎn)公開呈現(xiàn)，是思想方法互相交流，是思考和解決問題能力的提升，絕不是各小組對(duì)導(dǎo)學(xué)案上問題答案的重復(fù)性講解和統(tǒng)一答案，也不是把導(dǎo)學(xué)案上的內(nèi)容照搬到黑板上，應(yīng)該展示本堂課、本學(xué)時(shí)的重點(diǎn)難點(diǎn)，應(yīng)該是組內(nèi)或全班帶有共性的問題、易錯(cuò)的問題，要突出展示的問題性。展示哪些問題，展示到什么程度，需要展示的問題如何分配，每一個(gè)問題按照什么方式或思路展示，在課前都應(yīng)該有適當(dāng)?shù)念A(yù)設(shè)。每一個(gè)問題都有它的教學(xué)價(jià)值，只是展示的程度需要教師掌控，有些問題只需要一帶而過，有些問題卻需要深入追究，這樣才能突出重點(diǎn)，突破難點(diǎn)，不可平均用力，泛泛而談。展示過程中，既可以有疑難求助，又可以是對(duì)話交流，還可以是質(zhì)疑對(duì)抗，要體現(xiàn)出展示的互動(dòng)性。教師要引導(dǎo)學(xué)生重點(diǎn)展示自己獨(dú)特的思考和發(fā)現(xiàn)的一些規(guī)律性東西，包括學(xué)習(xí)方法總結(jié)、學(xué)習(xí)的新發(fā)現(xiàn)、新感悟等，體現(xiàn)展示的創(chuàng)生性和必要性。

2、細(xì)化展示形式。展示形式一般有書面展示、口頭展示、行為展示。書面展示，要求能將展示的內(nèi)容條理化，能較好地反映問題的要點(diǎn)和邏輯關(guān)系，便于其他同學(xué)閱讀和理解題意和解題過程；口頭展示要求在講解、討論和交流的過程中能用簡(jiǎn)潔、流利和通俗的語(yǔ)言表達(dá)自己的思想，能選擇較好的切口闡述自己的觀點(diǎn)；行為展示則是希望通過適當(dāng)形式的表演，說(shuō)明一些簡(jiǎn)單的道理，讓學(xué)生了解問題的實(shí)質(zhì)。將展示形式細(xì)化多樣化，在潛移默化中對(duì)學(xué)生知識(shí)和能力都會(huì)得到很好的發(fā)展。

3、營(yíng)造展示氛圍。課堂上要讓學(xué)生“敢于展示，會(huì)展示”,就要為學(xué)生悉心營(yíng)造一種尊重、民主、和諧、安全的課堂氛圍。就需要教師秉承道德的準(zhǔn)則，充分保障學(xué)生的話語(yǔ)安全和人格安全，在身心愉悅、人格健康、精神自由、生命自主的學(xué)習(xí)環(huán)境和學(xué)習(xí)過程中，更要在鼓勵(lì)中贊美中給學(xué)生強(qiáng)大的自信心，讓學(xué)生充滿強(qiáng)烈的表現(xiàn)欲，讓學(xué)生體驗(yàn)到展示的愉快和幸福。只有這樣，學(xué)生才會(huì)有感而發(fā)，敢于表達(dá)出來(lái)，展示才能真正成為觀點(diǎn)的交流、智慧的碰撞。

4、誘發(fā)展示技巧。在老師的指導(dǎo)下慢慢讓學(xué)生掌握一些展示的技巧，比如讓學(xué)生找到帶有普遍意義和近似性的“問題”進(jìn)行展示，讓學(xué)生找到容易出現(xiàn)歧義的或者核心的知識(shí)問題才拿出來(lái)做展示；再比如利用圖表比數(shù)字更直觀、更形象具體，比如利用表格展示更易于讓人對(duì)相關(guān)的數(shù)據(jù)產(chǎn)生對(duì)比等。所以，在教學(xué)過程的展示環(huán)節(jié)，尊重學(xué)生的心智發(fā)展水平，營(yíng)造良好氛圍，在誘導(dǎo)學(xué)生展示，激發(fā)學(xué)生的積極性和創(chuàng)造性方面有著不可低估的作用。

篇7

活動(dòng)目的：

培養(yǎng)班與班之間的籃球情誼以及頑強(qiáng)拼搏和永不言棄的精神，增強(qiáng)大學(xué)生的團(tuán)隊(duì)意識(shí)，發(fā)揚(yáng)團(tuán)結(jié)協(xié)作的精神。賽場(chǎng)上任何事情都可能發(fā)生，還能鍛煉同學(xué)們的隨機(jī)應(yīng)變能力和臨危不懼的品質(zhì)，提高同學(xué)們的心理素質(zhì)。

活動(dòng)背景：

為了增強(qiáng)同學(xué)們的交往，能夠豐富大學(xué)的生活與學(xué)習(xí)?；@球是一種普及的運(yùn)動(dòng)，大多數(shù)同學(xué)都會(huì)打，并且能夠強(qiáng)身健體，提高人的免疫力，使同學(xué)們遠(yuǎn)離疾病。

活動(dòng)時(shí)間：

2013年10月20日下午3：00——4：30

活動(dòng)地點(diǎn)：

第二籃球場(chǎng)

活動(dòng)主題：

培養(yǎng)籃球文化，增強(qiáng)團(tuán)隊(duì)意識(shí)。

活動(dòng)組織者：

第一組織者：張春雷 主要組織者：郭隆臻

活動(dòng)對(duì)象：

83班與82班的籃球愛好者

活動(dòng)流程：

（1）兩班的宣傳委員向同學(xué)們宣傳該活動(dòng)的主要目的和意義，呼吁籃球愛好者都參加，其他同學(xué)以拉拉隊(duì)隊(duì)員的身份參加。

（2）文體委員負(fù)責(zé)訓(xùn)練工作，使球員們鼓足勇氣，刻苦訓(xùn)練，樹立自信心，堅(jiān)定“友誼第一，比賽第二”的信念。

（3）班長(zhǎng)提前預(yù)定場(chǎng)地，以免發(fā)生沖突，同時(shí)請(qǐng)深入了解籃球規(guī)則的同學(xué)當(dāng)裁判。

（4）組織委員組織拉拉隊(duì)的呼喊口號(hào)和呼喊時(shí)機(jī)，在比賽前準(zhǔn)備好飲用水；組織攝影技術(shù)好的同學(xué)在比賽時(shí)攝影、拍照，在比賽結(jié)束時(shí)拍合影照。

（5）賽前兩隊(duì)隊(duì)員進(jìn)行友好握手，在搶球時(shí)要注意安全，避免受傷，同時(shí)要盡全力去比賽，展現(xiàn)各班的風(fēng)采，拉拉隊(duì)要選擇好時(shí)機(jī)為球員加油，把氣氛搞得活躍點(diǎn)。

（6）比賽結(jié)束時(shí)，兩隊(duì)球員要再一次友好握手，同時(shí)各隊(duì)球員要在一起合影留念，以建立深厚的友誼。

篇8

劉克莊

海濱蓑笠叟，駝背曲，鶴形臞.定不是凡人，古來(lái)賢哲，多隱于漁。

任公子，龍伯氏，思量來(lái)島大上鉤魚；又說(shuō)巨吞餌，牽翻員嶠方壺。

磻溪老子雪眉須，肘后有丹書。

被西伯載歸，營(yíng)丘茅土，牧野檀車。

世間久無(wú)是事，問苔磯癡坐待誰(shuí)歟？

只怕先生渴睡，釣竿指著珊瑚。

篇9

西蘭花屬于高纖維、低熱量蔬菜，能有效降低腸胃對(duì)葡萄糖的吸收，進(jìn)而降低血糖，同時(shí)纖維在胃內(nèi)吸水膨脹，可形成較大的體積，使人產(chǎn)生飽腹感，有助于減少食量，對(duì)控制體重有一定作用。

做水煮西蘭花所需材料：西蘭花、小米椒、蒜、鹽、食用油、海鮮生抽、醋、香油。具體做法：

1、將西蘭花摘小朵泡水洗干凈；

2、水燒開，放入適量鹽和食用油，再放入西蘭花煮2分鐘；

3、將海鮮生抽、醋、香油拌勻加少量水，放入小米椒和蒜末；

篇10

原則1 拋棄面面俱到的化妝法

如今，國(guó)際流行的化妝法則，已逐漸從“一個(gè)都不能少的”的完美妝，向“只留一個(gè)重點(diǎn)”的印象妝開始轉(zhuǎn)變。也就是說(shuō)，那種面面俱到、毫無(wú)主次的化妝方法，已經(jīng)開始被急速旋轉(zhuǎn)的流行舞臺(tái)所拋棄，那些玩弄色彩的大師們不再愿意塑造所謂的完美，而要根據(jù)不同的面孔強(qiáng)調(diào)個(gè)性。

在快節(jié)奏的生活中，我們也不必再每天早晨花費(fèi)很長(zhǎng)時(shí)間，費(fèi)力不討好地完成那些繁雜的工作，擺滿各種瓶瓶罐罐，一層層一步步地涂涂抹抹。我們只要找到自己五官中最美、最有特點(diǎn)的部位，著重強(qiáng)調(diào)，而其它部位只稍加修飾或者干脆省略就行了。

當(dāng)然，如果你堅(jiān)持完美主義，就不要輕易嘗試。若你想表現(xiàn)個(gè)性，或希望能給人留下深刻的印象，這樣的化妝法就是絕佳的選擇。

原則2 保養(yǎng)比化妝更重要

經(jīng)?；瘖y的人往往很依賴化妝品帶給自己的美貌。但要知道，好的膚質(zhì)比單純用粉底遮蓋更重要。如果能把保養(yǎng)肌膚放在首位，讓肌膚自然呈現(xiàn)年輕光彩，自然省去了化妝的麻煩。

原則 3 一物多用

目前有一種便利彩妝單品――能夠結(jié)合重點(diǎn)彩妝需求于一身的多功能彩妝筆。它把怎么搭配都不會(huì)出錯(cuò)的色彩放在一起，一只筆可同時(shí)當(dāng)作眉筆、眼影、腮紅和唇彩，即便你不懂任何化妝技巧，只要一丁點(diǎn)時(shí)間，按部就班把這些顏色放在臉上就行了。

或者你可以用化妝品的移位法，比如可以用淺棕色的唇線筆，同時(shí)當(dāng)作眉筆。棕色的眼影充當(dāng)眉粉，或臉上的陰影粉。緊急時(shí)刻，一只口紅變?yōu)檠塾案嗪腿t。注意：靠緊眼部和唇部的化妝品可以用在其它部位，而不要反過來(lái)用?？诩t當(dāng)做眼影和腮紅，雖然顏色沒錯(cuò)，但它們的成分是不同的，只能偶爾為之，長(zhǎng)期使用會(huì)造成面部斑點(diǎn)。另外，你還可選擇專為懶人研制的高科技化妝品。比如那種可以噴的粉底液，輕輕一按，就能讓粉底液均勻覆蓋在臉上，不用再考慮粉妝是否服帖，手法是否正確了。

原則4 用手代替繁瑣的化妝刷

粉撲、腮紅刷、眼影刷、唇刷等這些大大小小的化妝工具，一定讓你很煩惱。光是記住它們的樣子和用途就需要半天功夫。況且，在這個(gè)需要不同場(chǎng)合有不同裝扮的時(shí)代，每天拎一堆化妝工具跑來(lái)跑去也不太現(xiàn)實(shí)。尤其是那些懶惰又想漂亮的女孩們，當(dāng)然更希望讓化妝變得簡(jiǎn)單易學(xué)。那么，何不向頂級(jí)的化妝師學(xué)習(xí)，用手代替所有化妝刷。

用手涂抹粉底液：用無(wú)名指和中指沾粉底液輕輕拍打肌膚，讓其與肌膚更加貼合。

優(yōu)點(diǎn)：

A.手比海綿更靈活，使用更方便，能照顧到眼角、鼻翼等細(xì)小處；

B.手的溫度可以吸收粉底液中一部分油脂，防止脫妝；

C.手能令粉底與肌膚更緊密的結(jié)合，填埋毛孔。

用手涂抹眼影：用無(wú)名指沾眼影直接涂抹在眼皮上。

優(yōu)點(diǎn)：

A.無(wú)名指力量輕，不容易刺激眼部嬌嫩肌膚；

B.手指肌膚比粉刷更柔軟細(xì)膩，可使眼影粉與肌膚更融合，保持妝容更長(zhǎng)久。

用手涂抹腮紅：最好選擇液狀和膏狀腮紅，可采用手指輕拍和手掌暈涂的方法。盡量不要把顏色直接涂在臉上，這樣很容易導(dǎo)致用量過多，涂抹不均勻。正確方法是：把顏色抹在手掌上，兩手掌相對(duì)搓揉均勻后，把顏色涂在臉上，需要柔化的邊緣再用手指來(lái)幫忙。

用手涂抹口紅：用小指沾口紅均勻涂抹在唇上。

優(yōu)點(diǎn)：

A.省去了攜帶唇刷的麻煩；