導語：如何才能寫好一篇街舞達人，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

高一作為初高中的一個銜接點，寫作課該上什么內(nèi)容？對這個問題我思考了很久，初中作文是以記敘文寫作為主，高考作文盡管文體不限，學生的分析評價能力逐漸增強，議論文寫作教學自然成為這個階段的主要任務，但讓高一新生直接學議論文寫作未免有點兒早。

基于這樣的考慮，我希望在原有的基礎上，進一步提升他們的寫作水平。于是我選擇記敘文寫作中的細節(jié)描寫這塊內(nèi)容作為教學內(nèi)容，希望學生能更加靈活地運用細節(jié)描寫的方法，讓他們知道寫作不是為了湊字數(shù)，而是怎樣有效運用細節(jié)描寫刻畫出一個有血有肉的人物，不僅讓讀者看到他的形，而且要看到他的“神”，一個有著豐富內(nèi)心世界的人。讓讀者在文中能通過人物的一舉一動，一顰一笑，感知人物的喜怒哀樂，性格脾氣。有了這樣的考慮，我本堂課的教學內(nèi)容生成了，我要上的課是“細節(jié)，讓你的文章更動人”。

我是這樣設計這堂課的，先明確什么是細節(jié)描寫，細節(jié)描寫有哪些具體方法，細節(jié)描寫有什么作用，然后學以致用，用這種手法寫一則語段。

怎樣的描寫是細節(jié)描寫，學生自然是知道的，選一個學生較熟悉又經(jīng)典的語段作為引子喚醒學生的記憶?！侗秤啊肥浅踔薪滩膬?nèi)容，我選擇父親蹣跚穿過鐵道買桔子這個動作描寫，并且提供了朱老先生原先對父親動作的描繪“我看見他戴著黑布小帽，穿著黑布大馬褂，深青布棉袍，艱難地穿過鐵道”的一句簡短的話，比較兩個，哪個語段更精彩？設計這個問題的意圖是引出“細節(jié)描寫”這個概念。趁機也明確細節(jié)描寫的概念，就是把細小的環(huán)節(jié)或情節(jié)，如一個動作、一個表情、一句話等，通過準確、生動、細致的描繪，使讀者“如見其人”“如聞其聲”“如臨其境”。

第二步，重溫經(jīng)典。緊承前面的概念找了兩個關于語言描寫、心理描寫的語段，語言描寫是孔乙己給孩子分茴香豆這個情節(jié)，心理描寫是弗朗西斯逃課回校時得知從此不能學法語的心情，用這兩個語段是想得出一個方法，對人物的動作、心理、語言的描寫，能使人物更形象。

第三個經(jīng)典語段是《社戲》中大家伙一起劃船去看戲時看到的鄉(xiāng)村夜晚的景色。這個語段的鑒賞是為了說明添加景物描寫對塑造人物形象的作用。

在這樣的方法指導之后，我給學生一句話要求用剛才所學的兩種方法擴寫。

按照這樣的教學設計試上之后，發(fā)現(xiàn)問題出來了。第一，我自定的標題是“細節(jié)讓文章更動人”，但是本堂課是圍繞人物描寫讓文章更動人，太大了點。其次，景物描寫分兩種，即純景物描寫和用來烘托人物的景物描寫，從我本堂課的教學任務來看，需要的是為寫人服務的寫景，這樣看來，《社戲》這個語段不太合適了，魯迅先生寫故鄉(xiāng)寧靜的夜景為了表現(xiàn)對故鄉(xiāng)的懷念。第三，語段鑒賞分析不到位，這樣的描寫對塑造人物的分析作用分析不透徹。

于是我對一稿進行了修改，鑒于整堂課的設計是圍繞“塑造人物形象”，用的方法是“細節(jié)描寫”，我把作文課標題改為“細節(jié)，讓人物形象更飽滿”，這樣的標題讓本堂課的教學內(nèi)容一目了然。

在朱老父親穿過鐵道買桔子的兩段文字比較之后，把問題更加明確“父親穿過鐵道的艱難是通過什么表現(xiàn)出來的？”，這個問題指向性更加明確，不像原來那么大而空，希望通過這個話題直接切入“細節(jié)描寫”。圍繞“艱難”二字，分析作用，父親越是艱難，對兒子的體貼疼愛就表現(xiàn)得越明顯。

在第二個環(huán)節(jié)的方法指導中，保留了前面兩個語段，而把景物描寫的語段換成了《荷塘月色》中荷塘四周的景物描寫，做這樣的調(diào)解是考慮到本堂課的人物是塑造人物形象，要選擇一個烘托人物形象的景物描寫。寧靜的荷塘夜景是用來烘托主人公內(nèi)心的不平靜。

篇2

離開故鄉(xiāng)有二十年了吧，也該回家看望爸爸媽媽了我駕駛著單人飛機來到了久別的故鄉(xiāng)。

我走下了飛機。哇！這里的有的房屋是香蕉型的，有的是樹葉型的，還有的是海豚型的……我走著走著忽然看見媽媽和爸爸在想我招手呢！我頓時疑惑了，他們是怎么知道我要來地球呢？我跑過去問了他們。媽媽說：“是小仙告訴我們的?！?/p>

原來這里每家都養(yǎng)著一只有特異功能的小狗。我有些渴了，準備倒一杯水喝，這只小狗好像看透了我的心思似的，跑進臥室，不知從哪里弄來一杯新鮮可口的果汁，放在我面前，等我喝完。讓我坐在一張紙上帶我參觀了這里的瓜棚。哇噻！這里的蘋果和足球差不多大，一顆葡萄和鼠標一樣大，西瓜和水晶一樣晶瑩剔透……

又帶著我去參觀博物館，這里有許多化石和標本，我們坐上一輛粉紅的車子，來到了古代，這時我才明白原來這輛粉紅的車子是時光車，可以把人們傳遞到任何想去的地方。

我?guī)е恍┧{駛著單人飛機回家了。

篇3

節(jié)育環(huán)放置于育齡婦女的宮腔內(nèi)，通過機械性刺激及化學物質(zhì)的干擾而達到避孕目的，不抑制排卵，不影響女性內(nèi)分泌系統(tǒng)，避免了一般藥物避孕的不良反應，因而被廣泛用于育齡婦女中。據(jù)統(tǒng)計，育齡婦女放置節(jié)育環(huán)避孕者達85%以上。但有些婦女朋友對節(jié)育環(huán)的認識存在誤區(qū)，在此需要給以提醒。

誤區(qū)一：自己不適合上環(huán)

有些婦女上環(huán)后出現(xiàn)腹痛、月經(jīng)量多、環(huán)異位、環(huán)脫落等，便認為自己不適合上環(huán)。其實，節(jié)育環(huán)種類較多，有不同材質(zhì)及不同形狀，各有特性，你可能只是對某一種類的環(huán)不適應罷了。一般來說，多數(shù)育齡婦女都能找到適合自己的節(jié)育環(huán)。

育齡健康婦女首選含銅的“T”環(huán)，價格便宜，避孕效果確切。但塑料支架柔韌性稍差，帶環(huán)后子宮的排異功能使子宮收縮，出血及腹痛的副反應稍多。隨著時間延長，子宮排異逐漸減弱，副反應逐漸消失。

不能適應“T”環(huán)者，可嘗試使用新體380環(huán)，該環(huán)聚乙烯支架柔軟，順應性好，減少了對宮壁的刺激，不良反應少。

節(jié)育環(huán)易脫落者，可試用愛母環(huán)，環(huán)體呈V形，與宮腔形態(tài)一致，順應性好且不易變形，不易脫落。進口的吉妮環(huán)外形酷似微型鏈條，由聚丙烯手術縫線穿起6個銅套組成，沒有支架，形態(tài)相對自由，可隨宮腔變化，同時環(huán)的一端嵌于宮壁肌層，脫落率較低。

節(jié)育環(huán)異位的原因大多是環(huán)號偏大，當子宮肌層運動時環(huán)可損傷子宮內(nèi)膜和肌層，久之易發(fā)生穿孔。因此，應選擇大小及形狀合適的節(jié)育環(huán)。

平素月經(jīng)量較多的婦女，最好選擇含藥節(jié)育環(huán)。此節(jié)育環(huán)置入宮腔后，藥柱中的藥物會小劑量緩慢釋放出來，并且只作用于宮腔內(nèi)部，對全身各系統(tǒng)均無影響，能夠起到減少月經(jīng)量的作用。

誤區(qū)二：放環(huán)后不需檢查

對于子宮來講，節(jié)育環(huán)是一種異物，子宮的排異功能使子宮肌肉不斷收縮，企圖將節(jié)育環(huán)排擠出去，會導致一部分節(jié)育環(huán)東游西逛，避孕失敗。

常見的是節(jié)育環(huán)宮腔內(nèi)移位，位置下移，達不到避孕目的，往往是由于環(huán)號偏小，宮腔偏大，子宮肌層運動時使環(huán)下移；節(jié)育環(huán)還可脫落，多發(fā)生于子宮口松弛、月經(jīng)量多的婦女；少數(shù)可發(fā)生節(jié)育環(huán)異位，節(jié)育環(huán)偏離宮腔，嵌入子宮肌層或進入腹腔、膀胱、腸道等。

因此，放置節(jié)育環(huán)后要定期到醫(yī)院檢查，一般在術后1個月、3 個月、半年及1年各檢查1次，以后每年檢查1次?，F(xiàn)多采用超聲檢查，可以及時發(fā)現(xiàn)節(jié)育環(huán)是否還在宮腔內(nèi)，以及環(huán)的位置是否正常。

誤區(qū)三：絕經(jīng)后也不需取環(huán)

絕經(jīng)后的婦女停止排卵，不會再懷孕，因此也就不必再避孕。此時節(jié)育環(huán)已經(jīng)失去了價值，而且還會產(chǎn)生一些危害，應該將其取出來。

節(jié)育環(huán)在子宮局部起異物作用，絕經(jīng)后容易損傷子宮內(nèi)膜表層，導致子宮內(nèi)膜的非特異性炎癥；同時可使子宮內(nèi)膜腺體萎縮加快，加速子宮退化；而且節(jié)育器長期在子宮腔內(nèi)，容易造成宮腔感染、積膿。

篇4

強化代表建議意見辦理工作。常委會高度重視代表建議意見辦理工作，始終堅持以代表建議意見辦成率、代表滿意率來衡量代表工作成效，確保人民群眾的知情權、參與權、表達權、m監(jiān)督權落到實處。按照《*市*區(qū)人大常委會辦理代表建議、批評和意見暫行辦法》，對年初人代會期間代表提出的42件建議意見，經(jīng)過主任會議認真研究，常委會召開了專題交辦會，對“一府兩院”及其職能部門具體承辦單位提出了具體的辦理要求和辦理時限，明確了承辦單位的承辦責任和常委會內(nèi)設機構的督辦責任。在承辦部門認真辦理和常委會有針對性的督辦落實下，代表建議意見都得到了較好落實，常委會會議還專題聽取和審議了區(qū)人民政府關于代表建議、批評和意見辦理情況的報告，并邀請了相關代表列席會議，增強辦理結果透明度，代表們對代表建議意見的辦理工作給予了充分肯定，確保了代表建議意見事事有著落，件件有回音。對常委會8月份開展集中聯(lián)系代表工作中征集到的51件代表建議、批評和意見，經(jīng)過兩次主任會議研究，常委會在向“一府兩院”轉(zhuǎn)交《關于區(qū)人大常委會組成人員集中聯(lián)系代表情況的報告》基礎上，決定對常委會認為目前應重點考慮并予以解決的5件代表建議意見、今后應引起職能部門高度關注的9件代表建議意見進行重點督辦，目前已經(jīng)召開了專題交辦會，正式交承辦部門限期辦理。常委會將持續(xù)關注代表建議意見落實情況，切實加大督辦力度，確保落實。

全力組織好代表視察工作。2009年常委會共組織了4次代表視察，主要涉及消費者權益保護、現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展、社區(qū)建設和政府十件惠民實事落實情況等四個方面。組織視察時，擴大了代表參與面，重視發(fā)揮各個界別代表的作用，重點吸收基層代表、熟悉相關工作的代表參加視察，并認真征集、轉(zhuǎn)辦代表提出的建議意見，有關部門及時反饋了辦理結果。按照常委會“將關系群眾切身利益、社會高度關注的消費者的合法權益保護工作作為人大工作監(jiān)督重點”的總體要求，常委會組織了消費者權益保護法視察，在肯定工作的同時，提出了要進一步加大“消法”的宣傳力度，增強群眾依法維權意識，提升經(jīng)營者自律守法意識;加強基層維權網(wǎng)絡建設，使消費維權工作向基層、向農(nóng)村延伸;加強對食品、農(nóng)資及日用品市場的監(jiān)管力度，嚴厲打擊不法行為;加強部門協(xié)調(diào)，整合維權資源，形成齊抓共管、密切配合的維權工作態(tài)勢等意見建議轉(zhuǎn)交區(qū)人民政府辦理，推動我區(qū)消費者權益保護工作的深入開展。

積極開展代表專題調(diào)研活動。為增強代表履職積極性，充分發(fā)揮代表參政、督政作用，常委會確立了2個調(diào)研課題，先后組織15名相關界別的市區(qū)兩級人大代表開展了代表專題調(diào)研活動，并撰寫了專題調(diào)研報告，為區(qū)委、政府提供決策參考。一是開展了城鄉(xiāng)規(guī)劃管理工作情況的專題調(diào)研。調(diào)研過程中，代表們認為，我區(qū)城鄉(xiāng)規(guī)劃工作近年來取得了很大進展，有力地促進了經(jīng)濟社會的穩(wěn)步發(fā)展。針對制約我區(qū)城市可持續(xù)發(fā)展和統(tǒng)籌城鄉(xiāng)發(fā)展的一些問題，代表們提出要進一步理順城鄉(xiāng)規(guī)劃管理體制，按照屬地管理、提高效率的原則，積極爭取市政府理順城市管理體制，給予*區(qū)一定的參與城市規(guī)劃的職能;切實加強規(guī)劃編制工作，進一步擴大公眾參與程度，在規(guī)劃決策中廣泛聽取人大代表、政協(xié)委員、專家學者和廣大群眾的意見建議，提高規(guī)劃決策的民主化、科學化水平;合理規(guī)劃生產(chǎn)建設、生活居住、公共設施區(qū)域，統(tǒng)籌生產(chǎn)區(qū)、商業(yè)區(qū)、生活區(qū)、城市綠地等空間布局，建設一批彰顯*歷史文化特色、提升城市品位的特色街區(qū)和標志性建筑，打造我區(qū)的精品工程和城市品牌等方面的建議意見。二是開展了職業(yè)教育發(fā)展情況的專題調(diào)研。針對我區(qū)職業(yè)教育發(fā)展現(xiàn)狀，常委會提出了要進一步加強對職業(yè)教育資源配置、辦學保障等方面的統(tǒng)籌管理;加大職業(yè)教育投入，強化職業(yè)教育師資隊伍建設;正確把握職業(yè)教育方向，推進職業(yè)教育深入發(fā)展等建議意見。

注重提高代表素質(zhì)。常委會把提高代表素質(zhì)作為發(fā)揮代表作用的基礎性工作常抓不懈。在經(jīng)常性組織代表參加常委會檢查、視察、調(diào)研活動和堅持邀請代表列席常委會會議的基礎上，還注重提高代表的政治理論修養(yǎng)和人大工作能力。一是堅持代表學習經(jīng)?；?。以鄉(xiāng)鎮(zhèn)、街道為單位，組建代表小組、建立代表小組學習、活動制度，借助村“兩委”換屆、學習實踐科學發(fā)展觀活動契機，認真組織代表小組學習政治理論、法律法規(guī)、經(jīng)濟理論以及人大業(yè)務知識。常委會通過聯(lián)系走訪代表等活動，及時通報全區(qū)重點工作進展情況和人大常委會重要工作安排，保障代表更廣泛的知情權。二是邀請市人大領導結合代表法和地方組織法,就人大代表如何履職、如何發(fā)揮代表作用開展了2期代表集中培訓。特別是近期即將召開的七屆人大四次會議前，我們將對所有人大代表開展一次集中培訓，這對于我區(qū)更好地發(fā)揮代表的主體作用，更好地開展全區(qū)人大工作，將起到重要的指導和促進作用。

二、扎實履行監(jiān)督職能，維護和諧發(fā)展氛圍，支持促進發(fā)展顯現(xiàn)新成效

積極促進經(jīng)濟健康運行。按照區(qū)委提出的堅持率先發(fā)展、更好發(fā)展、更快發(fā)展的目標，常委會就全區(qū)經(jīng)濟運行情況，積極深入開展調(diào)查研究，圍繞全區(qū)突出抓好招商引資和項目建設的工作中心，專題審議了關于招商引資工作情況的報告，高度關注重點工業(yè)項目進展，為推進“工業(yè)立區(qū)、項目興區(qū)、和諧穩(wěn)區(qū)、富民強區(qū)”戰(zhàn)略的實施，提出了有針對性的意見和建議。持續(xù)關注計劃、預算執(zhí)行情況，強化了對預算的審查監(jiān)督，加大對預算執(zhí)行審計情況的跟蹤監(jiān)督，常委會會議專題審議了預決算執(zhí)行情況、國民經(jīng)濟運行情況、預算執(zhí)行審計等有關經(jīng)濟發(fā)展方面的專題報告，對預算部分變更的報告進行了審議并做出了相應決定。

高度關注農(nóng)村改革發(fā)展。認真貫徹落實黨的十七屆三中四中全會精神，使人大代表全面準確地理解和把握精神實質(zhì)，把代表和群眾高度關注的社會主義新農(nóng)村建設、農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化經(jīng)營、農(nóng)村基礎設施建設、農(nóng)村剩余勞動力轉(zhuǎn)移就業(yè)、強化農(nóng)民職業(yè)技能教育等工作納入了監(jiān)督議題。認真開展了對我區(qū)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展情況的專題視察，提出了要圍繞優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，大力發(fā)展農(nóng)民專業(yè)合作社;培養(yǎng)懂技術、會經(jīng)營的新型農(nóng)民，提高農(nóng)民的科技種田水平和勞動致富能力;加強農(nóng)業(yè)基礎設施建設，注重提高財政資金使用效率;建立健全項目區(qū)后期管理機制，發(fā)揮好項目區(qū)的典型示范帶動作用等意見建議。常委會始終保持對民生問題的高度關注，重點督辦了代表們提出的諸如：關于我區(qū)應高度關注農(nóng)村教育問題、應加大對化肥等農(nóng)資產(chǎn)品銷售的監(jiān)管力度、應加大對農(nóng)村水利基礎設施投入和建設力度、大力抓好旱作農(nóng)業(yè)項目試點等建議意見，努力推進我區(qū)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)、農(nóng)民增收、農(nóng)村穩(wěn)定。

努力營造良好法治環(huán)境。常委會充分發(fā)揮職能作用，努力通過卓有成效的工作，推動依法治區(qū)和精神文明建設協(xié)調(diào)發(fā)展。開展了涉及道路交通安全法、消費者權益保護法、職業(yè)教育法等三部法律貫徹實施情況的檢查視察，常委會會議聽取和審議了區(qū)人民法院關于民商事案件審判情況的報告，實行了涉法涉訴案件定期反饋和督查制度，并結合相關工作，提出了有針對性的意見建議，切實推進法律法規(guī)的有力實施，實現(xiàn)依法行政，維護司法公正。常委會檢查了“五五”普法決議落實情況，執(zhí)法檢查組針對我區(qū)普法工作情況，提出了要加強對各級領導干部、行政執(zhí)法人員和司法人員等重點對象的普法力度，抓好對青少年學生等特定對象的法制教育;積極探索法制宣傳教育工作的長效機制，使法制教育延伸到社會的各個領域、各個層面;加大法制宣傳教育經(jīng)費投入力度等意見建議。

進一步深化干部監(jiān)督工作。常委會依法履行對擬任人選的審查、任免程序，切實加強任前監(jiān)督。對擬任人選的基本情況，堅持提前印發(fā)給組成人員充分醞釀，努力把群眾的滿意度、公認度作為任免干部的重要標準，依法行使人事任免權。常委會采取聽工作匯報、組織檢查調(diào)查、開展代表評議，年終報告履職情況等多種措施，切實強化了對依法任命干部的任后監(jiān)督。一年來，共依法任免國家機關工作人員64人次，接受7名同志辭去區(qū)人大常委會委員職務。

三、密切聯(lián)系與溝通，依法指導基層工作，整體推動全區(qū)人大工作取得新進展

主動配合上級人大開展工作。常委會進一步密切與上級人大常委會的聯(lián)系，積極配合上級人大工作。一年來，自治區(qū)人大常委會領導及市人大常委會有關領導先后來我區(qū)開展視察、專題調(diào)研，內(nèi)容涉及我區(qū)貫徹實施科學技術普及法、科普條例、農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全法、土地承包法實施辦法、道路交通安全法、蒙古語文工作條例情況，社區(qū)衛(wèi)生工作開展情況，檢察院規(guī)范化建設工作情況，以及走訪聯(lián)系代表、慰問貧困群眾等多個方面，常委會都積極配合，認真做好服務工作。常委會還認真組織有關組成人員參加上級人大組織的專題業(yè)務培訓和考察，推動上級人大工作順利開展的同時，常委會自身工作水平也得到不斷提升。

加強與先進地區(qū)人大的工作交流。出席了市人大常委會組織的全市旗縣區(qū)人大常委會主任座談會，進行了經(jīng)驗交流和工作探討。接待了錫林浩特市人大常委會、巴林右旗人大常委會對我區(qū)新城區(qū)建設和人大工作的學習考察。認真組織赴先進地區(qū)學習考察活動，汲取外地人大做好預算審查監(jiān)督、代表建議辦理以及新農(nóng)村建設、第三產(chǎn)業(yè)發(fā)展等工作的做法與經(jīng)驗，推進了人大工作創(chuàng)新發(fā)展。

依法指導基層人大工作。常委會積極探索和改進與鄉(xiāng)鎮(zhèn)人大的聯(lián)系方式，進一步增強與鄉(xiāng)鎮(zhèn)人大的密切聯(lián)系，加強區(qū)鄉(xiāng)聯(lián)動開展工作。一是制定鄉(xiāng)鎮(zhèn)人大工作指導意見，為鄉(xiāng)鎮(zhèn)人大開展好工作指出工作努力方向，并就指導意見落實情況，開展了督查調(diào)研工作。二是在組織執(zhí)法檢查、視察、調(diào)查活動時，采取上下聯(lián)動的方式相互配合進行。三是開展鄉(xiāng)鎮(zhèn)之間的橫向交流，組織了人大主席經(jīng)驗交流會和業(yè)務培訓班。四是堅持邀請人大主席列席常委會會議制度，力求擴大參與面，進一步深化了對鄉(xiāng)鎮(zhèn)人大主席的業(yè)務培訓。常委會結合代表建議意見，目前正在研究探索街道人大工作機制，以進一步完善全區(qū)人大工作體系，全面推進人大工作協(xié)調(diào)發(fā)展。

四、不斷強化自身建設，進一步增強服務發(fā)展水平，常委會履職能力得到新提高

堅持區(qū)委對人大工作的領導。認真貫徹區(qū)委決策部署，牢固樹立黨的意識和大局意識，把握正確的政治方向，堅持在區(qū)委領導下開展人大工作，充分發(fā)揮人大黨組領導保障和機關黨員模范帶頭作用，把區(qū)委的決策部署貫徹落實到人大各項工作之中。堅持重大事項向區(qū)委報告制度，及時向區(qū)委報告人大工作開展情況，主動爭取區(qū)委對人大工作的領導和支持以及對人大干部的培養(yǎng)使用。認真貫徹區(qū)委的工作部署，在全區(qū)經(jīng)濟工作、社會事業(yè)、招商引資、扶貧開發(fā)等方面發(fā)揮了職能作用。較好地完成了區(qū)委部署的重點項目專項推進、鄉(xiāng)鎮(zhèn)聯(lián)系點、貧困村包扶點工作任務。

著力營造濃厚的學習氛圍。以學習實踐科學發(fā)展觀活動為契機，堅持法律法規(guī)、政治理論學習的經(jīng)?；?，以學習促進思想解放、素質(zhì)提高，不斷提升履職能力和議政督政水平。在常委會開展消費者權益保護法視察和道路交通安全法執(zhí)法檢查前，組織相關專家講解了法律知識，增強了工作針對性，極大的提升了工作效能。

積極倡導深入實際開展調(diào)查研究的務實作風。注重結合常委會議題，安排更多的時間深入實際、深入基層、深入群眾，了解民情民意，廣泛集中民智，以務實的精神和態(tài)度，扎實開展工作，增強了常委會審議針對性。加強機關建設，注重對人大干部的教育和培養(yǎng)，增強了機關干部的工作活力，全力為人大代表和人民群眾服好務。

篇5

方法一：如果文檔正在打印過程中需要取消打印任務，則直接點擊打印任務窗口中的“暫?！卑粹o即可取消打印任務；

方法二：通過點擊Windows任務欄右下角的打印機圖標來打開“打印任務”窗口，然后點擊“暫?！卑粹o以暫停打印任務；

方法三：打開“控制面板”，依次進入“硬件和聲音”-“設備和打印機”，右擊“本地打印機”圖標，從彈出的菜單中選擇“查看正在打印的任務”，在彈出的窗口中右擊欲取消的打印任務，從彈出的菜單中選擇“取消”即可取消打印任務；

篇6

誤解一：保險公司不能破產(chǎn)

許多保險營銷員為了打消客戶對長期壽險安全性的擔憂，凸顯保險的“保險”，經(jīng)常在展業(yè)中宣稱“險公司不能倒閉”或者“銀行能破產(chǎn)，保險公司都不能破產(chǎn)”并搬出《保險法》第八十九條“經(jīng)營有人壽保險業(yè)務的保險公司，除因分立、合并或者被依法撤銷外，不得解散?！眮碜糇C。

保險公司真的不能破產(chǎn)嗎？答案顯然是否定的，保險公司能破產(chǎn)。

要弄清這個問題首先要明確：公司的解散不同于公司的破產(chǎn)。破產(chǎn)在公司資不抵債情況下發(fā)生，而解散只要符合公司法的有關規(guī)定且不符合破產(chǎn)的要件，就可以解散。其次根據(jù)《保險法》第九十條的相關規(guī)定，壽險公司不能清償?shù)狡趥鶆?，并且資產(chǎn)不足以清償全部債務或者明顯缺乏清償能力的，國務院保險監(jiān)督管理機構照樣可以向人民法院申請對壽險公司的破產(chǎn)清算。

不過被保險人倒不必因此過分擔憂，鑒于保險公司的破產(chǎn)對社會經(jīng)濟的沖擊巨人，保險監(jiān)管部門制定了相關部門規(guī)章，為被保險人設置了一道安全的屏障。其規(guī)定壽險公司破產(chǎn)后，其人壽保險合同必須轉(zhuǎn)讓給其他壽險公司或由監(jiān)管部門指定保險公司接收。此外還設立了“保險保障基金”。當保險公司依法破產(chǎn)或被撤銷，其有效資產(chǎn)無法全額履行保單責任時，保險保障基金可以向保單持有人提供全額或部分救濟，個人客戶的損失將不會超過10%。

誤解二：買人壽保險可以避稅

“買保險，可避稅”業(yè)已成為保險營銷員的展業(yè)必備話術。但若深問下去：人壽保險避的是什么稅、怎么避稅、能避多少稅等問題后，就會發(fā)現(xiàn)在當下內(nèi)地市場，避稅已淪為保險營銷的噱頭，并無多少實操意義。

通常認為，買人壽保險能避的稅無外乎三種：遺產(chǎn)稅、個人所得稅與利息稅。在征收遺產(chǎn)稅的地區(qū)，比如臺灣，被保險生前投保巨額壽險，身故后保險公司支付受益人的保險金不被征收遺產(chǎn)稅。此種情況投保人壽保險確有避稅的作用，不過鑒于在可預見的將來，中國內(nèi)地很難開征遺產(chǎn)稅，所以買人壽保險避遺產(chǎn)稅尚無意義。

不少西方發(fā)達國家允許個人的商業(yè)養(yǎng)老保險費支出從個人應稅所得中扣除。此類規(guī)定鼓勵個人購買商業(yè)養(yǎng)老保險，是規(guī)避個人所得稅的基礎。而內(nèi)地尚無此類規(guī)定。此外國稅總局為了堵住一些企業(yè)透過購買團險來避稅的渠道，規(guī)定對企業(yè)為員工支付各項免稅之外的保險金，應在企業(yè)向保險公司繳付時（即該保險金落到被保險人的保險賬戶）并人員工當期的工資收入，按“工資、薪金所得”項目計征個人所得稅，稅款由企業(yè)負責代扣代繳。當然了，保險賠款的收入在內(nèi)地是不征收個人所得稅的。

最后，只有在開征利息稅的時候，購買儲蓄型保險才能規(guī)避繳納利息稅。不過現(xiàn)階段內(nèi)地利息稅是暫免征的。

誤解三：買人壽保險可以避債

避債，又是壽險營銷的宣傳重點之一。什么“保險是永不凍結的財產(chǎn)”、“保險單是不能被凍結或拍賣的”。保險似乎成為了“老賴”們的避債法寶。但實務中保險到底能不能避債，能不能躲過人民法院的強制執(zhí)行？我們先看一個案例（參考自呂筠的《人壽保險合同權益能否被強制執(zhí)行》）

張某向銀行貸款30萬元用于養(yǎng)殖業(yè)投資，因技術問題，所養(yǎng)觀賞魚幾乎全部死亡。張某將設備等固定資產(chǎn)賣得10萬元，以自己兒子為被保險人、妻子為受益人，購買了投資連接型人壽保險，保險費一次繳清。銀行要求張某償還貸款未果，向法院申請強制執(zhí)行其人壽保險單，要求強制張某退保取得保單的現(xiàn)金價值9.5萬元用于償還貸款。

人壽保險合同具有很強的人身依附性，這也是人壽保險“避債”功能的基礎。但是隨著新型人身保險產(chǎn)品的發(fā)展，人壽保險合同也有了儲蓄理財?shù)男再|(zhì)。在保護債權人的利益與維護保險合同的獨立性問題上，透過人民法院的相關審判案例，可總結出以下觀點：

在債權人中請人民法院強制執(zhí)行債務人的財產(chǎn)時，若債務人所投人壽保險（主要以分紅、萬能和投連險為主）擁有現(xiàn)金價值，且保險事故尚未發(fā)生，則人壽保險合同的現(xiàn)金價值屬于投保人則產(chǎn)，為可強制執(zhí)行的對象。人民法院一般會要求保險公司強制退保，使財產(chǎn)變現(xiàn)。

若保險事故發(fā)生，比如被保險人身故，保險合同若指定了受溢人，則死亡賠償金不作為被保險人的遺產(chǎn)處理，不可被強制執(zhí)行。若保險合同沒有指定受益人，則死亡賠償金則屬于被保險人的遺產(chǎn)，可強制執(zhí)行。

誤解四：過了體檢就可以隱瞞病史

有些被保險人為了降低保費，在投保時有意隱瞞既往病史。不少保險營銷員也認為，只要投保人隱瞞的病史在體檢中沒被查出來，就能蒙混過關。出險后保險公司也得理賠。

這利，錯誤的觀點導致許多被保險人因為保險公司的拒賠而與其列簿公堂。人民法院的判決一致認為，保險公司對被保險人的體檢與投保單中對被保險人既往病史的問詢，是兩回事兒，二者沒有什么關系。過了某項體檢不意味著被保險人就可以在該項目隱瞞病史。若隱瞞，出險后保險公司在規(guī)定時限內(nèi)照樣有理由拒賠。

誤解五：買了重大疾病保險，重大的疾病都能賠

但凡是重大的疾病，“重大疾病保險”都能管嗎？答案現(xiàn)然是否定的。

篇7

大公主：海昕

二公主：海夢

三公主：海靜

四公主：海儀

五公主：海悅

大公主的小魚寵物：昕兒

二公主的海星寵物：夢兒

三公主的海馬寵物：靜兒

四公主的小蝦寵物：儀兒

五公主的扇貝寵物：悅兒

篇8

單純性格贏得馮小寧賞識

作為胡玫的愛將，有玫女郎之稱的龔潔拍攝了多部胡玫的影視作品，從電視劇《喬家大院》、《浴血堅持》、《望族》，到電影《孔子》，再到去年熱播的電視劇《開天辟地》，龔潔有不俗的表現(xiàn)，尤其是在《開天辟地》中，她飾演青春鄧穎超，表現(xiàn)出來的那種清純和活力讓胡玫非常滿意。正好這時候胡玫聽到好友馮小寧在選擇“甲午大海戰(zhàn)”的女一號，并為之發(fā)愁，于是胡改強力向馮小寧推薦了龔潔。

“當時我們正在橫店拍戲。馮小寧導演特地大老遠坐飛機過來看我。沒想到見了一面，導演就給了我劇本。到現(xiàn)在我也沒想明白為什么?！饼彎嵑髞聿胖?，小妹這個角色由誰來飾演，導演馮小寧一度挺犯難，他選了很多女演員，甚至面試過多位知名演員，但是一直沒有找到他心中的那個“小妹”，直到龔潔出現(xiàn)?！榜T小寧導演說我比較單純，不世故。他喜歡只把心用在表演上的演員?！?/p>

“柏拉圖式愛情”很難演

龔潔在劇中出演的小妹其實是個虛構的角色。她是劉步蟾的妹妹，和鄧世昌青梅竹馬長大，感情深厚。小妹對鄧世昌的正直、勇敢以及才學都傾慕不已。隨后，小妹服從父母安排，去英國留學，歸來時，鄧世昌已有妻室。

龔潔說：“命運捉弄了小妹，雖然小妹從國外留學歸來，但是她跟鄧世昌的感情還是很含蓄的，兩個人幾乎沒有任何肢體接觸，這是很多年輕女孩都會向往的那種純凈的感情。鄧世昌也是一個很專一的好男人，當時的男人都很不得三妻四妾，但鄧世昌盡管心中喜歡小妹，但為了忠于自己的妻子，而拒絕了小妹的求愛?！饼彎嵱米约撼錆M靈氣的表演，完美地表現(xiàn)了小妹的人物性格和特點。在她的刻畫下，一個充滿柔情，有點勇敢又堅強的小妹呈現(xiàn)在觀眾面前。

談到與同為上戲畢業(yè)的師哥陸毅的合作，龔潔說：“陸毅不再是原來的單純的偶像演員了，他不僅外表比以前有棱角，他的內(nèi)心也更加成熟，是一個真正的男人，有魅力，有擔當。在現(xiàn)場，他話不多，永遠是微笑著。其實，這部戲拍得很苦，戲量大，環(huán)境艱苦，但陸毅一點都沒有大腕的勁兒，和普通演員沒什么分別?！?/p>

馮小寧的“狠”　胡玫的“放”

《甲午大海戰(zhàn)》是龔潔第一次和馮小寧導演合作。在龔潔眼中，馮小寧的“狠”無人能比。“馮導真是中國獨一份的導演!他幾乎把所有的精力和心力都投入到工作中了。我們每天拍完戲，不管多累都要開會。在別的劇組怎么會有這樣的事呢!第一次見到馮小寧導演時，我都有點害怕，他太嚴肅了。但他的這份嚴肅不止在對待演員上，我聽說這部《甲午大海戰(zhàn)》，馮導醞釀了20年，按1比1建的鐵甲艦五六年前就建好了。”

記者問她如何看待馮小寧和胡玫導演的風格，龔潔表示兩位名導有很大的不同，“胡玫導演舉重若輕，馮導事必躬親，有點拼命三郎。拍攝現(xiàn)場，胡玫導演有一個箱子專門放零食，她經(jīng)常是一邊嗑瓜子、看書，一邊工作，別看她一副無比輕松的樣子，可大事小情、一切盡在掌握之中。和馮導的風格完全不同?！?/p>

我得對得起這碗飯

龔潔的母親是歌唱家，父親是工程師，成長環(huán)境比較優(yōu)越，家教良好，但她說自己從小就很獨立，并無驕嬌二氣，還有點男孩子性格，特愛打抱不平，見不得不公，看不得恃強凌弱的事，有一次，她在路上看見個小男孩追打一只小貓，當即忍不住教訓起人家來……

“讀萬卷書，行萬里路”，一直是龔潔奉行不悖的圭臬，她覺得演員必須要長期修煉自己，否則早晚會被掏空。

在《甲午大海戰(zhàn)》之前，媒體提到龔潔經(jīng)常冠以“玫女郎”的稱號，而現(xiàn)在又有人稱她是“寧女郎”，對此，龔潔非常冷靜，“我覺得無論是‘玫女郎’還是‘寧女郎’的稱呼，都首先是對兩位導演的肯定，其次可能是觀眾、媒體對我的一點認可。我認為自己現(xiàn)在雖然成熟了很多，演技方面還是有很大的提升空間。胡玫導演使我有了一個較高的起點，一直提攜和幫助我，讓我明白自己努力的方向和軌跡，而馮導的敬業(yè)和認真也使我受益匪淺?！?/p>

無論是對待生活，還是對待自己熱愛的表演事業(yè)，龔潔一直都保持著不急不惱、不慌不忙，從容面對一切的風格，這在當今的影視圈當真是一種“稀缺資源”，由此也可見她的心，很定，很難被什么干擾和左右，“心態(tài)好，才能狀態(tài)好。我這人就是心態(tài)好，許多亂七八糟的事都不過心。找覺得只有這樣才能用心地演好每一個角色。我得對得起演員這碗飯?！饼彎嵳{(diào)皮地笑著說。

近期作品

《開天辟地》

由著名導演胡玫執(zhí)導，陳建斌、蔣勤勤、龔潔等聯(lián)袂主演的紅色大戲《開天辟地》去年在央視一套黃金時段獲得成功。龔潔在其中出演青年時期的鄧穎超。

起初，龔潔并沒有信心能勝任這個角色。“鄧穎超在年輕時期是一個充滿激情的熱血青年，時刻要充滿革命的斗志，所以拍攝起來時時刻刻都要神經(jīng)高度緊張，眼神、表情也都要表現(xiàn)出那個年代的特征，對我來說是種挑戰(zhàn)，但一旦進入角色，我真正體會到了鄧穎超是一個非常令人尊敬和敬佩的革命女性。”對于龔潔的表演，導演胡玫更是給予了充分的肯定，大贊龔潔飾演的鄧穎超青春逼人，給了劇組工作人員很大的驚喜。

《英雄曹操》

由胡玫導演的大型歷史劇《英雄曹操》講述了曹操自少年時代至官渡之戰(zhàn)打敗袁紹這二十年的成長歷程，可謂是一部真實的“青年曹操奮斗日記”。劇中，趙立新出演曹操，龔潔飾演女一號、曹操夫人卞氏。

為了演好曹操夫人，龔潔不但看了五部不同的描寫曹操的傳記，還得到了胡玫的親自指導，“開拍前，胡玫導演介紹我看美劇《大西洋帝國》，結果我兩天就看完了，導演說可以借鑒劇中女主演的表演，要利用你的眼睛?！焙嫡J為龔潔的眼睛長得很好看，一定要用眼睛來說話，把眼神表現(xiàn)出來。

篇9

夢幻誅仙獲得經(jīng)驗的方法有很多種,領雙倍經(jīng)驗打野怪、找京城的李文典做試練任務、每天定量20個的師門任務,還有就是找鎮(zhèn)妖大師領取的鎮(zhèn)妖任務,也就是我們俗稱的抓鬼。相比較試練任務的費錢、領雙倍的固定14小時、師門任務的定量,大多數(shù)玩家還是喜歡在每天做完師門組個隊伍搞個鬼抓抓,因為不僅鎮(zhèn)妖經(jīng)驗比較高,而且時不時還能得到些好東西(比如返生丹就價值幾十萬)。

鎮(zhèn)妖任務領取條件:

當然,并不是所有人都可以做鎮(zhèn)妖任務的,首先,等級必須達到35級,而且是組隊形勢完成,這一點筆者要表揚下鎮(zhèn)妖大師,他是關心大家的,鎮(zhèn)妖任務相比較其他任務而言,危險性比較高,指不定你就躺著回師門了,所以隊伍里必須有三個人才能領取任務。

下面,筆者就帶大家一起來了解了解這個神秘的鎮(zhèn)妖任務,為什么說它神秘呢,因為很多到了35級的玩家去鎮(zhèn)妖大師那里,其他玩家都不帶,怕直接掛掉,那到底鎮(zhèn)妖任務有這么可怕嗎?今天咱就好好的研究研究這個號稱能死人的任務。

領取任務:

首先,給大家推薦下鎮(zhèn)妖隊伍的陣容,天音是不可或缺的,畢竟少血死人的事情還是得靠咱醫(yī)生護士來排憂解難;鬼王當然也是必不可少的,鬼王可是第一物理攻擊系,沒他的三連擊,光靠寶寶硬砍也累;焚香或者青云也是必帶的,一個高法攻、一個高秒,與鬼王的物理攻擊相似,還是需要法術攻擊予以支持的。很多網(wǎng)站論壇還推薦圣巫和合歡,筆者不是有門派歧視,圣巫主要是靠法術封印、合歡是有個技能可以提高鬼王物理攻擊,筆者大膽的說一句,這倆技能在鎮(zhèn)妖任務里是個雞肋,物理技能的提高固然重要,但是浪費一個攻擊位置(加一個合歡就少一個物攻和法攻玩家)實屬沒有必要。

所以筆者更推薦天音、兩鬼王、焚香和青云的陣容。比如遇到血厚的狂暴陰靈時,法術系的不斷單秒和物理系的瘋狂三連擊還是可以在很大程度上提高鎮(zhèn)妖的效率。

鎮(zhèn)妖技巧:

鎮(zhèn)妖是有講究的,準備工作也是需要做足的,當然,這里的準備工作是針對隊長而言。

1.要保證足量的飛行旗:飛行旗要設定一個坐標在鎮(zhèn)妖大師那里,因為為了保證鎮(zhèn)妖效率,不能每次完成一次都長途跋涉的跑很遠到鎮(zhèn)妖大師那里領取下一個任務,最好是直接通過飛行旗直接到達,筆者在這里說個題外話,飛行旗的補充卷軸也可以不通過商城購買,因為每周六的科舉考試復試回答問題對了有幾率會獲得補充卷軸,大家可以申請幾個小號做一下,畢竟是賺銀幣嘛。

2.要保證一定數(shù)量的傳送符:傳送符是可以在京城的雜貨店購買的,相對于非人民幣玩家而言,經(jīng)常使用飛行旗的確也吃不消,即便不是鎮(zhèn)妖任務,買幾個不同地方的傳送符傍身也是不錯的,可以直接抵達如河陽、京城、南疆、大王村這幾個安全區(qū)域,非常方便。比如要完成青云山、小竹峰、竹林幽谷、草廟村等這些靠近京城的鎮(zhèn)妖任務,可以直接使用京城傳送符,傳送點靠近京城―草廟村的傳送通道。

3.要保證足夠的活力:到了30級,相信所有玩家都會擁有“乘云飛劍”這一道具(人民幣玩家會直接在商城購買高級飛行器,在視覺效果上的確比系統(tǒng)任務贈送的乘云飛劍漂亮),筆者所說的要保證足夠的活力也是為了使用御物飛行技能的。當領取任務時,有些地方如果光靠走路來尋找,的確有些麻煩,那些道路障礙先不說,在野地遇怪也會使鎮(zhèn)妖效率大打折扣。因此直接御物飛行不僅可以使效率大大提高,而且在找怪的時候視覺會非常清晰,畢竟登高望遠,會比地面搜索來的容易。

4.有足夠的導標旗:導標旗是商城道具,25銀幣一個,在鎮(zhèn)妖大師處領取任務之后,會彈出一個窗口,標明要找的陰靈大叔所在的地方,不會有坐標提示,而是直接提示是否使用導標旗傳送,所以有些講究效率的高等級隊伍,他們會在組隊的時候要求隊員每人提供給隊長兩個導標旗,直接兩地傳送,當然,這是人民幣玩家的玩法,普通非人民幣玩家只需要參照第三點提供相應的活力使用御物飛行就行了。

5.其他用品的準備:一個吸血帶毒的寵物,這個僅僅是筆者鎮(zhèn)妖的心得,一般鎮(zhèn)妖以物理攻擊型寵物為主,吸血可以保證寵物的可持續(xù)性戰(zhàn)斗,帶毒是讓寵物可以有一定幾率毒中血厚的主怪,如果毒中了,每回合降低數(shù)千滴血還是非常可觀的。另外,可以適當?shù)呐鋫鋷讉€加血較多的紅藥和救命藥,以備不時之需,如果遇到非常變態(tài)的法攻妖怪,盯著天音打,很難保證天音能一直站著。

陰靈大叔簡介:

準備工作做好了,下面我們來熟悉熟悉幾位陰靈大叔和它的嘍嘍們,把它們的個人簡介拿出來曬曬。

在鎮(zhèn)妖大師處領取任務時,只會出現(xiàn)兩種情況:一是陰靈大叔;二是散財?shù)年庫`大叔。這兩位大叔其實本質(zhì)上并沒有區(qū)別,找到之后都是需要殺的,但是散財?shù)年庫`大叔不同的是,點擊它之后多了一個選項,點擊后可以在當前地圖打怪,有幾率獲得“陰靈的碎銀”,做試練任務的朋友都知道,十個陰靈的碎銀是可以在當鋪那里找NPC換取試練任務所需的物品,但是也不可能無休止的刷陰靈的碎銀,畢竟一次鎮(zhèn)妖任務是有20分鐘的時間限制,所以大家要把握好這個時間。

主怪詳解:

1.金剛陰靈:對物理攻擊有一定的抗性,會使用五連擊,需要法術系使用單秒技能對其攻擊,當對方除金剛陰靈外少于5個小怪時,會主動招出新的小怪補充,因此在做這個任務時,要注意留五個小怪不要殺死,免得浪費時間。

2.虛無陰靈:對法術攻擊有一定的抗性,特點是血比較少,所以在做這個任務時讓鬼王全力三連擊會顯得非常方便,與金剛陰靈相同的是,虛無陰靈也會在乙方不足五個小怪的時候繼續(xù)招出新的小怪進行補充,打法與金剛陰靈相同,所以依照金剛陰靈和虛無陰靈的特點,雙鬼王和雙法術系的鎮(zhèn)妖陣容就會體現(xiàn)出他的優(yōu)勢,可以快速擊倒主怪。

3.狂暴陰靈:這個胖子的打法比較特殊,它會使用五連擊,而且是雙抗屬性的,相較金剛和虛無陰靈來說,血稍微少點,但是只要有一個小怪存活,狂暴陰靈都會在自己少血的情況下給自己加血,并且?guī)缀踅o自己加滿,所以要先將小怪全部清干凈,然后全力擊殺狂暴陰靈。

4.攝魂陰靈:攝魂陰靈與狂暴陰靈在某種程度上是相同的,但是攝魂陰靈不是物理攻擊,而是單體法術攻擊,而且法術攻擊比較高,它也會給自己加血,與狂暴陰靈相同,所以打法也是要將小怪清干凈然后全力擊殺攝魂陰靈。另外一點是,如果怪堆里有會釋放單體法術的小怪,盡量優(yōu)先攻擊,因為如果攝魂陰靈與會釋放單體法術攻擊的小怪都存在的話,我們這邊極有可能會出現(xiàn)某人掛掉的可能。

筆者個人有個體驗,但是僅供參考:筆者曾經(jīng)跟幾個朋友組隊做鎮(zhèn)妖任務,一個天音的好友帶著一個旋龜,我們意外的發(fā)現(xiàn),每次主怪有連擊的時候,都會去打旋龜,所以在總結這個現(xiàn)象的情況下,每次這個天音的朋友總是帶著旋龜防御,吸引主怪連擊攻擊。這個現(xiàn)象不知道是否是隱藏現(xiàn)象,總之做了2個小時的鎮(zhèn)妖任務,每次都出現(xiàn)這種情況,無一例外,希望對各位看官有所啟發(fā),當然筆者在沒有經(jīng)過詳細考證的前提下不對此言論付上任何責任。

小怪詳解:

從小怪的特點及攻擊強度依次排列介紹如下。

1.山精怪:此怪會法術封印,而且一般是見到天音就封,所以說完美這套智能系統(tǒng)搞的不錯,有一定的挑戰(zhàn)性,建議做任務的朋友先擊殺之。

2.山狐妖:它就是個護士,單體物理攻擊并不咋樣,但是加的血還挺多,不殺它殺誰,PVP還知道先殺天音呢,先殺了他就可以安安穩(wěn)穩(wěn)清理其他小怪了。

3.血幅妖:這家伙就是個惡心的東西,不僅單體物理攻擊比較高,還會自爆,當它血少到一定程度的時候就沖向我方進行全體傷害的自爆,而且還少不少血,我們50級隊伍被自爆一下是平均少450滴血左右。

4.花魅妖:花魅不知道前世是不是鬼王宗門下的,竟然也會后發(fā)先至,它既然會這招,所以大家應該知道它的厲害,不多說了,next!

5.猛虎妖:會單體物理攻擊和連斬,傷害可以說僅次于主怪,不容小覷。

6.狐妖:會單體法術攻擊,比較痛,而且會單體加血,總體來說危害不如前面幾個,看總體情況來定。

7.烏龜妖:它就是個MT,而且是不太攻擊的MT,防高血厚,最后殺吧。

8.靈鼠妖和焰靈妖:靈鼠是全體法術傷害,焰靈是群法,但不是全體,他們的傷害可以忽略不計,差不多在一下40滴血的樣子。

9.黑幅妖:單體物理攻擊,也是可以忽略不計的,沒啥威脅。

10.浣熊妖:這家伙平時不怎么出現(xiàn),但是出現(xiàn)就是個麻煩,會單體法術攻擊,傷害還挺高,得小心著。

篇10

目的： 構建人白介素12(hIL12)基因的植物表達載體. 方法： 采用PCR技術從質(zhì)粒pCA13hIL12中擴增hIL12基因，SmaI， SacI分別酶切hIL12基因和植物表達載體pBI121，回收，T4DNA連接酶連接得到重組質(zhì)粒pBI121hIL12，雙酶切和DNA測序鑒定后，通過三親雜交法將表達載體pBI121hIL12分別導入根癌農(nóng)桿菌EHA105和GV3101，用PCR法進行鑒定. 結果： 雙酶切及DNA序列測定證實hIL12已插入到表達載體pBI121中，PCR 擴增表明構建的重組表達載體pBI121hIL12成功轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌EHA105和GV3101中. 結論： 成功構建了植物表達載體pBI121hIL12，為進一步利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)hIL12奠定了實驗基礎.

【關鍵詞】 人白細胞介素12 植物表達載體 載體構建 根瘤菌屬

0引言

人白細胞介素12(hIL12)能促進自然殺傷細胞（NK）和T細胞的增殖、活化及細胞毒作用，誘導γ干擾素的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)Th0細胞向Th1細胞分化增殖，增強細胞免疫等多種生物學活性［1］，在機體的抗腫瘤、抗病毒、抗過敏過程中發(fā)揮極其重要的作用［2］. 自然狀態(tài)下， 體內(nèi)IL12含量低，獲得較困難. 我們構建hIL12基因的植物表達載體，為利用植物基因工程技術生產(chǎn)hIL12基因進行前期準備工作.

1材料和方法

1.1材料大腸桿菌菌株DH5α，含人IL12的質(zhì)粒pCA13hIL12由遵義醫(yī)學院生物化學與分子生物學實驗室保存；植物表達載體pBI121由浙江大學饋贈；根癌農(nóng)桿菌EHA105，GV3101以及輔助質(zhì)粒pRK2013由華南熱帶農(nóng)業(yè)大學國家重點實驗室饋贈. 限制性核酸內(nèi)切酶（SmaI， SacI），T4DNA連接酶（美國Promega公司）；高保真即用PCR擴增試劑盒、UNTQ10柱式DNA膠回收試劑盒（上海生工生物工程公司）；化學試劑均為國產(chǎn)分析純.

1.2方法

1.2.1hIL12引物的設計上游引物參考GenBank中cDNA序列進行設計，由上海生工生物工程公司完成，即5′TCC CCC GGG CCA CCA TGG GTC ACC AGC A3′，其中CCC GGG為SmaI酶切位點；下游引物5′A CCG GAG CTC TTA GGA AGC ATT CAG ATA G3′，其中GAG CTC為SacI酶切位點.

1.2.2PCR擴增hIL12基因在0.2 mL Eppendorf管中加入上、下游引物各3 μL，模板pCA13hIL12 1 μL，2×PCR Master 25 μL，補去離子水至50 μL. 擴增條件為94℃ 10 min，94℃ 1 min，64℃ 1 min，72℃ 2.5 min，30個循環(huán)，72℃延伸10 min. 擴增產(chǎn)物用10 g/L瓊脂糖凝膠電泳進行分離，將1600 bp左右的目的片段回收純化.

1.2.3重組質(zhì)粒pBI121hIL12 的構建和鑒定PCR產(chǎn)物純化回收后與載體pBI121經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶（SmaI， SacI）雙酶切，取回收的PCR產(chǎn)物和載體大片段以濃度比3∶1，16℃連接過夜. 轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5α細胞，涂布于100 mg/L卡那霉素抗性瓊脂平板，挑選陽性克隆，堿裂解法小量提取重組質(zhì)粒，作SmaI，SacI雙酶切鑒定，并送上海生工生物工程公司進行測序鑒定［3］. 構建的重組載體見圖1，其中hIL12由P35，P40兩亞基的基因經(jīng)Linker序列連接得到.

圖1表達載體pBI121 hIL12示意圖

1.2.4pBI121 hIL12轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌采用三親雜交法：受體菌、供體菌及輔助轉(zhuǎn)移菌分別于3 mL含相應抗生素的LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜（受體菌，28℃；其余兩種37℃過夜培養(yǎng)），按1∶1∶1的比例混合后，取50 μL涂布在無抗生素的LB平板上，28℃，過夜培養(yǎng)，待長出菌落后涂布相應的選擇平板（含50 mg/L卡那霉素、100 mg/L利福平、50 mg/L鏈霉素），待長出后，挑單菌落重新在相應的選擇平板上進行純化，挑出純化后的單個菌落在相應抗性LB液體培養(yǎng)基中28℃，過夜培養(yǎng)，用于鑒定.

轉(zhuǎn)貼于

1.2.5轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的PCR鑒定采用文獻［4］的方法分別提取農(nóng)桿菌（EHA105，GV3101）中的miniTi質(zhì)粒，用預先設計的引物進行PCR擴增鑒定，獲得可用于遺傳轉(zhuǎn)化的農(nóng)桿菌.

2結果

2.1PCR方法獲取hIL12基因片段以質(zhì)粒pCA13hIL12為模板，運用PCR方法獲得全長hIL12基因（1613 bp，圖2）.

2.2重組質(zhì)粒pBI121hIL12的鑒定經(jīng)限制性內(nèi)切酶SmaI，SacI酶切后得到大小約1600 bp和12800 bp的大片段，表明hIL12已經(jīng)克隆到質(zhì)粒pBI121中（圖3）. 質(zhì)粒送上海生工生物工程公司進行全長測序鑒定，通過序列比對分析發(fā)現(xiàn)，目的基因與GenBank中已發(fā)表的基因序列完全一致，表明植物表達載體pBI121hIL12構建成功.

2.3轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的PCR檢測從三親融合后的農(nóng)桿菌中提取miniTi質(zhì)粒，進行PCR擴增，擴增出大小約1600 bp的片段，與來自大腸桿菌DH5α中的重組質(zhì)粒pBI121hIL12為模板的PCR產(chǎn)物一致，而對照空載根癌農(nóng)桿菌單菌落為空白，表明獲得了2種含hIL12基因的植物表達載體的農(nóng)桿菌（圖5）.

3討論

hIL12是相對分子質(zhì)量為75 ku的蛋白質(zhì)，由不同基因編碼的2個亞基P35與P40兩條肽鏈通過二硫鍵結合在一起的異二聚體，研究表明，細胞必須同時表達這兩個基因才能產(chǎn)生有活性的IL12. 我們選用的質(zhì)粒pCA13hIL12中的hIL12基因就是利用這兩個亞基具有獨立的基因序列特點，將hIL12兩個亞單位進行融合，中間插入一個Linker序列，以保證其基因產(chǎn)物具有正確的蛋白結構及等比例的表達.

實驗中選用的載體pBI121是一個常用的植物表達載體，多克隆位點上游帶有CaMV35S啟動子，在植物組織中能啟動外源基因的表達，下游帶有GUS報告基因，由于酶切位點的要求，本實驗的GUS已被切除，切除了GUS報告基因，給轉(zhuǎn)化子的篩選帶來了不便，但這一缺憾可以通過特異性引物進行PCR檢測來彌補；在NOS啟動子下游帶有NPTII基因，可進行Kanamicin抗性篩選.

Mason等［5］提出了利用植物作生物反應器生產(chǎn)口服疫苗的設想. 我們構建的植物表達載體pBI121hIL12，可以用于馬鈴薯、煙草、番茄等植物的轉(zhuǎn)化，從而為用植物作為生物反應器生產(chǎn)藥用蛋白提供實驗基礎. 目前，將hIL12基因轉(zhuǎn)入馬鈴薯的工作正在進行中. 我們成功構建了hIL12基因的植物表達載體，為最終實現(xiàn)用植物生產(chǎn)hIL12奠定了基礎.

參考文獻

［1］ Hirota T， Suzuki Y， Hasegawa K， et al. Functional haplotypes of IL12B are associated with childhood atopic asthma ［J］. J Allergy Clin Immunol， 2005，116(4):789-795.

［2］ Inoue Y， Nakayama Y， Minagawa N， et al. Relationship between interleukin12expressing cells and antigenpresenting cells in patients with colorectal cancer ［J］.Anticancer Res， 2005，25(5):3541-3546.

［3］ 李霞，張璟，蘇金，等. 人cbl基因真核表達載體的構建及表達［J］. 第四軍醫(yī)大學學報，2004， 25(24):2209-2211.